Teses - Ciência Animal - FMVA

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    Avaliação do uso de coprodutos de frutas na alimentação de Tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus).
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-07-21) Chotolli, Andrey Piante [UNESP]; Ponsano, Elisa Helena Giglio; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Os objetivos neste estudo foram caracterizar coprodutos agroindustriais de maçã, acerola e uva e avaliar os efeitos de sua inclusão na dieta de tilápias sobre os parâmetros bioquímicos séricos e o estado oxidativo dos peixes e a qualidade da carne. Nos farelos das frutas foram medidos os compostos fenólicos, os carotenoides e suas atividades antioxidantes. O experimento com as tilápias foi realizado em um delineamento inteiramente casualizado com quatro tratamentos e seis repetições. Os tratamentos foram: C – ração controle, sem farelo de frutas, e três rações contendo farelos de acerola (FA) ou maçã (FM) ou uva (FU) na proporção de 5%. Os peixes foram criados em sistema fechado de recirculação de água, com aeração forçada e alimentação na proporção de 6% da biomassa de cada caixa, dividida em duas vezes ao dia, por 45 dias. A manutenção da qualidade da água foi realizada por meio de sifonagens e trocas parciais de água, acompanhadas do controle dos parâmetros físico-químicos (valores médios: temperatura 23,89 ± 0,71 ºC; pH 7,17 ± 0,04; nitrito 1,68 ± 0,8 ppm; amônia 2,46 ± 0,29 ppm; oxigênio dissolvido 9,78 ± 0,58 ppm). Os peixes foram pesados e medidos para a obtenção dos dados de desempenho produtivo (ganho de peso, fator de condição corporal e eficiência alimentar) e o sangue foi coletado para as análises bioquímicas e do estado oxidativo. Após o abate, os fígados foram removidos e pesados para a determinação do índice hepatossomático e os filés foram removidos para as análises de composição centesimal e peroxidação lipídica. Os resultados foram analisados estatisticamente por análise de variância e teste de Tukey, adotando-se o nível de significância de 5%. O farelo de uva apresentou a maior concentração de compostos fenólicos totais (857 ± 2,6 μg/100 mg), carotenoides (5,76 ± 0,58 mg/kg) e a maior atividade antioxidante (136 ± 4,98 μ Trolox/g), seguido dos farelos de acerola e maçã. A inclusão dos farelos de frutas nas dietas das tilápias promoveu maior deposição de lipídios nos filés (FA (%): 3,17 ± 0,86; FM (%): 3,14 ± 0,56; FU (%): 2,83 ± 0,12) e o farelo de uva promoveu maior deposição de proteínas (16,55 ± 0,31 %). Todos os farelos de frutas retardaram o estabelecimento da peroxidação lipídica durante o tempo de armazenamento sob congelamento. Os peixes alimentados com o farelo de acerola obtiveram o maior ganho de peso (656,167 ± 189,825 g) e as dietas contendo os farelos de frutas mantiveram ou melhoraram os parâmetros bioquímicos indicadores do estado de saúde e melhoraram os indicadores do estado oxidativo dos animais. Os resultados confirmam a sugestão de uso de coprodutos da industrialização de frutas na alimentação de peixes como forma de melhorar a qualidade físico-química da carne e melhorar a condição fisiológica dos animais.
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    Análise fatorial multipla e modelagem por equações estruturais: raiva e suas interfaces
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-08-22) Lorena, Laura Luisa Gonçalves [UNESP]; Marinho, Márcia; Queiroz, Luzia Helena; Garcia Neto, Manoel; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A raiva é uma zoonose negligenciada e letal, que acomete todos os mamíferos. Sua prevenção pode ser realizada por meio de protocolos de pré-exposição e de pós-exposição com o uso de imunizantes antirrábicos. O objetivo deste trabalho foi investigar as interações entre as variáveis observadas nas fichas de notificação de agravo do atendimento antirrábico do estado de São Paulo no período de 2013 a 2017 e a variável latente potencial de exposição à raiva do paciente que recebeu o tratamento com o uso de análise de Modelagem de Equações Estruturais. Por meio dos dados de 572.889 fichas de notificação do tratamento antirrábico, gerou-se o modelo estrutural, o qual apresentou os índices de ajuste de modelo aceitáveis, com SRMS=0,028, RMSEA=0,061 (IC95% 0,061-0,0616), CFI=0,970 e TLI=0,954. As variáveis antecedentes da variável latente potencial de exposição à raiva com maior coeficiente de regressão padronizado foram condição animal (β=0,627; p <0,00001) e observação do animal (β=-0,349; p<0,00001). Já entre as variáveis consequentes da variável latente, as maiores cargas fatoriais foram tratamento atual (β=0,936; p<0,00001), número de doses (β=0,774; p<0,00001), fim do animal (β=0,575; p<0,00001), e tratamento com uso de soro antirrábico (β=0,546; p<0,00001). Concluiu-se que o modelo estrutural utilizado é valido para a estimação das variáveis que envolvem a profilaxia da raiva humana, demonstrando que há relação entre o perfil do animal agressor com o potencial de exposição ao vírus da raiva, que por sua vez pode ser mensurada pelo tipo de tratamento indicado.
