UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA E ZOOTECNIA CAMPUS DE BOTUCATU SELEÇÃO DE NOVILHAS NELORE POR CARACTERÍSTICAS DE CARCAÇA E CORRELAÇÃO COM A EFICIÊNCIA REPRODUTIVA VITÓRIA APARECIDA MORATO RIBEIRO Dissertação apresentada ao Programa de Pós-graduação em Zootecnia como parte das exigências para obtenção do título de Mestre em Zootecnia. BOTUCATU – SP Junho 2024 UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA E ZOOTECNIA CAMPUS DE BOTUCATU SELEÇÃO DE NOVILHAS NELORE POR CARACTERÍSTICAS DE CARCAÇA E CORRELAÇÃO COM A EFICIÊNCIA REPRODUTIVA VITÓRIA APARECIDA MORATO RIBEIRO Orientadora: Profª. Drª. Cyntia Ludovico Martins Coorientador: Prof. Dr. Mário De Beni Arrigoni Dissertação apresentada ao Programa de Pós-graduação em Zootecnia como parte das exigências para obtenção do título de Mestre em Zootecnia. BOTUCATU – SP JUNHO 2024 IV BIOGRAFIA DO AUTOR Vitória Aparecida Morato Ribeiro – nascida em 03 de agosto de 1997, na cidade de São Paulo /SP, filha de Eliana Aparecida Rossi Morato Ribeiro e Hélio José Ribeiro, concluiu o ensino fundamental e médio na cidade de Pirassununga /SP, no colégio Objetivo Integrado no ano de 2014. Ingressou no curso de Zootecnia da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” – Unesp – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Câmpus de Botucatu, em março de 2017 e graduou-se em janeiro de 2022. Em março de 2022 iniciou o curso de Mestrado em Zootecnia da Unesp – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia – Câmpus de Botucatu, onde foi bolsista pela Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior/ CAPES. Atua na área de produção de bovinos de corte. V DEDICATÓRIA Aos meus pais Eliana Aparecida Rossi Morato Ribeiro e Hélio José Ribeiro, expresso profunda gratidão por terem me proporcionado uma sólida estrutura familiar desde o início e por terem investido no meu futuro. Sou eternamente grata pelo apoio incondicional e por tudo o que me concederam, permitindo que eu alcançasse a melhor formação possível. Sempre presentes em todas as áreas da minha vida, oferecendo conselhos, ensinamentos e apoio inestimável, contribuindo significativamente para o meu crescimento e desenvolvimento. Aos meus avós maternos (in memoriam) Hilda Rossi Morato e João Baptista de Camargo Morato, expresso profunda gratidão pelas histórias inspiradoras de vida simples, que despertaram minha admiração e respeito pela vida e pela lida no campo. Suas experiências e ensinamentos foram fontes inesgotáveis de inspiração, moldando minha compreensão e apreço pelo árduo trabalho e pela beleza da vida rural. Suas histórias ecoam em meu coração, incentivando-me e guiando-me em minha jornada. VI AGRADECIMENTOS Agradeço sinceramente a todos que contribuíram para a realização desta dissertação. Em primeiro lugar, gostaria de expressar minha profunda gratidão a Deus. Sua orientação, cuidado e provisão foram evidentes desde o início desta jornada acadêmica. Antes mesmo de ingressar na universidade, Deus já havia traçado um futuro repleto de pessoas incríveis que tornaram desde a minha graduação os melhores anos da minha vida. Ele mudou totalmente o caminho que eu havia traçado, mostrou-me a vida por uma outra perspectiva e preencheu-me com seu amor incondicional. A minha orientadora, Prof. Dra. Cyntia Ludovico Martins, pela orientação, paciência e apoio inestimáveis ao longo deste processo. Seu conhecimento e incentivo foram fundamentais para o desenvolvimento deste trabalho. Ao meu coorientador, Prof. Dr. Mário De Beni Arrigoni, pela acolhida, conversas e conselhos, por todo suporte na elaboração e aprimoramento deste projeto. Meus sinceros agradecimentos também vão para o Prof. Dr. Guilherme Nogueira e toda sua equipe do Laboratório de Endocrinologia Animal, UNESP - Câmpus de Araçatuba, por auxiliarem nas análises de Leptina, para a pesquisadora Mirele Poleti e toda a equipe do Laboratório de Oncologia Comparada e Translacional (LOCT), FZEA/USP - Câmpus de Pirassununga, por auxiliarem nas análises de Tireoglobulina e ao Prof. Dr. Paulo Henrique Mazza Rodrigues do Departamento de Nutrição e Produção Animal (VNP) FMVZ/ USP - Câmpus de Pirassununga, pelo auxílio nas análises estatísticas. Ao Zootecnista e Médico Veterinário Douglas Rodrigues, também gerente da Fazenda Boa Vista - Nova Andradina/MS, responsável pelo projeto conduzido nas novilhas, expresso meu sincero agradecimento por sua colaboração. Agradeço por organizar os manejos e por ajustar a rotina da fazenda para a realização das coletas, pela hospedagem e pela parceria ao longo de todo o projeto. Sua dedicação e suporte foram fundamentais para o sucesso desta pesquisa. Ao Prof. Dr. Ciniro Costa, Prof. Dr. José Carlos de Figueiredo Pantoja e Drª. Cristiana Andrighetto, por aceitarem e participarem da minha banca de qualificação e defesa, e contribuírem para o aprimoramento desta dissertação. Um agradecimento especial à minha amiga e companheira, Bianca Torin. Tivemos a oportunidade de morar juntas durante a graduação e também durante o meu primeiro ano de VII mestrado. Sua presença constante ao meu lado foi fundamental, oferecendo apoio e incentivo nos momentos mais desafiadores. Nossa amizade ao longo dos anos foi não apenas essencial, mas eterna para mim, e suas palavras de encorajamento me impulsionaram para lugares que eu jamais alcançaria sozinha. 'Um homem sozinho pode ser vencido, mas dois conseguem defender-se. Um cordão de três dobras não se rompe com facilidade' Eclesiastes 4:12. Obrigada, miga Bi, por sua amizade e por ser esse elo tão forte em minha vida. Te amo! Aos meus amigos de vida e de pós-graduação, André Francischinelli e Daniel Gouvêa, gostaria de expressar minha profunda gratidão pela companhia constante nas aulas, estudos na salinha, e pelos nossos momentos de café com fofoca no posto. A presença e o apoio de vocês foram essenciais em todas as fases da construção desta dissertação. Saibam que serei eternamente grata por todo o suporte que me proporcionaram, desde as coletas até a escrita deste projeto. Amo vocês! A equipe da Pós-Graduação, por todo suporte acadêmico e orientação, ao Conselho de Pós- Graduação em Zootecnia FMVZ/ UNESP - Câmpus de Botucatu pela oportunidade, e comprometimento com a formação dos alunos e a todos os colaboradores do Departamento de Melhoramento e Nutrição Animal, por todo auxílio, atenção e serviços prestados. O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001. A todos aqueles que não foram citados, mas contribuíram para o êxito deste projeto. MUITO OBRIGADA!!! VIII “O coração do homem traça seu caminho, mas o Senhor lhe dirige os passos” (Provérbios 16:9) IX RESUMO GERAL 1 2 Os desafios enfrentados pela pecuária brasileira para aprimorar os índices produtivos e elevar 3 a qualidade dos produtos cárneos têm impulsionado a busca por estratégias que visam atingir o 4 equilíbrio na composição corporal dos animais. Essas estratégias visam promover maior 5 deposição muscular, melhor distribuição do tecido adiposo e aprimoramento da funcionalidade 6 reprodutiva, especialmente nas fêmeas. A estratégia adotada em nosso estudo fundamenta-se 7 na aplicação da técnica de ultrassonografia para a seleção de novilhas da raça Nelore com base 8 em características de carcaça. O objetivo foi avaliar o impacto dessa seleção na eficiência 9 reprodutiva por meio de índices reprodutivos, análise do perfil sanguíneo para o hormônio 10 Leptina plasmática, desempenho da progênie e expressão do gene Tireoglobulina tanto na 11 população das fêmeas quanto dos bezerros. Para isso foram utilizadas 355 novilhas da raça 12 Nelore entre 20 e 24 meses de idade, distribuídas em 4 grupos de acordo com ultrassom de 13 carcaça sendo a Classe A, composta por 109 novilhas, selecionadas AOL/100kg (16,91 ± 1,45), 14 EGS/100kg (1,22 ± 0,23) e MAR % (3,49 ± 0,36), Classe B, 37 novilhas selecionadas por 15 AOL/100kg (17,40 ± 1,61), e EGS/100kg (1,21 ± 0,18), Classe C, composta por 134 novilhas, 16 selecionadas por AOL/100kg (17,47 ± 1,50) e Classe D, constituída por 75 selecionadas por 17 EGS/100kg (1,21 ± 0,21). Os dados foram analisados pelo PROC ANOVA do SAS® para 18 p<0,05. A seleção de novilhas Nelore por meio de classes formadas a partir de características 19 de carcaça não demonstrou influência significativa na taxa de prenhez, taxa de concepção e taxa 20 de prenhez acumulada (p>0,05). Da mesma forma, o peso (p=0,30) e o ganho de peso (p=0,63) 21 dos bezerros não apresentaram diferenças significativas de acordo com a classificação das 22 mães. Além disso, não foram identificadas relações entre o grau de marmoreio e a expressão 23 do gene da Tireoglobulina em novilhas, bezerros e touros (p=1,00). Também não foram 24 observadas diferenças nos níveis de Leptina plasmática entre as diferentes classes de novilhas 25 (p= 0,91). 26 Palavras-chave: marmoreio; leptina; tireoglobulina; ultrassom; carcaça. 