Análise do efeito de VisP no transcriptoma e patogenicidade de Salmonella enterica sorovar Typhimurium

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Data

2021-03-26

Autores

Leite, Luana de Sales

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Editor

Universidade Estadual Paulista (Unesp)

Resumo

As espécies de Salmonella são as que mais causam doenças de origem alimentar no mundo sendo uma das principais causas bacterianas de gastroenterite. S. Typhimurium é comumente utilizada para estudo de interações com células hospedeira, pois bactérias intestinais são extremamente eficientes em orquestrar uma comunicação intraespecíficas e interespecíficas, através de complexos sistemas de sinalização química. Estudos mostram a importância da proteína VisP no periplasma da célula bacteriana, integrando os cuidados com a homeostase da membrana, aos processos de virulência bacteriana e resposta ao estresse em S. Typhimurium. O intestino possui uma densa e diversificada microbiota, além de uma ampla variedade de nutrientes. A microbiota intestinal possui a capacidade de disponibilizar diferentes açúcares através de atividade enzimática, assim como outros tipos de metabólitos. A exploração desses subprodutos derivados da microbiota como nutrientes e outros sinais é crucial para o sucesso da infecção por patógenos entéricos. Portanto, o presente estudo buscou elucidar o papel que VisP poderia desempenhar na virulência de S. Typhimurium e a sua relação com a expressão de outros genes, como os relacionados a vias metabólicas envolvidas no processo de infecção por esse patógeno. Para tanto, foi realizado o estudo do padrão de expressão gênica para definir a influência de açúcares na regulação do operon visP/ygiV e também ensaios fenótipos em diferentes condições. Os resultados obtidos indicam que o operon visP/ygiV possa sofrer influência de alguns açúcares na sua regulação. O transcriptoma da linhagem mutante ΔvisP foi obtido através da técnica de RNAseq, o que demostrou a importância dessa proteína para S. Typhimurium, visto grande número de transcritos diferencialmente expressos comparados à linhagem selvagem. Ensaios de expressão gênica e fenotípicos foram realizados em diferentes condições (disponibilidade de nutrientes e oxigênio), afim de relacionar a ausência de VisP com a redução na expressão de genes relacionados ao mecanismo de invasão e metabolismo de 1,2 propanodiol. Os resultados mostram que a mudança na disponibilidade de nutriente e oxigênio altera o padrão de expressão de ambos os genes testados. Assim como, a presença de 1,2 propanodiol reduz a capacidade de invasão in vitro na ausência de VisP. Os dados apresentados nesse estudo reforçam a importância de VisP durante o processo infeccioso no lúmem intestinal, onde a disponibilidade de nutrientes é restrita e a capacidade de utilizá-los é de grande importância.
Salmonella species are the ones that cause the most foodborne diseases in the world, being one of the main bacterial causes of gastroenteritis. S. Typhimurium is commonly used to study interactions with host cells, because intestinal bacteria are extremely efficient in orchestrating intraspecific and interspecific communication, through complex chemical signaling systems. Studies show the importance of VisP protein in the bacterial cell periplasm, integrating care with membrane homeostasis, bacterial virulence processes and stress response in S. Typhimurium. The intestine has a dense and diverse microbiota, in addition to a wide variety of nutrients. The intestinal microbiota has the ability to make different sugars available through enzymatic activity, as well as other types of metabolites. The exploitation of these byproducts derived from microbiota as nutrients and other signs is crucial for the success of infection by enteric pathogens. Therefore, the present study sought to elucidate the role that VisP could play in the virulence of S. Typhimurium and its relationship with the expression of other genes, such as those related to metabolic pathways involved in the infection process by this pathogen. For this purpose, a study of the gene expression pattern was carried out to define the influence of sugars on the regulation of the visP/ygiV operon and phenotype tests under different conditions. The results obtained indicate that the visP/ygiV operon may be regulated by some sugars. The transcriptome of the ΔvisP mutant strain was obtained using the RNAseq technique, which demonstrated the importance of this protein for S. Typhimurium, given the large number of differentially expressed transcripts compared to the wild-type. Gene expression and phenotypic assays were performed under different conditions (availability of nutrients and oxygen), in order to relate the VisP absence with the reduction in the expression of genes related to the 1,2 propanediol invasion and metabolism mechanism. The results show that the change in nutrient and oxygen availability alters the expression pattern of both genes tested. Likewise, the presence of 1,2 propanediol reduces the capacity for invasion in vitro in VisP absence. The data presented in this study reinforce the importance of VisP during the infectious process in the intestinal lumen, where the availability of nutrients is restricted and the ability to use them is of great importance.

Descrição

Palavras-chave

S. Typhimurium, Patogenicidade, Transcriptoma, VisP, 1,2 propanodiol

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