Teses - Biotecnologia - IBB

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    Síntese e aplicação de policloreto de vinila (PVC) modificado com extrato da folha de mamona (Ricinus communis L.) e solvente sustentável para remoção de metais do Rio Tietê
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-26) Pasta, Paula Chiachia [UNESP]; Castro, Gustavo Rocha de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Verifica-se a crescente procura por produtos cada vez mais sustentáveis em relação ao desenvolvimento de novos materiais para aplicação em procedimentos de Extração em Fase Sólida (EFS) de metais tóxicos e potencialmente tóxicos. Em virtude da intensa utilização de polímeros à base de policloreto de vinila (PVC), a grande disponibilidade desse material oriundo de resíduos é altamente presente na cadeia produtiva. O PVC possui, na sua estrutura polimérica, átomos de cloro (Cl), os quais podem ser facilmente substituídos em reações orgânicas sem geração de resíduos tóxicos. Um dos objetivos do presente projeto consistiu na modificação do adsorvente à base de PVC com extrato etanólico 70% das folhas de mamona para promover o aumento de sua capacidade adsortiva, sendo caracterizado por meio das técnicas de Espectroscopia na Região do Infravermelho (FTIR), Ressonância Magnética Nuclear (RMN), Espectroscopia de Energia Dispersiva de raios X (EDX), detectando grupos químicos contendo oxigênio por meio de análises de Espectroscopia de fotoelétrons excitados por raios X (XPS). Além disso, constatou-se que valores de pH entre 5,0 e 6,0 foram os mais favoráveis para promover a adsorção. Verificou-se que a adsorção foi rápida, obtendo o equilíbrio a partir de 30 minutos, com adsorção máxima a partir de 40 minutos, aplicando-se o modelo de pseudossegunda ordem o qual se ajustou mais adequadamente à isoterma, corroborando com o tipo de quimissorção. Nos experimentos de capacidade máxima de adsorção, foram atingidos os valores máximos de 0,3329 mmol g-1 para cobre, 0,4154 mmol g-1 para cádmio e 0,4590 mmol g-1 para cobalto. O material adsorvente também foi aplicado em ensaios no sistema em fluxo (em coluna) para recuperação dos metais em amostras com padrão conhecido e em amostra do Rio Tietê, obtendo valores significativos para fator de enriquecimento: no caso do cobre (próximo a 20), e valores de recuperação expressivos para cobre (95,5%) e cobalto (77,5%). Tais dados permitem concluir que foram obtidos valores significativos de adsorção e recuperação dos metais analisados tanto nos estudos preliminares, quanto nas aplicações em amostra real do Rio Tietê.
  • ItemTese de doutorado
    Desenvolvimento de metodologias verdes na investigação química de resíduos de soja (Glycine max (L.) Merr.) e de seus produtos derivados
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-02-28) Bragagnolo, Felipe Sanchez [UNESP]; Funari, Cristiano Soleo de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Anualmente quantidades expressivas de subprodutos agrícolas são produzidas, os quais contêm diversos compostos bioativos. No caso da soja (Glycine max (L.) Merr.), estima-se que cerca de 651 milhões de toneladas de galhos, folhas, vagens e raízes serão deixados no solo após a colheita do grão em 2022/23. Esses subprodutos podem servir como uma fonte amplamente disponível e de baixo custo de metabólitos de alto valor agregado, como flavonoides, isoflavonoides e outros metabólitos. Os objetivos deste trabalho foram realizar a i) revisão acerca dos metabólitos presentes nas partes subutilizadas da soja (i.e., galhos, folhas, vagens e raízes), ii) extração, separação e identificação de uma ampla gama de metabólitos especializados presentes nos subprodutos agrícolas da soja deixados no solo pós-colheita do grão, e iii) geração de extratos contendo alto-conteúdo de compostos fenólicos por meio de solventes eutéticos naturais profundos (NADES) pressurizados (PLE). Por meio da revisão da literatura acerca da composição fitoquímica da soja pôde-se (i) identificar uma ampla gama e compostos bioativos, e subsequente, a análise metabolômica dos subprodutos da soja e (ii) demonstrar a presença de tais metabólitos em galos, folhas, vagens e raízes deixadas no solo após a colheita do grão. A combinação da PLE e NADES (iii) gerou extratos com alto conteúdo de compostos fenólicos, além de possibilitar uma nova abordagem para a extração da fração lipídica da soja. Adicionalmente, está sendo realizada a extração seletiva de genisteina e apigenina utilizando-se ferramentas in silico, Hansen solubility parameters (HSP) e Conductorlike Screening MOdel for Real Solvents (COSMO-RS), e otimização por meio do planejamento experimental (DoE). Ao fim, propõe-se a agregação de valor aos subprodutos agrícolas da soja, demonstrando o potencial uso destes materiais como fonte de compostos bioativos.
  • ItemTese de doutorado
    Plasma-rico em plaquetas liofilizado associado à nanohidroxiapatita na performance celular e regeneração óssea
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-01-20) Ferreira, Marcel Rodrigues [UNESP]; Zambuzzi, Willian Fernando [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Lesões ósseas constituem um dos problemas mais prementes na área médico-odontológica. Embora o tecido ósseo seja um tecido altamente dinâmico com boa capacidade de se regenerar, em caso de lesões extensas faz-se necessário o uso de biomateriais que permitam uma boa regeneração tecidual. Até o presente, não foi desenvolvido nenhum material sintético que reúna as propriedades e capacidades ofertadas pelo material autógeno, conhecidamente como material ideal. Dentre as diversas terapias propostas, a associação de biomateriais em escala nanométrica, como hidroxiapatita e/ou fosfato tricálcio, vem apresentando resultados positivos no processo de regeneração do tecido ósseo. Outra vertente amplamente utilizada é o uso de plasma rico em plaqueta (PRP), obtido do próprio paciente, no tratamento destas lesões. Baseando-nos neste prévio conhecimento sobre o potencial de ambas as terapias, o objetivo desta tese é a associação de hidroxiapatita em escala nanométrica (nanoHAp) e/ou fosfato tricálcio (βTCP) ao PRP liofilizado para a obtenção de um produto capaz de melhorar a regeneração óssea e por conseguinte a qualidade de vida do paciente. A experiência prévia do nosso grupo foi utilizada para uma caracterização do impacto deste compósito nas vias de sinalização clássicas relacionadas a processos de diferenciação de osteoblastos e regeneração do tecido ósseo através de ensaio in vitro. Embora o tema desta tese tenha sido amplamente explorado na literatura nossa motivação é justamente conhecer os aspectos celulares e moleculares que regem sua atuação durante os mecanismos de regeneração, além de propor protocolos prévios de, como resultado da proposição de novos métodos metodológicos alternativas na prática clínica, facilitando sua aplicação em lesões do tecido ósseo, amparado por um repertório molecular que justifica sua escolha e sua atuação, parâmetros altamente necessários para interagir com o setor produtivo. Foi utilizado o conhecimento em bioinformática para iniciar a compreensão do efeito de miRNAs presentes em micropartículas de plaquetas (PMPs) na osteogênese, adicionando uma nova faceta ao panorama do tratamento autólogos de PRP no tecido ósseo. Na sequência foi iniciada a padronização da obtenção PRP e sua liofilização, realizando a caracterização físico-química utilizando espectroscopia de infravermelho e molecular com ELISA. A performance celular foi avaliada em pré-osteoblastos (MC3T3-E1) e mesenquimais (MS) com ensaios de citotoxicidade e utilizando expressão gênica relativa em modelo de tratamento por 24 h e 7 dias, avaliando períodos iniciais da diferenciação osteoblástica. A síntese e caracterização físico-química de HAp e TCP foi realizada. Utilizando alginato realizamos a obtenção de hidrogéis associando PRP e HAp ou TCP e avaliamos a performance de células MC3T3-E1 e Raw 264.7 submetidas a meio condicionado por 24 h pelos hidrogéis. No geral, nossos resultados sinalizam que o PRP liofilizado afeta o desempenho dos osteoblastos de maneira semelhante ao PRP líquido quando avaliado em vias clássicas. Também foi possível concluir que a associação do PRP com os fosfatos de cálcio avaliados foi possível através da fabricação de hidrogéis de alginato de sódio.
