Pré-condicionamento de células estromais mesenquimais multipotentes caninas com soro e líquido cefalorraquidiano de cães acometidos por cinomose.

Abstract

A cinomose canina, causada pelo vírus da cinomose canina (CDV), é uma doença viral altamente contagiosa que acomete principalmente cães, provocando desmielinização em decorrência de um intenso processo inflamatório no sistema nervoso central (SNC). A medicina regenerativa tem se destacado como uma alternativa terapêutica, especialmente pelo uso de células estromais mesenquimais multipotentes derivadas de tecido adiposo (ATMSCs), reconhecidas por suas propriedades imunomoduladoras e neuroregenerativas. Considerando a escassez de estudos sobre o uso dessas células no contexto da leucoencefalite desmielinizante induzida pela cinomose, este estudo teve como objetivo investigar os efeitos do pré-condicionamento de AT-MSCs com diferentes estímulos: 1) TNF-α e IFN-γ (50 ng/ml); 2) pool de amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR); 3) pool de amostras de soro sanguíneo de cães naturalmente acometidos por cinomose em diferentes estágios da doença. O grupo controle consistiu de AT-MSCs cultivadas apenas em meio de cultura padrão. Após 72 horas de pré-condicionamento, foram analisadas a morfologia celular, a viabilidade, a expressão gênica (qPCR) de TNF-α, BDNF, GDNF, HGF, IL-10, PTGES2, IFN-γ e IDO, e a expressão proteica de MCP-1, IL-10, IL-8 e GM-CSF. Os resultados demonstraram que os diferentes estímulos foram capazes de modular distintamente as propriedades das AT-MSCs, promovendo perfis imunomoduladores ou neurotróficos. Dentre os grupos testados, a estimulação com TNF-α e IFN-γ foi a que mais potencializou tais propriedades, com aumento significativo na expressão gênica de BDNF, GDNF, IL-10 e PTGES2, bem como nas proteínas MCP-1 e IL-8. Conclui-se que o pré-condicionamento de AT-MSCs com TNF-α e IFN-γ constitui uma estratégia promissora para potencializar os efeitos terapêuticos dessas células em lesões neurológicas associadas a doenças desmielinizantes.

Canine distemper, caused by the canine distemper virus (CDV), is a highly contagious viral disease that primarily affects dogs, leading to demyelination due to an intense inflammatory response in the central nervous system (CNS). Regenerative medicine has emerged as a therapeutic alternative, particularly through the use of multipotent mesenchymal stromal cells derived from adipose tissue (AT-MSCs), known for their immunomodulatory and neuroregenerative properties. Given the scarcity of studies addressing the use of AT-MSCs in the context of CDV-induced demyelinating leukoencephalitis, this study aimed to investigate the effects of preconditioning AT-MSCs with different stimuli: (1) TNF-α and IFN-γ (50 ng/ml); (2) pooled samples of cerebrospinal fluid (CSF); and (3) pooled blood serum samples from dogs naturally affected by distemper at different disease stages. The control group consisted of AT-MSCs cultured in standard medium only. After 72 hours of preconditioning, cell morphology, viability, gene expression (qPCR) of TNF-α, BDNF, GDNF, HGF, IL-10, PTGES2, IFN-γ, and IDO, and protein expression of MCP-1, IL-10, IL-8, and GM-CSF were evaluated. The results showed that the different stimuli modulated AT-MSC properties in distinct ways, promoting either immunomodulatory or neurotrophic responses. Among the tested conditions, preconditioning with TNF-α and IFN-γ was the most effective in enhancing these properties, as evidenced by increased gene expression of BDNF, GDNF, IL-10, and PTGES2, along with elevated levels of MCP-1 and IL-8 proteins. These findings suggest that AT-MSCs preconditioned with TNF-α and IFN-γ represent a promising non-genetic strategy to enhance their therapeutic potential for neurological lesions associated with demyelinating diseases.