Dissertações - Biotecnologia Animal - FMVZ

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https://hdl.handle.net/11449/110292

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Efeito da sedação da associação xilazia com detomidina e reversão com ioimbina para realização de exame andrológico em equinos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-06-23) Trinque, Camila Moreira; Dell'Aqua Júnior, José Antônio; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O exame andrológico é responsável por predizer, momentaneamente, a condição reprodutiva do garanhão através de exames gerais e específicos do aparelho reprodutor e análise do ejaculado. Durante esse exame andrológico faz-se necessário a utilização de exames de inspeção, palpação, ultrassonografias, palpação transretal e em alguns casos endoscopia. No entanto, a avaliação transretal, nos garanhões por oferecer maiores riscos e dificuldades ao operador. Portanto, médicos veterinários utilizam de métodos de contenção física ou química para facilitar a realização deste procedimento. Sendo assim, os fármacos alfa-2 agonistas, são muito utilizados devido as ações sedativas, analgésicas e rápido início de ação. No entanto, a condução do animal, após o exame, só poderá ser feita posteriormente ao término dos efeitos sedativos. Nesse sentido, o uso de ioimbina pode ser feito, por ser uma substância alfa 2- antagonista. Portanto, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da sedação utilizando xilazina+ detomidina e reversão com ioimbina sobre os parâmetros espermáticos em garanhões e avaliar o efeito, comportamental, da ioimbina nesses animais. Para isso, foram utilizados 5 garanhões, com idades entre 4 a 20 anos, os quais passaram por três grupos foram divididos em três grupos: CONTROLE (solução fisiológica/ solução fisiológica), GRUPO1 (SEDACOMBO®/RESET®) e GRUPO 2 (solução fisiológica/ RESET®). Os animais foram previamente estimulados com a presença de égua em cio, e conduzidos ao tronco de palpação onde foram contidos e submetidos a aplicação de 1mL de solução salina no grupo CONTROLE; 0,4mg de xilazina + 0,008mg de detomidina/kg no GRUPO 1 e solução salina no GRUPO 2. Após 30 minutos foram administrados 1 mL de solução salina para o grupo CONTROLE e 0,1 mg/kg de ioimbina, Reset®, nos grupos GRUPO 1 e GRUPO 2. A colheita de sêmen foi realizada 45 minutos após a aplicação dos fármacos e o ejaculado analisado. Foi avaliado volume; concentração espermática; cinética espermática; estabilidade de membrana, potencial de membrana mitocondrial e geração de ânion superóxido por citometria de fluxo. O GRUPO 2 apresentou maior volume seminal em relação ao CONTROLE (P<0.05), e com a retirada do gel apresentou maior valor em relação ao CONTROLE e GRUPO 1 (P<0,05). O GRUPO 2 demonstrou menor concentração espermática por mL (P<0,05) quando comparado ao CONTROLE. A concentração total do ejaculado não diferiu entre os tratamentos. O GRUPO 1 apresentou maior estabilidade de membrana e células com alto potencial mitocondrial em relação ao GRUPO 2. Os demais parâmetros (cinética e geração de ânion superóxido) não apresentaram diferenças entre os grupos. Assim, pode-se concluir que a utilização do sedativo e seu reversor não altera a qualidade do sêmen, contudo o uso apenas do reversor pode afetar a qualidade.
Estudo imaginológico da zona triangular de segurança em cães
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-07-06) Sousa, Mariana Pacheco de; Machado, Vânia Maria de Vasconcelos [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A zona triangular de segurança (ZTS) é descrita como uma região espacial tridimensional, na qual não existem processos nervosos e sanguíneos importantes, utilizada na atualidade como janela cirúrgica para procedimentos minimamente invasivos somente na espécie humana. Este trabalho tem o objetivo de descreve a ZTS na coluna vertebral lombar de cães, e determinar a possibilidade da sua utilização na clínica cirúrgica veterinária. Para a sua mensuração, foram utilizadas imagens de ressonância magnética nos planos sagital, coronal e axial e nas ponderações T1 e T2, simultaneamente, para determinar com precisão os locais de início e final de cada um dos três lados que formam o triângulo. Foram utilizadas para esta determinação, 60 zonas de interesse, a partir de cinco peças anatômicas de cães submetidos ao exame de ressonância magnética e dissecção. Os dados obtidos para as variáveis estudadas foram analisados a partir de três diferentes critérios: por região anatômica; por região topográfica; e por região antimérica, e por fim, os triângulos foram classificados quanto ao seu formato. As principais utilizações da ZTS são a punção do disco intervertebral, os bloqueios de raiz nervosa e gânglio sensitivo e procedimentos minimamente invasivos para descompressão medular, tratamento de DDIV e fusão vertebral. Este trabalho foi capaz de determinar a ZTS na coluna lombar de cães a partir de exames de ressonância magnética de maneira efetiva.