  • ItemTese de doutorado
    Identificação de novos microRNAs em tecido testicular de bovinos Bos indicus
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-07-10) Sousa, Marco Antonio Perpétuo de; Fortes, Marina Rufino Salinas; Lopes, Flávia Lombardi; Lima, Andressa Oliveira de; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Os consórcios de anotação genômica funcional fornecem um recurso valioso para pesquisadores no mundo todo. A subespécie Bos indicus tem importância econômica relevante devido sua adaptação a climas tropicais e seu genoma requer melhor anotação. Os microRNAs são pequenos RNAs endógenos que atuam na regulação da expressão gênica através da repressão pós-transcricional, ligando-se ao RNA mensageiro de seus genes alvo, levando-os à degradação. O presente trabalho investigou a ocorrência de novos microRNAs em tecido testicular de bovinos Bos indicus. Identificamos 85 novos possíveis miRNA em 27 cromossomos sendo 48,24% expressos na cauda do epidídimo, 21,18% no caput do epidídimo e 17,65% no parênquima testicular, dos quais 14 apresentaram similaridade com 19 miRNAs anotados em outras espécies. Os novos miRNAs ocorreram em 978 regiões de QTL, sendo que 12,68% destas regiões estão relacionadas com reprodução e fertilidade. A predição de ligação dos novos miRNAs com seus genes alvo identificou 10 hub miRNAs dos quais 8 tiveram vias enriquecidas para seus genes alvo. O presente estudo descreveu novos miRNAs em tecido testicular e acrescenta informações para o genoma de animais Bos indicus fornecendo caminhos para formulação de novas hipóteses e elucidação de processos biológicos, possivelmente relacionados com a fertilidade e reprodução.
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    Análise craniométrica comparada entre cães domésticos e canídeos sul-americanos
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-07-17) Fernandes, Rodrigo Antonio; Utsunomiya, Yuri Tani; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Os cães domésticos (Canis lupus familiaris) possuem tanta variação na morfologia do esqueleto craniano (EC) quanto toda a ordem Carnivora. Esta variação resulta da seleção artificial mediada por humanos, a qual favoreceu a seleção direcional de genes envolvidos no desenvolvimento de ossos e cartilagens. Em contraste, canídeos selvagens apresentam menor variação do EC devido a restrições impostas pela seleção natural. Portanto, o uso de cães domésticos como base para a análise craniométrica comparativa de espécies de canídeos selvagens é uma estratégia promissora no estudo da evolução craniana. Neste trabalho, um conjunto de 124 cães domésticos foi utilizado na análise comparativa entre duas espécies de canídeos sul-americanos: o lobo-guará (Chrysocyon brachyurus, n = 9) e o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous, n = 8). Um total de 18 medições craniométricas foram feitas a partir desses espécimes, e 8 índices craniométricos foram calculados a partir dessas medições. Uma análise de correlação evidenciou que as 26 variáveis podem ser agrupadas em: (i) indicadores de comprimento rostro-caudal, (ii) altura ventro-dorsal e largura látero-lateral, (iii) índices cranianos e (iv) dimensões do forame magno. A exploração destas correlações em uma Análise de Componentes Principais (PCA) mostrou que o EC do cachorro-do-mato se assemelha a pequenos crânios dolicocéfalos de cães domésticos, enquanto o EC do lobo-guará é mais próximo dos cães dolicocéfalos maiores. Uma craniometria indireta realizada por meio de imagens radiográficas não diferiu significativamente da análise direta, sugerindo a viabilidade de futuras avaliações in vivo. Estes resultados mostram a utilidade da craniometria comparada no estudo da ecologia e evolução de canídeos selvagens.
  • ItemTese de doutorado
    Modulação gênica de neutrófilos humanos após infecção in vitro com Leishmania infantum
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-06-19) Scaramele, Natalia Francisco [UNESP]; Lopes, Flavia Lombardi; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A leishmaniose é uma zoonose tropical negligenciada com altas taxas de morbidade e mortalidade. É causada por protozoários do gênero Leishmania e transmitida durante o repasto sanguíneo das fêmeas de Lutzomyia longipalpis. Uma das manifestações clínicas da doença é a leishmaniose visceral, causada principalmente pela espécie L. infantum (syn. chagasi) nas Américas. Os sintomas da leishmaniose visceral incluem febre, anorexia, perda de peso, distensão abdominal, fraqueza e um aumento abdominal significativo, decorrente de hepato e esplenomegalia. Apesar da disponibilidade de medicamentos para tratar a doença, nenhuma vacina está comercialmente disponível para humanos. O papel dos neutrófilos como parte da resposta inata à Leishmania spp. infecção é duvidosa e varia de acordo com a espécie causadora da infecção. Ainda, a expressão global de RNAs codificantes, microRNAs e RNAs longos não codificantes muda como parte da resposta imune contra patógenos. No presente trabalho buscamos entender os padrões de expressão gênica de transcritos (codificantes e não codificantes) em neutrófilos humanos infectados in vitro com L. infantum. Isolamos neutrófilos de sangue total de doadores saudáveis do sexo masculino (n=5) e dividimos em grupos: 1) infectados com L. infantum (MOI = 5:1) e 2) controles não infectados. No grupo infectado as promastigotas não internalizadas após 3 horas foram removidas e, ao tempo de 20 horas pós-infecção o RNA total foi extraído das células dos grupos controle e infectado. Posteriormente foram realizadas duas técnicas: 1) sequenciamento de RNA total, e 2) microarranjo de microRNA. Observamos mudanças na expressão de 212 transcritos (log2(FC)±0,58, FDR≤0,05), sendo classificados: 202 RNAs mensageiros, seis RNAs longos não-codificantes, um RNA “miscellaneous”, um RNA nuclear pequeno, um pseudogene não processado e um pseudogene processado. E na expressão de 289 microRNAs (FC±2, FDR≤0,01). Com o auxílio de ferramentas bioinformáticas, pudemos ainda predizer funções biológicas aos nossos achados, e com isso inferimos que as mudanças observadas tanto na expressão de RNAs codificadores como dos não codificadores de neutrófilos estão associadas ao prejuízo na fagocitose, produção de óxido nítrico e de citocinas pró-inflamatórias após a infecção com L. infantum, favorecendo a persistência do parasito. Nosso trabalho lança luz sobre vários mecanismos utilizados pela L. infantum para controlar a resposta imune mediada por neutrófilos e identifica vários alvos para futuros estudos funcionais, visando o desenvolvimento de tratamentos preventivos ou curativos para esta prevalente zoonose.
