UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA 

“JÚLIO DE MESQUITA FILHO” 

FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS 

Curso de Graduação Farmácia-Bioquímica 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Kethllen Lisboa Espirito Santo Souza 

 

 

 

 

 

 

 

 

AVALIAÇÃO DE APOPTOSE DE NOVO INIBIDOR DE HISTONA 

DEACETILASE (HDACi 1-2), EM COMPARAÇÃO COM O COMERCIAL 

VORINOSTAT, EM CÉLULAS DE CÂNCER CERVICAL ASSOCIADA COM 

O PAPILOMAVÍRUS HUMANO (HPV) 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Araraquara, SP 

2023 



 

 

 

 

Kethllen Lisboa Espirito Santo Souza 

 

 

 

 

 

 

 

 

AVALIAÇÃO DE APOPTOSE DE NOVO INIBIDOR DE HISTONA 

DEACETILASE (HDACi 1-2), EM COMPARAÇÃO COM O COMERCIAL 

VORINOSTAT, EM CÉLULAS DE CÂNCER CERVICAL ASSOCIADA COM 

O PAPILOMAVÍRUS HUMANO (HPV) 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao 

Curso de Graduação em Farmácia Bioquímica da 

Faculdade de Ciências Farmacêuticas de 

Araraquara, da Universidade Estadual Paulista 

“Júlio de Mesquita Filho”, para obtenção do grau de 

Farmacêutica Bioquímica. 

Orientador: Prof. Dr. Cauê Benito Scarim 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Araraquara, SP 

2023 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 

 
 

 

 

 
 

 

 
 

 

 
 

 

 

 
 

 

 

 
 

 

 
 
 

 

 

     

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
Diretoria do Serviço Técnico de Biblioteca e Documentação – Faculdade de Ciências Farmacêuticas 

UNESP Campus de Araraquara 
 

                   Souza, Kethllen Lisboa Espirito Santo. 
S729a            Avaliação de apoptose de novo inibidor de histona deacetilase 

(HDACi 1-2), em comparação com o comercial Vorinostat, em 
células de câncer cervical associada com o papilomavírus humano 
(HPV) / Kethllen Lisboa Espirito Santo Souza. – Araraquara: [s.n.], 
2023. 

                           37 f. : il. 
 

 Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação – Farmácia 
Bioquímica) – Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita 
Filho”. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. 

 
                           Orientador: Cauê Benito Scarim. 
                           

       1. HPV. 2. Câncer cervical. 3. Tratamento. 4. Epigenético. 5. 
Vírus. I. Scarim, Cauê Benito, orient. II. Título. 

Esta ficha não pode ser modificada 



 

 

 

 

AGRADECIMENTO 

 

A Deus, que me deu essa oportunidade e me ajudou durante toda minha trajetória.  

A minha mãe que sempre acreditou em mim e me forneceu tudo que eu precisava 

para não desistir e entregar o melhor para mim, me deu todo o apoio necessário para que 

fosse possível essa conquista.  

Ao Vinicius, que me ouviu e me incentivou durante todos os anos, me dando toda a 

paciência e amor que eu precisava.  

Ao meu grupo de aliados, que estiveram comigo em toda graduação, me ajudando e 

crescendo juntos.   

À Leticia Galdino e Juliana Brandi, por terem me ensinado e me ajudado em diversos 

momentos ao longo do processo teórico e prático no laboratório. 

À Faculdade de Ciências Farmacêuticas e aos meus professores que me ensinaram 

tudo que eu sei para me tornar uma profissional; 

E a minha orientadora de iniciação científica, Profa. Dra. Christiane Pienna Soares, 

que me deu a oportunidade de me aprofundar sobre esse tema e acreditou no meu potencial 

para tal. 

Ao meu orientador de TCC Prof. Dr. Cauê Benito Scarim, que me acolheu e me ajudou 

nas etapas finais do meu percurso na graduação.  

O presente trabalho foi realizado com o apoio do processo nº 2020/11304-4, Fundação 

de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP).  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  



 

 

 

 

RESUMO 

 

Nas últimas décadas, tem havido um crescente interesse no papel das modificações 

epigenéticas no processo de desenvolvimento do câncer. Entre essas modificações, a 

acetilação das histonas emerge como um processo regulado pelas enzimas histona 

deacetilases (HDAC) e histona acetiltransferases (HAT), desempenhando um papel crucial 

na regulação epigenética, permitindo o controle da expressão dos genes. Os papilomavírus 

humano (HPVs) são pequenos vírus de DNA de fita dupla sem envelope. Eles são os 

principais carcinógenos humanos, estando, intrinsecamente, ligados ao desenvolvimento 

de câncer em 4,5% dos pacientes diagnosticados em todo o mundo. Ensaios in vitro e in 

vivo demonstraram que HDACi pode ser uma terapia promissora para o câncer cervical 

relacionado ao HPV. No presente trabalho foi proposto o estudo de uma nova molécula 

sintetizada com potencial inibitório de HDAC, visando avaliar sua eficácia terapêutica frente 

ao câncer cervical associado com HPV. Com o objetivo verificar a atividade de molécula 

recém sintetizada de HDACi de histona deacetilase 1/2 comparada a um medicamento 

comercial Vorinostat® que também inibe essa mesma classe de HDAC, avaliando 

comparativamente seu efeito em monoterapia e em combinação, a fim de avaliar a eficácia 

do tratamento em monoterapia da nova molécula e verificar a possibilidade de sinergismo, 

aditivo ou antagonismo da terapia combinada em células de câncer cervical associado ao 

HPV 16 (SiHa e Caski) e em controles celulares de câncer cervical negativa para HPV (C33-

A) e queratinócito normal de pele espontaneamente imortalizado (HaCaT). Com esse 

objetivo foi realizado ensaios de citotoxicidade por MTT para determinação de concentração 

dose-resposta e tempo-resposta de ambos os compostos (nova molécula e composto 

comercial), bem como a determinação do IC50 e o potencial efeito sinérgico, aditivo ou 

antagônico da terapia combinada, através de ensaios de MTT e análise de resultados 

utilizando Graph Pad Prism 5.1 e SinergyFinder. A molécula recém sintetizada HDACi 

apresentou melhor ação nas células infectadas com HPV16 SiHa e CasKi apresentando 

resultados promissores com curva dose resposta em tempo de tratamento de 72h. No 

tratamento combinado, os compostos apresentaram ação antagônica nas células de 

queratinócitos (HaCat) e nas células com a presença de HPV (SiHa). 

Palavra-chave: HPV; câncer cervical; tratamento; epigenético; vírus. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  



 

 

 

 

ABSTRACT 

 

The role of epigenetic modifications in the process of carcinogenesis has received much 

attention in recent years. Among them, histone acetylation is a process regulated by histone 

deacetylases (HDAC) and histone acetyltransferases (HAT), and plays an important role in 

epigenetic regulation, allowing the control of gene expression. In the present study, the study 

of a new synthesized molecule with HDAC inhibitory potential was proposed to verify its 

therapeutic capacity against cervical cancer associated with HPV. Human papillomaviruses 

(HPVs) are small, non-enveloped, double-stranded DNA viruses. They are the main human 

carcinogens, being intrinsically linked to the development of cancer in 4.5% of patients 

diagnosed with cancer worldwide. In vitro and in vivo trials demonstrated that HDACi may 

be a promising therapy for HPV-related cervical cancer. Therefore, the present study aimed 

to verify the activity of a newly synthesized histone deacetylase 1/2 HDACi molecule 

compared to the commercial drug Vorinostat, which also inhibits this same class of HDAC, 

comparatively evaluating its effect in monotherapy and in combination, the in order to 

evaluate the effectiveness of the monotherapy treatment of the new molecule and verify the 

possibility of synergism or antagonism of the combined therapy in cervical cancer cells 

associated with HPV 16 (SiHa and Caski) and in cellular controls of HPV-negative cervical 

cancer (C33- A) and spontaneously immortalized normal skin keratinocyte (HaCaT). With 

this objective, MTT cytotoxicity assays were carried out to determine the dose-response 

concentration and time-response of both compounds (new molecule and commercial 

compound), as well as the determination of the IC50 and the potential synergistic or 

antagonistic effect of the C33-A, combined therapy. Through MTT tests and analysis of 

results using Graph Pad Prism 5.1 and SinergyFinder. The newly synthesized HDACi 

molecule showed better action in cells infected with HPV16 SiHa and CasKi, presenting 

promising results with dose response curve with a treatment time of 72h. In the combined 

treatment, the compounds showed antagonistic action on keratinocyte cells (HaCat) and 

those with the presence of HPV (SiHa). 