  • ItemTese de doutorado
    Desenvolvimento de ferramentas de biologia de sistemas para avaliação de dados detranscriptômicos
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-10-14) Pilan, José Rafael [UNESP]; Rybarczyk Filho, Jose Luiz [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A cada dia são desenvolvidos novas metodologias e equipamentos que proporcionam maior facilidade para a elucidação dos RNAs transcritos em situações específicas nos mais diferentes organismos. O que essas metodologias e equipamentos possuem em comum é o enorme volume de dados que podem gerar em cada execução. Devido a grande quantidade de tecnologias que estão surgindo para geração de dados de sequenciamento e expressão gênica precisamos de ferramentas que permitam o estudo e análise integrada dos difer entes dados advindos dos resultado desses experimentos. Nesse trabalho propomos a integração das funções do transcriptograma com uma ferramenta desenvolvida para visualização de dados de expressão sobreposto a uma rede biológica gerando como resultado fina l um pacote para execução no layout de dashboard das ferramentas citadas. O pacote foi desenvolvido utilizando a linguagem de programação R em conjunto com as linguagens C e C++ e disponibilizado para o ambiente R. Para validar a ferramenta utilizaremos da dos de expressão gênica de amostras de pulmão obtidas das tecnologias de sequenciamento microarranjo e Single - Cell RNA. Como resultados a ferramenta levi (Landscape Expression Visualization Interface) está disponível para download em um dos principais repo sitórios onlines de ferramentas de bioinformática, o Bioconductor. A integraccão das ferramentas do transcriptograma foram adicionadas ao dashboard e para validarmos a aplicacão realizamos o workflow do trancriptograma em dados de microarranjo e RNA - seq de amostras de pessoas com e sem adenocarcinoma de pulmão. Os resultados indicam uma maior acurácia na utilizacão da ferramenta rTranscriptograma tanto para dados de microarranjo como para dados de RNA - seq.
  • ItemTese de doutorado
    Funcionalização de carvão ativado com ligante melamina para adsorção de espécies metálicas de meio aquoso
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-09-16) Silva, Adrielli Cristina Peres da; Castro, Gustavo Rocha de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Diante da crescente exposição de metais pesados, houve-se a necessidade de um aprofundamento em pesquisas por parte da comunidade científica. Nesta perspectiva, o presente trabalho relata o desenvolvimento de um material adsorvente, feito a partir da folha de Typha sp., a qual foi submetida ao processo de ativação e, posteriormente, à funcionalização por meio do ancoramento de moléculas de 1,3,5-Triazina-2,4,6-triamina (melamina) para aplicação nos estudos de adsorção de Cu(II), Cd(II) e Pb(II) de meio aquoso. A funcionalização do material foi constatada por espectroscopia vibracional em infravermelho, a qual indicou bandas em 3467, 3424 e 1338 cm-1 atribuídas à vibração de estiramento de -NH2, o que pode ser um indicativo sobre a ocorrência do ancoramento do ligante na superfície do material. Análise elementar de nitrogênio corroborou os resultados da espectroscopia na região do infravermelho e apresentou 2,21% de nitrogênio no material funcionalizado, enquanto 1,30% no carvão ativado. Espectroscopia de fotoelétrons excitados por raios X mostrou a modificação da composição da superfície do material após a reação de funcionalização. Quanto aos estudos de adsorção, também se constatou que o material apresenta uma cinética rápida, com maior tendência a ser descrito pelo modelo cinético de pseudo-segunda ordem. Quanto ao pH do meio, cujo valor favorece o processo adsortivo, foi determinado em 6,0, (pHPZC = 7,5), o qual também corresponde ao valor aproximado de águas naturais. A capacidade máxima de adsorção foi de 0,4388, 0,4025 e 0,2792 mmol g-1 para Cu(II), Pb(II) e Cd(II), respectivamente. O modelo que descreve a adsorção do material, foi o modelo de Langmuir, com coeficiente de correlação de 0,99 para as três espécies citadas. Para posterior aplicação em procedimento de pré-concentração, estudos dos parâmetros como massa e vazão foram otimizados. Em análise aos resultados obtidos, o material sintetizado apresenta boas propriedades adsortivas para as espécies metálicas, se destacando dentre os materiais presentes na literatura, o que o caracteriza com grande potencial para a aplicação em remediação de áreas contaminadas.