  • ItemTese de doutorado
    MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-03-23) Costa, Sidnei Ferro; Lima, Valéria Marçal Felix; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Os cães domésticos são os principais reservatórios urbanos de Leishmania infantum, o agente causador da leishmaniose visceral (LV). Na leishmaniose canina (CanL), a modulação da resposta imune do hospedeiro pode estar associada à expressão de pequenos RNAs não codificantes denominados microRNA (miR). A expressão do miR-194 aumenta em células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de cães com leishmaniose com correlação positiva com a carga parasitária. Estudamos CMSP de 5 cães saudáveis e 28 cães com leishmaniose. A expressão basal do miR-194 foi analisada utilzando qPCR. As CMSP foram transfectadas com Mimic e Inibidor sintéticos do miR-194 e cultivadas a 37º C, 5% de CO2 por 48 horas. A expressão de possíveis alvos do miR-194 foi analisada: iNOS, NO, T-Bet, GATA3 e FoxP3 foram analisadas por citometria de fluxo; a expressão gênica de TRAF6 foi analisada por qPCR, e o nível das citocinas IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ e TGF-β no sobrenadantes de cultura celular foi mensurada por Ensaio Imunoenzimático de Captura (ELISA). A carga parasitária foi analisada por citometria e qPCR. Ensaio funcional com Inibitor do miR-194 e bloqueio de IL-1β e avaliação da produção de NO também foram realizados. Transfecção com o mimic do miR-194 promoveu um aumento da carga parasitária. Não houve alterações significativas na expressão de T-bet, GATA3 ou FoxP3 com aumento ou inibição do miR-194. A inibição de miR-194 aumentou IL-1β e NO em CMSP de cães doentes, e o bloqueio de IL-1β após a inibição de miR-194 diminuiu os níveis de NO. Esses achados sugerem que o miR-194 é regulado positivamente em CMSP de cães com leishmaniose e regula positivamente a carga parasitária, possivelmente diminuindo a produção de NO dependente da IL-1β. Esses resultados aumentam nossa compreensão dos mecanismos moleculares de evasão da resposta imune pelo parasita e a identificação de possíveis alvos terapêuticos.
  • ItemTese de doutorado
    Análise espaço-temporal, vulnerabilidade social e fatores de risco para Leishmaniose visceral em área endêmica do noroeste paulista
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-03-01) Oliveira, Talita Carolina Bragança de; Bresciani, Katia Denise Saraiva [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A Leishmaniose Visceral é uma zoonose que pode levar a óbito pela gravidade de sua evolução, a caracterização como negligenciada a fez alvo da priorização de vigilância e controle. O agente etiológico é um parasito intracelular obrigatório, no Brasil é Leishmania (infantum) chagasi, cujo vetor é Lutzomyia longipalpis. O principal hospedeiro, o cão, possui uma relação próxima ao homem, por isso tem papel de destaque nas ações de vigilância e controle instituídas pelos programas voltados à enfermidade, como testagem diagnóstica destes, sobretudo nas áreas endêmicas. Para que as ações sejam assertivas, faz-se necessário que a identificação de áreas prioritárias de risco seja estabelecida, assim as estratégias que priorizam os cães sejam voltadas à essa área. Assim, espera-se que a incidência da leishmaniose em humanos seja diminuída. Portanto, por meio de análises espaciais, com delimitação dos aglomerados de casos (clusters) de risco relativo em comparação com as áreas não delimitadas. Além de necessário considerar variáveis ambientais para que os fatores relacionados à biologia do vetor sejam considerados.
  • ItemTese de doutorado
    MicroRNA-21 e microRNA-148a regulam PTEN, NO e ROS na leishmaniose canina
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-01-18) Freitas, Jéssica Henrique de; Lima, Valéria Marçal Felix de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A leishmaniose visceral canina (CanL) representa uma grave ameaça à saúde pública em vários países. A progressão da doença depende do grau de supressão da resposta imune. Os microRNAs (miRs) modulam a tradução do mRNA em proteínas e regulam várias funções celulares e vias associadas às respostas imunes. MiR-21 e miR-148a podem alterar a carga parasitária e os macrófagos M1 são as principais células na atividade leishmanicida de cães. Um estudo anterior encontrou aumento de miR-21 e miR-148a em leucócitos esplênicos (LE) de cães com CanL usando a análise de microarranjo, e a análise in silico identificou alvos da via PTEN. PTEN está envolvido na regulação imune de macrófagos. Medimos PTEN e a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e óxido nítrico (NO) após transfecção com mimic e inhibitor de miR-21 e miR-148a em LE de cães com CanL. Os níveis de PTEN aumentaram, NO e ROS diminuíram em LEs de cães com CanL. A inibição do miRNA-21 resultou em aumentos de PTEN; em contraste, o PTEN diminuiu após a inibição do miR-148a. Os níveis de nitrito aumentaram após a transfecção com o inibidor de miR-21, mas diminuíram com o inibidor de miR-148a. O aumento de miR-21 promoveu redução nos níveis de ROS e NO. Esses achados sugerem que miR-21 e miR-148a modulam a resposta imune em cães com CanL por meio de PTEN, NO e ROS.