27 28 29 30 31 X ABSTRACT 1 2 The challenges faced by Brazilian livestock farming to enhance productivity indices and elevate 3 the quality of meat products have driven the search for strategies aimed at achieving balance in 4 the animals' body composition. These strategies aim to promote greater muscle deposition, 5 better distribution of adipose tissue, and improvement of reproductive functionality, especially 6 in females. The strategy adopted in our study is based on the application of ultrasound technique 7 for selecting Nelore heifers based on carcass characteristics. The objective was to assess the 8 impact of this selection on reproductive efficiency through reproductive indices, analysis of 9 blood profile for plasma Leptin hormone, progeny performance, and expression of the 10 Thyroglobulin gene in both the female and calf populations. For this purpose, 355 Nelore 11 heifers aged between 20 and 24 months were used, distributed into 4 groups according to 12 carcass ultrasound, with Class A composed of 109 heifers selected by REA/100kg (16.91 ± 13 1.45), BFT/100kg (1.22 ± 0.23), and MAR% (3.49 ± 0.36), Class B consisting of 37 heifers 14 selected by REA/100kg (17.40 ± 1.61) and BFT/100kg (1.21 ± 0.18), Class C composed of 134 15 heifers selected by REA/100kg (17.47 ± 1.50), and Class D consisting of 75 selected by 16 BFT/100kg (1.21 ± 0.21). The data were analyzed using PROC ANOVA from SAS® for 17 p<0.05. The selection of Nelore heifers through classes formed from carcass characteristics 18 showed no significant influence on pregnancy rate, conception rate, and accumulated pregnancy 19 rate (p>0.05). Similarly, the weight (p=0.30) and weight gain (p=0.63) of calves did not show 20 significant differences according to maternal classification. Furthermore, no relationships were 21 identified between marbling degree and Thyroglobulin gene expression in heifers, calves, and 22 bulls (p=1.00). Likewise, no differences were observed in plasma Leptin levels among the 23 different classes of heifers (p= 0.91). 24 Keywords: marbling; leptina; thyroglobulin; ultrasound; carcass. 25 26 27 28 XI LISTA DE ILUSTRAÇÕES CAPÍTULO 2 Figura 1. Critérios de classificação das novilhas Nelore..................................……..........….43 Figura 2. Diagrama do protocolo de IATF........………………………………………......... 46 Figura 3. Cronologia de acontecimentos...........………………………………….........…….49 XII LISTA DE TABELAS CAPÍTULO 2 Tabela 1. Peso inicial e características de carcaça mensuradas por ultrassonografia de fêmeas da raça Nelore, divididas em classes de acordo com as características de carcaça..................53 Tabela 2. Taxas de prenhez, concepção e taxa de prenhez acumulada a inseminação artificial nos diferentes diagnósticos de gestação ao longo da estação de monta de novilhas Nelore distribuídas em diferentes classes de composição de carcaça por ultrassom............................55 Tabela 3. Peso vivo e do escore de condição corporal ao início e ao final da estação de monta, de fêmeas Nelore distribuídas em diferentes classes de composição de carcaça por ultrassom...................................................................................................................................56 Tabela 4. Taxas de prenhez, taxa de concepção e taxa de prenhez acumulada nos diferentes diagnósticos de gestação ao longo da estação de monta por faixa de escore de condição corporal de novilhas Nelore distribuídas em diferentes classes de composição de carcaça por ultrassom...................................................................................................................................57 Tabela 5. Peso ao nascimento de bezerros nascidos de novilhas Nelore distribuídas em diferentes classes de composição de carcaça por ultrassom.....................................................58 Tabela 6. Ganho médio diário de peso (GMD) dos bezerros nascidos de novilhas Nelore distribuídas em diferentes classes de composição de carcaça por ultrassom............................59 Tabela7. Frequências alélicas do polimorfismo do gene TG entre as classes de novilhas Nelore distribuídas em diferentes classes de composição de carcaça por ultrassom..............................59 Tabela 8. Associação entre as Classes e as concentrações de Leptina plasmática, espessura de gordura subcutânea, marmoreio, escore de condição corporal e peso final de novilhas Nelore distribuídas em diferentes classes de composição de carcaça por ultrassom..............................60 Tabela 9. Análise descritiva dos níveis de Leptina plasmática, frequência alélica do gene Tireoglobulina, espessura de gordura subcutânea e marmoreio dos touros..............................60 XIII LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SÍMBOLOS AOL Área de olho de lombo CEUA Comissão de Ética no Uso de Animais cm2 Centímetros quadrados DG Diagnóstico de gestação DGT Designer Genes Technologies ECC Escore de condição corporal EGG Espessura de gordura na garupa EGS Espessura de gordura subcutânea EM Escore de marmoreio EPM Erro padrão da média IA Inseminação artificial IATF Inseminação artificial em tempo fixo IGF-I Fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1 i.m Intramuscular AIFT Artificial Insemination by Fixed Time Kg Quilogramas LH Hormônio luteizante M1- M12 Momento1 – momento12 MAR Marmoreio MHz Mega hertz mm Milímetros ng/mL Nanograma por milímetros PB Peso do bezerro GPB Ganho de peso bezerro PV Peso vivo RMP Rotações por minuto s.c subcutânea T3 Triiodotironina 3 T4 Triiodotironina 4 TC% Taxa de concepção XIV TG Tireoglobulina TP% Taxa de prenhez TPac% Taxa de prenhez acumulada UGC Ultrasound Guidelines Council UNESP Universidade estadual paulista US Ultrassonografia de carcaça USDA United States Department of Agriculture XV SUMÁRIO CAPÍTULO 1 CONSIDERAÇÕES INICIAIS..............................................................................................17 1. REVISÃO DA LITERATURA...........................................................................................18 1.1. Predição da composição de carcaça por Ultrassonografia..................................................18 1.2. Marmoreio na carne bovina................................................................................................21 1.3. Correlação entre características de carcaça e eficiência reprodutiva...................................25 2. OBJETIVOS GERAIS........................................................................................................28 REFERÊNCIAS.....................................................................................................................29 CAPÍTULO 2. Seleção de novilhas Nelore por características de carcaça e correlação com a eficiência reprodutiva. 1. INTRODUÇÃO...................................................................................................................41 2. MATERIAL E MÉTODOS................................................................................................42 2.1. Critérios de inclusão dos animais........................................................................................42 2.2. Delineamento experimental................................................................................................44 2.3. Protocolo de Inseminação artificial em tempo fixo nas novilhas Nelore.............................44 2.4. Determinação das características das carcaças (variáveis independentes) ........................46 2.5. Determinação dos desfechos (variáveis dependentes) ........................................................47 2.6. Parâmetros avaliados: Eficiência reprodutiva de novilhas bovinas de corte........................48 2.7. Cronograma de amostragem longitudinal dos animais........................................................48 2.8. Avaliação do perfil de Leptina plasmática..........................................................................50 2.9. Avaliação da expressão gênica para o gene da Tireoglobulina (TG) relacionado com a presença do marmoreio em bovinos..........................................................................................50 2.10. Análise estatística ............................................................................................................51 3. RESULTADOS ...................................................................................................................53 4. DISCUSSÃO........................................................................................................................61 5. CONCLUSÃO.....................................................................................................................66 6. LITERATURA CITADA....................................................................................................67 IMPLICAÇÕES......................................................................................................................72 16 CAPÍTULO 1 17 CONSIDERAÇÕES INICIAIS 1 2 Promover o aumento do peso da carcaça, a diminuição da idade de abate e a adoção de 3 índices de seleção multicaracterísticas tanto para bovinos em terminação quanto para novilhas 4 de reposição, representam práticas gerenciais com significativo impacto na viabilidade da 5 produção de carne bovina (Terry et al., 2021). 