  • ItemTese de doutorado
    Compostos antioxidantes em vinhos produzidos na região de São Roque e São Miguel Arcanjo
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-01) Camargo, João Pedro Corrêa [UNESP]; Lima, Giuseppina Pace Pereira [UNESP]; Fernandez, Roberto Morato [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O consumo de vinho vem aumentando em toda a população brasileira, tanto por seus benefícios quanto por apreciarem a bebida como um todo. Neste estudo, foram avaliados compostos bioativos (aminas e compostos fenólicos), assim como a atividade antioxidante e análise isotópica para detecção de adulterações em vinhos comerciais proveniente das regiões de São Roque e São Miguel Arcanjo, SP. Foram analisados 30 vinhos comerciais das regiões de São Roque (latitude: 23° 31' 51'' Sul e longitude: 47° 8' 8'' Oeste) e São Miguel Arcanjo (latitude: 23° 52' 50'' Sul, Longitude: 48° 0' 38'' Oeste) de 9 genótipos, pertencentes à safra de 2017/2018. Os vinhos foram doados por produtores e analisados em triplicata. Foram realizadas análises bioquímicas como compostas fenólicos totais, flavonoides totais, antocianinas totais, atividade antioxidante por DPPH e perfil de aminas, aminoácidos e polifenois por HPLC. Além disso, analisamos por isótopos estáveis a possível adulteração dos vinhos pela adição de açúcares de plantas C4. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram-se muito promissores, onde foi revelado que o conteúdo de aminas biogênicas foi relativamente baixo. Além disso, os vinhos da uva ‘Bordo’ e ‘Niagara Rosada’ apresentaram teores superiores de aminoácidos, neurotransmissores e compostos fenólicos, quando comparados com resultados obtidos em outros trabalhos. Os vinhos obtidos de uvas ‘Máximo’, apesar de não mostrarem grandes quantidades de aminoácidos e neurotransmissores, apresentaram elevados teores de compostos fenólicos, assim como os vinhos de uva ‘Violeta’, principalmente as antocianinas, compostos utilizados para maior coloração. Por meio da técnica de isótopos estáveis, foi possível detectar a presença de adulterações pela adição de açúcares.
  • ItemTese de doutorado
    Biossensor para identificação da doença de alzheimer
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-10-07) Bovolato, Ana Livia de Carvalho; Leite Moraes, Marli; Brolo, Alexandre; Deffune, Elenice [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A doença de Alzheimer (DA) é a uma doença neurodegenerativa complexa, responsável pela maioria dos casos de comprometimento cognitivo progressivo em pacientes idosos. O processo degenerativo pode iniciar 20 anos antes da manifestação clínica da doença. O diagnóstico precoce e preciso da DA continua laborioso e quase sempre interfaceado com o diagnóstico de exclusão. Neste projeto é proposto o desenvolvimento de um biossensor para a detecção da doença de Alzheimer baseado na detecção de autoanticorpos anti-ATP-sintase subunidade Beta e anti-FRMD8 presentes em amostra periféricas, soro, e em LCR (líquido cefalorraquidiano) de pacientes com a doença de Alzheimer. Para tal foi construído dois sistemas baseados em imunoensaios: 1) imobilizou-se ATP-Sintase subunidade Beta em lâmina de ouro modificadas com 11-MUA e Quitosana e 2) imobilizou-se o peptídeo FRMD8 associado ao lipossomo de DPPG em superfície de ouro modificada com 11-MUA e PEI. Em ambos os casos se quantificou os respectivos anticorpos comerciais diluídos nas proporções não diluído, 0,01mg/mL (puro), 1:10 (0,001mg/mL), 1:100 (0,0001mg/mL), 1:1000 (10ng/mL) e 1:10000 (1ng/mL), com o intuito de gerar uma curva de calibração. Para realizar as medidas foi feita a técnica de SERS (Espectroscopia Raman Aprimorada por Superfície) usando sondas SERS de nanopartículas de ouro modificadas com Anti-IgG porção Fc. Como análise comparativa, ambos os resultados foram comparados com amostras de indivíduos não portadores de DA (como controle Alzheimer, CA) e com anti-HIV p17 como controle experimental (CE). Os sensores foram hábeis de gerar curvas de calibração na qual o biossensor baseado em FRMD8 foi capaz de detectar até 1ng/mL e o biossensor baseado em ATP-Sintase foi capaz de detectar até 10ng/mL. Na validação, apenas o biossensor baseado em ATP Sintase se demostrou eficaz na semi-quatificação e diferenciação entre controles e amostras e através de análise de PCA foi estabelecer e criar um Score SERS e correlacionar com o Score MEEM. Um ponto extremamente importante a se destacar nesse trabalho é que não há biomarcador “perfeito” para a DA devido ao seu múltiplo interfaceamento, sendo, a melhor alternativa, uma análise de múltiplos marcadores.
  • ItemTese de doutorado
    Avaliação do potencial cicatricial de formulações tópicas contendo beta-cariofileno em lesões cutâneas de ratos
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-08-27) Gushiken, Lucas Fernando Sérgio; Pellizzon, Cláudia Helena [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A pele é fundamental para manter a integridade do organismo. A descontinuidade desse sistema promove o mecanismo cicatricial, que pode ser dividido em fases inflamatória, proliferativa e remodeladora. As lesões cutâneas têm grande importância na saúde pública devido à possibilidade de deficiência física ou até mesmo levar à morte. Como consequência de estudos anteriores referentes à atividade cicatricial da Copaifera langsdorffii, o sesquiterpeno β-cariofileno e a óleo-resina de Copaifera langsdorffii nanoencapsulada foram selecionados para analisar o potencial cicatricial das formulações e seus mecanismos de ação. Para isso, foram utilizados ratos Wistar machos divididos em grupos experimentais (n = 5): Controle, FST, Gel, Col, Dex, NeBa, Car e NLC. Os animais foram submetidos à lesão dorsal de 3 cm de diâmetro, tratadas duas vezes por dia durante 3, 7 e 14 dias. As áreas das lesões foram medidas diariamente para verificar a redução macroscópica das lesões e amostras foram retiradas para análises de atividade anti-inflamatória, histopatológicas e imunohistoquímicas. Macroscopicamente foi possível observar a retração das lesões nos tratamentos Car e NLC comparados com FST e Gel. Os resultados de ELISA mostraram o potencial anti-inflamatório dos tratamentos Car e NLC pela redução de citocinas pró-inflamatórias TNF-α, IFN-γ, IL-1β e IL-6 e aumento da citocina anti-inflamatória IL-10. Os resultados das análises bioquímicas para estresse oxidativo mostraram o aumento de GPx nos grupos NeBa, Car e NLC. As análises histopatológicas e imunohistoquímicas mostraram o aumento da imunomarcação de laminina-γ2 e α-SMA, bem como a redução de desmogleína-3 em Car e NLC. Foi observado o aumento da deposição de colágeno nos tratamentos Car e NLC comparados a FST. Sendo assim, a partir dos resultados analisados, confirmou-se a atividade cicatricial do β-cariofileno e da óleo-resina de copaíba em lesões cutâneas, estimulando os mecanismos de retração da lesão mediado por miofibroblastos, o remodelamento da matriz extracelular e a reepitelização mediada por laminina-γ2; além de inibir a atividade inflamatória e o estresse oxidativo local.