  • ItemTese de doutorado
    Uso de coprodutos da industrialização de frutas na alimentação de tilápias
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-01-20) Fonseca, Victor Eloy da; Ponsano, Elisa Helena Giglio; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Conhecida pela sua alta resistência e rusticidade, a tilápia é o segundo peixe mais cultivado no mundo e sua produção quadriplicou em relação à última década. Esses aumentos em produção e produtividade geram demanda por matérias-primas que possam substituir parcialmente ingredientes tradicionais, melhorando os custos de produção e a qualidade dos produtos. Os resíduos da industrialização de frutas contêm carboidratos, ácidos graxos e nucleicos e compostos fenólicos, importantes para a dieta animal. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a digestibilidade dos resíduos do processamento de acerola, maçã e uva na alimentação de tilápias e avaliar os efeitos de sua inclusão na dieta sobre o desempenho dos animais e a qualidade dos filés. Para a determinação do coeficiente de digestibilidade aparente (CDA), 408 juvenis de Tilápias com peso médio de 270 g foram distribuídos em tanques para coleta de fezes, seguindo um delineamento inteiramente casualizado com quatro dietas-teste e seis repetições. Os CDA de matéria seca (MS), proteína bruta (PB), energia bruta (EB) e fibra detergente neutro (FDN) foram avaliados pela metodologia de substituição do alimento-teste (farelos de frutas) numa dieta-referência, usando-se 0,05% de óxido crômico como indicador externo. Os farelos de acerola, maçã e uva apresentaram 91,20%, 93,83% e 91,53% de MS, 13,53%, 9,56% e 10,69% de PB, 4.350 kcal, 2.261 kcal, e 5.010 kcal de EB e 48,96%, 11,46% e 54,16% de FDN, respectivamente. Os CDA dos farelos de acerola, maçã e uva foram de 27,6%, 60,9% e 54,0% para MS, 8,02%, 66,1% e 39,9% para PB e 28,5%, 61,4% e 54,9% para EB, respectivamente. Todos os farelos testados apresentaram perfil bromatológico de matéria seca, proteína bruta e energia bruta com potencial de uso em dietas para tilápias. O farelo de maçã apresentou maior digestibilidade de matéria seca, proteína bruta e energia bruta e o farelo de menor digestibilidade foi o de acerola. Para a avalição do desempenho, o experimento foi composto de quatro tratamentos e seis repetições, em um delineamento inteiramente casualizado. Os tratamentos consistiram em quatro dietas experimentais: RF – dieta de referência, sem farelo de frutas, e três rações contendo farelos de acerola (FA) ou maçã (FM) ou uva (FU) com inclusão de 5% da matéria seca total, durante 45 dias. Os peixes foram pesados e medidos para a obtenção dos dados de desempenho (ganho de peso, fator de condição corporal, índice hepatossomático e eficiência alimentar) e, após o abate, os filés foram amostrados para as determinações de composição centesimal e perfil de ácidos graxos. Os resultados foram analisados estatisticamente para a verificação de diferença entre os tratamentos, adotando-se a significância de 5%. O desempenho produtivo foi equivalente entre os tratamentos, o teor de proteína foi maior nos filés dos peixes alimentados com farelo de uva e as concentrações de lipídeos foram maiores nos filés dos peixes alimentados com os farelos de frutas. Os dados obtidos reforçam a sugestão de uso de resíduos de frutas na alimentação de peixes como forma de reduzir resíduos provenientes de operações industriais.
  • ItemTese de doutorado
    INFECÇÃO POR Giardia spp. E Cryptosporidium spp. EM MACACOS-PREGO (Sapajus spp.) MANTIDOS EM CATIVEIRO
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-01-24) Ferreira, Gilberto Chiantelli; Bresciani, Katia Denise Saraiva; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Os animais da Ordem Primata são muito susceptíveis as infecções parasitárias. Este estudo foi desenvolvido com o objetivo de investigar a ocorrência de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. em macacos prego mantidos em cativeiro. Amostras fecais de 50 macacos-pregos foram processadas pela Técnicas de Faust e por meio da coloração negativa de verde malaquita. Os resultados obtidos nesse experimento foram submetidos à análise estatística pelo teste qui-quadrado com correção de yates, para verificar a associação desses enteroparasitos em relação ao gênero. Assim, foi observado que não houve correlação entre o sexo dos macacos e a presença dos protozoários supramencionados. Importante evidenciar que quatro amostras foram positivas para Giardia spp. e 12 amostras para Cryptosporidium spp. Assim, nós observamos a liberação de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de macacos pregos assintomáticos mantidos em cativeiro.