6 Durante muito tempo, a seleção genética de bovinos concentrou-se principalmente em 7 características de crescimento, com a expectativa de influenciar positivamente o peso final em 8 sistemas de produção destinados ao mercado de carne. No entanto, essas abordagens de seleção 9 começaram a ter impactos negativos nas características de carcaça e no potencial reprodutivo 10 das fêmeas, com animais de maior porte demonstrando resposta tardia em acabamento de 11 carcaça e eficiência reprodutiva em comparação aos de menor porte (Pereira et al., 2017; 12 Warren et al., 2019; Terry et al., 2021). 13 Frente a isso, a composição da carcaça e o seu impacto no desempenho reprodutivo 14 principalmente em novilha, por representarem a categoria de maior desafio na produção de 15 bezerros, tem ganhado destaque e pesquisas vêm buscando respostas na maneira que a 16 composição corporal pode afetar o desempenho reprodutivo nas fêmeas (Brunes, 2024; Yokoo, 17 2009). 18 Sabe-se da importância do peso e da composição corporal para o início da puberdade. 19 O peso atingido na idade adulta serve como indicador para a entrada de novilhas na fase 20 reprodutiva. Essas novilhas devem alcançar peso próximo ao peso adulto para minimizar os 21 desafios reprodutivos associados ao crescimento nessa fase, evitando assim baixos índices de 22 reprodução (Pimentel et al., 2001), porém, esse fato culmina muitas vezes na exposição tardia 23 das fêmeas principalmente da raça Nelore por apresentarem características de crescimento 24 tardias. 25 A partir disso, a modulação das características de carcaça pode ser crucial no início da 26 fase reprodutiva, parto precoce e idade ao primeiro parto, influenciando diretamente a eficiência 27 reprodutiva das fêmeas bovinas. Assim, a melhoria da condição de carcaça e a seleção genética 28 de atributos ligados à precocidade sexual surgem como estratégias promissoras para reduzir a 29 idade da puberdade e aumentar as taxas de prenhez. 30 Sendo assim, produtores podem adotar práticas de manejo direcionadas, considerando 31 fatores como peso ao nascer, deposição de gordura e condição corporal, a fim de otimizar as 32 taxas de concepção e promover a puberdade precoce nas novilhas, contribuindo para aumentar 33 18 a eficiência reprodutiva e, consequentemente, a produtividade e sustentabilidade do sistema de 1 produção de bovinos de corte (Bis et al., 2024; Brunes et al., 2022). 2 As características de carcaça comumente utilizadas para a avaliação da composição 3 corporal dos animais são área de olho de lombo (AOL) que representa a área de uma secção 4 transversal do músculo Longissimus thoracis entre as 12ª e 13ª costelas, servindo como 5 indicador de musculosidade. A espessura de gordura subcutânea (EGS), por sua vez, 6 corresponde à espessura do depósito de gordura subcutânea entre as 12ª e 13ª costelas, 7 refletindo o grau de acabamento da carcaça, a qual influencia tanto na qualidade da carne, 8 protegendo a carcaça durante o resfriamento, quanto em questões sensoriais e marmoreio 9 (MAR), outro parâmetro importante, indicador da quantidade de gordura entremeada na carne, 10 o que afeta suas características sensoriais e sua aceitação pelo consumidor. Todas essas medidas 11 são obtidas por meio de mensurações realizadas por ultrassom de carcaça, oferecendo uma 12 análise precisa e não invasiva da composição corporal dos animais (Yokoo et al.,2009; 2011). 13 O início da vida reprodutiva de novilhas é um acontecimento de grande importância 14 para a sustentabilidade e a viabilidade econômica do sistema de produção, pois está diretamente 15 associado à produção de carne e à reposição do rebanho (Lima & Schraiber, 2011). Muito tem 16 sido estudado sobre a precocidade sexual e a capacidade das novilhas de se tornarem prenhes, 17 visando identificar características de seleção que impactem não apenas no potencial produtivo, 18 mas também no desempenho reprodutivo, buscando elevar o potencial genético do rebanho por 19 meio da seleção de características de crescimento e de carcaça obtidas por ultrassom. 20 Considerando que essas características são fundamentais para a manutenção e seleção 21 do rebanho, são necessários mais estudos que avaliem o impacto da seleção por características 22 de carcaça na eficiência reprodutiva de novilhas Nelore, com o objetivo de fornecer 23 informações mais precisas sobre os fatores que influenciam o desempenho sexual de fêmeas 24 jovens. 25 26 1. Revisão de Literatura 27 28 1.1. Predição da composição de carcaça de bovinos por Ultrassonografia 29 30 A ultrassonografia de carcaça foi proposta como método de predição da composição 31 corporal de bovinos de corte, a partir de 1950 pelo Dr. James Stouffer da Universidade de 32 Cornell, nos Estados Unidos (Sainz e Araújo, 2002). Esta técnica, reconhecida como uma 33 tecnologia economicamente viável e de execução prática, sobressai-se por sua eficácia na 34 19 estimativa da composição da carcaça, proporcionando alternativa vantajosa comparada às 1 mensurações diretas pós-abate (Fisher,, 1997). 2 O entendimento da composição corporal dos animais e seu impacto nas características 3 produtivas é essencial para orientar de forma precisa a seleção de animais de alto desempenho, 4 ampliar o mérito genético da progênie e elevar a qualidade do produto final na indústria de 5 produção de bovinos (Coutinho, 2014; Bonin, 2012; Cucco, 2010). Isso porque o conhecimento 6 do conjunto de características correlacionadas pode favorecer o grau e a direção da seleção, 7 controlar os efeitos de uma característica sobre a outra e incluir cada vez mais fatores que 8 possam ser modulados por uma mesma característica (Ferriani, 2006; Garnero et al., 2002). 9 As medições obtidas por meio da ultrassonografia no músculo Longissimus thoracis 10 proporcionam a avaliação in vivo do nível de musculosidade e adiposidade em animais (Perkins 11 et al., 1992; Wilson, 1992; Herring et al., 1998). As características empregadas nessa avaliação 12 incluem a área de olho de lombo (AOL), expressa em centímetros quadrados (cm²), a espessura 13 de gordura subcutânea (EGS), expressa em milímetros (mm), e o marmoreio (MAR), expresso 14 em porcentagem (%) ou por escalas visuais, sendo essas características avaliadas na região entre 15 a 12ª e 13ª costelas do músculo Longissimus thoracis (Yokoo et al. 2009; Yokoo et al., 2011). 16 A seleção de reprodutores para aprimoramento das características de carcaça, 17 especificamente em termos de rendimento, pode ser conduzida pela escolha de animais com 18 maior AOL, característica diretamente associada ao grau de musculosidade da carcaça, 19 indicando maior quantidade de carne presente, aspecto que impacta significativamente na 20 redução dos custos fixos do processamento de carcaças no frigorífico e na produção animal 21 como um todo (Yokoo et al., 2013). 22 Quadros et al. (2022), avaliaram as características de carcaça e o rendimento de cortes 23 comerciais em novilhos das raças Crioula Lageana e Nelore, utilizando escores visuais como 24 recomendado por Müller (1987). A raça Crioula Lageana apresentou maior AOL e maior 25 proporção de cortes em relação ao peso de carcaça, demonstrando a capacidade da AOL em ser 26 um indicador relevante do rendimento de cortes cárneos da carcaça, apresentando correlação 27 positiva com a porção comestível, corroborando com estudos anteriores (Luchiari Filho, 2000; 28 Ribeiro, 1993; Felício e Norman, 1978; Briquet Junior, 1967). No entanto, no estudo em 29 questão, é conveniente ressaltar que apesar da maior AOL, essa não refletiu necessariamente 30 em maior rendimento de carcaça, onde a raça Nelore obteve desempenho superior. Essa 31 disparidade pode ser explicada pela seleção natural da raça, na qual a Crioula, devido à 32 participação de raças taurinas na sua composição, obteve maior desenvolvimento de 33 20 componentes que não compõem a carcaça, contribuindo para a redução no rendimento de 1 carcaça. 2 Porém, é válido ressaltar a importância da utilização de métodos confiáveis para a 3 avaliação da composição corporal dos animais, a metodologia de avaliação das características 4 de carcaça por escalas visuais, pode gerar resultados equivocados, pois são mais passíveis de 5 erro e confundimento, principalmente quando os indivíduos avaliados apresentam diferenças 6 discretas; a ultrassonografia de carcaça por sua vez, possibilita reduzir a problemática da 7 subjetividade das avaliações visuais da composição corporal, gerando informação objetiva, 8 tendo ainda como vantagem ser realizada in vivo, sem a necessidade de abater o animal, 9 tornando viável e rápida a seleção de touros e matrizes para características de 10 carcaça. 11 O tecido adiposo, determinado a partir das mensurações da característica EGS, é 12 depositado por último, marcando a maturidade fisiológica do animal. Nesse estágio, o 13 crescimento muscular atinge seu ápice, e qualquer ganho de peso subsequente é composto 14 predominantemente por gordura (Owens et al., 1995). 