  • ItemTese de doutorado
    Sinalização parácrina mediada por proteínas e microvesículas entre células ósseas e seu microambiente
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-04-08) Fernandes, Célio Junior da Costa; Zambuzzi, Willian Fernando [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Compreender os mecanismos envolvidos na manutenção e homeostase óssea requer elucidar o comportamento de células em seu microambiente. O objetivo deste estudo foi investigar como células ósseas (MC3t3-E1, HOEL) ou mesenquimais são moduladas através da sinalização parácrina desencadeada por fibroblastos (3t3-NIH), células endoteliais de veias (HUVEC) e de aorta (HCAEC), além de células de músculo liso (AoSMC/VSMC). Para avaliar essa capacidade de modulação de células ósseas, fibroblastos, células endoteliais e de musculatura lisa foram mantidas em cultura por 72 horas com o intuito de condicionar o meio, o qual foi coletado e utilizado para tratar MC3T3 ou HOEL ou células mesenquimais, com o intuito de fazer uso de ferramentas de biologia celular e molecular para investigar alterações de expressão gênica e fenotípica. Nossos resultados mostram que 3T3-NIH é capaz de modular a expressão de marcadores de diferenciação osteoblasto-osteócito (DMP1. SOST, RankL e OPG). Além disso, vimos que AoSMC em duas condições distintas - Estatico e Shear-Stress - são capazes de promover uma transição osteoblasto-osteócito através de vesículas extracelulares (EVs), ativando a expressão de biomarcadores moleculares deste processo (miR23-a, DMP1, SOST, FGF23 e GP38) e, neste contexto, nossos dados também mostram que o meio condicionado por HUVEC modula marcadores de diferenciação de osteoblastos (Runx2, Osterix e ALP) e genes que são traduzidos em proteínas e que atuam na homeostase dos minerais da matriz óssea (NPP1 e TNAP). Considerando que as células AoSMC e HUVEC são capazes de modular a osteocitogênese e a osteoblastogênese, respectivamente, o meio condicionado por essas células foi coletado e as vesículas foram extraídas coletadas para melhor caracterização em termos de tamanho, concentração, biomarcadores de membrana, carga elétrica de membrana e conteúdo proteico, o que revelou que o perfil AoSMC não apresentou diferença em termos de condições experimentais (estática e Shear-Stress), também vimos que as células mesenquimais que recebem o tratamento com meio de cultura condicionado por AoSMC aumentou os marcadores de osteocitogênese, enquanto os EVs isolados do meio condicionado por HUVEC modularam positivamente esses mesmos marcadores (PHEX, MEPE, MMP-14, GP-38, DMP1). Esses dados permitem concluir que o tecido endotelial e os fibroblastos contribuem para a homeostase do osso e sua remodelação dinâmica é modulada pela transição osteoblastos-osteócitos por meio de fatores tróficos e vesículas extracelulares.
  • ItemTese de doutorado
    Avaliação da atividade larvicida da microbiota intestinal cultivável de mosquitos Aedes spp.
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-03-30) Porto, Mariana Cristina de Freitas; Souza Neto, Jayme Augusto de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Mosquitos são grandes responsáveis por sérios problemas de saúde pública no mundo e transmissores de diversas arboviroses. Até o momento, não existem vacinas ou medicamentos eficazes disponíveis contra essas arboviroses, dessa maneira, o controle vetorial ainda é a principal estratégia de intervenção para reduzir a disseminação dos principais arbovírus urbanos transmitidos pelos mosquitos do gênero Aedes. No entanto, a eliminação dos mosquitos tornou-se muito desafiadora no ambiente urbano moderno, onde a crescente ocorrência de resistência a inseticidas tornou o uso de tais compostos químicos cada vez menos eficazes. Neste contexto, o desenvolvimento de novos produtos é extremamente necessário. Recentemente, a microbiota intestinal do mosquito provou ser um ótimo recurso utilizando bactérias com atividades antivirais e entomopatogênicas. O objetivo deste trabalho foi identificar e analisar a atividade larvicida de bactérias cultiváveis isoladas da microbiota intestinal de mosquitos Aedes aegypti e Aedes albopictus coletados em Avaré e Botucatu/SP. As bactérias isoladas do intestino do mosquito foram purificadas em meios seletivos e foram realizadas extrações de DNA e a identificação foi realizada a partir da amplificação e sequenciamento do fragmento do rDNA 16S. Posteriormente, avaliou-se a ação larvicida das bactérias que foram identificadas e isoladas sobre larvas do segundo estágio de Ae. aegypti (Rockefeller), em condições de laboratório. Os bioensaios foram preparados com dez larvas, em triplicata, colocadas em placas de seis poços, contendo os pellets de cultura bacteriana resuspendida em 5ml de PBS 1X e o controle negativo contendo 5ml de PBS 1X. As suspensões bacterianas foram ajustadas para DO600= 1.0. Os bioensaios foram mantidos no insetário à temperatura de 28°C, umidade relativa de 80 ± 5% e fotoperíodo de 12 horas. Os resultados do bioensaio larvicida foram registrados diariamente após a inoculação do meio bacteriano nos poços contendo as larvas por quatro dias. Foram identificadas 26 diferentes espécies de bactérias de 10 gêneros. Os gêneros Bacillus (30,76%) e Chryseobacterium (15,38%) apresentaram a maior porcentagem dos isolados obtidos. Nossas análises revelaram que três isolados bacterianos, Bacillus sp. (1C1-1), Chryseobacterium cucumeris (27D12) e Chryseobacterium indologenes (POOL 4D), apresentaram elevada atividade na mortalidade nas larvas de Ae. aegypti (Rockfeller), sendo 70%, 80% e 90% , respectivamente após 96 horas. Essas bactérias por apresentarem mais de 50% de mortalidade em 96 horas foram utilizadas em bioensaios para estimar as doses letais (DL50) contra larvas de segundo estágio de Ae. aegypti. Considerando as avaliações nos intervados de 24, 48, 72 e 96 horas, verificou-se que o isolado Chryseobacterium indologenes (POOL 4D) obteve maior toxicidade, para os quais foram obtidos os menores valores de DL50 nos quatro intervalos de leitura. Nossos resultados demonstram que o uso dessas bactérias podem ser uma alternativa viável no controle dos vetores futuramente.