Proteômica de vesículas extracelulares de soro de cadelas com neoplasias mamárias
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-07-07) Sousa, Gabriela Carneiro; Souza, Fabiana Ferreira de [UNESP]; Alves, Carlos Eduardo Fonseca [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
As neoplasias mamárias são o tipo de tumor mais frequente em cadelas, acometendo cerca de 50% das fêmeas. A espécie é considerada modelo experimental para câncer de mama em mulheres. Em vista disso, novas abordagens buscando biomarcadores e alvos terapêuticos têm encontrado respostas promissoras no estudo de vesículas extracelulares (VEs). As VEs são nanopartículas secretadas por diversos tipos celulares, incluindo células cancerígenas, as quais carreiam informações da sua célula de origem e estão envolvidas na manutenção do microambiente tumoral e metástases. O objetivo desse estudo foi investigar a relação da proteômica de VEs séricas de cadelas acometidas por neoplasias mamárias e a malignidade tumoral. Trinta cadelas foram selecionadas e divididas em 3 grupos, controle (GC, n = 10) composto por cadelas sem neoplasia; cadelas com tumores grau I e II (GI, n = 13) e grau III (GII, n = 7). Durante a exérese cirúrgica o sangue foi colhido, o soro separado e preparado para o isolamento das VEs por cromatografia por exclusão de tamanho. As VEs séricas foram caracterizadas por análise de nanopartículas, microscopia eletrônica de transmissão. A seguir as amostras foram digeridas com tripsina para proteômica com abordagem shotgun. A média ± erro padrão para a idade foi (1,95 ± 0,33; 10,1 ± 0,60; 12,1 ± 0,70 anos), e para o peso corporal (16,2 ± 2,5; 17,9 ± 3,6; 10,9 ± 3,4 kg). Não houve diferença entre a concentração de VEs (5,5 x 1012 ± 4,4 x 1012; 1,3 x 1012 ± 0,66 x 1012; 1,1 x 1012 ± 0,88 x 1012 partículas/mL) e tamanho das VEs (136,2  6,0; 129,3  4,0; 125,5  6,1 nm) entre os GC, GI e GII, respectivamente. Os resultados de VEs isoladamente não foram capazes de diferenciar o GC dos grupos GI e GII, entretanto podem ser considerados uma importante contribuição para a caracterização, quantificação e validação de VEs sérica em cadelas saudáveis e com neoplasia mamária. Na proteômica duas proteínas sintetizadas por genes importantes na supressão de tumores em humanos a keratin 18 e a protocadherin 17 apresentaram diferente abundância entre os grupos, podendo assim servir como candidatas em futuros estudos que busquem identificar biomarcadores para as neoplasias mamárias em cadelas por meio das VEs.
Maturação in vitro de oócitos equinos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-26) Frasson, Mariana Silva; Papa, Frederico Ozanam [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A produção in vitro de embriões equinos pelo método de OPU-ICSI, vem crescendo constantemente devido as melhorias significativas em sua técnica laboratorial e consequentemente melhores resultados na produção de embriões e taxas de prenhez. Desta forma houve um aumento na procura e demanda devido ao interesse entre os criadores de cavalos, para quem está biotecnologia proporciona diversos recursos na reprodução equina, como a otimização no uso do sêmen congelado, permanência de reprodutoras idosas que já impossibilitam sua fertilidade pelas técnicas convencionais e o uso de éguas com distúrbios do trato reprodutivo. No entanto, a maturação in vitro é um ponto crucial para o sucesso na produção in vitro de embriões. Diante disso, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de dois tipos específicos de meios para a maturação in vitro de oócitos imaturos, analisando a competência de desenvolvimento dos oócitos para a realização da fertilização (ICSI). Foram realizadas cinco sessões de aspiração folicular transvaginal guiada por ultrassom, utilizando quatro (n=4) éguas por sessão. Os complexos cumulus-oócitos (COCs) foram coletados e distribuídos aleatoriamente em dois grupos diferentes. O meio de maturação do grupo controle (GC) foi composto de DMEM/F-12, suplementados com FSH, LH, aditivos (ITS, EGF, IGF, piruvato) e 15% de SFB, já o meio de maturação do grupo experimental (GE) foi constituído de TCM199 com sais de Earle, FSH, 17β-estradiol, aditivos (ITS, EGF, IGF, piruvato) e 10% de SFB. Posteriormente, os COCS foram mantidos em meio de manutenção durante o período de 5-12 horas de espera, em seguida transferidos para meio de maturação e cultivados por 36 horas em incubadora de 5% CO₂ ao ar, em temperatura 38,2°C. Logo após, os COCs foram então desnudados, para a visualização da extrusão do corpúsculo polar, realização da ICSI e os possíveis zigotos foram cultivados em incubadora de 5%CO₂, 6%O₂ à 38,2°C. A clivagem foi verificada no dia 3 após a ICSI, os blastocistos foram avaliados e classificados (em uma escala de grau A-B-C) dos dias 7 a 10. Os resultados demonstraram que não houve diferença (P > 0,05) entre os grupos em degenerado (GC=15,7%, 13/83; GE= 9,5%, 8/84), estágio VG (GC=4,8%, 4/83; GE=6,0%, 5/84), presuntivos MI (GC=4,8%, 4/83; GE=2,4%, 2/84) ou MII (GC=74,7%, 62/83; GE= 81,0%, 68/84) dos oócitos avaliados após cultura de maturação. Em relação a taxa de clivagem no dia 3 não houve diferença (P > 0,05) entre os grupos (GC=72,2%, 39/54; GE= 67,9%, 38/56). Na contagem de células, o grupo controle apresentou diferença estatística, tendo maior número de embriões em estágio de 2 células no dia 3 (GC=13,0%, 7/54; GE=1,8%, 1/56). No entanto, o grupo experimental mostrou tendência (P = 0,07) de ter mais embriões no estágio de 8-16 células no dia 3 (GC=5,6%, 3/54; GE=17,9%, 10/56). Não houve diferença significativas na taxa de blastocisto entre os grupos (GC=21,0%, 13/62; GE=23,5%, 16/68). Para a classificação dos embriões, não houve diferença (P > 0,05) entre os grupos, nos três diferentes graus (9,7%, 6/62 e 13,2%, 9/68 para o grau A; 6,5%, 4/62 e 10,3%, 7 /68 para o grau B; e 4,8%, 3/62 e 0,0%, 0/68 para o grau C, os valores apresentados são do grupo controle e experimental, respectivamente). Embora não houve diferença estatística na maioria das variáveis, podemos observar que o grupo experimental mostrou numericamente mais oócitos no estágio MII, menos embriões no estágio de 2 células e mais embriões no estágio de 8-16 células no dia 3. Da mesma forma, podemos observar numericamente mais embriões de alta qualidade (grau A e B) no grupo experimental do que no grupo controle. Ainda assim, com um número total maior de oócitos, provavelmente encontraríamos diferenças estatísticas nessas variáveis. Por este motivo estudos adicionais são necessários para aprimorar a eficiência deste meio de maturação.