  • ItemTese de doutorado
    Prevalência de endoparasitos e caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris) em áreas urbanas
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-12-06) Hossotani, Camila Michele de Souza; Meireles, Marcelo Vasconcelos; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    As capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris) pertencem à família Caviidae e subfamília Hydrochoerinae. Seu habitat são ambientes próximos de leitos antigos de rios, lagoas e em margens de rios. As parasitoses de capivaras despertam interesse devido à sua crescente presença em áreas alagadas e antrópicas, como praças, parques e represas. Por isso, há uma crescente preocupação quanto à relação desses animais atuarem como reservatórios e representar fontes de infecção de parasitos para o homem. Algumas áreas antrópicas, como parques e praças que possuem lagos naturais ou artificiais, abrigam uma considerável densidade e biomassa de capivaras. Já foram encontradas em fezes de capivaras algumas espécies de protozoários, como Giardia sp., Cryptosporidium sp. e Eimeria sp., além de ovos de helmintos, como Fasciola hepatica, Trichostrongyloidea e Capillaria spp.. Tendo em vista o potencial das capivaras atuarem como reservatório para diversas parasitoses e a falta de estudos sobre a ocorrência e a caracterização molecular de espécies e genótipos de Cryptosporidium que infectam capivaras, o objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência de endoparasitos e realizar a caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em populações de capivaras presentes em áreas urbanas. Um total de 401 e 392 amostras fecais de capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris) foi analisado por microscopia para a detecção de Cryptosporidium spp. e de outros endoparasitos, respectivamente. A detecção e análise moleculares de Cryptosporidium spp. foram realizadas pela reação em cadeia pela polimerase para amplificação de fragmento parcial dos genes da subunidade 18S do rRNA (18S rRNA), actina, proteína do choque térmico (HSP70) e glicoproteína (GP60). Os resultados dos exames microscópicos e moleculares revelaram prevalência de 0,25% (1/401) e 0,5% (2/401) para Cryptosporidium spp., respectivamente, e a presença de um novo genótipo de Cryptosporidium, denominado como Cryptosporidium genótipo capivara. As sequências genéticas amplificadas por PCR para amplificação de fragmentos parciais dos genes 18S rRNA, HSP70, actina e GP-60 de Cryptosporidium genótipo capivara apresentaram similaridade genética com Cryptosporidium wrairi de 99%, 99,7%, 99,5% e 91,5%, respectivamente. Dentre as 392 amostras pesquisadas para a presença de endoparasitos, 84% (329/392) foram positivas e 14% (63/392) foram negativas para parasitoses gastrointestinais. Dentre as amostras positivas, foram encontradas as seguintes taxas de ocorrências: oocistos de Eimeria spp. (62%; 245/392), ovos de Trichostrongylidae (39%; 155/392), Capillaria sp. (1%; 6/392), Anoplocephalidae (2/392; 0,5%), Strongyloides spp. (0,5%; 2/392), Paramphitosmatidae (0,7%; 3/392) e ovos e adultos de Protozoophaga obesa (24%, 93/392). Foi observada uma baixa prevalência de Cryptosporidium spp., com identificação de um novo genótipo de Cryptosporidium em capivaras de áreas urbanas. Além disso, nossos resultados indicaram uma alta ocorrência de amostras positivas para diversos gêneros/famílias de parasitos, demonstrando o alto potencial desses animais abrigarem espécies variadas de parasitos e atuarem como reservatórios e possíveis dispersores de diversas parasitoses.
  • ItemTese de doutorado
    O efeito do estresse térmico associado à produção de leite e índices reprodutivos de vacas da raça Holandesa
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-11-07) Lopes, Marco Antonio Ruiz; Nogueira, Guilherme de Paula; Feitosa, Francisco Leydson Formiga; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O objetivo deste estudo foi avaliar a taxa de concepção de vacas leiteiras sob influencia da produção de leite e estresse térmico ambiental. Um total de 250 fêmeas leiteiras Holandesas foi convertido em 1.238 observações. Essas observações foram de nulíparas que receberam inseminação artificial (IA; n = 297), multíparas com IA (n = 465) e multíparas com inseminação artificial em tempo fixo (IATF; n = 476). As observações foram agrupadas em cinco classes térmicas ambientais, cada uma dividida em variáveis acima ou abaixo do limite de tolerância térmica para as estações climáticas (primavera/verão (Q) vs. outono/inverno (F)); temperatura ambiente (°C, temperatura máxima diurna (TMd) e temperaturas máximas médias (MTM) diárias no intervalo de 50 dias antes do IA/IATF (< 30°C vs  30°C)) e índice de temperatura e umidade ( THI, índice de temperatura-umidade diário (THId) e THI médio diário (MTHI) durante um intervalo de 50 dias antes da IA/IATF, < 72 vs 72); dias em lactação (DEL), produção de leite em litros (L). Houve diferença na taxa de concepção (P/AI) após 30 dias de IA entre nulíparas e multíparas (62,3% [185/297] vs. 24,8% [233/941]) e entre IA e IATF em multíparas (29,9% [139/465] vs. 19,7% [94/476]). A produção de leite foi maior nas multíparas (29,23  0,43 L/dia) do que nas primíparas (25,18  0,28 L/dia). Vacas acima de 201 DEL apresentaram menor produção média de leite (L/dia) em comparação aos intervalos de 1 a 100 DIM e 101 a 200 DIM em primíparas (21,84  0,58 vs. 25,68  0,37 vs. 26,83  0,54) e multíparas (23,84  0,74). vs. 31,85  0,60 vs 30,16  0,74). Houve associação de melhor taxa de concepção em nulíparas quando expostas a menor limiar térmico (estações outono/inverno; ambiente com temperatura < 30°C e THI < 72, quando avaliados em dia e em médias). Em vacas multíparas em lactação a taxa de concepção foi menor quando comparadas a nulíparas e sofreram interferência negativa da produção de leite. O aumento do THId diminuiu a taxa de concepção em nulíparas e multíparas com produção > 32 L/dia. Nas condições climáticas do ambiente tropical, as nulíparas apresentaram melhores taxas de concepção quando comparadas as primíparas e multíparas, mesmo com THId > 72, acreditamos ser resultado da ausência da produção de leite apesar de serem termossensíveis. Por outro lado, vacas primíparas e multíparas em lactação mostraram-se termossensíveis diminuindo a taxa de concepção e probabilidade de prenhez à medida que a produção de leite e THId aumentam para vacas da raça Holandesa criadas em sistema estabulado.