Keyword: HPV; cervical cancer; treatment; epigenetic; virus. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  



 

 

 

 

LISTA DE FIGURAS 

Figura 1. Representação da infecção e do ciclo de vida do HPV de alto risco e progressão 

tumoral ............................................................................................................................... 12 

Figura 2. Representação esquemática do genoma do HPV, assim como as funções de cada 

gene................................................................................................................................... 13 

Figura 3. Classificação das histonas ................................................................................. 14 

Figura 4. Acetilação e deacetilação de histonas ............................................................... 15 

Figura 5. A) Estrutura química da molécula nova sintetizada, a HDACi 1-2; B) Estrutura 

química do composto comercial, o Vorinostat® ………………..……………………….…… 17 

Figura 6. Desenho experimental do tratamento em ensaio de MTT ................................. 19 

Figura 7. Desenho experimental do plaqueamento do ensaio de checkerboard .............. 20 

Figura 8. Representação gráfica e excel do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 (A) 

e SAHA (B) em SiHa em 24 horas (três experimentos independentes). ………….……… 21 

Figura 9. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA em 

SiHa em 72 horas (três experimentos independentes) ……………………………….…...... 22 

Figura 10. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA 

em CaSki em 24 horas ………………………………………….……………………………… 24 

Figura 11. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA 

em CaSki em 72 horas ………………………………………….……………………………… 25 

Figura 12. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA 

em C33-A em 24 horas ………………………………………….……………………………....26 

Figura 13. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA 

em C33-A em 72 horas ………………………………………….……………………………... 27 

Figura 14. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA 

em HaCaT em 24 horas ………………………………………….……………………………  27 

Figura 15.  Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA 

em HaCaT em 72 horas ………………………………………….……………………………  29 

Figura 16. Análise gráfica fornecida pelo SinergFinder da viabilidade da linhagem celular 

HaCat (A) e SiHa (B) frente ao tratamento com os compostos HDACi e SAHA. ……….. 31 

 

 

 



 

 

 

 

LISTA DE TABELAS 

 

 

Tabela 1. IC50 do tratamento em monoterapia de HDACi 1,2 e SAHA em tempos de 24h e 

72h ……..…………………….……………………………………...……………………….…... 30 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

 

 

 

LISTA DE ABREVIAÇÕES E SIGLAS 

 

B - Branco 

CI50 – Concentração inibitória mínima de 50% 

CN - Controle negativo 

CP - Controle positivo 

CV - Controle de veículo 

DMSO - Dimetilsulfóxido 

DMEM - Meio de cultura Dulbecco Modified Eagle Medium 

HBSS -  Solução salina de Hank  

DNA – Ácido desoxirribonucleico 

HATs - Histona acetiltransferase  

HDACi – Inibidor histona deacetilase 

HDACs - Histona deacetilase 

HPV – Human papilomavirus 

IS – Índice de seletividade  

MTT - Brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólico 

INCA - Instituto Nacional do Câncer 

SAHA - Suberoylanilide hydroxamic acid 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  



 

 

 

 

SUMÁRIO  

 

1. INTRODUÇÃO ................................................................................................................. 11 

1.1.  Epidemiologia ........................................................................................................... 11 

1.2. Câncer cervical e HPV .............................................................................................. 11 

1.3. Terapia epigenetica ................................................................................................... 14 

2. OBJETIVO ....................................................................................................................... 16 

2.1. Objetivo geral ............................................................................................................ 16 

2.3. Objetivos específicos ................................................................................................. 17 

3. MATERIAL E MÉTODO ................................................................................................... 17 

3.1.Estrutura química de composto HDACi 1-2 e VORINOSTAT (SAHA) ........................ 17 

3.2. Cultura de células ...................................................................................................... 17 

3.3 Preparo das soluções tratamento ............................................................................... 18 

3.3.1. Solução de HDACi 1,2 e SAHA ........................................................................... 18 

3.4. Citotoxicidade - Ensaio de MTT ................................................................................. 18 

3.5. Ensaio de Checkerboard ........................................................................................... 19 

3.6 Análise Estatística ...................................................................................................... 20 

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO ....................................................................................... 21 

5. CONCLUSÃO .................................................................................................................. 31 

7. REFERÊNCIAS ............................................................................................................... 33 

 



11 
 

 

1. INTRODUÇÃO 

1.1.  Epidemiologia  

O câncer cervical, conhecido como câncer de colo do útero, excluindo o câncer de 

pele não melanoma, é uma enfermidade amplamente disseminada entre as mulheres, 

ligada a um considerável impacto na saúde e taxa de mortalidade em escala global 

(LUCKETT; FELDMAN, 2015). No ano de 2018, cerca de 570 mil mulheres foram 

diagnosticadas com câncer cervical, resultando em 311 mil mulheres óbitos relacionados 

com a doença, sendo a principal causa de morte relacionada ao câncer em mulheres na 

regiões leste, oeste, meio e sul da África (ARBYN et al., 2020). É evidente que o câncer 

cervical é prevalente nas mulheres de nações em desenvolvimento e subdesenvolvidas, 

onde cerca de 88% dos casos são registrados (BYCHKOVSKY et al., 2016).  

O câncer cervical é o terceiro tumor maligno mais frequente na população feminina e 

a terceira causa de morte de mulheres por câncer no mundo, atrás apenas do câncer de 

mama e de pulmão (GLOBAL OBSERVATORY OF CANCER, 2020). No ano de 2020, 

foram notificados aproximadamente 604.000 novos diagnósticos de câncer cervical e 

324.000 óbitos em escala global, sendo que quase 90% desses casos ocorreram em países 

de baixa e média renda (World Health Organization. 2022).  

No Brasil, o câncer cervical ocupa a quarta posição nas causas de morte por câncer 

(GLOBAL OBSERVATORY OF CANCER, 2020). No último ano (2022), estimou-se a 

ocorrência de cerca de 17.010 novos casos da doença, resultando em 6.627 óbitos 

relacionados a ela (INCA, 2022). No Brasil, a estratégia de rastreamento para prevenção 

do câncer do colo do útero é direcionada para mulheres entre 25 e 64 anos, através de 

exames periódicos de Papanicolau que é pouco realizado em função da escassez de 

recursos e de profissionais de saúde treinados, o que limita a detecção precoce da citologia 

(HULL et.al, 2020). Martel et al. (2020), descreveu que cerca de 2,2 milhões de casos de 

câncer atribuíveis à infecção foram diagnosticados em todo o mundo em 2018. De acordo 

com o Instituto Nacional do Câncer (INCA), no Brasil, em 2018, foram estimados 16.370 

novos diagnósticos de câncer em mulheres relacionados ao papilomavírus humano (HPV), 

representando 8,1% dos novos diagnósticos de câncer em mulheres associados ao HPV 

(INCA, 2022). Esses números indicam uma tendência de persistência e aumento de casos 

ao longo dos anos. 