  • ItemTese de doutorado
    Minimização das forças de contração de polimerização de resinas compostas usando o controle de intensidade de luz no processo de fotoativação
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-09-30) Marcelino, Edilmar; Cesarino, Ivana [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Em nosso país, o número de pessoas que tem problemas bucais de origem dentária, apresenta dados alarmantes quando comparados a outros países desenvolvidos. Por mais avanço que a Odontologia vem apresentando nas últimas décadas, encontramos problemas nos processos das restaurações dentárias, sejam por causa dos materiais e equipamentos utilizados ou devido às técnicas utilizadas. Visando restabelecer o elemento dental destruído por fraturas ou por cárie, as restaurações dentárias visam devolver a estrutra perdida, reestabelecendo de maneira apropriada a forma e função natural. Com enforque especial para as resinas compostas, as mesmas são utilizadas como o material de primeira escolha pelos profissionais, lenvando-se em conta a exigência dos pacientes, os quais buscam além da função mastigatória, um material que apresente estética adequada. Assim, o resultado estético encontrado com o uso das resinas compostas é muito bom, variando da composição das mesmas e indicação específica da região dental em que deverão ser utilizadas, de acordo com a necessidade do profissional. No entanto, alguns comportamentos mecânicos durante e após o processo de fotopolimerização são insatisfatórios, em especial, a elevada contração de polimerização, a qual acarreta infiltrações bacterianas nestas restaurações no decorrer do tempo, levando a destruição dental e perda consequente da restauração. Pelo exposto, o presente estudo avaliou os diferentes métodos de fotoativação: convencional, pulse-delay, soft-start e exponencial, considerando diferentes níveis de energia de ativação. Foram utilizados três modelos/marcas de resinas compostas para a realização dos ensaios de contração, dureza e variação de temperatura. O método exponencial apresentou resultados promissores para sua aplicação em consultórios odontológicos, pois demonstrou grande potencial para diminuição da contração de polimerização e da variação da temperatura na resina, mantendo a qualidade da restauração quando comparado aos demais métodos de fotoativação.
  • ItemTese de doutorado
    Avaliação cognitiva e de volumetria cerebral em uma amostra brasileira de pacientes com esclerose múltipla: um estudo transversal
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-04-09) Medeiros, Leonardo Mariano Inácio; Pedrosa, Valber de Albuquerque [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Introdução: a esclerose múltipla (EM) é uma doença desmielinizante e inflamatória, de etiologia autoimune, com componente degenerativo, comprometendo o sistema nervoso central. Nos últimos anos, muitos centros de pesquisa e tratamento de pacientes com EM estão voltando a atenção para os aspectos cognitivos e de volume cerebral. Objetivo: avaliar em pacientes com diagnóstico de EM as características clínicas, sociodemográficas, cognitivas e de neuroimagem, a fim de mensurar se há relação entre os aspectos cognitivos e de volumetria. Método: os participantes foram submetidos à avaliação da incapacidade funcional por meio do EDSS, a bateria do BICAMS (SDMT, CVLT-2 e o BVMT-R) para avaliação cognitiva e a um questionário para detecção de sintomas depressivos e de ansiedade. Os participantes realizaram exame de ressonância magnética de crânio e após quantificação do volume cerebral pelo MSmetrix. Resultados: foram incluídos no estudo 54 pacientes com EM. A amostra foi formada principalmente por mulheres e com faixa etária média de 36 anos de idade, com nível de escolaridade alta e média de EDSS de 1,6. Em relação à presença de sintomas depressivos, foi observado correlação estatisticamente significativa (p < 0,05) com o BICAMS e com a fadiga. O EDSS apresentou correlação negativa com o SDMT oral (p = -0,40) e o BVMT-R T1 (p = -0,28) e a coordenação motora demonstrou correlação negativa com SDMT oral (p = -0,57) e com CVLT-2 (p = -0,34). Além disso, percebemos uma correlação entre o SDMT oral e a volumetria cerebral, tanto total (p = 0,009920), quanto de substância cinzenta (p = 0,009531) e com a carga lesional (p = 0,000123). Finalmente, ao realizarmos análise de regressão linear, em que a variável dependente foi o SDMT, percebemos que a depressão foi responsável por 27,26% do Coeficiente de Determinação (R2), demonstrando sua importância na avaliação do paciente com EM. Conclusões: os resultados deste trabalho sugerem que pacientes com EM e sintomas depressivos possuem pior desempenho nos testes cognitivos e pior nível de incapacidade funcional, devendo ser avaliado em todo paciente com EM; além disso, o SDMT mostrou correlação positiva com a volumetria cerebral.
  • ItemTese de doutorado
    Toxicidade e genotoxicidade do biopesticida Azamax™ em ovário e intestino de Ceraeochrysa claveri (Neuroptera:Chrysopidae)
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-08-05) Pastrana, Bertha Irina Gastelbondo; Santos, Daniela Carvalho dos [UNESP]; Fernandes, Fábio Henrique; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O biopesticida Azamax™ tem sido utilizado como uma alternativa aos inseticidas sintéticos para o controle de pragas em plantações. Além disso, este produto tem obtido destaque por poder se associar ao uso de predadores naturais no controle biológico previsto pelo Manejo Integrado de Pragas (MIP). Dentre os modelos biológicos, destaca-se a espécie Ceraeochrysa claveri, sobretudo devido sua característica predadora na fase de larva com ampla variedade de presas e alto potencial reprodutivo na fase adulta. Embora a azadiractina, ingrediente ativo do Azamax™, já tenha sido relacionada com a indução de efeitos citotóxicos em insetos, ainda não há dados na literatura sobre os possíveis efeitos da sua ingestão indireta em células germinativas e intestinais de C. claveri. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito tóxico e genotóxico do Azamax™ em células do ovário e do intestino de fêmeas de C. claveri. As larvas foram alimentadas ad libitum, com ovos de Diatraea saccharalis tratados com duas diferentes concentrações do Azamax™ (0,3% e 0,5%) durante todo o seu período larval (n=150 larvas/grupo). As análises morfológicas, ultraestruturais e de genotoxicidade foram realizadas após os indivíduos se desenvolverem até a fase adulta. Os resultados indicaram que a exposição ao Azamax™ somente na fase larval, induziu sinais de toxicidade em todas as fases do desenvolvimento do inseto, como: (a) significante taxa de mortalidade a partir do 3º instar larval; (b) prepupa e pupas inviáveis; (c) alterações na duração das fases (larva, prepupa e pupa); (d) marcantes malformações nos adultos emergidos; (e) danos primários no DNA de células intestinais e células dos ovários; (f) alterações ultraestruturais significantes nas células ovarianas (desorganização dos cistos/folículos ovarianos, dilatação do envelope nuclear e do retículo endoplasmático das células ovarianas e grande número de células com morfologia sugestiva de morte celular apoptótica. Nas condições experimentais utilizadas, os presentes dados indicam que o Azamax™ afeta o desenvolvimento e o potencial reprodutivo de Ceraeochrysa claveri, o que pode afetar a manutenção da espécie no ecossistema e, consequentemente, a continuidade do controle biológico natural exercido por esta espécie predadora de pragas.