Avaliação da suplementação mineral e vitamínica injetável na qualidade seminal e concentração de testosterona em ovinos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-28) Souza, Estevam Rodrigues de; Oba, Eunice [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A pecuária brasileira tem destaque acentuado quanto a sua participação no produto interno Bruto nacional (PIB), entretanto, dentro da cadeia produtiva das proteínas de origem animal, a ovinocultura ainda se apresenta como uma atividade com pouca expressividade e tecnificação frente a outras espécies animais domesticas, desta forma seu fomento e próspero desenvolvimento é dependente de inúmeros fatores, sendo que destes o correto manejo reprodutivo da espécies , a escolha de raças autóctones ou do exterior com boa adaptabilidade para serem criadas em regiões de clima tropical e subtropical encontrados no Brasil e a correta seleção quanto a características reprodutivas de matrizes e principalmente de jovens carneiros cujos quais se deseja utilizar como reprodutores em rebanhos que buscam a constante evolução produtiva se faz muito importante. Tal cenário traz à tona a importância da realização de estudos referentes a suplementação de elementos como vitaminas e micro minerais, que embora não sejam os maiores constituintes das dietas ofertadas aos animais de interesse zootécnico, exercem grande influência não só no crescimento e desenvolvimento do tecido muscular como também podem estar positivamente correlacionados quanto aos aspectos reprodutivos . O presente trabalho objetivou a avaliação da qualidade seminal e morfometria testicular de carneiros púberes submetidos a suplementação injetável de minerais e vitaminas , sendo utilizados 30 reprodutores divididos em três grupos de dez animais cada, com delineamento dos grupos inteiramente casualizado. Ao primeiro grupo foi administrada suplementação vitamínica e mineral (Grupo VM), no segundo grupo houve apenas suplementação vitamínica (Grupo VIT) e no terceiro grupo a suplementação mineral (Grupo MIN). No presente trabalho buscou-se avaliar os efeitos da aplicação de complexo vitamínico e mineral sobre a qualidade do sêmen ovino, medidas morfométricas testiculares e alteração nas concentrações dos hormônios cortisol e testosterona.
Uso de fibrina rica em plaquetas em úlceras de córnea em cães.
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-18) Sousa, Juliana Marques; Brandão, Cláudia Valéria Seullner [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo do estudo foi analisar a ação clínica da fibrina rica em plaquetas (PRF) autóloga nas úlceras de córnea superficiais e estromais em cães; e verificar a viabilidade da manutenção do biomaterial com uso de lentes de contato associada à tarsorrafia lateral temporária. Para isso, foram utilizados 16 cães, atendidos em serviço de oftalmologia com úlcera de córnea unilateral, distribuídos em dois grupos equitativos (n=08). Todos foram tratados com colírio à base de tobramicina 0,3% quatro vezes ao dia (QID) e colírio lubrificante à base de hialuronato de sódio 0,15% (QID). No grupo controle (GC) este foi o único tratamento instituído, no grupo grupo lente (GL), foi adicionada a aplicação da membrana de PRF autóloga, seguida de lente de contato e tarsorrafia lateral temporária. Os cães foram avaliados antes do tratamento, dez dias e trinta dias após o início da terapêutica, por meio de escores quali-quantitativos das variáveis oftalmológicas: vascularização, secreção ocular, hiperemia, blefaroespasmo, quemose, fotofobia, pigmento corneal. Adicionalmente foi avaliada a área da úlcera e espessura da córnea. Aos dez dias observou-se maior retração das úlceras em relação ao GC, embora sem relevância estatística. Todas as úlceras estavam cicatrizadas no momento final de avaliação. O PRF autólogo é uma opção viável de tratamento adjuvante na reparação das ceratites ulcerativas, o uso de lentes de contato e tarsorrafia temporária tornam a técnica acessivel.
Avaliação prognóstica das amplificações somáticas focais dos cromossomos 10 e 30 no melanoma oral canino e sua correlação histopatológica e clínica
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-28) Henriques, Marina Valsecchi; Alves, Carlos Eduardo Fonseca; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O melanoma oral canino é a principal neoplasia maligna da cavidade oral em cães e é considerada uma doença muito agressiva. A taxa metastática é de cerca de 80% e pode se disseminar para linfonodos regionais, pulmões e outros órgãos. Estudos recentes demonstraram que alterações na expressão gênica do melanoma humano e canino compartilham ativação e sensibilidade à inibição de vias de sinalização relacionadas ao câncer. O ganho e/ou perda no número de cópias pode alterar o nível de expressão de oncogenes e adquirir vantagens tumorais conferidas por essas amplificações focais causando um rearranjo cromossômico estrutural. O objetivo deste estudo foi avaliar amplificações focais no cromossomo 10 e 30 (Canis familiaris 10 e 30) de melanoma oral canino utilizando PCR quantitativo e correlacioná-las com aspectos clínicos e patológicos. Foram analisados 45 tumores e como resultado não houve amplificação focal para o CFA 30 nas amostras avaliadas. Para o gene MDM2 do CFA 10 apenas duas amostras apresentaram amplificação e no gene CDK4 todas as amostras apresentaram amplificação. Como não pode ser definido um padrão entre as amplificações encontradas e os fatores prognósticos analisados, não foi identificada relevância na rotina clínica para estes marcadores.