15 A deposição do tecido adiposo ocorre das extremidades para o centro, uma medida 16 crucial para determinar a completa cobertura da carcaça. Além de indicar maturidade, a gordura 17 subcutânea desempenha um papel relevante no resfriamento da carcaça, agindo como eficiente 18 isolante térmico (Felício, 1997). Carcaças com adequada cobertura de gordura mitigam efeitos 19 adversos como desidratação e encurtamento das fibras musculares (cold shortening) durante o 20 resfriamento, fatores que podem resultar no endurecimento da carne (Felício, 1998). 21 Suguisawa et al. (2006), relataram que as mensurações de EGS obtidas por 22 ultrassonografia em bovinos jovens das raças Nelore, ½ Angus Nelore, ½ Simental Nelore e 23 Canchim, criados no sistema de produção do novilho superprecoce, apresentaram correlações 24 positivas com a porcentagem de tecido adiposo, e correlações negativas com as porcentagens 25 de músculo e tecido ósseo, destacando a importância da EGS como indicador na avaliação da 26 composição corporal desses animais. 27 O equilíbrio entre AOL e EGS assegura uniformidade nos animais, tanto em termos de 28 produtividade quanto de eficiência reprodutiva. A seleção com exclusividade na AOL está 29 associada a maior musculosidade, porém apresenta correlação negativa com a precocidade, 30 indicando que animais altamente musculosos são propensos a serem mais tardios, tanto em 31 termos reprodutivos quanto produtivos. Por outro lado, o excesso de EGS, característica 32 relacionada à quantidade de cortes na carcaça, resulta em menor proporção de carne para maior 33 proporção de gordura, culminando em animais de pesos menores na maturidade, mesmo que 34 21 sejam mais precoces em termos reprodutivos (Suguisawa et al., 2003; Yokoo, 2008; Luchiari 1 Filho, 2000). 2 Diante das possibilidades de uso tanto para a seleção genética, quanto para a 3 determinação do momento ótimo de abate, a tecnologia de ultrassonografia de carcaça emerge 4 como uma solução para mitigar a subjetividade na avaliação da composição corporal, 5 permitindo a compreensão do potencial genético dos animais, resultando em redução de custos 6 para o produtor, impulsionada por uma estratégia de manejo mais eficiente dos animais e a 7 seleção direcionada de acordo com a necessidade de melhoramento do rebanho (Tedeschi; Fox; 8 Guiroy, 2004; Tedeschi, 2006). 9 10 1.2. Marmoreio na carne bovina 11 12 O depósito de gordura em ruminantes ocorre em quatro locais distintos: a gordura 13 visceral, localizada dentro da cavidade abdominal entre os órgãos; a gordura subcutânea, 14 situada sob a pele dos animais e responsável pela maior proporção de gordura na carcaça; a 15 gordura intermuscular, localizada entre os músculos; e a gordura intramuscular, localizada entre 16 as fibras musculares (Don V. et al., 2021) O conteúdo de gordura intramuscular, denominado 17 marmoreio, refere-se à presença de depósitos de gordura visíveis entre as fibras musculares 18 (Hocquete et al., 2010). Esses depósitos podem ser avaliados por meio de ultrassonografia de 19 carcaça entre as 12ª e 13ª costelas do músculo Longissimus thoracis ou visualmente por 20 avaliadores capacitados na interface do músculo esquelético (Harris et al., 2018; Nguyen et al., 21 2017). 22 Estudos indicaram que o grau de marmoreio na carne aumentou posteriormente em 23 relação ao restante do depósito de gordura corporal, sugerindo uma ordem lógica na deposição 24 de diferentes tipos de gordura (Berg & Butterfield, 1976; Shorthose & Harris, 1991; Menezes 25 et al., 2005). Por outro lado, alguns autores argumentam que diversos fatores podem influenciar 26 essa ordem, como alterações na curva de crescimento ou variações nos níveis alimentares em 27 diferentes fases da vida (Menezes et al., 2005; Vaz & Restle, 2003). 28 Portanto, a deposição de gordura, especialmente a de marmoreio, constitui um processo 29 biológico complexo, podendo ser regulado tanto pelo potencial genético (Martins et al., 2015) 30 quanto pelo manejo nutricional (Ramírez-Zamudio et al., 2023), envolvendo uma complexa 31 interação de enzimas, hormônios e metabólitos que desempenham papeis fundamentais na 32 regulação do metabolismo, deposição e diferenciação das células adiposas (Bonnet et al., 33 2010). 34 22 O desenvolvimento da gordura intramuscular está intimamente relacionado ao tipo de 1 fibra muscular e ao padrão metabólico do metabolismo energético expresso pelo tecido 2 muscular (Pethick et al., 2007). Estudos conduzidos com novilhos de diferentes genótipos 3 (Angus, Japanese Black x Angus e Limousin), expressando níveis variados de marmoreio, 4 mostraram que os músculos mais glicolíticos tendem a apresentar menores quantidades de 5 gordura intramuscular (Hocquette et al., 2003). Além disso, há evidências que bovinos 6 altamente musculosos, ou seja, mais glicolíticos, tendem a ter menos gordura na carcaça 7 (Pethick et al., 2005). As diferenças na deposição de marmoreio entre raças podem ser 8 atribuídas às variações no metabolismo energético e na expressão de genes reguladores (Wang 9 et al., 2017; Dinh et al., 2010). Estudos mostram que raças com maior teor de marmoreio 10 apresentam expressão regulada positivamente de genes adipogênicos, como ZFP423, PPARγ e 11 C/EBPα (Duarte et al., 2013; Martins et al., 2015). 12 A adipogênese, o processo pelo qual as células-tronco mesenquimais se diferenciam em 13 adipócitos, é mediada por uma série de fatores reguladores, como a proteína α de ligação ao 14 intensificador de citidina-citidina-adenosina-timidina (C/EBPα) e o receptor γ ativado por 15 proliferador de peroxissoma (PPARγ) (Du et al., 2015; Wei et al., 2019). Estudos indicam que 16 a expressão diferencial de genes, como ZFP423, PPARγ e C/EBPα, pode influenciar na 17 adipogênese e, consequentemente, no conteúdo de gordura intramuscular (Duarte et al., 2013; 18 Martins et al., 2015). 19 A lipogênese, processo de síntese endógena de ácidos graxos, é regulada por diversos 20 fatores e genes (Ladeira et al., 2016). Em ruminantes, o acetato e a glicose são os principais 21 precursores da biossíntese de ácidos graxos, com adipócitos subcutâneos preferindo acetato e 22 adipócitos intramusculares preferindo glicose (May et al., 1995). 23 Pethick et al. (1997 e 2004) sugeriram que dietas capazes de promover a fermentação 24 máxima no rúmen para produzir precursores gliconeogênicos, como o propionato, e de 25 maximizar a digestão do amido no intestino delgado, podem aumentar a deposição de gordura 26 intramuscular. Essas dietas, geralmente associadas a altos níveis de processamento, aumentam 27 a acessibilidade dos grânulos de amido dietético às amilases microbianas e intestinais, 28 maximizando assim a disponibilidade de glicose para o animal em engorda (Rowe et al., 29 1999). 30 A lógica por trás dessa hipótese reside no potencial dessas dietas em promover maiores 31 níveis de hormônios anabólicos, como a insulina, conhecidos por estimular a lipogênese. Além 32 disso, tais dietas fornecem maiores níveis de energia líquida para a lipogênese, o que explica 33 por que a alimentação com maior proporção de grãos promove maior desenvolvimento de 34 23 gordura intramuscular em comparação com a terminação em pasto, onde majoritariamente a 1 dieta é composta por carboidratos fibrosos (Pethick et al., 2004). Há evidências que os 2 adipócitos intramusculares preferem a utilização de carbono glicose/propionato, enquanto o 3 tecido adiposo subcutâneo utiliza principalmente acetato como fonte de unidades acetil para a 4 lipogênese (Smith & Crouse, 1984). 5 O controle dinâmico da partição e armazenamento de nutrientes depende do equilíbrio 6 entre a demanda energética do tecido e a oferta de energia. Em ruminantes, esse equilíbrio é 7 mantido por meio da integração de diversos sinais que comunicam o estado nutricional do 8 organismo à periferia, incluindo insulina, hormônio do crescimento (GH), cortisol, 9 catecolaminas, ácidos graxos não esterificados (NEFA), glicose e adipocinas como a leptina 10 (Chilliard et al., 1998; Chilliard et al., 2005). 11 A insulina e o GH exercem funções cruciais na regulação da partição de nutrientes. 12 Estudos apontam uma relação GH/insulina mais acentuada em novilhos que em novilhas 13 (Gettys et al., 1988), durante a fase inicial do crescimento (Hornick et al., 2000), e em bovinos 14 Holandeses em comparação com raças de origem japonesa (Shingu et al., 2001). Essa relação 15 reflete os efeitos do GH, que promove o crescimento muscular, e os efeitos da insulina, que 16 estimula o armazenamento de nutrientes. 17 Adicionalmente, a leptina desempenha um papel fundamental na regulação do 18 metabolismo energético. A sua secreção pelo tecido adiposo branco (TAB) aumenta conforme 19 a gordura corporal ou a ingestão de energia aumentam, elevando o gasto de energia e a oxidação 20 de ácidos graxos, além de inibir a formação de gordura no TAB e reduzir o apetite. A leptina 21 plasmática é mais baixa em novilhos que em novilhas (Brandt et al., 2007) e em raças magras 22 que em raças gordas (Chilliard et al., 2005), o que pode favorecer o crescimento muscular 23 precoce em bovinos de maturação tardia. Portanto, novilhos magros geralmente apresentam 24 metabolismo oxidativo reduzido, diminuição na leptinemia e na expressão gênica da leptina em 25 comparação com novilhos gordos (Jurie et al., 2007; Underwood et al., 2008; Bonnet et al., 26 2010). 