 

1.2. Câncer cervical e HPV 

O câncer cervical, também conhecido como do colo do útero, é uma neoplasia maligna 

devastadora que afeta o colo do útero, apresentando-se frequentemente na forma de 

carcinomas de células escamosas (ZHANG et al., 2020). Existem vários fatores de risco 

associados ao seu desenvolvimento, como exposição à tabagismo, álcool, uso de 

contraceptivos orais prolongados, infecções bacterianas, parasitárias e vírais como o 



12 
 

 

Papilomavírus Humano (HPV) (KHAN et al., 2019). Sendo a infecção pelo HPV um dos 

principais fatores causais, contribuindo para aproximadamente 99,7% de todos os casos 

(OKUNADE, 2020). O sistema de vacinação contra o HPV em faixa etária precoce (9 a 14 

anos em meninas e 11 a 14 anos em meninos), contribui significativamente para a 

eliminação da transmissão viral (TEKALEGN, 2022). No mercado, há disponivel as vacinas 

bivalentes (Glaxo Smith-Klein©) e quadrivalentes (Merck©), dirigidas a imunização contra 

o HPV 16 e 18 (bivalente) e HPV 6, 11, 16 e 18  com proteção cruzada contra três tipos 

virais (HPV31/33/45) antes da exposição da infecção pelo HPV (quadrivalente) os quais 

protegem com alta eficiência a infecção para os tipos virais alvos, sendo uma terapia 

profilatica. Recentemente foi aprovada pela ANVISA, uma nova vacina nonavalente 

(Gardasil 9, Merck ©), a qual protege contra nove tipos de HPV (6, 11, 16, 18, 31, 33, 45, 

52 e 58) (TSANG, 2020). Entretanto, está vacina é apenas disponibilizada em rede 

particular. 

O HPV é um vírus DNA dupla fita, não envelopado, com capsídeo proteíco 

icosaédrico, pertence à família Papillomaviridae, e com tropismo pelo epitélio escamoso 

(pele e mucosa). A transmissão do vírus do HPV ocorre através do contato com a pele ou 

mucosa infectada, principalmente devido ao contato sexual desprotegido, podendo ser 

através do contato oral-genital, genital-genital e manual-genital (MINISTÉRIO DA SAÚDE, 

2014). A infecção é intalada pelo acesso do virus as células basais por meio de 

microabrasão, onde o vírus entra na camada basal e estabelece uma infecção de longo 

prazo nessas células em divisão (MCBRIDE; WARBURTON, 2017). A infecção é iniciada 

na zona de transformação do epitélio cervical, localizada entre o epitélio pavimentoso e o 

epitélio colunar exposto por esta microlesão (HERFS et al., 2012). Com estudos indicativos 

de que a junção ectoendocervical escamocolunar das células do colo do útero poderia ser 

o principal alvo para a carcinogênese cervical (Gurvich et al., 2004) conforme figura 1. 

 

 



13 
 

 

Figura 1. Representação da infecção e do ciclo de vida do HPV de alto risco e progressão tumoral. O vírus infecta a 

camada basal do epitélio através de microlesões, novas partículas virais são montadas e liberadas pelas camadas 

superficiais. Fonte: Souza 2023.  

 

Embora existam mais de 100 tipos de HPV, são divididos em dois grupos, baixo e alto 

risco. Os grupos de baixo risco (HPV 6 e 11) dão origem a lesões benignas, como 

condilomas, enquanto grupos de alto risco (HPV 16, 18, 45, 33, 31, 52, 58, 35) são 

considerados oncogênicos e causam infecção persistente (MESRI; FEITELSON; 

MUNGER, 2014). Os HPVs foram classificados em categorias cancerígenas, como 

cancerígenos (Grupo 1), provavelmente cancerígenos (Grupo 2a), possivelmente 

cancerígenos (Grupo 2b), não classificáveis (Grupo 3) ou provavelmente não cancerígenos 

(Grupo 4) (SCHIFFMAN; CLIFFORD; BUONAGURO, 2009) Sendo os tipos HPV 16 e 18 

responsáveis por cerca de 70% de todos os casos de câncer do colo do útero. Além do 

câncer de colo de útero, o vírus também pode provocar câncer de vulva, vagina, pênis, 

ânus e orofaringe (MCLAUGHLIN-DRUBI; MÜNGER, 2009) 

O vírus possui 50 nm de diâmetro, com genoma de aproximadamente 8,000 pares de 

base, composto das regiões precoce (E) e tardia (L). A região 'inicial' contém seis proteínas 

(E1, E2, E4, E5, E6 e E7), que são responsáveis pela replicação do genoma do HPV e 

modulação imunológica (JENDOUBI-FERCHICHI et al., 2018; WILLIAMS et al., 2011). A 

região 'tardia' consiste em proteínas do capsídeo L1 e L2, que foram relatadas como 

desempenhando um papel na transmissão do vírus (GRAHAM, 2003). Entre as proteínas 

da região E, as principais causadoras de transformação maligna, em especial na cérvice 

uterina não as proteínas E6 e E7. Assim, a tumorigênese cervical parece depender 

integração do DNA viral ao genoma da célula hospedeira (GUPTA; PRAMANIK, 2019), 

resultando no aumento nos níveis da oncoproteína E6, degradando p53, e da proteína E7, 

inativando a proteína supressora de tumor retinoblastoma – pRb 9, por consequência, 

interrompendo controles celulares, como apoptose e proliferação descontrolada (HOPPE-

SEYLER et al., 2018) conforme figura 2.  

 
Figura 2. Representação esquemática do genoma do HPV. Fonte: Souza 2023 



14 
 

 

 

Esses são dois eventos moleculares primordiais no descontrole de vias celulares, 

promovendo o câncer cervical. A infecção por vírus de alto risco aumenta com a expressão 

das proteínas virais resultam em alterações celulares que podem evoluir para o câncer 

cervical. (INCA, 2022). A carcinogênese cervical é um processo de múltiplos passos com o 

acúmulo de alterações genéticas e epigenéticas na célula hospedeira. Essas alterações 

envolvem alterações em oncogenes e genes supressores de tumor, eventos esses cruciais 

para regular vários eventos moleculares incluindo a apoptose. 

 

1.3. Terapia epigenetica  

A carcinogênese cervical passa por um processo de acúmulo de alterações genéticas 

e epigenéticas na célula hospedeira. Essas alterações envolvem alterações em oncogenes 

e genes supressores de tumor, eventos esses cruciais para regular a progressão do ciclo 

celular, estabilidade cromossômica, ativação de telômeros e apoptose (RIVOIRE; 

CORLETA; BRUM, 2006). As histonas têm sido relacionadas com a transformação maligna 

em diferentes tipos de tumor. Em relação ao câncer cervical associado ao HPV, as 

proteínas HPV E6 e E7 alteram a competência transcricional das células infectadas 

associando ou modulando a expressão de HDACs, bem como modificando enzimas 

responsáveis pela modificação de histonas e de remodelamento de cromatina (GUPTA; 

PRAMANIK, 2019).  

Histonas são membros de uma família de proteínas nucleares que interagem com o 

DNA, resultando no enovelamento desse DNA ao redor core octamérico de histonas numa 

estrutura complexa denominada nucleossomos. Dezoito isoformas de HDAC foram 

identificadas e classificadas em quatro classes (classe I – IV), de acordo com sua homologia 

e localização nas células conforme figura 3. As classes I, II e IV são enzimas dependentes 

de zinco, enquanto a classe III inclui enzimas dependentes de NAD+, também chamadas 

de sirtuínas (SIRTs) (BRADNER et al., 2010). 