Avaliação da expressão de pancitoqueratina para diagnóstico de micrometástase em linfonodo sentinela de cadelas com carcinoma mamário
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-26) Paleari, Alessandra Costa Araujo; Alves, Carlos Eduardo Fonseca [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O câncer de mama é a neoplasia mais comum em cadelas, e apresenta alto índice de metástase, sendo a principal causa de morte em pacientes acometidas por neoplasias mamárias. A pesquisa de metástase tem um papel importante para a sobrevida e prognóstico das pacientes. Com isso, a técnica de linfonodo sentinela auxilia na identificação do linfonodo que drena o tumor e avalia possibilidade de metástase. Comumente os linfonodos são avaliados pela técnica de hematoxilina e eosina, e as metástases são identificadas por análise morfológica. Pacientes com neoplasias mamárias podem ter micrometástase em linfonodos, que não podem ser identificadas por técnicas de rotina. Neste contexto, a expressão de pan-citoqueratina (AE1/AE3) por meio da imuno-histoquímica no linfonodo sentinela auxilia na pesquisa de micrometástase. No entanto, o impacto da presença de micrometástases em linfonodos sentinelas de cadelas acometidas por neoplasias mamárias é desconhecido. O objetivo desse estudo foi avaliar a presença de micrometástase em linfonodos sentinelas de cadelas submetidas à mastectomia radical e avaliar seu impacto no prognóstico das pacientes. Foram incluídas nesse estudo, 65 cadelas submetidas à mastectomia radical unilateral, com remoção do linfonodo sentinela. O subtipo histológico mais encontrado foi o tumor misto grau I (19/65), seguido por carcinoma complexo grau I (13/65) e carcinoma tubulopapilar grau II (5/65) e também carcinoma tubular grau I (5/65). Dessas cadelas, 20% (13/65) apresentaram micrometástases em linfonodos sentinelas, detectadas apenas por meio da técnica de imuno-histoquímica. Um achado interessante, foi que a maioria das cadelas com micrometástases, apresentaram tumores de grau I (8/13), seguido por tumores de grau II (3/13). Assim, não houve associação da graduação histológica e a presença de micrometástases. A presente pesquisa identificou uma importante frequência de micrometástases em linfonodos de cadelas acometidas por neoplasia mamária, e cadelas com tumores de grau I foram as mais acometidas.
Efeito antimicrobiano in vitro de terapias biológicas e não biológicas em microrganismos causadores de endometrite em éguas
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-02-14) Mazzuchini, Mariana Polesso; Canisso, Igor Frederico; Segabinazzi, Lorenzo Garrido Teixeira Martini; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A endometrite é a principal causa de subfertilidade em éguas, podendo ser de origem infecciosa ou não infecciosa. O diagnóstico de endometrite se dá pela associação de diferentes técnicas a fim de identificar a presença de neutrófilos e de microrganismos nos casos infecciosos. O tratamento se dá por uma abordagem multimodal, sendo comumente associadas lavagens uterinas, agentes ecbólicos, anti-inflamatórios e antimicrobianos. Contudo, com o aumento de resistência antimicrobiana, o desenvolvimento de terapias alternativas às tradicionais se faz necessário, uma vez que, a utilização de antimicrobianos na rotina à campo promove o desenvolvimento de microrganismos multirresistentes. Assim, o presente trabalho, no capítulo 1 apresenta uma revisão bibliográfica ressaltando a endometrite, classificações, formas de diagnóstico e principais tratamentos, apresentando tratamentos alternativos às terapias tradicionais que possam evitar o desenvolvimento de microrganismos multirresistentes. Já, o capítulo 2 apresenta o artigo no qual foi testada a atividade antimicrobiana de terapias alternativas contra microrganismos causadores de endometrite em éguas. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito antimicrobiano in vitro de terapias alternativas (NTT) utilizadas na prática clínica contra microrganismos causadores de endometrite em éguas. O experimento foi dividido em terapias não-biológicas, sendo estas: Dimetilsulfóxido (DMSO), Peróxido de hidrogênio (H2O2), ringer ozonizado (O3, 60µg/ml de ozônio durante 10 minutos), Iodopovidona 4% (Iodine), e terapias biológicas: plasma rico em plaquetas (PRP, 1056±198 x103plaquetas/µl) e plasma pobre em plaquetas (PPP, 37±14 x103plaquetas/µl). Os microrganismos testados foram Escherichia coli (E.coli), Pseudomonas aeruginosa (Pseudo), Klebsiella pneumoniae (Kleb), Staphylococcus aureus (Staph), e Candida albicans (Candida). Dentre as terapias alternativas não-biológicas, a H2O2 apresentou os melhores efeitos inibitórios in vitro. Já, das terapias alternativas biológicas, o PRP foi mais eficiente quando comparado ao PPP. Assim, a H2O2 e o PRP apresentaram-se eficientes na inibição de microrganismos causadores de endometrite em éguas, contudo, estudos in vivo são necessários para avaliar o efeito clínico das terapias.
Bloqueio meiótico em oócitos de equinos como alternativa para melhora da viabilidade
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-01-27) Jorge, Mariana Lemos Nagib; Landim, Fernanda da Cruz [UNESP]; Silva, Elisa Sant'Anna Monteiro da [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A manutenção dos oócitos equinos em bloqueio meiótico, seja através do uso de inibidores de meiose ou manutenção deles em temperatura ambiente, é benéfica para o posterior desenvolvimento embrionário. Com o objetivo de testar a viabilidade da manutenção de oócitos em meio de cultivo embrionário comercial disponível no Brasil (Botuembryo), comparando ao meio de cultivo acrescido de inibidor de meiose (Butirolactona), antes da maturação in vitro (MIV), concebeu-se este ensaio. Foram utilizados 149 oócitos equinos, separados em 3 grupos: Controle, Botuembryo e Butirolactona. O grupo Controle seguiu direto para a MIV por 24 horas, os grupos Botuembryo e Butirolactona passaram por um processo de pré-maturação (PM) por 20 horas com os respectivos produtos, e depois seguiram para a MIV por mais 24 horas. No grupo Controle, o momento 1 (M1) corresponde ao momento da obtenção dos oócitos, já nos grupos Botuembryo e Butirolactona, o M1 corresponde ao final da PM. O momento 2 (M2), nos 3 grupos, foi após a MIV. Após a coloração, a maturação nuclear e citoplasmática foi avaliada pela microscopia confocal. A investigação da expressão gênica foi realizada por RT-qPCR. Nos oócitos foram analisados os genes: Proteína Morfogenética Óssea 15 (BMP15), Conexina 37 (Cx37), Fator de Crescimento e Diferenciação 9 (GDF9) e Metaloproteinase de Matriz 2 (MMP2); já nas células do cumulus (CCs) foram avaliados os genes: Ampiregulina (AREG), Conexina 43 (Cx43), Hialurona Sintetase 2 (HAS2), Receptor de FSH (FSHR) e Receptor de LH (LHR). Na avaliação da maturação nuclear foram encontrados resultados semelhantes entre os grupos tratados e na análise da maturação citoplasmática foi encontrado no grupo Butirolactona o maior percentual de oócitos imaturos no M1, maior percentual de oócitos maduros no M2, e menor percentual de degeneração. Por outro lado, os dados da expressão gênica, demonstraram que houve falha do bloqueio da maturação molecular no grupo Butirolactona, com aumento da abundância de AREG e HAS2 no M1, e diminuição no M2. Além disso, observou-se superioridade do grupo Botuembryo, entre os grupos tratados, no M1, em relação a menor abundância de AREG, LHR e HAS2 e maior abundância de FSHR; já no M2, apresentou maior abundância de GDF9, indicando melhor qualidade tanto dos oócitos como das CCs. Embora os resultados obtidos com o uso da Butirolactona ou do Botuembryo sejam semelhantes em relação a maturação nuclear e citoplasmática, os resultados de maturação molecular demonstraram a superioridade do Botuembryo para manter a qualidade de oócitos e CCs antes da realização de técnicas de fertilização assistida em equinos.