27 No estudo conduzido por Kawakita et al. (2001), não foi encontrado correlação 28 significativa entre os níveis de leptina no plasma e o grau de marmoreio no músculo 29 Longissimus dorsi, assim como relatado por Sanches (2006), indicando uma limitação na 30 utilização da leptina como preditor do marmoreio. No entanto, Geary et al. (2001) identificaram 31 uma correlação positiva entre o marmoreio e a concentração de leptina em diferentes grupos 32 genéticos de bovinos, sugerindo potencial para o uso da leptina como indicador do grau de 33 marmoreio em certos contextos. 34 24 Por outro lado, Cianzio et al. (1985) apontaram que o tamanho e o número de células 1 adiposas são determinantes na produção de leptina, o que pode influenciar o marmoreio da 2 carne bovina. Apesar disso, Gillis et al. (2004) indicaram que a proporção de leptina no tecido 3 adiposo não varia significativamente entre diferentes depósitos de gordura, o que pode 4 complicar a interpretação dos níveis de leptina como indicador específico do marmoreio. 5 Portanto, enquanto alguns estudos sugerem relação entre a leptina e o marmoreio, a 6 diversidade de resultados e os diversos fatores envolvidos destacam a complexidade dessa 7 associação e a necessidade de considerar múltiplos aspectos na interpretação dos níveis de 8 leptina como marcadores do marmoreio da carne bovina. O gene da tireoglobulina (TG), 9 localizado no cromossomo 14 bovino, desempenha um papel crucial na regulação da 10 distribuição de gordura intramuscular. Barendse (1999) destacou o TG como um candidato 11 promissor para essa característica, identificado por sua associação com o microssatélite 12 CSSM66, relacionado ao marmoreio. Estudos genéticos revelaram que polimorfismos nesse 13 gene, como o detectado na sequência 5', estão associados à marmorização da carne, sendo o 14 alelo T, em posição específica, relacionado ao maior teor de gordura intramuscular (Barendse 15 et al., 2004). 16 Barreto et al. (2012), em estudo com a raça Pantaneira, confirmaram essa associação, 17 observando que a frequência do alelo T, associado a maior quantidade de gordura 18 intramuscular, era superior a 57% na população estudada. Por outro lado, raças de origem 19 zebuína tendem apresentar maior frequência do alelo C, relacionado a menor distribuição de 20 gordura intramuscular (Marshall, 1999; Fortes et al., 2007; Ripoli et al., 2011). 21 Os hormônios tireoidianos desempenham um papel crucial no metabolismo da gordura, 22 influenciando a deposição de gordura intramuscular (Obregon, 2014). A tiroxina (T4) e a 23 triiodotironina (T3), produzidas pela glândula tireoide, estão associadas ao aumento do 24 metabolismo basal, promovendo o gasto de energia e a oxidação dos ácidos graxos, em vez de 25 seu armazenamento como gordura (Obregon, 2014; Mears et al., 2001). 26 Estudos indicam que a expressão do gene THRSP, regulada pelos hormônios 27 tireoidianos, é maior em músculos com elevado marmoreio, sugerindo sua influência na 28 deposição de gordura (Kuemmerle et al., 2011; Komolka et al., 2014). Além disso, 29 polimorfismos no gene TG, precursor dos hormônios tireoidianos, afetam diretamente a 30 deposição de gordura intramuscular, evidenciando o papel dos hormônios tireoidianos nesse 31 processo (Anton et al., 2013). 32 Fica evidente a importância dos fatores genéticos, hormonais e ambientais na deposição 33 de gordura intramuscular. A identificação de genes como a Tireoglobulina e a compreensão dos 34 25 mecanismos envolvidos na regulação do metabolismo de gordura pelos hormônios tireoidianos 1 destacam-se como aspectos cruciais para entender e aprimorar o marmoreio da carne. 2 A seleção de animais com características genéticas favoráveis ao marmoreio, aliada a 3 práticas de manejo adequadas, pode resultar em produtos finais de melhor qualidade e valor 4 comercial. Compreender esses aspectos não apenas beneficia os produtores, permitindo a 5 produção de carne mais valorizada no mercado, mas também atende às demandas dos 6 consumidores por produtos mais saborosos e suculentos. Assim, investir em práticas que 7 promovam o marmoreio pode ser crucial para o avanço e a sustentabilidade da indústria 8 pecuária. 9 10 1.3. Correlação entre características de carcaça e eficiência reprodutiva 11 12 A eficiência reprodutiva é um dos principais pilares que influenciam diretamente na 13 produção de bovinos de corte (Mercadante et al., 1996; Donoghue, 2006). A fertilidade 14 determina a quantidade de animais produzidos pelo sistema e desempenha um papel crucial na 15 rentabilidade da atividade (Silva et al., 2003). Dessa forma, otimizar a taxa reprodutiva emerge 16 como uma estratégia para maximizar os resultados econômicos do sistema. 17 Nesse contexto, o melhoramento genético da precocidade sexual das novilhas apresenta-se 18 como uma abordagem eficaz para otimizar o ciclo produtivo dos rebanhos bovinos de corte, 19 pois é intrínseco a eficiência reprodutiva, qualidade da carcaça e produção dos animais 20 (Fernandes et al., 2019). 21 A obtenção de maiores taxas de ganho de peso durante o período prévio à maturidade 22 sexual das novilhas promove desenvolvimento mais rápido e eficiente do aparelho reprodutivo. 23 Esse desenvolvimento precoce contribui para a antecipação da puberdade, resultando em taxas 24 mais elevadas de prenhez e fertilidade. Nesse sentido, o peso corporal e o ganho de peso 25 revelam-se fatores determinantes para a idade à puberdade, enfatizando a importância de 26 práticas de manejo que visem garantir que as novilhas atinjam o peso mínimo necessário para 27 concepção (Rawlings et al., 2003; Maquivar, 2011; Chenoweth, 1994; Nogueira, 2004; Gasser, 28 2006). 29 O processo de puberdade é complexo e envolve a interação de diferentes órgãos do animal, 30 sendo influenciado por fatores genéticos e ambientais. As raças zebuínas, que foram menos 31 selecionadas para precocidade e fertilidade sexual, exibem maior variabilidade genética em 32 comparação com as raças taurinas, o que pode conferir-lhes maior potencial de seleção 33 (Nogueira, 2004). Como resultado, as fêmeas zebuínas tendem a atingir a puberdade com peso 34 26 e idade mais elevados quando comparadas às fêmeas taurinas (Emerick et al., 2009; Sartori et 1 al., 2010). 2 Estudos conduzidos por Mamede (2015), demonstram que os programas de melhoramento 3 genético na raça Nelore estão direcionados de maneira a enfatizar características de relevância 4 produtiva, reprodutiva e de qualidade da carcaça, as quais apresentam associações genéticas 5 favoráveis entre si. Assim, ao priorizar o aprimoramento das características reprodutivas, tanto 6 em machos quanto em fêmeas, espera-se um progresso genético que também influencie 7 positivamente outras características reprodutivas, gerando impactos econômicos positivos nos 8 sistemas de produção. Além disso, é possível que, a longo prazo, os animais com maior 9 precocidade sexual apresentem, não apenas melhores rendimentos de cortes cárneos da carcaça, 10 mas também maior produtividade acumulada e maior permanência das fêmeas no rebanho. 11 No mesmo sentido, Weik et al. (2022) investigaram as características de crescimento, 12 ultrassom e carcaça em bovinos das raças Angus e Hereford, buscando avaliar suas correlações 13 com os principais aspectos do desempenho materno. O estudo revelou aumento na eficiência 14 reprodutiva das novilhas de reposição, especialmente aquelas que pariram no início da segunda 15 temporada de acasalamento, estava positivamente associado às características de gordura nos 16 animais durante a fase de terminação. 17 Essa correlação genética positiva foi identificada tanto na ultrassonografia de animais 18 vivos quanto no abate. Portanto, sugere-se que o avanço genético no teor de gordura dos animais 19 em engorda provavelmente elevará a qualidade média do rebanho de reposição, resultando em 20 maior taxa de sucesso na gestação. O estudo concluiu que compreender as relações das 21 características que influenciam tanto na condição materna quanto a fase de terminação é 22 essencial para maximizar a eficiência de todo o rebanho de corte. 23 O aumento da espessura de gordura na garupa (EGG) em novilhas Nelore relatado por 24 Freitas et al. (2021), apresentou maior influência tanto na puberdade quanto na taxa de prenhez. 25 Um maior número de novilhas com medida de EGG superior a 3,4 mm alcançou a puberdade, 26 enquanto a taxa de prenhez foi maior para aquelas com EGG superior a 2,5 mm. Estes achados 27 sugerem que o tecido adiposo subcutâneo, avaliado por meio do EGG, desempenha papel 28 significativo na função reprodutiva de novilhas Nelore jovens. Portanto, é essencial que as 29 novilhas submetidas à reprodução apresentem desenvolvimento corporal adequado, refletido na 30 espessura da gordura subcutânea. 