Detection of Cryptosporidium parvum oocysts in calf fecal samples by direct immunofluorescence assay

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dc.contributor.authorTeixeira, Weslen Fabricio Pires [UNESP]
dc.contributor.authorCoelho, Willian Marinho Dourado [UNESP]
dc.contributor.authorNunes, Caris Maroni [UNESP]
dc.contributor.authorMeireles, Marcelo Vasconcelos [UNESP]
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.date.accessioned2014-05-20T15:09:10Z
dc.date.available2014-05-20T15:09:10Z
dc.date.issued2011-12-01
dc.description.abstractO objetivo deste estudo foi produzir um conjugado contendo anticorpos policlonais anti-Cryptosporidium parvum e padronizar a Reação de Imunofluorescência Direta (RID), para detecção de oocistos de C. parvum em amostras fecais de bezerros. Para produção de anticorpos policlonais anti-C. parvum, dois coelhos da raça Nova Zelândia foram imunizados com uma solução purificada de oocistos de C. parvum e adjuvante de Freund. A purificação da fração de imunoglobulina G (IgG) foi realizada por meio de precipitação em sulfato de amônio e cromatografia em coluna de DEAE celulose. A titulação dos anticorpos policlonais anti-C. parvum foi determinada por meio de ensaio imunoenzimático (ELISA). A fração IgG de coelho anti-C. parvum foi conjugada com isotiocianato de fluoresceína, e a padronização da RID foi feita utilizando-se várias diluições do conjugado, em lâminas positivas para C. parvum. Foi pesquisada também a presença de reatividade cruzada do conjugado anti-C. parvum com C. serpentis, C. andersoni, Escherichia coli, Eimeria sp. e Candida sp.. A produção do conjugado anti-C. parvum foi bem sucedida, sendo possível a padronização da RID para detecção de oocistos em fezes. Foi também observada reatividade cruzada dos anticorpos policlonais anti-C. parvum, com C. andersoni e C. serpentis.pt
dc.description.abstractThe aim of this study was to produce a conjugate containing anti-Cryptosporidium parvum polyclonal antibodies and standardize a Direct Immunofluorescence Assay (DIF) for detecting C. parvum oocysts in fecal samples from calves. In order to obtain anti-C. parvum polyclonal antibodies, two New Zealand rabbits were immunized with a purified solution of C. parvum oocysts and Freund's adjuvant. Purification of the immunoglobulin G (IgG) fraction was performed by means of precipitation in ammonium sulfate and chromatography using a DEAE-cellulose column. The anti-C. parvum polyclonal antibody titer was determined by means of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The rabbit anti-C. parvum IgG fraction was conjugated with fluorescein isothiocyanate and standardization of the DIF was performed using various dilutions of conjugate on slides positive for C. parvum oocysts. The cross-reactivity of the anti-C. parvum conjugate was tested using oocysts of Cryptosporidium serpentis, Cryptosporidium andersoni, Escherichia coli, Eimeria sp., and Candida sp. An anti-C. parvum conjugate was successfully produced, thus allowing standardization of DIF for detection of Cryptosporidium oocysts in fecal samples. Cross-reactivity of anti-C. parvum polyclonal antibodies with C. andersoni and C. serpentis was also observed.en
dc.description.affiliationUniversidade Estadual Paulista Faculdade de Medicina Veterinária
dc.description.affiliationUniversidade Estadual Paulista Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias
dc.description.affiliationUnespUniversidade Estadual Paulista Faculdade de Medicina Veterinária
dc.description.affiliationUnespUniversidade Estadual Paulista Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
dc.description.sponsorshipIdFAPESP: 08/57380-1
dc.format.extent269-273
dc.identifierhttp://dx.doi.org/10.1590/S1984-29612011000400003
dc.identifier.citationRevista Brasileira de Parasitologia Veterinária. Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, v. 20, n. 4, p. 269-273, 2011.
dc.identifier.doi10.1590/S1984-29612011000400003
dc.identifier.fileS1984-29612011000400003.pdf
dc.identifier.issn1984-2961
dc.identifier.lattes1892359871207408
dc.identifier.lattes0903513897615274
dc.identifier.orcid0000-0003-0063-5172
dc.identifier.scieloS1984-29612011000400003
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11449/27122
dc.identifier.wosWOS:000302842400003
dc.language.isoeng
dc.publisherColégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária
dc.relation.ispartofRevista Brasileira de Parasitologia Veterinária
dc.relation.ispartofjcr1.090
dc.rights.accessRightsAcesso aberto
dc.sourceSciELO
dc.subjectImunofluorescência diretapt
dc.subjectoocistospt
dc.subjectCryptosporidium parvumpt
dc.subjectamostras fecaispt
dc.subjectbovinospt
dc.subjectDirect immunofluorescenceen
dc.subjectoocystsen
dc.subjectCryptosporidium parvumen
dc.subjectfecal samplesen
dc.subjectcattleen
dc.titleDetection of Cryptosporidium parvum oocysts in calf fecal samples by direct immunofluorescence assayen
dc.title.alternativeDetecção de oocistos de Cryptosporidium parvum em amostras fecais de bezerros pela reação de imunofluorescência diretapt
dc.typeArtigo
unesp.author.lattes1892359871207408[3]
unesp.author.lattes0903513897615274
unesp.author.orcid0000-0003-0063-5172[4]
unesp.author.orcid0000-0002-5463-3845[3]
unesp.campusUniversidade Estadual Paulista (Unesp), Faculdade de Medicina Veterinária, Araçatubapt

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