Efeitos da centrifugação do sêmen bovino em gradiente equipure™
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-12-22) Ocampo Ortiz, Cristian Jose; Souza, Fabiana Ferreira de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Atualmente o uso de biotécnicas relacionadas ao sêmen bovino tem crescido exponencialmente com o objetivo de suprir a demanda de produtos de origem animal. Com isto, é possível minimizar as perdas econômicas identificando ejaculados de baixa qualidade seminal. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do gradiente Equipure™ enquanto a viabilidade e congelabilidade do sêmen de touros para seleção espermática. Para isso, 35 touros foram coletados e o sêmen foi avaliado quanto a cinética espermática, morfologia e integridade de membrana. A seguir, a amostra foi diluída e separada em 2 alíquotas, contendo 1 x 106 espermatozoides cada uma. Uma amostra foi depositada em Equipure™ e a outra mantida in natura. As alíquotas foram centrifugadas e posteriormente o pellet dos tubos foram recuperados e reavaliados. Após a análise das variáveis, os 10 touros com maior motilidade foram novamente coletados para congelação dos espermatozoides. A congelação foi conduzida após a avaliação e diluição (30 x 106 espermatozoides/mL) em meio comercial. Posteriormente, as amostras foram descongeladas e reavaliadas. Os resultados mostram que o uso de Equipure diminui a quantidade de células defeituosas após a centrifugação de sêmen fresco e após descongelação. Com isto podemos inferir que o uso de Equipure™ em amostras de sêmen de touros com pobre qualidade espermática pode aumentar a taxa de células espermáticas morfologicamente normais até valores de referência, porém considerando que a taxa de recuperação espermática descende até valores mínimos quando comparados com sêmen fresco. Estudos que avaliem as características subjetivas da qualidade seminal, o tempo e força da centrifugação, tempo transcorrido entre os procedimentos e o uso de diluentes devem ser reavaliados.
Malformação occipital caudal: aspectos imaginológicos em cães braquicefálicos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-09-30) Mendes, Alex Ferreira; Machado, Vânia Maria de Vasconcelos [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O neurocrânio protege as estruturas vitais do sistema nervoso e impede mecanicamente a sua expansão em casos de injúrias que alteram as dimensões encefálicas. A Malformação Occipital Caudal (MOC) compreende um conjunto de deformidades da fossa caudal e está principalmente relacionada à coarctação do conteúdo neural na altura da junção cervicomedular, podendo causar desde dor neuropática cervical até a obstrução do fluxo liquórico, levando à sua estase e à siringomielia (SM). Foram avaliados 120 exames de ressonância magnética (RM) de encéfalos de cães, 60 braquicefálicos e 60 não braquicefálicos com pelo menos um ano de idade e com algum tipo de sintomatologia neurológica atendidos no Hospital Veterinário da Unesp, Campus de Botucatu, entre os anos de 2012 e 2020, com o objetivo de relacionar os achados imaginológicos à esta malformação. Em 81,7% dos cães braquicefálicos observou-se algum tipo de herniação pelos limites da junção craniocervical. Estes também mostraram maior ocorrência de alteração de dimensão, principalmente ventriculomegalia lateral, e uma abertura do forame magno (FM) maior que os não braquicefálicos (P<0,001). A principal queixa clínica relatada foi convulsão, diferente de dor neuropática cervical e sinal de coceira fantasma frequentemente descritas nesta enfermidade. Assim, cães braquicefálicos com sintomatologia neurológica inespecífica submetidos ao exame de RM podem ter a malformação não notificada.
Efeito da pentoxifilina oral na resposta inflamatória e acúmulo de fluido intrauterinos após inseminação artificial e taxa de recuperação embrionária em éguas velhas.