31 O tecido adiposo desempenha papel crucial na regulação da reprodução, principalmente 32 por meio da ação da leptina. Um aspecto fundamental da atuação da leptina em bovinos de corte 33 27 reside no controle do início e na regulação da puberdade, pois influencia a secreção de GnRH 1 e a ativação do eixo hipotálamo-ovariano (D'occhio et al., 2019). 2 Brunes (2017), ao investigar as relações entre prenhez precoce e características de 3 crescimento e carcaça, chegou a resultados semelhantes com outros estudos, destacando a 4 espessura de gordura como o principal indicador para prenhez precoce. Além disso, observou-5 se que animais com maior desenvolvimento muscular tendem a apresentar fenótipos mais 6 precoces, associados a menor idade de maturidade sexual. Estudos prévios sobre a correlação 7 de musculosidade e precocidade sexual corroboram essa observação, evidenciando relação 8 positiva e significativa entre essas duas características (Souza, 2003; Koury Filho, 2009). 9 No estudo conduzido por Zucoloto (2023) sobre a influência das medidas de 10 ultrassonografia de carcaça na produção in vitro de embriões em doadoras da raça Senepol, 11 constatou-se que algumas medidas, como a AOL 100, EGS 100 e EGSG, não tiveram efeito 12 significativo no potencial de produção de oócitos e embriões durante a produção in vitro de 13 embriões. Entretanto, novilhas com alto escore de marmoreio (EM) mostraram menor número 14 de oócitos inviáveis em comparação com aquelas de baixo EM, além de maior taxa de clivagem 15 e maior taxa de embriões. 16 Esses resultados sugerem que novilhas e vacas com maior depósito de gordura nos 17 adipócitos intramusculares, indicado por maior EM, apresentam melhor produção embrionária. 18 A gordura entremeada com as fibras musculares pode representar reserva de energia de rápida 19 mobilização, o que pode explicar os resultados observados tanto em novilhas quanto em vacas 20 (Zucoloto, 2023). 21 Em suma, a correlação das características de carcaça e eficiência reprodutiva em bovinos 22 de corte desempenha papel crucial na rentabilidade e sustentabilidade da indústria da carne. 23 Estudos demonstraram que o melhoramento genético direcionado para características 24 reprodutivas e de carcaça pode resultar em animais com melhor desempenho tanto na fase de 25 produção como na de reprodução (Zucoloto 2023; Weik et al. 2022; Freitas et al. 2021; Brunes 26 2017). 27 A compreensão dessas inter-relações permite aos produtores selecionarem animais com 28 características desejáveis, como maior precocidade sexual, maior taxa de fertilidade e melhores 29 índices de qualidade de carcaça. Essa seleção criteriosa não apenas aumenta a eficiência 30 reprodutiva do rebanho, mas também melhora a qualidade do produto final. Além disso, os 31 resultados destacam a importância de considerar a influência da gordura intramuscular na 32 produção embrionária, ressaltando a necessidade de avaliar não apenas as características de 33 carcaça, mas também os aspectos reprodutivos dos animais. 34 28 Portanto, a seleção direcionada dos animais, levando em consideração tanto as 1 características de carcaça quanto a eficiência reprodutiva, são essenciais para maximizar a 2 lucratividade e a sustentabilidade da produção de bovinos de corte. Esse enfoque estratégico 3 não apenas beneficia os produtores, mas também contribui para a oferta de produtos de alta 4 qualidade aos consumidores finais, promovendo assim a competitividade e o desenvolvimento 5 contínuo da indústria pecuária. 6 7 2. OBJETIVOS GERAIS 8 9 O presente trabalho teve por objetivo utilizar a técnica de ultrassonografia na seleção de 10 novilhas Nelore por características de carcaça, para avaliar o impacto da seleção na eficiência 11 reprodutiva, parâmetro hormonais, desempenho da progênie e a expressão do gene 12 Tireoglobulina na população das novilhas e da progênie. 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 29 REFERÊNCIAS 1 2 ANTON, István et al. Effect of thyroglobulin gene polymorphism on the intramuscular fat 3 content in cattle examined by x-ray computed tomography and Soxhlet methods. Archives 4 Animal Breeding, v. 56, n. 1, p. 593-596, 2013. 5 BARENDSE, W et al. The TG5 Thyroglobulin gene test for a marbling quantitative trait loci 6 evaluated in feedlot cattle. Australian Journal of Experimental Agriculture, v. 44, p. 669-674, 7 2004. 8 BARENDSE, WJ. Assessing lipid metabolism. Patent, International Publication number: 9 WO99/23248. 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Influência das medidas de carcaça avaliadas por ultrassonografia em 4 doadoras da raça Senepol na produção in vitro de embriões. 2023. 67 f. Dissertação (Mestrado 5 em Ciência e Tecnologia Animal) - Universidade Estadual Paulista (UNESP), Dracena, 2023. 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 40 CAPÍTULO 2 Seleção de novilhas Nelore por características de carcaça e correlação com a eficiência reprodutiva Artigo a seguir está redigido de acordo com as normas de publicação do periódico Journal Animal Science exceto o idioma e a posição das figuras e tabelas. 41 1. INTRODUÇÃO 1 2 Os desafios da pecuária brasileira em melhorar os índices produtivos e incrementar a 3 qualidade dos produtos cárneos, nos levam a buscar estratégias capazes de encontrar o 4 equilíbrio na composição corporal de indivíduos para uma maior deposição muscular, melhor 5 deposição de tecido adiposo, e otimização da funcionalidade reprodutiva, principalmente das 6 fêmeas (Brunes, 2017; Coutinho, 2014). 7 As características reprodutivas estão associadas a rentabilidade do sistema de 8 produção de bovinos de corte, tornando-se, em índices de seleção, mais importante do ponto de 9 vista econômico em relação as características de crescimento (Brumatti et al., 2011). Isso 10 porque a eficiência econômica de um rebanho de vacas de corte está vinculada a produção de 11 bezerros e bezerras destinados a produção de carne ou a reposição do rebanho, sendo a fonte de 12 lucro do sistema (Lima & Schraiber, 2011). 13 As raças zebuínas de corte, principalmente a raça Nelore, que constitui a base do 14 rebanho brasileiro (Rosa; Menezes, 2016), são conhecidas por apresentar maturidade sexual 15 tardia, com idade ao primeiro parto variando de 34 a 45 meses (Azevedo et al., 2006). O peso 16 corporal é um dos principais determinantes para o início da vida reprodutiva das novilhas. A 17 adoção de um peso mínimo de 70% do peso adulto, conforme sugerido por Wiltbank et al. 18 (1985), resulta em desafios econômicos significativos para o sistema, devido à demora na 19 maturação sexual das fêmeas, resultante de suas características de crescimento tardio. 20 Dessa forma, identificar parâmetros de seleção que possam ser favoráveis para 21 características produtivas, reprodutivas e de carcaça como a composição corporal dos animais, 22 podem maximizar efeitos positivos à maturidade sexual, saúde do bezerro, manutenção da 23 condição corporal das fêmeas otimizando a função reprodutiva, melhorando o potencial 24 genético do rebanho e entregando a indústria, animais com carcaça mais padronizadas (Brunes, 25 2017; Coutinho, 2014; Silva et al., 2005). 26 Frente a esse cenário, por sua objetividade e acurácia, a técnica de ultrassonografia 27 tem melhorado as condições na identificação de indivíduos superiores no quesito composição 28 de carcaça nos rebanhos do Brasil (Suguisawa, 2002). Desde a década 30, a tecnologia tem 29 permitido estimar o crescimento muscular com o objetivo de predizer a composição da carcaça 30 (Bailey et al., 1986; Faulkner et al., 1990, Renand & Fisher, 1997; Perry & Fox, 1997), o 31 rendimento de cortes cárneos (Waldner et al., 1992; Hamlin et al., 1995; Hassen et al., 1999), 32 42 assim como a avaliação do escore de condição corporal, relacionado ao estado nutricional dos 1 animais (Bruckmaier et al., 1998). 2 A seleção de características relacionadas a carcaça tem como objetivo atender 3 exigências de mercado, ou seja, demanda por quantidade e qualidade de carne (Mamede, 2015). 4 Como forma de otimizar esse critério de seleção, espera-se que as mensurações feitas a partir 5 do músculo Longissimus thorasis, para a obtenção das medidas de área de olho de lombo 6 (AOL), espessura de gordura subcutânea (EGS) e marmoreio (MAR) possam ser utilizadas 7 como indicadores favoráveis para a obtenção de ganhos genéticos (Bergen et al., 1996) e 8 colaborar com o desempenho reprodutivo das fêmeas (Brunes et al., 2022). 9 A estratégia utilizada em nosso estudo foi a seleção de novilhas Nelore por 10 características de carcaça utilizando a técnica de ultrassonografia, para avaliar o impacto da 11 seleção na eficiência reprodutiva, parâmetro hormonal, desempenho da progênie e a expressão 12 do gene Tireoglobulina na população das novilhas e da progênie. 