Efeitos do silenciamento gênico da enzima quinase MELK sobre a radiossensibilidade de células tumorais prostáticas DU145
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Data
2021-03-16
Autores
Corrêa, Luiza da Silva
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Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Resumo
Prostate cancer (PC) is the second type that most kills men when the cause is cancer. Today, there are treatments for the most diverse types of PC, including surgery, radiotherapy, immunotherapy, chemotherapy, and antiandrogenic therapies. However, in most cases of the advanced stage of the disease, the treatments only prolong the patients' life, without curing them. In this way, new therapeutic strategies that can provide efficient treatments for primary and "de novo" PC are needed. In a recent work, a high gene expression of maternal embryonic leucine zipper kinase (MELK) was observed in tumors of mice and patients with PC. In addition, MELK has been described by having an important role in cell cycle proliferation and regulation, apoptosis, tumor initiation and spread and malignant transformation in various types of cancers. So, the involvement of MELK in tumor biology makes it an interesting therapeutic target for study in castration-resistant metastatic PC. Thus, the aim of this work was to observe the effects of MELK silencing on the radioresistance of DU145 metastatic prostate tumor cells, especially on cell viability and clonogenicity. For this, DU145 cells were cultured and treated with siRNA-MELK. Then, the cells were re-plated and exposed to ionizing radiation (IR) (2, 4 and 6Gy). The effect of radiotherapy on the viability of the cells with silenced MELK was analyzed by MTT assay, while the proliferative capacity was assessed by the clonogenic assay - the colonies were fixed, stained and counted in a stereomicroscope. The viability of the cells with silenced MELK had a significant reduction in all doses of IR, when compared to the non-silenced cells. In the clonogenic assay, the colony numbers were also decreased, with a reduction up to 95% in the silenced group irradiated with the dose of 6Gy, compared to the control. In conclusion, DU145 prostate tumor cells with MELK knockdown become more sensitive to radiotherapy and cell confluence status takes place in this phenomenon.
O câncer de próstata (CaP) é o segundo que mais mata homens quando a causa é o câncer. Hoje, os tratamentos existentes para os mais diversos tipos de CaP incluem cirurgia, radioterapia, imunoterapia, quimioterapia e terapias antiandrogênicas, porém em grande parte dos casos de estágio avançado da doença, os tratamentos só prolongam a vida do paciente sem curá-lo. Desta forma, novas estratégias terapêuticas que possam conferir tratamentos eficientes para os CaPs primários e “de novo” são necessários. Em trabalho recente, altas expressões do gene Leucina Embrionária Materna Zipper Quinase (MELK) foram encontradas em tumores de camundongos e de pacientes com CaP. Além disso, este gene é descrito por ter importante papel na proliferação e regulação do ciclo celular, na apoptose, na iniciação e na propagação tumoral e na transformação maligna em vários tipos de cânceres. Assim, o envolvimento de MELK na biologia tumoral torna-o um interessante alvo terapêutico para estudo no CaP metastático resistente à castração. Com isso, o objetivo deste trabalho foi observar os efeitos do silenciamento de MELK na radioresistência de células tumorais prostáticas metastáticas DU145, especialmente sobre a viabilidade celular e clonogenicidade. Para isso, células DU145 foram cultivadas e tratadas com siRNA-MELK. Em seguida, as células foram re-plaqueadas e expostas à radiação ionizante (RI) (2, 4 e 6 Gy). O efeito da radioterapia sobre a viabilidade das células com MELK silenciada foram avaliados por marcação com MTT, enquanto a capacidade proliferativa foi avaliada por ensaio clonogênico - as colônias foram fixadas, coradas e contadas em estereomicroscópio. A viabilidade das células com MELK silenciada teve uma redução significativa em todas as doses de RI, quando comparadas às células não silenciadas. No ensaio clonogênico, o número de colônias formadas também foi reduzido, obtendo redução de até 95% no grupo silenciado irradiado com a dose de 6 Gy, comparado ao controle. Portanto, células tumorais prostáticas DU145, quando possuem a MELK silenciadas, tornam-se mais sensíveis à radioterapia e o grau de confluência celular interfere neste fenômeno.
O câncer de próstata (CaP) é o segundo que mais mata homens quando a causa é o câncer. Hoje, os tratamentos existentes para os mais diversos tipos de CaP incluem cirurgia, radioterapia, imunoterapia, quimioterapia e terapias antiandrogênicas, porém em grande parte dos casos de estágio avançado da doença, os tratamentos só prolongam a vida do paciente sem curá-lo. Desta forma, novas estratégias terapêuticas que possam conferir tratamentos eficientes para os CaPs primários e “de novo” são necessários. Em trabalho recente, altas expressões do gene Leucina Embrionária Materna Zipper Quinase (MELK) foram encontradas em tumores de camundongos e de pacientes com CaP. Além disso, este gene é descrito por ter importante papel na proliferação e regulação do ciclo celular, na apoptose, na iniciação e na propagação tumoral e na transformação maligna em vários tipos de cânceres. Assim, o envolvimento de MELK na biologia tumoral torna-o um interessante alvo terapêutico para estudo no CaP metastático resistente à castração. Com isso, o objetivo deste trabalho foi observar os efeitos do silenciamento de MELK na radioresistência de células tumorais prostáticas metastáticas DU145, especialmente sobre a viabilidade celular e clonogenicidade. Para isso, células DU145 foram cultivadas e tratadas com siRNA-MELK. Em seguida, as células foram re-plaqueadas e expostas à radiação ionizante (RI) (2, 4 e 6 Gy). O efeito da radioterapia sobre a viabilidade das células com MELK silenciada foram avaliados por marcação com MTT, enquanto a capacidade proliferativa foi avaliada por ensaio clonogênico - as colônias foram fixadas, coradas e contadas em estereomicroscópio. A viabilidade das células com MELK silenciada teve uma redução significativa em todas as doses de RI, quando comparadas às células não silenciadas. No ensaio clonogênico, o número de colônias formadas também foi reduzido, obtendo redução de até 95% no grupo silenciado irradiado com a dose de 6 Gy, comparado ao controle. Portanto, células tumorais prostáticas DU145, quando possuem a MELK silenciadas, tornam-se mais sensíveis à radioterapia e o grau de confluência celular interfere neste fenômeno.
Descrição
Palavras-chave
Prostate cancer, Radiotherapy, Gene silence, Radiossensibility, Radioterapia, MELK, Radiossensibilidade, Câncer de próstata, Silênciamento gênico