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-05-04) Oliveira, Odilon Marquez de [UNESP]; Canisso, Igor Frederico [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A maioria das éguas doadoras de embrião tem a limpeza uterina prejudicada devido a problemas uterinos e cervicais como resultado de repetidas inseminações e coletas de embrião. Esses problemas levam à suscetibilidade à endometrite persistente pós cobertura (EPPC) que está associada à inflamação persistente, que mostra edema uterino excessivo, acúmulo de líquido intrauterino (FIU), grande número de neutrófilos polimorfonucleares na citologia e cultura positiva. A intensa e prolongada inflamação endometrial cria um ambiente uterino desfavorável ao desenvolvimento embrionário, resultando em queda na fertilidade. A pentoxifilina é um fármaco reolítico, que promove aumento da maleabilidade das hemácias, e apresenta efeitos anti-inflamatórios e antioxidantes. Sendo amplamente utilizado na prática clínica equina e na reprodução por aumentar o fluxo sanguíneo para os diversos tecidos. Este estudo teve como objetivo avaliar a resposta inflamatória uterina pós inseminação artificial e a recuperação embrionária de éguas doadoras velhas e subférteis tratadas com pentoxifilina. Doze éguas (16±3,7 anos) foram classificadas como suscetíveis ou resistentes à EPPC com base no histórico reprodutivo, nos achados ultrassonográficos e na taxa de recuperação embrionária. No início do estudo, uma amostra de biópsia foi coletada para determinar o score de biópsia do padrão Kenney e Doig. Cada égua foi submetida a seis ciclos estrais. Durante os dois primeiros ciclos, todas as éguas receberam, por via oral, 50mL de um suplemento comercial acrescido de 17mg/kg/dia de Pentoxifilina. Os dois ciclos subsequentes foram usados como washout (sem suplemento, sem pentoxifilina). Nos dois últimos ciclos, 50mL de suplemento comercial puro foi administrado por via oral. As coletas de embrião foram realizadas oito ou nove dias após ovulação. A palpação transretal e a ultrassonografia foram realizadas diariamente para avaliar o controle folicular, edema endometrial e acúmulo de fluido intrauterino. A citologia endometrial foi realizada pré e pós (24, 48 e 72h) inseminação artificial, enquanto a cultura uterina foi realizada pré e 72h pós inseminação. As contagens de neutrófilos relacionada aos efeitos do tempo não diferiram entre os grupos, bem como o edema uterino, o acúmulo de fluido intrauterino e a cultura positiva (P>0,05). A recuperação embrionária foi maior no grupo pentoxifilina (P=0,046). Em conclusão, a suplementação com pentoxifilina pode ser uma alternativa para diminuir a resposta inflamatória endometrial pós inseminação artificial e pode melhorar a taxa de recuperação embrionária.
Sexagem e acondicionamento de embriões equinos pré-implantacionais produzidos in vivo
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-09-29) Camargo, Giovana Siqueira; Meira, Cezinande de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A sexagem de embriões equinos através do fluido da blastocele (FB), é uma biotecnologia recente, e associada ao transporte de embriões têm boas perspectivas no campo. Objetivos:(1) testar a técnica de sexagem por PCR do FB de embriões pré-implantacionais produzidos in vivo coletado a partir do colapso embrionário com agulha hipodérmica; (2) avaliar a capacidade de re-expansão embrionária após acondicionamento destes embriões produzidos in vivo colapsados; (3) avaliar a qualidade e tamanho de embriões produzidos in vivo, colapsados e íntegros, após simulação de transporte sob acondicionamentos em temperatura ambiente (25ºC) e refrigeração à 5ºC por 24 horas. As condições experimentais visaram mimetizar condições aplicáveis à rotina de campo. Métodos: I -Foram coletados 42 embriões e distribuídos aleatoriamente entre quatro grupos experimentais: CTA (n=11 embriões colapsados acondicionados em temperatura ambiente), CTR (n=11 embriões colapsados acondicionados sob refrigeração), NCTA (n=10 embriões não colapsados acondicionados em temperatura ambiente) e NCTR (n=10 embriões não colapsados acondicionados sob refrigeração), e todos armazenados por um período de 24 horas. II -As amostras de FB (n=19) foram coletadas após o colapso dos embriões com agulha hipodérmica 26G, dos grupos CTA e CTR, e foram submetidas as duas PCR sequenciadas com os primers específicos TSPY e AMEL para a identificação dos sexos. III - Apenas três embriões (n=1 CTA, n=1 CTR, e n=1 imediatamente após o colapso) foram submetidos a microscopia por fluorescência com marcador DAPI e microscopia de interferência de contraste (DIC) para uma análise descritiva da lesão. Resultados: (I)Todos os embriões submetidos ao colapso sofreram redução no tamanho após as 24h, mas os acondicionados em temperatura ambiente (25ºC) apresentaram uma melhor qualidade morfológica após as 24h. Dos embriões íntegros, apenas o grupo NCTA obtiveram uma taxa de crescimento positiva (+25,95%) e mantiveram sua qualidade de grau 1 excelente em M24, enquanto que os refrigerados a 5ºC apresentou uma queda na classificação com 20% de embriões degenerados após as 24h. (II) A técnica de sexagem por FB mostrou-se eficiente com o diagnóstico de 57,90% de machos, através da amplificação de bandas especificas para TSPY com as duas PCR sequenciadas. (III) A lesão embrionária causada pelo colapso manual com a agulha hipodérmica 26G foi visualizada por microscopia de fluorescência. É possível realizar a sexagem embriões equinos através de amostras do FB por PCR. Conclusões: Os embriões colapsados com a agulha hipodérmica 26G são capazes de se recuperar parcialmente das lesões, principalmente quando acondicionados em meio de manutenção em temperatura ambiente por até 24h. A temperatura ambiente (25ºC) demonstrou ser a melhor temperatura de acondicionamento para o transporte de embriões equinos íntegros e colapsados por até 24h, dentro das condições apresentadas, por atuar diretamente otimizando a qualidade morfológica durante as 24hrs. Estudos complementares são necessários para comprovar a viabilidade das células embrionárias pós-colapso como teste in vitro, e a aplicabilidade de inovulação desses embriões para obtenção de suas possíveis taxas de prenhez e perdas embrionárias como teste in vivo.
