Implementação de um diagnóstico molecular confirmatório para o HTLV-1 e HTLV-2 no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu

O vírus da leucemia de células T humanas tipo 1 (HTLV-1) foi o primeiro retrovírus associado a câncer em humanos, causando a leucemia de células T do adulto e outras doenças crônicas. Posteriormente, foi descrito o vírus HTLV-2, porém não foi estabelecida uma relação clínica com outras doenças. Com isso, a maioria dos casos da infecção são assintomáticas, dificultando o diagnóstico da doença. No Brasil, a triagem sorológica para o HTLV foi incorporada em 1993 como obrigatória em bolsas de sangue, sendo critério de exclusão em caso de positividade. Em 2009, passou a ser obrigatória também em doadores e receptores de órgãos ou tecidos e, em 2024, foi incluído o rastreamento em gestantes no pré-natal no Sistema único de Saúde (SUS). No Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (HCFMB) são efetuados somente os testes sorológicos de triagem, que não são capazes de confirmar e diferenciar os subtipos, sendo recomendável que os resultados positivos na triagem sorológica sejam confirmados para exclusão de possíveis falso-positivos. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver e padronizar um ensaio de PCR em tempo real (qPCR) para a detecção e diferenciação do HTLV-1, HTLV-2, utilizando os genes POL e TAX como alvos virais e o gene da albumina humana como controle endógeno. Para a validação analítica e a construção da curva padrão foi utilizado um plasmídeo sintético, que permitiu determinar o limite de detecção (LoD), a repetibilidade e a reprodutibilidade. O LoD para o alvo POL foi de 100 cópias por reação, e para o gene TAX, foi de 25 cópias por reação. A aplicabilidade clínica foi confirmada pela testagem de amostras de pacientes, no qual o ensaio apresentou uma especificidade 100%. Entretanto, a baixa disponibilidade de amostras positivas dificultou a análise completa da sensibilidade. Contudo, os resultados demostraram a eficácia do método, que atualmente encontra-se em processo de implementação no rol dos exames oferecidos pelo HCFMB.

Resumo (inglês)

The human T-cell leukemia vírus type 1 (HTLV-1) was the first retrovírus associated with cancer in humans, causing adult T-cell leukemia as well as other chronic diseases. Subsequently, HTLV-2 was described; however, no clear clinical association with other diaseases has been established. As a result, most HTLV-2 cases remain asymptomatic, wich hinders disease diagnosis. In Brazil, serological screening for HTLV was introduced in 1993 as a mandatory test for all blood donations, being a criterion for exclusion in cases of positivity. In 2009, screening also became mandatory for organ and tissue donors and recipients, and in 2024, prenatal screening for pregnant women was included in the Sistema único de Saúde (SUS). At the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (HCFMB) only serological screening tests are performed, which are not able to confirm infection or differentiate between viral subtypes. However, it is recommended that positive serological results undergo confirmatory in order to exclude possible false positives. As such context, the aim of the present study was to develop and stardardize a real-time PCR (qPCR) assay for the detection and differentiation of HTLV-1 andHTLV-2 targeting the viral pol and tax gene, with the human albumin gene used as an endogenous control. For analytical validation and standard curve construction, a synthetic plasmid was employed, allowing the determination of the limit of detection (LoD), as well as the assessment of repeatability and reproducibility. The LoD was established at 100 copies per reaction for the pol target and 25 copies per reaction for the tax gene. Clinical applicability was confirmed throught the testing of patient samples, in which the assay demonstrated 100% specificity. However, the limited availability of positive samples hindered a complete analysis of sensitivity. Nevertheless, the results demonstrated the effectiveness of the method, wich is currently in the process of being implemented among the diagnostic assays offered at HCFMB.

Palavras-chave

Técnicas de diagnóstico molecular, Infecções por HTLV-1, Infecção por HTLV-2, Diagnóstico molecular, Infecções

Idioma

Português

Citação

FERREIRA, Isabela Cristina de Oliveira Souza. Implementação de um diagnóstico molecular confirmatório para o HTLV-1 e HTLV-2 no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu. 2026. Dissertação (Mestrado em Pesquisa e Desenvolvimento – Biotecnologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, 2026.