  • ItemTese de doutorado
    A frequência de pré-hipertensão e estresse oxidativo aumentam em gatos obesos
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-08-19) Valadares, Taiana Carvalho; Ciarlini, Paulo César; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A causa fundamental da obesidade é a ingestão de alimentos com alta densidade energética e a inatividade que levam ao desbalanço entre consumo e gasto calórico. A hipertensão relacionada a obesidade é uma das mais sérias consequências da síndrome metabólica humana. Mesmo sendo considerado modelo para a obesidade humana, em gatos essa alteração ainda é controversa. Além disso o estresse oxidativo já foi associado há várias doenças desses animais domésticos e parece ter um importante papel no desenvolvimento das alterações sistêmicas da obesidade. Após revisão sistemática de literatura foi investigada a hipótese de que a hipertensão em gatos naturalmente obesos esteja associada ao estresse oxidativo sistêmico. Em 25 gatos adultos agrupados de acordo com o escore de condição corporal (ECC), controle (ECC 5) e obeso (ECC 7, 8 ou 9) foram comparados e associados parâmetros bioquímicos, hematológicos, antropométricos, a pressão arterial sistólica e marcadores sistêmicos de estresse oxidativo. Embora não tenha ocorrido associação do estresse oxidativo sistêmico e hipertensão arterial, houve uma maior frequência de pré-hipertensão (38%) em gatos obesos e correlação do índice de estresse oxidativo com a circunferência abdominal (r=0,518 P=0,0113). Esses resultados reforçam a necessidade de monitoramento clínico, controle da pressão arterial e estresse oxidativo de gatos obesos para que não ocorram complicações relacionadas a essas alterações.
  • ItemTese de doutorado
    Fauna atropelada do Estado de São Paulo – Estudo de caso na Rodovia Marechal Rondon: Desafios e soluções
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-06-01) Ramos, Gabriela Cortellini Ferreira; Marinho, Márcia; Adania, Cristina Harumi; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    As primeiras estradas teriam sido construídas aproximadamente 3000 a.C., e, a partir da década de 1920, no Brasil, o sistema rodoviário se transformou na principal rede de transporte terrestre. Os empreendimentos lineares são essenciais na infraestrutura necessária ao desenvolvimento econômico de um país, porém são responsáveis por vários impactos sociais e ambientais, como poluição sonora e luminosa, fragmentação de habitats, dispersão de espécies exóticas e a perda da fauna por atropelamento, sendo esse último, a causa direta da mortalidade de vertebrados silvestres mais evidente da fragmentação de habitats. A malha rodoviária brasileira possui cerca de 1,7 milhão de quilômetros de extensão e uma frota de mais de 107 milhões de veículos, e, entre as diversas categorias de acidentes rodoviários, os acidentes provocados por animais representam a única categoria que demanda a indenização do usuário por parte do administrador rodoviário. Ao analisar os valores gastos com indenizações e o que seria gasto com infraestrutura, é observado que seria mais estratégico mitigar acidentes específicos envolvendo a fauna, do que ter que arcar com indenizações. As exigências de estudos sobre os impactos causados por grandes obras, dentre elas, as rodovias, abriu um novo campo de estudo, a Ecologia de Estradas, que envolve a função das estradas como ecossistemas, seus efeitos deletérios, e o gerenciamento desses empreendimentos. A chamada “fauna de estrada” pode servir como indicador da biodiversidade local, fornecer dados ecológicos sobre a história natural de algumas espécies, e revelar aspectos como o padrão de deslocamento e a dinâmica sazonal de algumas populações de espécies presentes na comunidade. Outro campo de estudo é a “Ecologia da Paisagem”, uma área de conhecimento que relaciona conceitos geográficos e biológicos para analisar a estrutura espacial da paisagem. Com estas informações pode-se avaliar o estágio de conservação local e estabelecer áreas prioritárias para proteção e manejo da fauna que utiliza rodovias como parte de seu habitat. Visando à preservação da diversidade biológica e consequentemente o banco genético animal, torna-se necessária à adoção de medidas mitigatórias para conter o impacto à fauna. Pensando nessa problemática, estudos vêm tentando identificar os chamados hotspots de atropelamentos, que consistem em trechos das rodovias que apresentam o maior índice de acidentes envolvendo a fauna, e, por meio da identificação, é possível traçar medidas de mitigação a fim de minimizar os impactos às populações ou comunidades de animais silvestres. As medidas de mitigação visam basicamente restabelecer algum grau de conectividade para minimizar o efeito de barreira e impedir os atropelamentos em pontos mais suscetíveis, podendo ser intervenções estruturais, manejo de usuários e manejo biológico. O objetivo geral desse estudo foi identificar o impacto de um trecho da rodovia SP-300 sob a fauna local, e, a partir do conhecimento gerado, estabelecer estratégias de mitigação.