 

 
Figura 3. Classificação das histonas. Classe I (HDAC-1, 2, 3 e 8), classe IIa (HDAC-4, 5, 7 e 9), classe IIb (HDAC-6 e 

10), classe III (SIRT1 –7) e classe IV (HDAC-11). Fonte: Souza 2023. 

 

As HDACs de classe I são encontradas em todos os tecidos e células, sendo elas 

consideradas as principais HDACs responsáveis pela desacetilação de histonas, e sua 



15 
 

 

localização em sua maioria nuclear (SEGRE; CHIOCCA, 2011; FASS et al., 2012). As 

HDACs de classe II são enzimas mais específicas, localizadas no cérebro, coração, 

músculo liso, rim e fígado, com estudos incativos de essas enzimas são substratos não 

histonas ou recrutadores para as HDACs (WITT et al., 2009; BRADNER et al., 2010; FASS 

et al.,  2012). A HDAC de classe IV localizada no núcleo de células  

neurais e imunes, possui semelhanças com as classes I e a II. As HDACs de classe III,  são 

enzimas dependentes de dinucleotídeos nicotina-adenina como cofatores, gerando como 

resultado o complexo O-acetil-ADP-ribose (O-AADPR) e um substrato desacetilado. Essas 

hisnonas estão presentes na resposta celular ao estresse oxidativo, ciclo celular, 

termogênese, produção de ATP, secreção de insulina, ciclo da ureia e transcrição de rDNA, 

podendo estar localizado no núcleo, no citosol ou na mitocôndria (HAIGIS; SINCLAIR, 2010; 

FASS et al., 2012).  

A acetilação/deacetilação de histonas é um importante mecanismo epigenético de 

regular a expressão gênica e o remodelamento da cromatina (RASHEED; JOHNSTONE; 

PRINCE, 2007; ALBERTS, 2002). A acetilação de histonas, por exemplo, promove a 

expressão gênica, alterando a estrutura espacial dos nucleossomos e induzindo o 

afrouxamento da cromatina, aumentando assim a replicação do DNA e a transcrição. As 

HDACs, por outro lado, removem os resíduos acetil e estão associadas a condensação das 

estruturas da cromatina, suprimindo a transcrição, conforme figura 4.  

 
Figura 4. Acetilação e deacetilação de histonas. Acetilação de histonas (HATs) promove a expressão gênica, alterando 

a estrutura espacial dos nucleossomos e induzindo o afrouxamento da cromatina, aumentando assim a replicação do 

DNA e a transcrição. A deacetilação de histonas (HDACs), por outro lado, removem os resíduos acetil e estão associadas 

a condensação das estruturas da cromatina, suprimindo a transcrição. Fonte: Souza 2023 

 

Dessa forma, um  grande recrutamento de HDAC reprime a expressão de genes 

específicos na célula, acreditando ser esse um mecanismo de oncogênese em alguns 

desenvolvimentos de tumores específicos (JONES; BAYLIN, 2002).  

Devido à superexpressão de HDAC em diversos tipos de câncer, como no colo do 

útero, sabe-se que os inibidores de HDAC atuam reduzindo o desenvolvimento do tumor, 



16 
 

 

sendo usados isoladamente ou em combinação com outras drogas. Alguns compostos têm 

a capacidade de reverter os padrões de metilação e acetilação do DNA e histonas 

(APARICIO  et  al.,  2009). Pesquisas demonstraram  que  ao  inibir  a  atividade  das  

histonas  deacetilases,  ocorre  um  bloqueio  do  ciclo celular e apoptose das células por 

mecanismos desconhecidos,  fazendo  dessas  enzimas  possíveis  alvos terapêuticos 

(GIBBS, 2007). Além da remodelação da cromatina, as HDACs afetam proteínas não-

histonas em locais específicos, incluindo supressores de tumor e oncoproteínas envolvidas 

nas vias de sinalização tumoral, afetando em última análise o destino celular. HDACs 

desacetilam muitos grupos de proteínas não histonas, incluindo: fatores de transcrição, 

proteínas de adesão celular, proteínas celulares, proteínas de reparo de DNA, proteínas de 

sinalização celular e proteínas virais. No entanto, o papel dos HDACs na tumorigênese é 

controverso: promovendo a sobrevivência das células cancerígenas ou causando a morte 

celular entre diferentes tipos de câncer (WAWRUSZAK et al., 2021). Dessa forma, os 

inibidores e HDAC (HDACi) são amplamente utilizados na pesquisa epigenética do câncer. 

Tais inibidores reduzem a deacetilação de histonas e melhora os níveis de histona de 

acetilação controlando o emaranhamento de DNA em histonas portanto, desempenhando 

um papel na regulação da expressão gênica (LIU et al., 2019).  

Estudos mostram que a terapia epigenética com a utilização de HDACi foi capaz de 

efeito proliferativo, indutores de apoptose e diminuição de tumores induzidos em 

camundongos nude Balb-C, utilizando diferentes tipos celulares, inclusive a células HeLa 

(câncer cervical HPV18). (CHENG et al., 2019). Ainda os inibidores de HDAC 

potencialmente induzem parada do ciclo celular, processo de diferenciação e apoptose sem 

apresentar efeitos citotóxicos em células normais (LIU et.al, 2012).  

O inibidor de HDAC SAHA (ácido hidroxâmico suberoylanilida), também chamado 

Vorinostat, é um inibidor de pan-HDAC (Classes I (HDAC1, 2, 3 and 8), II (HDAC4, 5, 6, 7, 

9, and 10), and IV (HDAC11)) e apresentou boa atividade contra o câncer de colo uterino 

(SERRANO-OLVERA et al., 2014). Entretanto o presente estudo propõe a avaliação de 

molécula sintetizada, cuja modificação química merece avaliação quanto sua atividade 

antitumoral contra o câncer de colo uterino associado ao HPV, sendo avaliado  inibidores 

de HDAC linhagens cervicais HPV16 (SiHa e CasKi), utilizando esses inibidores como 

estratégia terapêutica.  

 

2. OBJETIVO 

2.1. Objetivo geral 

 Avaliar o potencial de uma nova molécula HDACi 1-2 em comparação com um 

composto comercial (Vorinostat) em monoterapia e em terapia combinada, a fim de avaliar 

sua eficiência para o tratamento de câncer de colo uterino associado à infecção pelo HPV.  

 



17 
 

 

2.3. Objetivos específicos 

 Verificar comparativamente o efeito citotóxico, por meio da viabilidade celular, 

através de ensaio de citotoxicidade pelo ensaio do MTT, de dois compostos, um comercial 

(SAHA) e outro recém sintetizada (HDACi 1,2) inibidoras de histona deacetilase 1,2 em 

diferentes concentrações e tempos de tratamento em linhagens celulares normais e de 

câncer cervical HPV-16 positiva. 

Avaliar o tratamento concomitante de ambos os compostos (nova molécula de 

HDACi 1-2 e composto comercial Vorinostat), a fim de identificar se a terapia combinada 

resulta em um efeito sinérgico, aditivo ou antagônico. Avaliado pelo ensaio de checkerboard 

e software SynergyFinder . 

