Investigação da variabilidade da Fímbria do tipo 1 na formação de biofilme e no estabelecimento do padrão de aderência agregativa às células HeLa em isolados de Escherichia coli enteropatogênica atípica (aEPEC)
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Data
Orientador
Hernanedes, Rodrigo Tavanelli 
Coorientador
Orsi, Henrique
Pós-graduação
Curso de graduação
Botucatu - IBB - Ciências Biológicas
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é um dos seis patotipos de E. coli diarreiogênica, podendo ser típica (tEPEC) na presença do plasmídeo pEAF (EPEC adherence factor) ou atípica (aEPEC) na ausência desse plasmídeo. Uma importante adesina fimbrial amplamente conhecida em E. coli é a fímbria do tipo 1 (FT1), responsável pela adesão das bactérias tanto a superfícies bióticas como abióticas. A porção terminal dessa fímbria é a proteína FimH que se liga a glicoproteínas manosiladas presentes nas células eucarióticas. Essa proteína é codificada pelo gene fimH, o qual possui uma grande variação alélica que pode levar em diferenças nos fenótipos de adesão. Assim sendo, o objetivo desse trabalho foi avaliar se essa variação alélica do gene fimH acarretaria mudanças no padrão de aderência e na formação de biofilme em isolados de aEPEC. Um total de 106 isolados de aEPEC previamente sequenciados foram confirmados a partir de uma PCR do gene escN e submetidos a tipagem do gene fimH através da ferramenta online FimTyper, disponível no site do Center for Genomic Epidemiology. Após essa tipagem, a produção de FT1 foi averiguada através de ensaios de aglutinação com Saccharomyces boulardii. Um isolado representativo de aEPEC albergando cada um dos subtipos de fimH detectados e produtores de FT1 foram selecionados e submetidos a ensaios de aderência as células HeLa (6 horas) e formação de biofilme em poliestirenos (24 horas). Esses ensaios foram realizados tanto na presença como na ausência de D-manose (2%). Trinta distintos subtipos de fimH foram identificados entre os 106 isolados e a produção de FT1 foi observada em 65% deles. Ensaios comparativos realizados na presença e na ausência de D-manose mostraram o estabelecimento de padrão agregativo nos testes realizados sem D-manose nos subtipos fimH24, fimH27, fimH32, fimH35, fimH38, fimH319 e fimH3066. Enquanto testes de biofilme realizados na ausência desse açúcar foram significativos apenas nos isolados com os subtipos fimH24, fimH27, fimH31, fimH32, fimH35, fimH39, fimH54 e fimH693 Coletivamente, nossos dados ressaltam a diversidade de subtipos de fimH presente em isolados de aEPEC e sugere que distintos subtipos possam ser mais eficientes no processo de aderência bacteriana às superfícies bióticas e abióticas.
Resumo (inglês)
Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is one of the six diarrheagenic E. coli pathotypes and can be classified as typical (tEPEC) in the presence of the pEAF (EPEC adherence factor) plasmid or atypical (aEPEC) in its absence. An important and widely recognized fimbrial adhesin in E. coli is the type 1 fimbriae (T1F), which mediates bacterial adhesion to both biotic and abiotic surfaces. The terminal adhesin of this structure is the FimH protein, which binds to mannosylated glycoproteins on eukaryotic cells. FimH is encoded by the fimH gene, which exhibits considerable allelic variation that may result in differences in adhesion phenotypes. Therefore, the aim of this study was to evaluate whether allelic variation in the fimH gene could influence adherence patterns and biofilm formation in aEPEC isolates. A total of 106 previously sequenced aEPEC isolates were confirmed by PCR targeting the escN gene and were subjected to fimH typing using the online tool FimTyper, available at the Center for Genomic Epidemiology website. Following typing, T1F production was assessed by agglutination assays using Saccharomyces boulardii. One representative aEPEC isolate harboring each detected fimH subtype and producing T1F was selected for adherence assays in HeLa cells (6 hours) and biofilm formation assays on polystyrene surfaces (24 hours). These experiments were performed both in the presence and absence of 2% D-mannose. Thirty distinct fimH subtypes were identified among the 106 isolates, and T1F production was observed in 65.1% of them. Comparative assays performed with and without D-mannose demonstrated an aggregative adherence pattern in the absence of D-mannose for isolates harboring the subtypes fimH24, fimH27, fimH32, fimH35, fimH38, fimH319, and fimH3066. Biofilm formation assays conducted in the absence of D-mannose showed significantly increased biofilm production only in isolates carrying the subtypes fimH24, fimH27, fimH31, fimH32, fimH35, fimH39, fimH54, and fimH693. Collectively, our findings highlight the diversity of fimH subtypes among aEPEC isolates and suggest that certain variants may confer enhanced efficiency in bacterial adhesion to both biotic and abiotic surfaces.
Descrição
Palavras-chave
Microbiologia molecular, Microrganismos patogênicos, Fatores de virulência, Bacteriologia, Molecular microbiology, Pathogenic microorganisms, Virulence factors, Bacteriology
Idioma
Português
Citação
Bassetto, Francisco José de Moraes. Investigação da variabilidade da Fímbria do tipo 1 na formação de biofilme e no estabelecimento do padrão de aderência agregativa às células HeLa em isolados de Escherichia coli enteropatogênica atípica (aEPEC) Orientador: Rodrigo Tavanelli Hernandes. 2026. 31 p. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Ciências Biológicas) - Instituto de Biociências de Botucatu, Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, 2026.
