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dc.contributor.advisorFerreira, Henrique [UNESP]
dc.contributor.advisorMartins, Paula Maria Moreira
dc.contributor.authorPereira, Camila Malvessi
dc.date.accessioned2019-04-17T13:52:50Z
dc.date.available2019-04-17T13:52:50Z
dc.date.issued2019-02-26
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11449/181581
dc.description.abstractXanthomonas citri subsp. citri (X. citri) é o agente etiológico do cancro cítrico, uma doença que ataca todas as variedades comerciais de citros, causando prejuízos econômicos em vários países produtores. Em áreas endêmicas, o cancro cítrico é controlado principalmente por aplicação de bactericidas cúpricos. Compostos alternativos para controlar a doença são desejáveis, pois os bactericidas cúpricos causam impactos ambientais e podem induzir resistência em X. citri. Um passo importante para a descoberta e avaliação de novos compostos para controle de X. citri é a caracterização de genes/proteínas que são alvos em potencial. O gene mreB codifica para uma proteína que é uma actina bacteriana com papel-chave na determinação da morfologia celular. Esses genes foram caracterizados em algumas bactérias, nas quais foi demonstrado que são essenciais. Não existem relatos da caracterização de mreB em X. citri. A proteína MreB e a actina tem baixa similaridade de sequência, apesar de serem homólogos funcionais. Essas características fazem de MreB um alvo interessante para novos compostos antibacterianos. Os objetivos deste trabalho foram descrever a função e determinar a localização subcelular de MreB em X. citri. Para estudar a função de MreB, duas estratégias foram usadas para deletar o gene mreB em X. citri. Entretanto, não foi possível obter mutantes deletados para mreB nem na ausência, nem na presença de complementação. Esse resultado evidenciou que mreB é essencial para X. citri e mostrou que o método de complementação utilizado não foi adequado para manter a viabilidade de X. citri. Para investigar a localização subcelular de MreB em X. citri, uma fusão em sanduíche de MreB com GFP foi desenvolvida, e células expressando a fusão foram visualizadas por microscopia de fluorescência e de contraste de fase. As imagens de microscopia de fluorescência e de contraste de fase obtidas de X. citri expressando a fusão em sanduíche mostraram células com morfologia de bastonete com manchas de fluorescência predominantemente na periferia da célula. Essas imagens evidenciaram que a fusão em sanduíche foi expressa com sucesso em X. citri sem efeitos negativos detectáveis para as células. Essas imagens também revelaram pela primeira vez que a distribuição subcelular de MreB em X. citri é muito similar àquela vista na literatura em outras bactérias. Os resultados deste trabalho, além de terem expandido o conhecimento da biologia de X. citri, poderão ser utilizados em futuras avaliações de compostos químicos para controle do cancro cítrico.pt
dc.description.abstractXanthomonas citri subsp. citri (X. citri) is the etiological agent of Citrus canker, a widespread plant disease that attacks all varieties of commercial citrus plants, causing economic loss worldwide. In endemic areas, citrus canker is controlled mainly by the application of cupric bactericides. Alternative compounds to control this pathogen are desirable, since copper based bactericides have negative environmental impact and induce resistance in X. citri. An important step for the discovery and evaluation of new compounds to control X. citri is the characterization of genes/proteins that are potential targets. The mreB gene codes for a protein that is a bacterial actin homologue with a key role in rod shape morphogenesis. This gene was characterized in some bacteria, in which it was shown to be essential. There are no reports of characterization of mreB in X. citri. MreB and actin have a weak sequence similarity, despite being functional homologues. These characteristics make MreB an interesting target for new antibacterial chemical compounds. The objectives of this work were to study the function and subcellular localization of MreB in X. citri. To study the function of MreB in X. citri, two strategies were used to delete the mreB gene. However, neither strategy produced deleted mutants. This result confirmed that mreB is essential to X. citri and showed that the complementation method used was not adequate to ensure the viability of X. citri. To investigate MreB subcellular localization, a sandwich fusion of MreB with GFP was developed, and cells expressing the fusion were imaged with fluorescence and phase contrast microscopy. The fluorescence and phase contrast microscopy images obtained of X. citri expressing the sandwich fusion showed rod shaped cells with spots of fluorescence predominantly at the periphery of the cells. These images indicated that the sandwich fusion was successfully expressed in X. citri with no detectable negative effects for the cells. These images also revealed for the first time that the subcellular distribution of MreB in X. citri is very similar to that seen in other bacteria. The results of this work expanded the knowledge of the biology of X. citri and will also be useful to future evaluations of chemical compounds to control citrus canker.en
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Estadual Paulista (UNESP)
dc.subjectMreBpt
dc.subjectMorfologia bacterianapt
dc.subjectCancro cítricopt
dc.subjectCitrus cankeren
dc.subjectBacterial morphologyen
dc.titleCaracterização de mreB de Xanthomonas citri subsp. citri codificando uma actina bacterianapt
dc.title.alternativeCharacterization of the mreB gene of Xantomonas citri subsp. citri coding for a bacterial actinen
dc.typeDissertação de mestrado
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual Paulista (UNESP)
dc.rights.accessRightsAcesso aberto
dc.description.sponsorshipIdFAPESP: 2017/08856-2
dc.description.sponsorshipIdCAPES: 001
unesp.graduateProgramCiências Biológicas (Microbiologia Aplicada) - IBRCpt
unesp.knowledgeAreaMicrobiologia aplicadapt
unesp.researchAreaGenética de bactériaspt
unesp.campusUniversidade Estadual Paulista (UNESP), Instituto de Biociências, Rio Claropt
unesp.embargoOnlinept
dc.identifier.aleph000915236
dc.identifier.capes33004137041P2
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