  • ItemTese de doutorado
    microRNA-148a regula citocinas inflamatórias e atividade microbicida na leishmaniose canina
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-04-08) Rebech, Gabriela Torres; Lima, Valéria Marçal Felix de; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A leishmaniose canina (LCan) é um grave problema de saúde pública, pois animais infectados facilitam a transmissão do protozoário Leishmania para humanos pela picada do vetor flebotomíneo durante o repasto sanguíneo. A progressão da LCan está relacionada à supressão efetiva da resposta imune, possivelmente associada a pequenos RNAs chamados microRNAs (miR), que podem afetar a tradução do mRNA em proteínas e, consequentemente, regular o funcionamento das células. O aumento de miR-148a em leucócitos esplênicos (LS) de cães com LCan foi observado em estudos anteriores e análises in silico identificaram possíveis vias envolvidas na regulação da resposta imune que são afetadas por este miR. Portanto, através do uso de cultura celular e transfecção, in vitro, avaliamos o envolvimento de miR-148a, na regulação de citocinas inflamatórias como TNF-α, IL-6, IL-12, IL-1β, iNOS, expressão de MHCII, CD80, CD3, dos fatores de transcrição T-bet (Th1) e GATA-3 (Th2) e sua relação com a carga parasitária em LS de cães com LCan. Primeiramente, LS coletados de cães saudáveis e doentes (LCan), foram transfectados com oligonucleotídeos inventariados de inibidor e mimetizador de miR-148a. Após 48 horas, a expressão das proteínas MHCII, CD80, iNOS, CD3, Tbet, GATA-3 foi avaliada por citometria de fluxo e a concentração de TNF-α, IL-12, IL-6 e IL-1β foi medida no sobrenadante de cultura por ELISA de captura. A transfecção de LS com mimetizador de miR-148a diminuiu a concetração de iNOS nas células e de TNF-α, IL-6 e IL-12 no sobrenadante do LS cultivado de cães LCan. Curiosamente, a transfecção com inibidor de miR-148a diminuiu a carga parasitária nas células. Esses resultados sugerem um papel regulador negativo deste miR na resposta imune à infecção por L. infantum. Concluímos que miR-148a pode afetar a resposta imune regulando citocinas inflamatórias durante LCan. Nossos resultados contribuem para o entendimento da complexa interação hospedeiro/parasito na leishmaniose canina e podem auxiliar no desenvolvimento de possíveis tratamentos.
  • ItemTese de doutorado
    Identificação e caracterização de variantes genéticas associadas à pelagem em gado zebuíno
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-22) Trigo, Beatriz Batista; Utsunomiya, Yuri Tani; Lopes, Flávia Lombardi; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O gado zebuíno da raça Nelore (Bos indicus) é conhecido por sua fácil adaptação nos ambientes de climas tropicais e subtropicais. Uma das características fenotípicas relacionadas à essa adaptação e principalmente à tolerância à radiação ultra-violeta é o padrão de coloração da pele e da pelagem apresentado pela raça. Outras raças zebuínas também apresentam padrão de pelagem semelhante ao Nelore. Dada a potencial contribuição da variação na pelagem destes animais na adaptação dos mesmos nos climas tropicais e sub-tropicais, objetivou-se mapear variantes genéticas candidatas estruturais ou funcionais que estivessem associadas ao escurecimento da pelagem nos zebuínos. Realizando análise de associação genômica ampla (genome-wide association study – GWAS) e posterior análise de dados de sequenciamento completo foi possível encontrar uma complexa variante estrutural nas proximidades do gene da proteína sinalizadora agouti (agouti signaling protein -ASIP) a qual foi denominada de ASIP-SV1, sendo fortemente correlacionada ao escurecimento da pelagem em regiões específicas no corpo dos bovinos das raças Nelore e Brahman. A variante estrutural ASIP-SV1 também foi predita como sendo de origem B. indicus, para confirmar tal predição foram analisadas sequencias da região da variante estrutural de animais zebuínos e não-zebuínos para elucidar a segregação desta variante. Nas análises realizadas 45,3% dos zebuínos analisados apresentaram a variante estrutural enquanto que dos taurinos somente 6.3% continham a variante no gene ASIP sendo que esses taurinos eram de raças conhecidas por apresentarem introgressão zebuína em seu genoma. Concluiu-se que a variante ASIP-SV1 causa o escurecimento na pigmentação da pelagem em regiões específicas do corpo destes animais causando um aumento na produção de eumelanina, a variante se mostrou robusta e sugeriu-se que, em conjunto a outros genes, essa variação possa contribuir com a adaptação dos bovinos aos climas tropicais e sub-tropicais.
  • ItemTese de doutorado
    Análise do potencial regulatório de RNAs longos não-codificadores em macrófagos de camundongos infectados com Leishmania major
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-11) Athayde, Flávia Regina Florencio de [UNESP]; Lopes, Flavia Lombardi [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A leishmaniose é uma doença endêmica sendo comum em regiões pobres de países em desenvolvimento. Essa parasitose é causada por protozoários do gênero Leishmania, pertencentes à família Trypanosomatidae e responsável pela segunda maior taxa de mortalidade mundial. Dentre os hospedeiros vertebrados há uma grande variedade de mamíferos, e a transmissão ocorre principalmente por meio da picada de fêmeas de flebotomíneos do gênero Lutzomyia, principais vetores no Brasil. Nos hospedeiros mamíferos a forma amastigota intracelular coloniza principalmente os macrófagos, os quais atuam na eliminação do patógeno. Contudo, para se manter vivo, o parasita evita os mecanismos de defesa, os quais podem ser regulados por processos epigenéticos dos macrófagos. Dentre esses, destacam-se os RNAs longos não-codificadores (lncRNA), que apresentam diversas funções incluindo o controle da expressão de genes alvos próximos ou distantes. Considerando a capacidade regulatória deste protozoário, identificar a relação na expressão de lncRNAs e seus possíveis alvos, em macrófagos infectados com Leishmania, é importante para o entendimento do papel dos processos epigenéticos no diálogo parasita-hospedeiro, na leishmaniose.