  • ItemTese de doutorado
    Comparação de padrões de dieta vegetariana versus onívora sobre o efeito de ativação da via NRF2 em células endoteliais
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-07-24) Cinegaglia, Naiara da Costa; Sandrim, Valéria Cristina [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Evidências apontam que a dieta vegetariana diminui a probabilidade de desenvolver doenças cardiovasculares (DCVs). Um dos principais mecanismos que levam às doenças cardiovasculares é a disfunção do endotélio, associada com a diminuição da biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) e a produção excessiva de espécies reativas de oxigênio (ROS). Do ponto de vista de biomarcadores de estresse oxidativo/antioxidante e de envelhecimento biológico, enzimas com propriedades antioxidantes e o comprimento do telômero podem apresentar efeitos na modulação do sistema vascular. O presente estudo inclui dois manuscritos, sendo o primeiro relacionado a via de regulação NRF2/HO-1 e o segundo ao comprimento dos telômero em onívoros (ONI) e vegetarianos (VEG). No primeiro manuscrito, o objetivo foi verificar a concentração de HO-1 circulante, bem como investigar o efeito da incubação do plasma de ONI e VEG em células endoteliais sob a modulação da via NRF2/HO-1 e a produção de NO. Dos 745 indivíduos inicialmente recrutados, 44 ONI e 44 VEG do sexo masculino aparentemente saudáveis foram incluídos no estudo. A concentração de HO-1 circulante foi mensurado usando o ensaio de ELISA. As células endoteliais foram incubadas com amostras de plasma de ONI e VEG. Nós observamos que a concentração de HO-1 circulante foi maior nos ONI em relação aos VEG. A incubação das células endoteliais com o plasma de ONI induziu o aumento da expressão gênica/proteica do NRF2 e HO-1, bem como a atividade do ARE e a produção de NO, quando comparado com o grupo VEG. Estes achados indicam que a produção de HO-1 circulante nos ONI pode estar relacionada a um maior status pro-oxidativo. A ativação da via HO-1/NRF2 e a produção de NO em cultura de células endoteliais incubadas com o plasma de ONI, parece refletir um mecanismo adaptativo de proteção destas células contra possíveis danos. No segundo manuscrito, nosso objetivo foi avaliar o comprimento do telômero em leucócitos (LTL, do inglês leukocyte telomere length) nos ONI e VEG e sua associação com biomarcadores clássicos de risco cardiovascular. O LTL foi mensurado em 39 amostras de ONI e 41 de VEG através da reação em cadeia da polimerase (PCR) quantitativa em tempo real (RT-QPCR). Apesar de não haver diferença no comprimento do telômero entre ONI e VEG, uma forte correlação negativa entre LTL e a espessura intima-média da carótida (IMT, do inglês intima-media thickness) foi observada nos ONI, mas não no grupo VEG. Além disso, os ONI que foram classificados com o LTL curto apresentaram maior IMT comparado com VEG. Nossos achados sugerem que o comprimento do telomero pode ser utilizado como um marcador de aterosclerose subclinico no grupo de onívoros.
  • ItemTese de doutorado
    Recuperação enzimática na produção de etanol 2g: um estudo sobre capacidade de adsorção entre lignocresol e celulases.
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-05-07) Ferreira, Mariana Teresa Barduco; Oliveira Neto, Mario de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A busca por fontes de energias renováveis vêm ganhando cada vez mais importância, pois, com a eminente escassez dos combustíveis fósseis, que são as principais fontes energéticas utilizadas mundialmente e ao mesmo tempo com os problemas ambientais causados por esses combustíveis, o etanol de segunda geração (2G) surge como uma alternativa de energia renovável já que é obtido a partir de biomassa lignocelulósica. Entretanto, as tecnologias para a conversão desta biomassa em açúcares fermentáveis ainda possuem fatores limitantes. Um dos grandes problemas do processo de obtenção do etanol 2G está relacionado ao custo das enzimas celulolíticas. Sendo assim, desenvolver estratégias para a recuperação dessas enzimas é necessário para assegurar a viabilidade econômica do processo de conversão de biomassa. Diversas técnicas estão sendo estudadas e colocadas em prática para promover a recuperação, reciclagem e imobilização enzimática. Entretanto, nenhuma das metodologias utilizadas demonstram, de maneira geral, alta eficiência, custo baixo, rapidez e manutenção da atividade enzimática. A partir da lignina, subproduto da indústria de papel e celulose, pode-se sintetizar o lignocresol. Este, apresenta grandes expectativas de interação enzimática uma vez que apresenta características físico-químicas favoráveis à adsorção. Frente a isto, propusemos a produção deste composto para promover a interação com enzimas para promover recuperação enzimática. A síntese de lignocresol, oriundo da lignina Kraft de Pinus spp., foi feita pela adaptação à metodologia do sistema de separação de fases. Nesse processo, mais especificamente na primeira fase, a madeira é solvatada com o p-cresol (derivado do fenol) para evitar o ataque do ácido concentrado a lignina e assim ela não se dissolver. Desse modo, apenas os carboidratos são dissolvidos pelo ácido concentrado na segunda fase. Para obtenção do complexo, foram realizadas duas suspensões de lignocresol em tampão citrato de sódio (50 mM), ambas com concentração fixa 10 mg/mL. Ensaios de adsorção foram realizados entre o lignocresol e β-glicosidases (TpBgl1 e TpBgl3), e o coquetel enzimático Cellic Ctec 3 (Novozymes). Em relação a adsorção das β-glicosidases, os resultados encontrados demonstram grande adsorção (100-90%) do lignocresol para com TpBgl1 e TpBgl3, em concentrações inferiores à 0,25 e 0,40 mg/mL, respectivamente. Ensaios de adsorção utilizando somente a lignina apresentaram resultados muito inferiores aos de lignocresol, comparados também em concentrações inferiores como demonstradas anteriormente, sendo ausente adsorção de lignina à TpBgl1 e adsorção de lignina à TpBgl3 de 70-50%. Os ensaios de ELS, demonstraram que lignocresol e lignina apresentam potencial-zeta (mV) negativo entre a faixa de pH 4-7. Vale ressaltar que, entre o pH 5-7, o lignocresol apresenta valores maiores negativamente se comparado à lignina. A adsorção do lignocresol proveniente da lignina Kraft com o coquetel Cellic Ctec 3 foi eficiente, a celulase foi efetivamente imobilizada pelo lignocresol. O desempenho da hidrólise enzimática de celulases imobilizadas em lignocresol é de aproximadamente 33% em relação ao da celulase livre na conversão de açúcares. A celulase manteve uma atividade residual após a adsorção em lignocresol. A estabilidade do complexo celulase de lignocresol também foi testada e a atividade foi mantida a partir da formação do complexo. Portanto, todos estes resultados mostram boa adsorção do lignocresol às enzimas, demonstrando que o lignocresol pode ser utilizado como suporte para recuperação enzimática, sendo uma alternativa para redução dos custos na produção de etanol 2G.