13 14 2. MATERIAL E MÉTODOS 15 16 A pesquisa foi submetida ao Comitê de Ética em Uso Animal (CEUA) da Faculdade de 17 Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista (UNESP), Campus de 18 Botucatu, conforme protocolo CEUA (Protocolo 0261/2022). 19 20 2.1 Critérios de inclusão dos animais 21 22 Os dados foram coletados em uma propriedade comercial, localizada no município de 23 Nova Andradina, Mato Grosso do Sul/MS situada aproximadamente à latitude 21º51'27" sul e 24 a uma longitude 53º38'0,5" oeste. 25 A propriedade foi escolhida em razão da quantidade de animais disponíveis para a coleta 26 de dados e ao programa de seleção e melhoramento genético do rebanho da raça Nelore que 27 está sendo conduzido em parceria com a empresa DGT - Designer Genes Technologies Brasil, 28 responsável pela realização da ultrassonografia de carcaça nos animais. 29 Para o estudo, foram utilizadas 355 novilhas da raça Nelore, com aproximadamente 24 30 meses de idade, selecionadas a partir de um lote inicial de 628 novilhas. Esses animais foram 31 submetidos às mesmas condições ambientais a pasto, com fornecimento de suplementação de 32 manutenção e água ad libitum. As matrizes foram escolhidas para participar do estudo com base 33 em sua composição de carcaça, utilizando dados de ultrassonografia, todas as mensurações 34 43 foram coletadas a partir do músculo Longissimus thoracis, localizado entre as 12ª e 13ª costelas. 1 Aquelas que não atenderam às expectativas estabelecidas para Área de olho de Lombo (AOL), 2 Espessura de gordura Subcutânea (EGS) a Marmoreio (MAR) foram desclassificadas e 3 removidas da pesquisa. 4 Os animais selecionados foram agrupados em quatro classes, denominadas Classe A, 5 Classe B, Classe C e Classe D. A Classe A, composta por 109 novilhas, foi caracterizada pela 6 mensuração das características de carcaça, incluindo a área de olho de lombo (AOL), espessura 7 de gordura subcutânea (EGS) e marmoreio (MAR). As medidas obtidas foram: AOL variando 8 de 50,71 cm² a 73,32 cm² (média ± desvio padrão: 58,54 ± 5,63), EGS variando de 3,09 mm a 9 7,57 mm (4,25 ± 0,96) e MAR % variando de 2,85 a 4,41 (3,49 ± 0,36). 10 Na Classe B, 37 novilhas foram selecionadas segundo as mensurações de AOL, variando 11 de 51,77 cm² a 70,07 cm² (57,83 ± 5,02), e EGS, variando de 3,31 mm a 5,94 mm (4,04 ± 0,68). 12 Para a Classe C, composta por 134 novilhas, a seleção foi baseada na característica 13 AOL, variando de 50,65 cm² a 68,00 cm² (54,95 ± 3,41). 14 Na Classe D, constituída por 75 novilhas, a seleção foi realizada com base na EGS, 15 variando de 3,05 mm a 7,57 mm (3,74 ± 0,70). 16 17 Figura 1 – Critérios de classificação das novilhas Nelore- Foram utilizadas 355 novilhas da 18 raça Nelore, os animais foram agrupados em quatro classes, denominadas Classe 19 A, Classe B, Classe C e Classe D segundo as características de carcaça mensuradas 20 por ultrassonografia. A Classe A, composta por 109 novilhas, foi caracterizada pela 21 mensuração das características de carcaça, incluindo a área de olho de lombo 22 (AOL), espessura de gordura subcutânea (EGS) e marmoreio (MAR). As medidas 23 obtidas foram: AOL variando de 50,71 cm² a 73,32 cm² (média ± desvio padrão: 24 58,54 ± 5,63), EGS variando de 3,09 mm a 7,57 mm (4,25 ± 0,96) e MAR % 25 variando de 2,85 a 4,41 (3,49 ± 0,36). Na Classe B, 37 novilhas foram selecionadas 26 segundo as mensurações de AOL, variando de 51,77 cm² a 70,07 cm² (57,83 ± 27 5,02), e EGS, variando de 3,31 mm a 5,94 mm (4,04 ± 0,68). Para a Classe C, 28 composta por 134 novilhas, a seleção foi baseada na característica AOL, variando 29 de 50,65 cm² a 68,00 cm² (54,95 ± 3,41). Na Classe D, constituída por 75 novilhas, 30 a seleção foi realizada com base na EGS, variando de 3,05 mm a 7,57 mm (3,74 ± 31 0,70). 32 33 44 1 2.2 Delineamento experimental 2 3 Foi utilizado delineamento experimental fundamentado no estudo observacional de 4 Coorte. Inicialmente, os animais foram selecionados com base nas características de 5 composição de carcaça, determinadas por ultrassonografia de carcaça, estabelecendo uma base 6 para a análise prospectiva, a fim de avaliar as associações entre as características de carcaça e 7 os desfechos de interesse tais como taxa de prenhez, índices reprodutivos e desempenho da 8 progênie. 9 Este delineamento proporcionou uma abordagem científica sólida para explorar as 10 complexas relações entre características de carcaça e desfechos reprodutivos, por permitir o 11 cálculo direto das medidas de incidência nas classes. O estudo foi conduzido em etapas sendo 12 primeira a montagem das classes de indivíduos por meio dos parâmetros propostos e segundo 13 a observação de cada classe ao longo do tempo para a comparação dos desfechos, ou seja, o 14 desempenho reprodutivo das novilhas e sua progênie. 15 16 2.3 Protocolo de Inseminação artificial em tempo fixo nas novilhas Nelore 17 18 Para o manejo de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), foram utilizados os 19 sêmen de touros da raça Nelore: o Concreto (FSAT4404) com 25 meses de idade, peso de 753 20 kg, AOL (Área de Olho de Lombo) de 121,48 cm², AOL/100kg de 16,13 cm², Marmoreio de 21 45 4,05, EGS (Espessura de Gordura Subcutânea) de 6,22 mm e EGS/100kg de 0,83; e o Alicerce 1 (FSAS3498) com 33 meses de idade, peso de 696 kg, AOL de 121,31 cm², AOL/100kg de 17,43 2 cm², Marmoreio de 4,65, EGS de 8,04 mm e EGS/100kg de 1,16 mm; todas as mensurações 3 foram coletadas a partir do músculo Longissimus thoracis, localizado entre as 12ª e 13ª 4 costelas.. 5 Foram inseminadas 355 novilhas Nelore, agrupadas em quatro diferentes classes de 6 acordo com as mensurações das características de carcaça. No total, foram realizados três 7 manejos de IATF, sendo conduzidos por dois inseminadores. O primeiro inseminador foi 8 responsável pela primeira e segunda IATF, enquanto o segundo inseminador realizou a terceira 9 IATF. O sêmen utilizado na primeira e segunda IATF foi proveniente do Touro Concreto, e na 10 terceira IATF, foi utilizado o sêmen do Touro Alicerce. A escolha dos touros baseou-se em suas 11 características de carcaça, visando corrigir e potencializar as características de menor 12 desempenho das fêmeas. 13 Na Classe B, a progênie foi corrigida para Marmoreio (MAR), na Classe C para a 14 característica Espessura de Gordura Subcutânea (EGS), e na Classe D a correção foi realizada 15 para Área de Olho de Lombo (AOL), conforme indicado na Tabela 1. 16 As novilhas receberam, vinte e seis dias antes do início do protocolo de IATF, 1 ml de 17 Progesterona injetável i.m (P4Inj; SINCROGEST®, Ouro Fino Saúde Animal, Brasil) para a 18 indução de cio, juntamente com 5 ml de BOVIGEN® repro total SE s.c (Virbac, São Paulo, 19 Brasil), que atua contra as principais doenças que causam perdas reprodutivas (VIRBAC, 20 2017). No dia do protocolo da primeira IATF (Dia 0), foram administradas a segunda dose de 21 5 ml de BOVIGEN® repro total SE s.c (Virbac, São Paulo, Brasil), 10 ml de FOSFOSAL® s.c 22 (Virbac, São Paulo, Brasil), inseridos os dispositivos intravaginais PRIMER® (Agener, União 23 Química, Brasil) e 2 ml de Benzoato de Estradiol i.m. (RIC-BE®, Tecnopec, São Paulo, Brasil). 24 No Dia 7, foi retirado o implante, administrado 1 ml de Cipionato de Estradiol i.m 25 (CIPIOTEC®, Agener, União Química, Brasil), 2 ml de Prostaglandina i.m (ESTRON®, 26 Agener, União Química, Brasil) e 1 ml de Gonadotrofina coriônica equina i.m (NOVORMON®, 27 Zoetis, São Paulo, Brasil). No Dia 9, 48 horas após a remoção do dispositivo intravaginal de 28 progesterona, foi realizada a IATF. O diagnóstico gestacional ocorreu no Dia 29, e as fêmeas 29 vazias foram ressincronizadas utilizando o mesmo protocolo anteriormente descrito, sendo 30 submetidas à segunda IATF. 31 Para o terceiro manejo de IATF, o mesmo protocolo descrito anteriormente foi utilizado. 32 Posteriormente, as novilhas foram expostas a touros com avaliação andrológica positiva, os 33 quais permaneceram até o fim da estação de monta (Figura 1). 