 

3. MATERIAL E MÉTODO  

3.1.Estrutura química de composto HDACi 1-2 e VORINOSTAT (SAHA) 

 

Figura 5. A) Estrutura química de molécula nova sintetizada de HDACi 1-2; B) Estrutura química de composto comercial 

do Vorinostat 

 

A)  

B)  

 

 

3.2. Cultura de células 

As linhagens celulares foram cultivadas em ambiente esterilizado nos frascos de 

cultura de célula utilizando meio de cultura Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) 

(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) suplementado com soro fetal bovino 10% (SFB) 

(Cultilab, Campinas, SP) e solução de antibiótico/antimicótico (penicilina 100 U/mL, 

estreptomicina 100 µg/mL e anfotericina B 0,25 µg/mL) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) 

a 37 ºC em atmosfera com CO2 5%. As células foram mantidas em condições de cultivo até 

se obter subconfluência de 80% para os ensaios e colhidas com solução tripsina 0,5% 

(Gibco, Carlsbad, CA, EUA) em solução salina de Hank (HBSS) (v/v). As linhagens 



18 
 

 

celulares foram as linhagens de câncer cervical transformadas com HPV16 positiva SiHa 

(1 a 2 cópias virais) e linhagem não tumoral de pele espontaneamente imortalizada 

(HaCaT). Em função dos problemas com o estoque e reativação das linhagens (explicitado 

como mencionado na justificativa), as células foram gentilmente cedidas pela Professora 

Associada Marilia de Freitas Calmon, Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas, 

IBILCE, UNESP, São José do Rio Preto, São Paulo. 

 

3.3 Preparo das soluções tratamento 

3.3.1. Solução de HDACi 1,2 e SAHA  

Para o preparo da solução de ambos os compostos, foram preparadas alíquotas dos 

compostos solubilizados com DMSO, preparando soluções de estoque. Segundo protocolo 

padrão para preparação da solução de trabalho, a solução para uso no tratamento das 

células deve conter apenas 0,5 a 1% de DMSO, dessa forma, foi preparado uma solução 

mãe contendo 10% de DMSO e a solução para uso, com meio de cultura e apenas 0,5% 

de DMSO, sendo armazenadas posteriormente congelada a -20°C, sob abrigo de luz. 

 

 

3.4. Citotoxicidade - Ensaio de MTT 

Com o objetivo de desenvolver quimioterápicos essenciais para o controle de diversos 

tipos de câncer, um dos principais testes é o método de redução do tetrazólio. Esse teste 

pode determinar a concentração inibitória mínima necessária para obter 50% das células 

viáveis ou inviáveis pela citotoxicidade promovida pelo agente testado, o tempo de 

exposição ao medicamento e a eficácia da administração do medicamento (OZI et. al,  

2011; BOURNINE et al., 2017). 

Através do ensaio com brometo de 3- (4,5-dimetiltiazo-2-il) -2,5- difeniltetrazolio (MTT) 

(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) pode-se determinar a atividade metabólica da mitocôndria e 

correlacionar com as células viáveis após tratamento dos compostos  HDACi 1-2 e 

Vorinostat (SAHA). Para determinação da citotoxicidade e seletividade sobre as linhagens, 

as células foram cultivadas em placas de cultura de células de 96 poços, na concentração 

de 1 x 105 células/mL, em estufa a 37 ºC com atmosfera com 5% de CO2, durante 24 horas 

(h), antes dos tratamentos com as amostras. As linhagens celulares testadas foram tratadas 

em cinco diferentes concentrações (100µM a 6.5µM) de HDACi 1-2 e SAHA (Vorinostat) 

nos tempos de 24h e 72h. Depois do tratamento, o meio de cultura foi descartado da placa 

e colocado 10 µL de MTT, a 5 mg/mL em PBS, em cada poço. A placa foi incubada por 

mais 3 h nas mesmas condições de cultivo para ocorrer a redução do sal. A seguir o sal de 

formazana foi solubilizado com 100 µL de isopropanol, seguida de leitura em 

espectrofotômetro iMark Microplate Reader (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EUA) no 



19 
 

 

comprimento de onda 570 nm, descontando a absorbância a 655 nm. A estimativa de 

células vivas é obtida pela fórmula:   

 

 % Células Vivas = Absorbância Teste - Absorbância Branco x100 

Absorbância Controle Negativo - Absorbância Branco 

 

Três experimentos independentes foram realizados, com triplicatas. Adicionalmente 

foram realizados o controle negativo (células sem tratamento) controle positivo 

(Doxorrubicina a 100µM) e como controle de veículo (DMSO 0,5%) e branco contendo 

somente meio de cultura suplementado com 10% soro fetal bovino e antibióticos. Dessa 

forma, o experimento foi desenhado e realizado como demonstrado na figura 6.  

 
Figura 6. Desenho experimental do tratamento em ensaio de MTT 

 

3.5. Ensaio de Checkerboard 

O ensaio de checkerboard tem como objetivo avaliar a combinação de substâncias 

com diferentes células ou microrganismos in vitro, utilizando de um padrão de diluição 

distribuído na placa de cultivo (MEDEIROS, 2012).  

Após o cultivo, utiliza-se do ensaio de MTT para realizar a revelação dos resultados, 

verificando assim, a atividade inibitória de crescimento da linhagem celular. Para o  ensaio 

é realizado o plaqueamento da linhagem, onde na vertical, cada poço é tratado com uma 

concentração diferente do composto HDACi 1,2, enquanto na horizontal diferentes 

concentrações de SAHA, conforme figura 6.  



20 
 

 

 
Figura 7. Desenho experimental do plaqueamento do ensaio de checkerboard 

 

Em seguida é realizado o calculo para viabilidade celular  e realizado a media dos 

três experimentos independentes. Após a obtenção da média, é criada uma planilha com 

os resultados no template do programa SynergyFinder e realizado as analises a partir do 

software.  

 

3.6 Análise Estatística 

Para analisar os resultados obtidos em triplica e três experimentos independentes 

foram aplicados no teste One-Way ANOVA com Pós-Test de Tukey de comparações 

múltiplas entre os grupos, utilizando o software  Graph Pad Prism 5.1 (Inc., La Jolla, CA, 

USA). O IC50 (concentrações capazes de inibir 50% da viabilidade celular) foi obtido através 

do excel utilizando a regressão linear da curva dose resposta dos compostos. Para a 

analise do ensaio de checkerboard, foi utilizado o software SynergyFinder, com intuito de 

analisar as combinações multidose de diferentes compostos. O programa estabelece 

resultados utilizando uma base de dados científicos e diferentes modelos matemáticos de 

análise. Dessa forma, para cada combinação de droga testada é gerado um valor 

denominado escore, na qual os valores < -10 indica uma provável interação antagônica 

entre duas drogas, no intervalo de -10 a 10 uma interação aditiva e um valor maior que 10 

a interação entre duas drogas é provavelmente sinérgica. Para analise, foi escolhido o 

método de análise ZIP, o qual captura as relações de interação medicamentosa 

comparando a mudança na potência das curvas dose-resposta entre medicamentos 

individuais e suas combinações. 

 



21 
 

 

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO 

 Inicialmente, para analisar o efeito citotóxico nas células de câncer cervical HPV16 

positivo tratadas com novo composto recém sintetizado HDACi 1,2 e SAHA em 

monoterapia, foram realizados experimentos com linhagem de câncer cervical HPV16 

positiva (SiHa e CasKi) HPV negativa (C33A) e linhagem não tumoral de pele 

espontaneamente imortalizada (HaCaT), tratadas com HDACi 1,2 e SAHA, em tempo de 

24h. De forma que, por meio da viabilidade celular, obtidos através do ensaio de MTT, fosse 

possível indicar se há uma resposta efetiva de morte celular, levando a uma curva dose-

resposta nas concentrações de 6,25µM, 12,5µM, 25µM, 50µM e 100µM em ambos os 

tratamentos. 

 Os resultados dos experimentos com a linhagem de câncer cervical HPV16 

positiva (SiHa) com tratamento 24 horas utilizando o composto HDACi 1,2 e SAHA, não 

indicaram uma ação do composto significativa, como pode ser observado na Figura 2. 

