Efeito da Tricostatina A durante o cultivo pré-maturação in vitro sobre o padrão da configuração da cromatina e atividade transcricional de oócitos recuperados de folículos antrais iniciais
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Data
2022-12-07
Autores
Silva, Cíntia Rodrigues da
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Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Resumo
A população heterogênea de folículos ovarianos pode afetar de maneira significativa a eficiência da produção in vitro de embriões bovinos, uma vez que oócitos de folículos menores que 2 mm de diâmetro, não possuem competência para o desenvolvimento embrionário in vitro. Sendo assim, como ferramenta para melhorar a competência desses oócitos, o presente trabalho teve como objetivo estabelecer um sistema de cultivo de pré-maturação in vitro (pré-MIV) com uso do bloqueador NPPC suplementado com tricostatina A (TSA), substância que promove hiperacetilação de histonas, a fim de aumentar a atividade transcricional oocitária para que os mesmos tivessem maior competência para o desenvolvimento. Os experimentos foram divididos em duas partes, sendo o primeiro momento feita a avaliação de oócitos bovinos em cultivo de pré-MIV simples, e no segundo, utilizou-se cultivo de pré-MIV enriquecido com substâncias estimuladoras. Os resultados foram obtidos através das comparações entre as médias dos grupos, utilizando-se a análise de variância (ANOVA) seguida do teste de Tukey, sendo P<0,05. Com isso, os resultados demonstraram que o cultivo de pré-MIV simples e enriquecido não foram capazes estimular o crescimento oocitário até o tamanho esperado da espécie bovina (102-109 mícrons de diâmetro), no entanto a TSA demonstrou nos dois experimentos um possível efeito protetor contra danos oxidativos nos oócitos tratados quando comparados ao grupo controle, assim como melhorou a atividade transcricional dos mesmos. Ainda que com alta transcrição, nossos resultados não apresentaram melhores taxas no desenvolvimento embrionário, uma vez que as taxas de blastocistos foram menores que 5% de embriões em meio simples e 2% em meio enriquecido. A partir destes resultados, concluímos que o cultivo de pré-MIV acrescido da TSA, proporcionou maior atividade transcricional e proteção à estresse oxidativo, embora não tenha melhorado o crescimento oocitário, assim como a produção de embriões. Sendo assim, nossos resultados demonstram possíveis ferramentas de como melhorar a qualidade de oócitos recuperados de folículos antrais iniciais, e futuramente, melhorar os índices de produção de embriões in vitro.
The heterogeneous population of ovarian follicles can significantly affect the efficiency of in vitro production of bovine embryos, since oocytes from follicles smaller than 2 mm in diameter do not have competence for in vitro embryonic development. Therefore, as a tool to improve the competence of these oocytes, the present work aimed to establish an in vitro pre-maturation culture system (pre-IVM) using the NPPC blocker supplemented with trichostatin A (TSA), a substance that promotes histone hyperacetylation, in order to increase oocyte transcriptional activity so that they have greater competence for development. The experiments were divided into two parts, with the first moment evaluating bovine oocytes in simple pre-IVM culture, and the second, using pre-IVM culture enriched with stimulating substances. The results were obtained through comparisons between the means of the groups, using the analysis of variance (ANOVA) followed by the Tukey test, with P<0.05. Thus, the results showed that the cultivation of simple and enriched pre-IVM were not able to stimulate oocyte growth to the expected size of the bovine species (102-109 microns in diameter), however TSA showed a possible effect in both experiments. protective against oxidative damage in treated oocytes when compared to the control group, as well as improved their transcriptional activity. Although with high transcription, our results did not show better rates in embryonic development, since blastocyst rates were lower than 5% of embryos in plain medium and 2% in enriched medium. Based on these results, we conclude that pre-IVM culture plus TSA provided greater transcriptional activity and protection against oxidative stress, although it did not improve oocyte growth or embryo production. Therefore, our results demonstrate possible tools on how to improve the quality of oocytes recovered from early antral follicles, and in the future, improve in vitro embryo production rates.
The heterogeneous population of ovarian follicles can significantly affect the efficiency of in vitro production of bovine embryos, since oocytes from follicles smaller than 2 mm in diameter do not have competence for in vitro embryonic development. Therefore, as a tool to improve the competence of these oocytes, the present work aimed to establish an in vitro pre-maturation culture system (pre-IVM) using the NPPC blocker supplemented with trichostatin A (TSA), a substance that promotes histone hyperacetylation, in order to increase oocyte transcriptional activity so that they have greater competence for development. The experiments were divided into two parts, with the first moment evaluating bovine oocytes in simple pre-IVM culture, and the second, using pre-IVM culture enriched with stimulating substances. The results were obtained through comparisons between the means of the groups, using the analysis of variance (ANOVA) followed by the Tukey test, with P<0.05. Thus, the results showed that the cultivation of simple and enriched pre-IVM were not able to stimulate oocyte growth to the expected size of the bovine species (102-109 microns in diameter), however TSA showed a possible effect in both experiments. protective against oxidative damage in treated oocytes when compared to the control group, as well as improved their transcriptional activity. Although with high transcription, our results did not show better rates in embryonic development, since blastocyst rates were lower than 5% of embryos in plain medium and 2% in enriched medium. Based on these results, we conclude that pre-IVM culture plus TSA provided greater transcriptional activity and protection against oxidative stress, although it did not improve oocyte growth or embryo production. Therefore, our results demonstrate possible tools on how to improve the quality of oocytes recovered from early antral follicles, and in the future, improve in vitro embryo production rates.
Descrição
Palavras-chave
Técnicas de maturação in vitro de oócitos, Epigenética, Embriões