Avaliação de modelos de silicone como método complementar no ensino de técnica cirúrgica veterinária
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-09-05) Mazzali, Giovana Banin; Quitzan, Juliany Gomes [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Com o avanço dos ideais de bem-estar, ética e proteção animal, o uso de animais em meios científicos e didáticos está cada vez mais restrito. Nesse contexto, novas alternativas como modelos e simuladores tem se destacado, possibilitando treinos consecutivos e desenvolvimento de habilidades, incluindo as emocionais, como autoconfiança e segurança. Objetivou-se com este estudo desenvolver um modelo em silicone para o ensino de técnicas de sutura e hemostasia durante a disciplina de Técnica Cirúrgica Veterinária. Utilizou-se uma placa de acrílico para envase do silicone por camadas, para representar o tecido subcutâneo e a pele, tingidos com pigmento amarelo e róseo, respectivamente. Os tubos de silicone preenchidos com gelatina balística representaram os vasos sanguíneos e foram posicionados na camada subcutânea. Durante as aulas, 81 alunos testaram os modelos e, posteriormente realizaram os procedimentos em animais vivos. Ao fim da disciplina, os alunos responderam aos questionários para avaliação dos modelos. Para a grande maioria, o treino no modelo proporcionou maior segurança ao realizar as técnicas em animais (p<0,0001) e 98,8% dos alunos recomendou seu uso para a prática das técnicas de suturas e hemostasia, incluindo o treinamento de nós cirúrgicos (71,6% recomendou muito e 27,2% recomendou). Algumas dificuldades relatadas foram relacionadas à baixa similaridade entre as camadas do silicone em relação à pele e fragilidade do tubo de silicone, o que denota a necessidade de aprimoramento destas estruturas. Porém, a avaliação dos resultados reforça que o ensino e aprendizagem são satisfatórios quando o modelo ou simulador permite ao aluno o treino repetido para desenvolver as habilidades necessárias, independentemente da fidelidade na reprodução das estruturas e custo envolvido. O modelo em silicone proposto possibilitou o desenvolvimento de habilidades emocionais, relacionada à maior segurança, bem como técnicas, que facilitaram a realização de procedimentos de hemostasia e sutura.
Avaliação da heterogeneidade da expressão de HER-2 e efeito antitumoral do lapatinibe em osteossarcomas caninos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-07-29) Franzoni, Mayara Simão; Alves, Carlos Eduardo Fonseca [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O câncer é uma das causas de maior mortalidade dos cães, sendo o osteossarcoma um tipo de neoplasia óssea que tem grande incidência nessa espécie. Pesquisa recentes demonstraram que o HER-2, um receptor de tirosina quinase, é expressado nesse tipo de tumor, e está associado a baixa sobrevida e resistência quimioterápica, além disso, estimula a diferenciação celular, migração, apoptose e angiogênese, portanto, o bloqueio desta via pode impedir a diferenciação e a migração celular, induzir apoptose das células neoplásicas e diminuir a angiogênese. Atualmente o tratamento de eleição para o osteossarcoma canino é a amputação do membro acometido associado à quimioterapia, normalmente com Doxorrubicina. Em função dos novos achados em relação ao HER-2, novas terapias estão em desenvolvimento, sendo o Lapatinibe um fármaco que inibe a fosforilazação desse receptor, e será testado em culturas celulares de osteossarcomas coletados no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da UNESP de Botucatu, no intuito de comparar seu efeito antineoplásico com o efeito da Doxorrubicina, além de caracterizar a expressão do HER-2 nessas amostras, uma vez que há poucos estudos com essas informações em relação ao osteossarcoma em cães.
Análise do andamento marchado de equinos da raça criollo colombiano
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-04-28) Duarte, Héctor Orlando Garcia; Hussni, Carlos Alberto [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A locomoção é a função do organismo que permite executar os movimentos corporais e o deslocamento do centro de gravidade em qualquer direção. Os andamentos são considerados formas de locomoção que podem ser habilidades inatas ou adquiridas, se classificam em naturais ou artificiais e em básicos ou especiais. Os básicos naturais são o passo, a andadura, o trote, o galope de três e quatro tempos. Entre os andamentos naturais especiais estão as marchas, como a picada e a batida, presentes em raças de equinos Brasileiras, e as modalidades de “paso” ocorrentes nos cavalos paso fino Peruano, fino Colombiano e fino de Porto Rico. Nos andamentos os equinos movimentam os membros locomotores, deslocando o corpo, com características como a velocidade, sequência dos momentos de apoio e elevação, além de mostrar as pegadas, as pistas e as batidas, que são características biomecânicas que definem os andamentos. O estudo dos andamentos é parte vinculante da biomecânica/cinesiologia, portanto, deve ser compreendido além da anatomia funcional, da fisiologia, da medicina esportiva e do estudo das claudicações, sendo partes da “ciência equina”. Este material tem por objetivo revisar e descrever os conceitos gerais da locomoção e os diferentes andamentos naturais em equinos.
Avaliação biomecânica da técnica de sobreperfuração da cortical óssea cis em placas bloqueadas com sistema de bloqueio cônico aplicadas em modelo de fratura femoral de coelhos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-06-10) Pereira, Geovane José; Rahal, Sheila Canevese [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
O objetivo do estudo foi avaliar a influência da técnica de sobreperfuração da cortical óssea nas propriedades mecânicas da montagem composta de placa bloqueada, com sistema de bloqueio cônico, em modelo de fratura transversa femoral de coelhos. Foram utilizados sete pares de fêmures de coelhos, com idade estimada em seis meses. Após descongelação dos ossos, estes foram divididos em dois grupos: Grupo 1 – controle (n=7); Grupo 2 – sobreperfuração (n=7). Foram utilizadas placas bloqueadas de aço inoxidável compostas de cinco orifícios com buchas rosqueáveis de titânio. No Grupo 1 parafusos bicorticais foram aplicados nos orifícios 1, 2, 4 e 5. No Grupo 2 as placas foram aplicadas de forma semelhante ao Grupo 1, porém aplicou-se os parafusos com sobreperfuração da cortical óssea cis. Após a colocação da placa e parafusos foi criada uma fratura transversa de 2 mm de comprimento. Foram realizados ensaios de compressão com carga axial distribuída excentricamente, com velocidade de 5 mm/minuto e célula de carga de 500 kgF. A média da força máxima foi estatisticamente maior no Grupo 2 comparada ao Grupo 1, porém a inclinação foi similar entre os grupos. As falhas das montagens do Grupo 1 ocorreram em sua maioria por fissura, principalmente entre os parafusos proximais, ao passo que no Grupo 2 não ocorreu um padrão definido. Foi possível concluir, que pelo ensaio mecânico destrutivo com carregamento estático a sobreperfuração da cortical cis promoveu um aumento da força máxima suportada pela montagem, porém sem alteração na rigidez.