 

Figura 8. Representação gráfica e excel do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 (A) e SAHA (B) em SiHa em 24 

horas (três experimentos independentes). Experimento de citotoxicidade com MTT. CN= Meio de Cultura (DMEM F10) 

CV= Controle de Veículo (DMS0 0.05%); CP= Controle Positivo (Doxorrubicina 100µM). Análise Estatística, Teste One-

Way ANOVA com pós-teste de Tukey com comparações múltiplas entre os grupos. p = 0,0005, significativo (***) para 

HDACi 1,2 e p = 0,0034 (p<0.05), significativo (**) para SAHA . Software  Graph Pad Prism 5.1 (Inc., La Jolla, CA, USA).  

 

 
 

 Ambos tratamentos apresentaram significância estatística apenas para os 

controles. Indicando que o tratamento com HDACi 1,2 e SAHA não apresenta diferença 



22 
 

 

estatística e curva dose resposta em linhagem câncer cervical HPV16 positivo em tempo 

de 24h. Segundo estudos, molecularmente, o câncer é definido pela divisão celular 

descontrolada, seguida por alterações genéticas e modificações epigenéticas. A ativação 

de oncogenes e a desativação de genes supressores de tumor resultam na inibição ou 

inativação de vias de sinalização apoptóticas, aumentando assim a proliferação celular 

(WAWRUSZAK et al., 2021). Estudos prévios mostraram que os inibidores da histona 

desacetilase, bloqueiam a expressão de HDACs, levando à regulação positiva da acetilação 

da histona e da proteína não-histona (WAWRUSZAK et al., 2021), e potencialmente 

induzem parada do ciclo celular, processo de diferenciação e apoptose sem apresentar 

efeitos citotóxicos em células normais (LIU et.al, 2012). Com essa base, os resultados do 

tratamento com HDACi 1,2 e SAHA na linhagem SiHa indicaram que o tratamento em 24h 

não foi suficiente para promover a ativação das vias apoptóticas, onde em 24h não há 

tempo de ver alterações significativas. Estudos anteriores indicaram que um tratamento de 

72h e 96h permitiria um tempo de ação mais efetivo para os compostos. Entretanto em 96h 

haveria a perca do controle negativo, devido ao super crescimento das celulas nos poços 

controle sem tratamento. 

 Dessa forma, foi estudado a possibilidade de aumentar o tempo de tratamento, o 

qual disponibilizaria maior tempo de ação da molécula e assim permitir maior regulação 

epigenética e controle da expressão gênica, visto que a estudos apontam que a 

desacetilação de histonas está frequentemente associada à transcrição e repressão e 

silenciamento de genes, podendo modular a atividade de HDACs e, assim, regular a 

expressão gênica (KAWAGOE;  KAWAGOE;  SANO,  2002).   

 Logo, foram realizados experimentos com linhagem de câncer cervical HPV16 

positiva (SiHa), tratadas com HDACi 1,2 e SAHA, em tempo de 72h conforme Figura 2. 

 

Figura 9. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA em SiHa em 72 horas (três 

experimentos independentes). Experimento de citotoxicidade com MTT. CN= Meio de Cultura (DMEM F10) CV= Controle 

de Veículo (DMS0 0.05%); CP= Controle Positivo (Doxorrubicina 100µM). Análise Estatística, Teste One-Way ANOVA 

com pós-teste de Tukey com comparações múltiplas entre os grupos. p < 0.0001, significativo (***) para HDACi 1,2 e p < 

0.0001, significativo (***) para SAHA. Software  Graph Pad Prism 5.1 (Inc., La Jolla, CA, USA). 

 



23 
 

 

 

 Os resultados do tratamento de SiHa com HDACi 1,2 e SAHA em 72h 

demonstraram maior efetividade, com uma curva dose-resposta mais acentuada e 

diferença significativa entre os tratamentos. Quando comparado com o controle positivo, 

pode-se verificar que a ação do HDACi 1,2 na concentração de 100μM apresentou uma 

ação bem semelhante a doxorrubicina, visto a proximidade da viabilidade celular obtidos. 

Indicando que o tempo-resposta para linhagem celular de câncer cervical HPV16 (SiHa) 

apresentou resultados melhores em 72h, com uma dose inibitória de 50% (IC50) de 32,2μM 

para HDACi 1,2. Para esse experimento, o relatório de análises estatísticas demonstrou 

que houve valores significativos de tratamento com o composto HDACi 1,2, onde quando 

comparado com controle negativo a concentração de 100μM, 50μM, 25μM, 12,5μM 

apresentaram p <0,0001 e 6,25 p <0,01 e o composto SAHA apresentou valores 

significativos quando comparado com controle negativo a concentração de 100μM, 50μM, 

25μM, 12,5μM e 6,25μM apresentaram p <0,0001, com IC50 abaixo de 1μM indicando que 

ambos compostos iduzem a morte das células. Estudos apontaram que a atividade de 

SAHA in vitro inibe HDACs de classe I e II em cerca de 50nM, interrompendo o crescimento 

celular de uma ampla variedade de células em cultura à 2,5–5,0 µM (MARKS; BRESLOW, 

2007). 

 Em seguida, para avaliar amplamente o efeito do tratamento com a molécula 

recém sintetizada e a comercial nas linhagens de câncer cervical associados com HPV16, 

foram realizados experimentos com linhagem de câncer cervical HPV16 positivo com mais 

cópias virais (CaSKi) em tempo de 24h conforme Figura 4.  

 

Figura 10. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA em CaSki em 24 horas (três 

experimentos independentes). Experimento de citotoxicidade com MTT. CN= Meio de Cultura (DMEM F10) CV= Controle 

de Veículo (DMS0 0.05%); CP= Controle Positivo (Doxorrubicina 100µM). . Análise Estatística, Teste One-Way ANOVA 

com pós-teste de Tukey com comparações múltiplas entre os grupos. p < 0.0001, significativo (***) para HDACi 1,2 e 

SAHA. Software  Graph Pad Prism 5.1 (Inc., La Jolla, CA, USA).  

 



24 
 

 

 

 
 

 Os resultados obtidos com o tratamento de ambos compostos em tempo de 24h 

demonstraram curva dose-resposta. O tratamento com HDACi 1,2 apresentou significância 

de p <0,01 para controle negativo e 100μM com dose inibitória (IC50) de 110,5μM para 

HDACi 1,2. Já o tratamento com SAHA apresentou diferença significativa de p<0001 para 

controle negativo em comparação a 100, 50 e 25μM e com dose inibitória (IC50) de 149,3μM.  

As células CaSki abrigam cerca de 600 cópias do genoma integrado do HPV-16 e 

expressam os genes E6 e E7  (BAKER, 1987), podendo ser responsavel pelo aumento da 

resposta aos compostos. Todavia, o tratamento da linhagem apresentou maior resposta em 

tempo 72h comparado ao tempo de 24h, com diferença significativa nas concentrações de 

12,5, 25, 50 e 100µM (p <0,0001) em relação a HDACi 1,2 com controle negativo, com IC50 

de 12,85µM e em todas concentrações (p <0,0001) em relação ao tratamento com SAHA e 

controle negativo, com IC50 abaixo de 1µM, apresentando um acentuado efeito inibitório 

para ambos tratamentos, conforme Figura 5. Demonstrando com isso, a hipótese de que 

os compostos apresentam uma ação em células cancerígenas positivas para HPV, visto 

que apresentou resultados significativos na linhagem celular SiHa. Ademais, os resultados 

induzem uma possível relação da maior potência dos compostos com a maior quantidade 

de cópias virais, porém para melhor elucidar seria necessário mais estudos. 