  • ItemTese de doutorado
    Avaliação da expressão de miRNAs circulantes e da articulação tibiotársica em equinos
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-17) Denadai, Daniela Scantamburlo [UNESP]; Peiró, Juliana Regina; Canola, Paulo Aléscio; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A osteoartrite é uma das maiores causas de morbidade em equinos. É caracterizada pela degeneração e proliferação óssea, lesões nas cartilagens e espessamento da membrana sinovial e da cápsula articular. O estudo de miRNAs é um campo emergente na determinação dos mecanismos que regulam enfermidades inflamatórias, podendo-se criar modelos para estudar as vias de sinalização para enfermidades articulares. Foram utilizados seis equinos atletas da raça Quarto de Milha, divididos em dois grupos: Grupo Controle (CT) - sem qualquer enfermidade ósteo-articular, e Grupo Osteoartrite (OA) - diagnosticados com osteoartrite tibiotársica primária traumática subclínica. Foram coletadas amostras de sangue venoso e de líquido sinovial para realizar a extração do RNAtotal por meio do kit “Alternative Protocol for Extraction of RNA from Cells Captured on LeukoLOCK Filters Using TRI Reagent®” (Thermo Fisher Scientific®). O microarranjo foi realizado com o kit “Affymetrix® miRNA 4.1 Array Strip” e equipamento “GeneAtlas Affymetrix®”. As análises estatísticas foram realizadas com o programa “Transcriptome Analysis Console (TAC)”. Quando comparados os grupos, foram identificados 42 miRNAs diferencialmente expressos no sangue dos equinos (36 regulados positivamente e 6 regulados negativamente). Já no líquido sinovial, foram identificados 13 miRNAs diferencialmente expressos (regulados positivamente). A intersecção desses resultados revelou miRNAs que podem ser utilizados como biomarcadores sistêmicos para osteoartrite tibiotársica. A detecção do aumento na expressão destes miRNAs (eca-miR-15a, eca-miR-15b, eca-miR-17, eca-miR-18a, eca-miR-19b, eca-miR-20a, eca-miR-106a, eca-miR-106b, eca-miR-191, eca-miR-361-5p, eca-miR-450b-5p, eca-miR-451 e eca-miR-486-5p) no sangue venoso de equinos Quarto de Milha, indica que estes podem ser utilizados como biomarcadores para detecção precoce de osteoartrite tibiotársica em equinos de maneira menos invasiva e sistêmica.
  • ItemTese de doutorado
    Análise da expressão de mRNA de amostras FFPE de feridas lombares de equinos tratados com óleo de copaíba 10 %
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-10) Poló, Tatiane da Silva; Lucas, Flavia de Almeida; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O objetivo desta pesquisa foi analisar o transcriptoma de mRNA de feridas cutâneas experimentais na região lombar de equinos tratadas ou não com óleo de copaíba a 10% a partir de biopsia de amostras, fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE). Foram utilizadas biopsias de feridas experimentais em região lombar de equinos tratadas ou não (controle) com óleo de copaíba a 10% obtidas e armazenadas em FFPE há sete anos. A extração do RNA foi realizada utilizando Kit Qiagen RNeasy FFPE, devidamente quantificado e qualificado para análise da expressão do transcriptoma no GeneChip™ Equine Gene 1.1 ST Array Strip, escaneadas pelo GeneAtlas (Affymetrix®), utilizando o software Transcriptome Analysis Console (TAC) (Affymetrix®) para identificação, empregando-se a análise estatística ANOVA (fold change ± 1,5; FDR corrigido P < 0,05). A metodologia de extração de mRNA mostrou-se eficaz na avaliação de amostras de tecido tegumentar FFPE para realização de transcriptoma. O grupo que recebeu o óleo de copaíba a 10% apresentou cinco mRNA supra regulados, relacionados aos genes MIR365-2, MIR551B , LOC100060487, RPL12 e CNN3, além de três mRNA infra relulados, estes relacionados aos genes LOC102149005, LOC102149966 e C10H19orf33. Este é o primeiro estudo relacionado ao transcriptoma de mRNA de feridas lombares em equinos tratados com óleo de copaíba 10%. Os cinco genes supra regulados estão relacionados ao controle de tecido de granulação, apoptose e migração fibroblástica e, entre os três genes infra regulados, há o envolvimento da proteína ligadora de histonas, que ao ser inibida há diminuição da fibrose em pele, melhorando as características de cicatrização feridas ferida.
  • ItemTese de doutorado
    Perfil cristalúrico em ovinos suplementados com cloreto de amônio
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021-10-15) Navarro, Fábio Castilho; Mendes, Luiz Cláudio Nogueira; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Apesar de cristais urinários serem componentes habituais, a formação de urolitíase é sempre precedida destas concreções. O estudo objetivou identificar a mudança do perfil cristalúrico em ovinos suplementados com cloreto de amônio. Foram utilizados 25 ovinos, machos, com idade de três meses, confinados e distribuídos aleatoriamente em três grupos: GRUPO GC (Controle) (n=5) não recebeu Cloreto de Amônio; GRUPO G200 (n=10) (200 mg/Kg) de Cloreto de Amônio por 56 dias consecutivos; Grupo G500 (n=10) (500 mg/Kg) de Cloreto de Amônio por 56 dias consecutivos, administrados diariamente por via oral. Os Momentos (M) de colheita de amostras e avaliação clínica foram realizados com intervalo de sete dias, sendo M0 (imediatamente antes da administração do Cloreto de Amônio), M1 (sete dias após) até M8, totalizando 70 dias de confinamento. As amostras de urina foram analisadas para se identificar a presença, o tipo e a quantidade de cristais. Houve aumento da cristalúria em todos os grupos em relação ao tempo por influência dietética, principalmente no Grupo Controle, que apresentou mais cristais de fosfato de cálcio amorfo e oxalato de cálcio. Além disso, o Grupo G500 apresentou maior presença de cristais de urato/ácido úrico após acidificação urinária, estando estes intimamente relacionados ao pH urinário.