  • ItemTese de doutorado
    Identificação de assinaturas sistêmicas associadas à tolerância ao etanol em linhagens de Saccharomyces cerevisiae
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-07-01) Wolf, Ivan Rodrigo; Valente, Guilherme Targino [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A crescente demanda por combustíveis fósseis e as instabilidades econômicas relacionadas à sua utilização despertam o interesse no desenvolvimento de biocombustíveis tais como o bioetanol. O processo de produção mais comum do bioetanol é a tecnologia de primeira geração, no qual o organismo mais amplamente utilizado é a levedura Saccharomyces cerevisiae. No entanto, a alta concentração de etanol gera toxicidade para S. cerevisiae e constitui um dos fatores limitantes na produção deste bioetanol. Assim, a produção de linhagens mais resistentes a esse estressor constitui um ponto chave no desenvolvimento dos processos biotecnológicos relacionados ao bioetanol. Nesse contexto, análises sistêmicas são pouco empregadas para o entendimento do fenômeno de tolerância ao etanol, deixando a busca por genes candidatos algo bastante laborioso e custoso. Assim, as diferenças entre linhagens pouco tolerantes (LT) e altamente tolerantes (HT) ao etanol (EtOH) foram analisadas por meio de ferramentas de bioinformática como a biologia de sistemas e a análises de transcriptomas. Os resultados mostraram que as linhagens HT e LT utilizam inicialmente um sistema de resposta à estresse comum, mas que devido as mudanças na estrutura das redes metabólicas, regulatórias e de interação proteína-proteína de cada linhagem, mecanismos de resposta ao estresse por etanol distintos são ativados em cada grupo. As linhagens LT mantém a homeostase da célula com o ciclo celular ativo, efetuando o ajuste dos metabolismos ao custo de que elementos transponíveis ficam ativos e agentes anti oxidantes importantes deixam de ser produzidos, permitindo que ocorram danos no DNA. As linhagens HT interrompem seu ciclo celular e boa parte do metabolismo, porém, elas mantêm a produção e reparo de proteínas para estabilizar as membranas celulares e o controle de espécies reativas de oxigênio (ROS) em conjunto com a metabolização do etanol. Uma vez que o EtOH está sendo utilizado para obtenção de carbono no ciclo do ácido cítrico, as linhagens HT resistem a concentrações maiores de etanol. Assim, o conhecimento aqui gerado poderá ser aproveitado para enriquecer as discussões futuras sobre o fenômeno estudado e o desenvolvimento biotecnológico.
  • ItemTese de doutorado
    Aplicação de ferramentas de Engenharia de Tecidos na biofabricação de intestino delgado: desafios da Medicina Regenerativa
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-05-14) Carandina, Rafael Factor [UNESP]; Willian, Fernando Zambuzzi [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Artigo 1 Dos transplantes intestinais convencionais à Engenharia de Tecidos: estado da arte Resumo O intestino delgado é responsável pela realização de múltiplas funções, incluindo motilidade, digestão e absorção. Nos distúrbios gastrointestinais, algumas dessas funções são prejudicadas ou perdidas. A ressecção do segmento doente é uma abordagem comum. No entanto, os pacientes sofrem de complicações e de baixa qualidade de vida. Substituições funcionais são, portanto, necessárias para restaurar, reparar ou substituir partes danificadas do intestino. A Engenharia de Tecidos e a Medicina Regenerativa fornecem uma abordagem alternativa para reconstruir diferentes segmentos do trato gastrointestinal. Os desafios são grandes e a área é extremamente promissora. Artigo 2 Avaliação e caracterização de scaffolds de matriz extracelular para aplicações na Engenharia de Tecidos do trato gastrointestinal Resumo Várias estratégias têm sido exploradas para aumentar o número de enxertos de intestino delgado para transplantes e, principalmente, para diminuir as taxas de rejeição deste órgão transplantado. Avanços recentes na Medicina Regenerativa estão fornecendo novas abordagens para os estudos de reparação ou substituição funcional do intestino afetado, seja por traumas ou por doenças. Neste contexto, a Engenharia de Tecidos pode ser uma opção para produzir scaffolds biocompatíveis para a produção de segmentos de intestino delgado em laboratório. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar e caracterizar diferentes protocolos de descelularização de intestino delgado de ratos Wistar para a produção de scaffolds tubulares. Nossos resultados mostraram que a criopreservação dos intestinos a -80℃, seguida de imersão e agitação moderada em Deoxicolato de Sódio (DS) a 1% durante 2 horas foi o protocolo mais efetivo na remoção nas células e melhor preservação da matriz extracelular, além de preservar a resistência mecânica. Porém, estudos adicionais de otimização do processo de descelularização devem ser implementados para garantir um maior controle de qualidade e produção em escala desses scaffolds, já que os mesmos apresentaram fragmentos longos de DNA residual, os quais podem ser um potencial agente imunogênico.
  • ItemTese de doutorado
    Avaliação da toxicidade do inseticida novaluron em Bombyx mori (Lepidoptera: Bombycidae)
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-05-15) Santorum, Marilucia; Santos, Daniela Carvalho dos [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O bicho-da-seda, Bombyx mori (Lepidoptera: Bombycidae), é o inseto de maior importância econômica na produção de seda. A lagarta se alimenta de folhas de amoreira e é altamente sensível a agrotóxicos, assim o uso destes em culturas agrícolas circunvizinhas às plantações de amoreira pode afetar o desenvolvimento de B. mori, acarretando em desequilíbrio nas suas funções metabólicas e, consequentemente, comprometendo a produção de casulos. Entre estes agrotóxicos, destaca-se o Novaluron, inseticida inibidor da síntese de quitina nos insetos e empregado no controle de insetos pragas de culturas agrícolas próximas as plantações de amoreira. Assim, investigamos os efeitos tóxicos de Novaluron no desenvolvimento de B. mori. Lagartas de B. mori, foram separadas em dois grupos experimentais: grupo controle (GC) e grupo tratamento (GT: tratado com 0, 15 mL/L de Novaluron). Após ecdise do 2° para o 3° instar, lagartas do GT foram alimentadas por 24 horas com folhas de amoreira tratadas com o inseticida. Paralelamente foi realizada uma nova exposição, porém em lagartas que realizavam a ecdise do 4° para o 5° instar. Lagartas, pupas e adultos de B. mori foram anestesiadas e segmentos do intestino médio, glândula da seda e órgãos reprodutores retirados e processados convencionalmente para técnicas de microscopias de luz, eletrônica e imunohistoquímica. Além disso, os efeitos no desenvolvimento, reprodução e qualidade do casulo também foram avaliados. O Novaluron provocou efeitos citotóxicos no intestino médio e na glândula da seda de lagartas de B. mori, bem como reprotoxicidade nos testículos e ovários de lagartas, pupas e adultos, através de pronunciadas alterações, como extrema rarefação citoplasmática e nuclear, dilatação do retículo endoplasmático, alteração mitocondrial, presença de vacúolos citoplasmáticos e dilatação celular com liberação de protusões citoplasmáticas, além de espaçamento entre células epiteliais e a lâmina basal e o desprendimento de algumas células para o lúmen. Em adição, destacamos vários sintomas de toxicidade de Novaluron em todas as fases do desenvolvimento de B. mori, tais como: grande taxa de mortalidade das lagartas, efeito negativo na qualidade do casulo produzido, redução no peso dos casulos construídos, construção de casulos defeituosos, além da significante redução no número de ovos ovipositados pelas fêmeas adultas de B. mori tratadas. Estes resultados nos mostram que Novaluron tem grande efeito tóxico em B. mori, afetando seu desenvolvimento, bem como a produção dos casulos da seda, o que pode causar sérios prejuízos à sericultura no Brasil.