Foi possivel observar que houve uma ação maior em relação ao composto SAHA, visto que 

obteve uma ação inibitória maior em todas as concentrações em comparação ao inibidor 

HDACi 1,2. Podendo ser explicado por SAHA ser um inibidor de HDACs de classe I e II e 



25 
 

 

IV, sendo um composto mais abrangente, diferente do composto inibididor de HDAC 1,2 

que inibe apenas a classe I.  

 

Figura 11. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA em CaSki em 72 horas (três 

experimentos independentes), Experimento de citotoxicidade com MTT. CN= Meio de Cultura (DMEM F10) CV= Controle 

de Veículo (DMS0 0.05%); CP= Controle Positivo (Doxorrubicina 100µM). . Análise Estatística, Teste One-Way ANOVA 

com pós-teste de Tukey com comparações múltiplas entre os grupos. p < 0.0001, significativo (***) para HDACi 1,2 e 

SAHA. Software  Graph Pad Prism 5.1. 

 

  

 Com o intuito de avaliar a seletividade do composto por linhagens de câncer 

cervical associado com HPV16, foi avaliado o tratamento com a molécula recém sintetizada 

(HDACi 1,2) e a comercial (SAHA) em células de linhagem de câncer cervical HPV16 

negativo C33-A, seguindo a metodologia anteriormente usada nos demais experimentos, 

conforme a Figura 6.  

 

Figura 12. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA em C33-A em 24 horas (três 

experimentos independentes). Experimento de citotoxicidade com MTT. CN= Meio de Cultura (DMEM F10) CV= Controle 

de Veículo (DMS0 0.05%); CP= Controle Positivo (Doxorrubicina 100µM). Análise Estatística, Teste One-Way ANOVA 

com pós-teste de Tukey com comparações múltiplas entre os grupos. p < 0.0001, significativo (***) para tratamento HDACi 

1,2 e SAHA. Software  Graph Pad Prism 5.1 (Inc., La Jolla, CA, USA). 



26 
 

 

 

 

 Os resultados apresentaram o mesmo padrão de viabilidade celular referente 

ao tratamento em tempo de 24h, não apresentando diferença significativa entre as 

concentrações e curva dose resposta. Necessitando de concentrações altas para inibir 50% 

das células (IC50 HDACi 1,2 = 197,4μM , IC50 SAHA = 253,8μM).   

 Entretanto para o tratamento em tempo de 72h apresentou maior efetividade 

e curva dose resposta, conforme apresentado na Figura 7, com redução da concentração 

inibitória (IC50 HDACi 1,2 = 4,41μM e SAHA = 1,99μM), indicando que ambos os 

tratamentos levam a morte celular em linhagens celulares de câncer celular associado e 

não associado com HPV16, abrindo-se uma interpretação dos resultados de que o 

composto inibidor de HDAC 1,2 não seja seletivo para a presença de HPV, visto que a 

linhagem celular C33-A apresenta células de câncer cervical HPV negativo.  

 

Figura 13. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA em C33-A em 72 horas (três 

experimentos independentes). Experimento de citotoxicidade com MTT. CN= Meio de Cultura (DMEM F10) CV= Controle 

de Veículo (DMS0 0.05%); CP= Controle Positivo (Doxorrubicina 100µM). . Análise Estatística, Teste One-Way ANOVA 

com pós-teste de Tukey com comparações múltiplas entre os grupos. p < 0.0001, significativo (***). Software  Graph Pad 

Prism 5.1 (Inc., La Jolla, CA, USA). (***) CN e 100 (p<0,0001), (***) CN e 50 (p<0,0001), (**) CN e 25 (p<0,01), (**) CN e 

12,5 (p<0,01), (**) CN e 6,25 (p<0,01) para HDACi 1,2 e  (***) CN e 100 (p<0,0001), (***) CN e 50 (p<0,0001), (***) CN e 

25 (p<0,0001), (***) CN e 12,5 (p<0,0001), (**) CN e 6,25 (p<0,01), (**) 6,25 e 100 (p<0,01), (*) 6,25 e 50 (p<0,05). para 

SAHA . 



27 
 

 

 

 

.  

 Finalizando os testes em monoterapia, foi realizado experimentos nas 

linhagem celular imortalizada de pele humana não tumoral (HaCaT), tratadas com HDACi 

1,2 e SAHA em monoterapia, a fim de observar o efeito do tratamento em linhagem não 

tumoral, conforme a Figura 8 e 9.  

 

Figura 14. Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA em HaCaT em 24 horas (três 

experimentos independentes). Experimento de citotoxicidade com MTT. CN= Meio de Cultura (DMEM F10) CV= Controle 

de Veículo (DMS0 0.05%); CP= Controle Positivo (Doxorrubicina 100µM). Análise Estatística, Teste One-Way ANOVA 

com pós-teste de Tukey com comparações múltiplas entre os grupos. p = < 0.0001 (p<0.05), significativo (***). Software  

Graph Pad Prism 5.1 (Inc., La Jolla, CA, USA). (**) CN e 100 (p<0,01),  (*) 6,25 e 100 (p<0,05) para HDACi 1,2 e  p = < 

0.0001 (p<0.05), significativo (***). (***) CN e 100 (p<0,0001),  (***) 6,25 e 100 (p<0,0001), (*) 12,5 e 100  (p<0,05) para 

SAHA.   

 



28 
 

 

 

 O tratamento de HaCaT com HDACi 1,2 e SAHA, apresentou curva dose-

resposta em tempo de 24h. Identificando que no tratamento com HDACi 1,2 revelou 

resultado significativo para 100µM (p<0,01) com controle negativo em um IC50 de 124,8µM, 

enquanto que para SAHA apresentou um resultado significativo em 100μM (p<0,0001) em 

relação ao controle negativo, com IC50 de 100,5μM. Além disso, para o tratamento de 

HaCaT com HDACi 1,2 e SAHA em 72h, foi observado curva dose resposta mais 

acentuada, com uma concentração IC50 de 68,9μM para HDACi 1,2 e 28,5μM para SAHA.  

 Com este resultado, surge a hipótese que o tratamento com HDACi 1,2 e SAHA 

leva à morte celular em linhagens celulares de câncer celular associado com HPV16, não 

associado ao HPV16 e em linhagens não tumorais, fato que pode não ser interessante 

pensando na seletividade celular, onde com o tratamento com SAHA, por atuar em 

diferentes histonas dentro das três principais classes, não possui seletividade para as 

celulas tumorais. Entretanto, com o calculo do índice de seletividade (IS) dos compostos, o 

qual avalia quanto cada substância foi seletiva para as linhagens tumorais, demonstrou que 

HDACi 1,2 em 24h possui índice de seletividade igual a 0,63 e 72h igual a 15,6, enquanto 

que para SAHA apresentou um índice de seletividade para 24h de 0,39 e 72h de 14,3 em 

relação a linhagem celular tumoral C33A. Dessa forma, considerando que os valores 

encontrados que demonstram que IS >1,0 indicam que o composto foi mais tóxico para a 

célula de linhagem tumoral do que para célula normal, enquanto que valores de IS <1,0 

demonstram toxicidade do composto para a linhagem não tumoral (MAKI et al, 2022), é 

possível avaliar uma seletividade para o tratamento em 72h nas linhagens tumorais, o que 

pode ser um resultado positivo para os tratamentos, visto que em baixas concentrações o 

inibidor HDAC 1,2 e SAHA possui uma ação maior em comparação ao controle de linhagem 

não tumoral. Todavia, HDAC 1,2 não apresentou-se mais seletiva que o tratamento com 

SAHA, sendo esse apresentando maior inibição em todas as linhagens.  