34 46 1 Figura 2 – Diagrama do protocolo de IATF- D 0: Inserção dos dispositivos intravaginais e 2 2 ml de Benzoato de Estradiol; D 7: Retirada do implante, administração de 1 ml de 3 Cipionato de Estradiol, 2 ml de Prostaglandina e 1 ml de Gonadotrofina coriônica 4 equina; D 9: 48 horas após a remoção dos dispositivos intravaginal de progesterona, 5 foi realizada a 1ª IATF. O DG 1 ocorreu no D 29, e as fêmeas vazias foram 6 ressincronizadas utilizando o mesmo protocolo descrito, sendo submetidas à 2ª 7 IATF, para o terceiro manejo de IATF o mesmo protocolo foi utilizado e touros de 8 repasse com avaliação andrológica positiva foram introduzidos a partir da terceira 9 inseminação até o fim da estação de monta 10 11 12 2.4 Determinação das características das carcaças (variáveis independentes) 13 14 As novilhas foram avaliadas por classes de acordo com a seleção por características de 15 carcaça e peso, estabelecidos pela tecnologia de ultrassonografia. As novilhas foram 16 imobilizadas em tronco de contenção e realizada a medida da Área de Olho de Lombo (AOL), 17 Espessura de Gordura Subcutânea (EGS) e Marmoreio (MAR), todas as mensurações a partir 18 do músculo Longissimus thoracis, localizado entre as 12ª e 13ª costelas. As avaliações foram 19 realizadas segundo as normas internacionais da UGC (Ultrasound Guidelines Councill, 2014), 20 utilizando-se ultrassom veterinário “ALOKA 500V”, com sonda de 17,2cm /3,50 MHz e óleo 21 vegetal como acoplante acústico. As imagens foram colhidas por meio do software “BIA PRO 22 PLUS e analisadas no Laboratório de Imagens da Designer Genes Technologies Brasil, por 23 técnicos certificados pela UGC. 24 47 As 355 novilhas utilizadas neste experimento possuem entre 20 e 24 meses de idade e 1 concomitante as medidas por ultrassom, todas as matrizes foram pesadas para as avaliações de 2 eficiência reprodutiva conforme parâmetros a serem estudados. Por se tratar de um estudo 3 observacional, o número de novilhas em cada grupo não foi uniforme. Desta forma, com base 4 nas características estudadas (peso vivo e características ultrassônicas da carcaça), as novilhas 5 foram distribuídas nas seguintes classes: 6 Classe A: 109 novilhas selecionadas por equilíbrio para as características mensuradas de AOL, 7 EGS e MAR. As medidas das características dentro das classes foram consideradas 8 em uma faixa de variação de: AOL variando de 50,71 cm² a 73,32 cm² (média ± 9 desvio padrão: 58,54 ± 5,63), EGS variando de 3,09 mm a 7,57 mm (4,25 ± 0,96) e 10 MAR % variando de 2,85 a 4,41 (3,49 ± 0,36). 11 Classe B: 37 novilhas selecionadas para AOL e EGS, sendo consideradas em uma faixa de 12 variação de: AOL variando de 51,77 cm² a 70,07 cm² (57,83 ± 5,02), e EGS, variando 13 de 3,31 mm a 5,94 mm (4,04 ± 0,68). 14 Classe C: 134 novilhas selecionadas para AOL, sendo considerada uma faixa de variação: 15 AOL variando de 50,65 cm² a 68,00 cm² (54,95 ± 3,41). 16 Classe D: 75 novilhas selecionadas para EGS, sendo considerada em uma faixa de variação: 17 EGS variando de 3,05 mm a 7,57 mm (3,74 ± 0,70). 18 O escore de condição corporal (ECC) também foi utilizado como variável independente, 19 a fim de avaliar sua influência sobre a eficiência reprodutiva. Os animais foram classificados 20 de acordo com a quantidade de reservas teciduais, sobretudo gordura e músculos, em 21 determinadas regiões do corpo: costelas, processos espinhosos da coluna vertebral, processos 22 transversos da coluna vertebral, vazio, ponta do íleo, base da cauda, sacro e vértebras lombares. 23 A avaliação se deu por um Sistema de Escore em uma escala de 1 a 5, a seguir estão 24 apresentadas as medias e desvio padrão de cada classe em relação ao ECC: 25 Classe A: média ± desvio padrão 3,59 ± 0,16; Classe B: 3,53 ± 0,17; Classe C: 3,52 ± 0,17 e 26 Classe D: 3,55 ± 0,17. 27 28 2.5 Determinação dos desfechos (variáveis dependentes) 29 30 Após a seleção das novilhas e distribuição nas classes foi analisado e construído um 31 banco de dados do rebanho com as mensurações de parâmetros de eficiência reprodutiva e 32 48 correlacionados com as características de carcaça obtidas por meio da ultrassonografia de 1 carcaça. 2 3 2.6 Parâmetros avaliados: Eficiência reprodutiva de novilhas bovinas de corte: 4 5 Taxa de prenhez (TP%) - Expresso em porcentagem (%): Número de novilhas prenhes 6 ao 1º diagnóstico de gestação e 60 dias após o término da estação de monta multiplicado por 7 100 e dividido pelo número de novilhas que entraram na estação de monta e foram submetidas 8 ao diagnóstico de gestação. 9 Taxa de concepção (TC%) - Expresso em porcentagem (%): Número de novilhas 10 prenhez no 2ª, 3ª e 4º diagnóstico de gestação multiplicado por 100 e dividido pelo número de 11 novilhas vazias do diagnóstico de gestação anterior. 12 Taxa de prenhez acumulada (TPac%) - Expresso em porcentagem (%): Somatório entre 13 duas ou mais taxas de concepção e prenhez. 14 Peso do bezerro (PB) - Expresso em quilo gramas (Kg): Para a análise do resultado, 15 foram utilizados os pesos de 252 bezerros. Esses foram pesados ao nascer para avaliar o 16 desempenho de cada classe no período de gestação. 17 Ganho de peso do bezerro (GPB) - Expresso em quilo gramas (Kg): 46 bezerros foram 18 pesados novamente após uma média de 158 dias após o nascimento, para a avaliação do ganho 19 de peso dos bezerros segundo a classificações das mães por característica de carcaça. 20 21 2.7 Cronograma de amostragem longitudinal dos animais 22 23 Inicialmente, todas as novilhas incluídas no estudo, com idade de até 24 meses, passaram 24 por ultrassonografia (momento 1 = M1) para avaliação do potencial genético com base em 25 características de carcaça. Posteriormente, utilizando os dados da medição por ultrassom, as 26 novilhas foram apartadas e classificadas em quatro classes (momento 2 = M2) de acordo com 27 características de carcaça e limites estabelecidos para o programa de seleção (conforme 28 indicado na Tabela 1). 29 Após nove dias da classificação e constituição das classes de avaliação, implementou-se o 30 protocolo de manejo reprodutivo. Todas as novilhas entraram em estação de monta, sendo 31 submetidas a um protocolo de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), conforme 32 descrito na Figura 1. Durante esse processo, as novilhas foram inseminadas com o sêmen do 33 49 touro Concreto, escolhido com base em medidas de carcaça, incluindo Área de Olho de Lombo 1 (AOL), Espessura de Gordura Subcutânea (EGS) e Marmoreio (MAR) (momento 3 = M3). 2 Trinta dias após a inseminação, as novilhas foram submetidas ao primeiro diagnóstico de 3 gestação (DG1) (momento 4 = M4). As fêmeas não prenhes, identificadas nove dias depois, 4 passaram por um segundo protocolo de IATF (momento 5 = M5), sendo inseminadas 5 novamente com o sêmen do touro Concreto. Trinta dias após essa segunda inseminação, 6 realizou-se o segundo diagnóstico de gestação (DG2) (momento 6 = M6). As novilhas que não 7 apresentaram gestação foram submetidas a uma terceira IATF (momento 7 = M7), utilizando o 8 sêmen do Touro Alicerce. Após nove dias, touros de repasse foram introduzidos (momento 8 = 9 M8). 10 Trinta dias após a introdução dos touros de repasse, as novilhas foram submetidas ao 11 terceiro diagnóstico de gestação (DG3) (momento 9 = M9). Aquelas diagnosticadas como 12 vazias retornaram junto aos touros para repasse (momento 10 = M10). 13 Ao final do período de estação de monta, foi realizada uma última ultrassonografia para o 14 diagnóstico de gestação (DG4), coleta de sangue para mensuração dos níveis de Leptina e 15 amostras de pelos da vassoura da cauda para avaliar a expressão do gene Tireoglobulina (TB) 16 das novilhas (momento 11 = M11). 17 Após aproximadamente 288 dias de gestação, ocorreu o nascimento dos primeiros 18 bezerros, que foram pesados e tiveram amostras de pelos da vassoura da cauda coletadas para 19 análise da expressão do gene Tireoglobulina (TB) (momento 12 = M12). A cronologia de 20 acontecimentos está detalhada na figura 2. 21 22 Figura 3- Cronologia de acontecimentos - Inicialmente, todas as novilhas incluídas no estudo 23 passaram por ultrassonografia (momento 1 = M1); as novilhas foram apartadas e 24 classificadas em quatro classes (M2); todas as novilhas entraram em estação de 25 monta, sendo submetidas a um protocolo de IATF, com o sêmen do touro Concreto 26 (M3); primeiro diagnóstico de gestação (DG1) (M4); as fêmeas não prenhes, 27 passaram por um segundo protocolo de IATF com o sêmen do touro Concreto (M5); 28 segundo diagnóstico de gestação (DG2) (M6); as novilhas não prenhes foram 29 submetidas a terceira IATF com o sêmen do Touro Alicerce (M7); touros de repasse 30 foram introduzidos (M8); as novilhas foram submetidas ao terceiro diagnóstico de 31 gestação (DG3) (M9); aquelas diagnosticadas como vazias retornaram junto aos 32 touros para repasse (M10); ao final do período de estação de monta, foi realizada 33 uma última ultrassonografia para o diagnóstico de gestação (DG4), coleta de sangue 34 para mensuração dos níveis de Leptina e amostras de pelos da vassoura da cauda para 35 avaliar a expressão do gene TB (M11) e ao nascimento dos primeiros bezerros, foram 36 pesados e tiveram amostras de pelos da vassoura da cauda coletadas para análise da 37 expressão do gene TB (M12). 38 50 1 2.8 Avaliação do perfil de Leptina plasmática 2 3 Ao término da estação de monta, foram coletadas amostras sanguíneas das novilhas com o 4 propósito de avaliar e mensurar o hormônio Leptina, para relacionar entre as diferentes classes. 5 As amostras foram obtidas diretamente da veia coccígea, localizada na região da cauda, 6 utilizando tubos a vácuo de 10 mL heparinizados (Vacutainer®). Posteriormente, essas 7 amostras foram submetidas a centrifugação a uma velocidade de 3500 rpm, durante 10 minutos. 8 Após o processo de centrifugação, o plasma resultante foi aliquotado em tubos Eppendorf (1,5 9 mL), sendo destinados dois tubos por animal. Essas amostras foram armazenadas a uma 10 temperatura de 0°C até o transporte ao freezer, onde foram conservadas a -20°C, aguardando a 11 realização dos ensaios em laboratório. 12 A determinação da leptina plasmática foi realizada pelo método ELISA, utilizando kit 13 especí