  • ItemTese de doutorado
    Estudos de inibição de β-glicosidases bacterianas por fenóis solúveis
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-02-27) Barbosa, Mariana de Almeida [UNESP]; Oliveira Neto, Mario de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A biomassa lignocelulósica pode ser usada para a produção de energia ou de novos bioprodutos potenciais substitutos de químicos convencionais. Porém a conversão dos polissacarídeos estruturais presentes na parede celular vegetal das células que compõe a biomassa não é simples. Isto se deve principalmente pela presença da lignina, que juntamente com a hemicelulose, formam uma estrutura coesa de microfibrilas que entrelaçam a celulose. Compostos que inibem as enzimas celulolíticas, incluindo fenólicos solúveis (derivados da lignina), açúcares solúveis, aldeídos de furano e ácidos fracos são gerados durante os diversos pré-tratamentos utilizados atualmente. Neste estudo, observamos como os fenólicos solúveis interagem com -glicosidases. Para isso, combinamos simulações de ensaio enzimático, docking molecular e dinâmica molecular para descrever o processo de ligação. Notavelmente, o ácido tânico, um dos fenólicos solúveis estudados, foi a molécula com maior poder inibitório em comparação com todos os demais fenólicos. Possivelmente devido ao seu comprimento e suas substituições de grupos químicos. A alta presença de anéis aromáticos e grupos hidroxilas no ácido tânico, leva a maior interação entre as moléculas e consequente inibição/desativação das β-glicosidases bacterianas, enquanto os grupos carboxílicos presentes nos demais fenólicos alteram os efeitos físico-químicos aumentando a hidrofobicidade; criando cargas eletrostáticas e aumentando a ligação de hidrogênio, afetando assim interações com as β-glicosidases. Observamos também que os diferentes mecanismos enzimáticos apresentados pelas β-glicosidases influenciam no modo de interação dessas moléculas com os fenólicos. Esses dados podem fornecer uma base útil para futuras aplicações biotecnológicas de β-glicosidases microbianas, especialmente no campo da produção de biocombustíveis
  • ItemTese de doutorado
    Mecanismos envolvidos no efeito cicatrizante de feridas cutâneas do lupeol isolado das cascas do caule de Bowdichia virgilioides Kunth. (Fabaceae) em modelos experimentais in vivo e in vitro
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019-03-01) Beserra, Fernando Pereira [UNESP]; Pellizzon, Cláudia Helena [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A dificuldade de cicatrização de feridas é uma das principais complicações decorrentes do Diabetes mellitus (DM), que torna o processo cicatricial mais lento e o tratamento mais dispendioso. O presente estudo teve como objetivo investigar o efeito e os mecanismos do lupeol envolvidos no processo de cicatrização de feridas cutâneas experimentais in vitro e em ratos normoglicêmicos (RN) e hiperglicêmicos (RH). Foi investigado o efeito do lupeol (0,1, 1, 10 e 20 μg/mL) em ensaios in vitro de cicatrização de feridas utilizando queratinócitos e fibroblastos de prepúcio neonatal humano. Para os estudos in vivo, ratos Wistar machos (n=8) foram randomicamente divididos nos seguintes grupos experimentais usando RN: creme base, colagenase 1.2 U/g, creme à base de lupeol 0,1%, 0,2% e 0,4% tratados durante 3, 7 e 14 dias. O estudo realizado em RH, os grupos foram divididos em: creme base, insulina 0.5 U/g e creme à base de lupeol 0.2% (menor dose efetiva em RN) em RH tratados durante 14 dias. A indução experimental de feridas cutâneas foi realizada na região dorsal dos ratos com o auxílio de um punch de 2 cm de diâmetro. Foram investigados parâmetros macroscópicos, histológicos, imunohistoquímicos, imunoenzimáticos e moleculares. Os resultados in vitro mostraram que, baixas concentrações do lupeol foi capaz de estimular a migração e proliferação celular de queratinócitos, efeito contrátil em fibroblastos dérmicos embebidos em um solução gel de colágeno, possivelmente através das vias PI3k/Akt, MAPK/p38, vias sinalizadoras envolvidas na proliferação/migração celular, angiogênese e reparo tecidual. Nossos resultados in vivo mostraram potencial cicatricial do lupeol após 7 e 14 dias de tratamentos em feridas de ratos normoglicêmicos. Lupeol mostrou atividade anti-inflamatória, com significativa redução de TNF-α, IL-6 e NF-κB, e aumento nos níveis de IL-10, atividade proliferativa por estimular a expressão de Ki-67, aumento do processo angiogênico por aumento da expressão de VEGF, estímulo da reepitelização observados pelo aumento de EGF e remodelação da matriz extracelular por estimular a síntese de colágenos. Os resultados em RH, mostraram um aumento na porcentagem de retração da lesão a partir do 11º dia de tratamento após da indução da lesão. As análises histopatológicas revelaram uma diminuição da infiltração de células inflamatórias, aumento da proliferação de fibroblastos, vascularização e deposição de fibras colágenas no tratamento com lupeol. Os resultados do ELISA revelaram níveis de TNF-α e IL-6 reduzidos e níveis de IL-10 sobreregulados, mostrando atividade anti-inflamatória. Os resultados moleculares e imunohistoquímicos confirmaram o potencial anti-inflamatório do lupeol através da redução de NF-κB e do estresse oxidativo por aumentar a expressão de enzimas antioxidantes, como HO-1 e SOD-2, bem como mecanismos de proliferação celular, angiogênese e remodelamente de matriz extracelular estimulados por FGF-2, TGF-β1, HIF-1α e colágeno III. Nossos achados permitem concluir que o lupeol pode servir como uma nova opção terapêutica para o tratamento de feridas cutâneas normais e em condições hiperglicêmicas, regulando os mecanismos envolvidos nas fases inflamatória, proliferativa e de remodelação tecidual.