Avaliação da vibração de corpo inteiro em cães adultos hígidos não atletas da raça leão da rodésia submetidos à sessão única de esteira ergométrica
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-06-10) Sakata, Stella Helena [UNESP]; Santos, Ivan Felismino Charas dos [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
RESUMO A Vibração de Corpo Inteiro (VCI) são vibrações mecânicas geradas por plataformas vibratórias, que ativam o sistema neuromuscular, cardiovascular e musculoesquelético. Contudo, atualmente, não existe informação sobre os benefícios da VCI no condicionamento físico em pequenos animais. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da VCI em fêmeas não atletas, submetidos à sessão única de exercício na esteira ergométrica, por meio da avaliação hematológica, plaquetograma, glicemia, biomarcadores musculares. Foram usados 30 cães adultos hígidos, da raça Leão da Rodésia, com idade entre 24,0 e 84.0 meses e massa corpórea entre 34,0 e 40,0 kg; e divididos, aleatoriamente, em três grupos de 10 animais, de acordo com o uso ou não da esteira ergométrica ou VCI: GE - esteira ergométrica; GEV -esteira ergométrica e VCI; GC – cães não submetidos à ação da esteira ou da VCI. As variáveis avaliadas incluíram a avaliação clínica, hemograma e plaquetograma, aspartato aminotransferase, creatina quinase, glicemia e lactato plasmático. Foi identificado um aumento significativo dos valores da frequência respiratória (FR) e frequência cardíaca (FC) entre o momento antes dos estímulos (M0) e cinco minutos (M5min) após, e uma diminuição estatística entre os momentos: M5min vs 30 minutos após os estímulos (M30min) e M5min vs 60 minutos após (M60min), nos grupos GE e GEV. Na avaliação intergrupos, foi observado valores da FR significamente maiores nos grupos GE e GEV quando comparados com o GC. Os valores dos leucócitos foram significamente maiores no grupo GEV quando comparados com o grupo GC, nos momentos M30min e 24 horas após os estímulos (M24h). Na comparação entre os momentos, os valores dos leucócitos aumentaram significamente entre os momentos: três horas (M3h) e M24h, no grupo GEV. Foi identificada uma variação significativa da glicose plasmática entre os grupos nos seguintes momentos: M0 ii (GE > GC); M60min (GE > GEV, GE > GC), M24h (GEV > GE, GEV > GC). Na comparação intergrupos, foi observada uma diminuição significativa no grupo GEV, entre os momentos M0, M5min e M30min com o M60min, e os mesmos momentos com o M3h. Os valores do lactato plasmático demonstraram uma diminuição estatística nos grupos GE (M5min vs M6h) e GC (M30min e M3h), e os animais do grupo GE, apresentaram valores do lactato plasmático significamente maiores quando comparados com os restantes grupos, nos momentos M5mi, M30min, M60min e M3h. A sessão única de VCI (30 e 50 Hz, 15 minutos), induziu efeitos benéficos com relação aos valores do lactato plasmático em cães da raça Leão da Rodésia submetidos ao exercício agudo de alta intensidade na esteira ergométrica. Palavras-chave: exercício; glicemia, lactato plasmático; plataforma vibratória.
Resposta inflamatória uterina após infusão de prostaglandina E1 (misoprostol) pré-inseminação ou imediatamente após coleta de embrião em éguas doadoras comerciais.
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-05-04) Amorim, Gabrielle Bueno de Almeida Gonçalves [UNESP]; Canisso, Igor Frederico [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
RESUMO Este estudo teve como objetivo avaliar a resposta inflamatória e potenciais reações sistêmicas após a administração intrauterina de misoprostol, seja antes da inseminação ou imediatamente após a coleta de embrião. Éguas doadoras de embriões de propriedade privada (n=11) tiveram seus ciclos designados aleatoriamente para receber infusões de misoprostol (200 µg + 3mL de solução de Ringer com lactato) ou controle (3 mL de solução de Ringer com lactato), depositados bilateralmente na ponta dos cornos uterinos, pelo menos 72h pré inseminação (experimento 1) ou imediatamente após coleta de embrião (experimento 2). Cada égua teve um ciclo para misoprostol e controle em ambos os experimentos e um ciclo de reprodução (sem controle ou misoprostol) entre os experimentos. Edema uterino, acúmulo de líquido e número de polimorfonucleares foram avaliados antes de cada infusão e depois, diariamente, por 72h. Lavagem uterina foi realizada no dia seguinte a cada infusão em todos os grupos e experimentos. A ovulação foi induzida com um agonista de GnRH e confirmada em intervalos de 24h. As éguas foram inseminadas com sêmen de seis garanhões. As coletas de embrião foram realizadas entre 8 a 9 dias após a ovulação. Em ambos os experimentos, o misoprostol não afetou o edema uterino ou o acúmulo de líquido (P>0,05). No entanto, ambas as infusões simuladas e de misoprostol aumentaram o número de PMN até 48h pós-infusão em ambos os experimentos. As recuperações de embriões foram semelhantes entre os ciclos controle (45%, 5/11) e misoprostol nos experimentos 1 (45%, 5/11; P>0,05) e 2 (controle, 68%, 7/11; misoprostol, 45%, 5 /11; P>0,05). Em conclusão, o misoprostol não induziu inflamação uterina exacerbada em éguas ou reações adversas sistêmicas quando infundido antes da inseminação ou imediatamente após a coleta de embrião. Palavras-chave: Endometrite equina; infertilidade; prostaglandina E-1; tuba uterina.

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