 

Figura 15.  Representação gráfica do tratamento dose-resposta com HDACi 1,2 e SAHA em HaCaT em 72 horas (três 

experimentos independentes). Experimento de citotoxicidade com MTT. CN= Meio de Cultura (DMEM F10) CV= Controle 

de Veículo (DMS0 0.05%); CP= Controle Positivo (Doxorrubicina 100µM).Análise Estatística, Teste One-Way ANOVA 

com pós-teste de Tukey com comparações múltiplas entre os grupos. p = < 0.0001 (p<0.05), significativo (***). Software  



29 
 

 

Graph Pad Prism 5.1 (Inc., La Jolla, CA, USA). (***) CN e 100 (p<0,0001),  (***) 6,25 e 100 (p<0,0001), (**) 12,5 e 100 

(p<0,01), (**) 25 e 100 (p<0,01), (*) 50 e 100 (p<0,05) para HDACi 1,2 e  p = < 0.0001 (p<0.05), significativo (***). Software  

Graph Pad Prism 5.1 (Inc., La Jolla, CA, USA).  (***) CN e 100 (p<0,0001), (***) CN e 50 (p<0,0001), (***) CN e 25 

(p<0,0001), (**) CN e 12,5 (p<0,01), (***) 6,25 e 100 (p<0,0001), (***) 6,25 e 50 (p<0,0001), (***) 6,25 e 25 (p<0,0001), (*) 

6,25 e 12,5 (p<0,05), (*) 12,5 e 100 (p<0,05) para SAHA. 

 

 

 

 Conforme a Tabela 1, foi possível observar resultados promissores no tratamento 

em 72h, visto que para as linhagens de células tumorais associado e não associado com 

HPV16, as concentrações inibitórias mínimas do novo composto se mostrou-se eficaz em 

baixas concentrações, enquanto que para linhagem de células não tumorais (HaCaT) 

apresentou a necessidade de uma concentração maior, possibilitando um tratamento mais 

seletivo em baixas dosagens.   

 

Tabela 1 - IC50 do tratamento em monoterapia de HDACi 1,2 e SAHA em tempos de 24h e 72h 



30 
 

 

 
-* concentração abaixo de 1µM 

 

 Após a obtenção dos resultados experimentais de viabilidade celular em 

monoterapia, foi realizado a combinação dos compostos para verificação do efeito da 

combinação dos compostos utilizando o software SynergyFinder, onde o programa,  através 

da sua base de dados, cria um score que indica o tipo de ação quando há combinação de 

dois ou mais compostos. Na linhagem de células imortalizadas (HaCaT) foi observado um 

score de -13.302, indicando uma ação antagonista dos compostos usados em combinação, 

identificado nas áreas em verde do mapa, onde os mapas gerados traduzem os dados 

numéricos dos escores em cores, mostrando através da cor verde áreas que apresentaram 

escores indicativos de uma ação antagônica e na cor vermelha áreas com ação sinérgica 

conforme Figura 10.   

 A principio, era esperado que os compostos apresentassem ação sinérgica, visto 

que ambos teriam ação de inibição de HDAC. Estudos de combinação de SAHA e 

Doxorrubicina relataram efeito sinérgico, com o aumento na acetilação da p53 em células 

cancerígenas cervicais e outras células cancerosas induzidas pelo co-tratamento regulando 

positivamente o nível de expressão da proteína pró-apoptótica Bad, levando 

consequentemente à inibição sinérgica do crescimento através da promoção da morte 

apoptótica (LEE et al., 2014). Entretanto, na combinação dos compostos nas células de 

câncer infectados com HPV16 (SiHa), foi apresentado um score de -14.46, indicando uma 

ação antagonista dos compostos usados em combinação nas linguagens tumorais, 

indicando uma ação semelhante nas duas linhagens, o que pode não ser interessante, visto 

que os compostos apresentaram ação sobre as células de câncer associado ao HPV, ao 

mesmo tempo que apresentam ação em linhagem não tumoral. Esse resultado pode ser 

explicado devido a HDAC estarem trabalhando na trascrição de outros genes, os estão 

sendo alterados e levando a diferentes mecanismos celulares. Para uma melhor conclusão 

desse resultado é necessario realizar mais estudos voltados a proteomica e redox celular 

completo aumentando e diminuindo a expressão dos genes.  

 

Figura 16. Análise gráfica fornecida pelo SinergFinder da viabilidade da linhagem celular HaCat (A) e SiHa (B) frente ao 

tratamento com os compostos HDACi e SAHA.  



31 
 

 

                                        A)                                                              B) 

 

 

5. CONCLUSÃO 

A carcinogênese cervical é um processo de múltiplos passos com o acúmulo de 

alterações genéticas e epigenéticas na célula hospedeira. Essas alterações envolvem 

alterações em oncogenes e genes supressores de tumor. Dentre elas, a acetilação das 

histonas é um processo regulado pelas histonas deacetilases (HDAC) e histonas 

acetiltransferases (HAT), e desempenha importante papel na regulação epigenética, 

permitindo o controle da expressão gênica. Todavia tem se notado uma superexpressão de 

HDAC em diversos tipos de câncer, inclusive no colo do útero. Como dito anteriormente, 

estudos indicam que os inibidores de HDAC atuam reduzindo o desenvolvimento do tumor, 

sendo usados isoladamente ou em combinação com outras drogas. Dessa forma, viu-se a 

importância de um estudo mais aprofundado para avaliar a atividade de molécula recém 

sintetizada de HDACi de histona deacetilase 1,2 comparado o fármaco comercial 

Vorinostat® (SAHA), que também inibe essa mesma classe de HDAC, avaliando 

comparativamente seu efeito ou em sinergismo em células de câncer cervical associado ao 

HPV 16 (SiHa e Caski) e respectivos controles celulares – linhagem celular de câncer 

cervical negativa para HPV (C33-A) e queratinócito normal de pele espontaneamente 

imortalizado (HaCaT).  

Os resultados obtidos indicaram que o tratamento de 24 horas com HDACi 1,2 e 

SAHA são pouco efetivos nas linhagens testadas, enquanto que os experimentos com 

tratamento em 72h demonstraram maiores efeitos citotóxicos em todas as linhagens. Os 

experimentos com tratamento com HDACi 1,2 em linhagem de câncer cervical associado 

ao HPV16 (72 horas) foi mais citotóxico, quando comparado com as células não tumorais. 



32 
 

 

O tratamento com SAHA nas mesmas concentrações, em 72 horas, também demonstrou 

maior citotoxicidade frente às células não tumorais. Entretanto, tanto o tratamento de 

HDACi 1,2 e SAHA nas células não tumorais e células de câncer cervical HPV negativo 

demonstraram ser citotóxicos, não apresentando exclusividade para células de câncer 

cervical associado com HPV16. Porém é possível analisar uma maior citotoxicidade em 

ambas moléculas referente às células associadas com HPV16, todavia os ensaios a fim de 

ser avaliar o sinergismo entre os dois compostos, conforme descrito nos objetivos iniciais, 

não demonstraram os efeitos esperados, apresentando um efeito antagônico nas linhagem 

de célula não tumoral e tumoral infectada com HPV16. Importante ressaltar, que para uma 

melhor conclusão quanto a avaliação do mecanismo de apoptose da  nova molécula de 

HDACi 1-2 mostra-se necessário a realização de ensaios futuros de proliferação celular, 

citometro de fluxo e anexina V, afim de aprofundar os efeitos do composto, verificando a 

capacidade antitumoral in vitro desses compostos para o câncer cervical associado ao HPV. 

 

 

 

 

  



33 
 

 

REFERÊNCIAS 

 

ALBERTS, B.; et al. The molecular cell biology. 4th. ed. New York: Garland Science, 

2002. Disponível em: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21054/. Acesso em: 20 jul. 

2023. 

APARICIO, A.; et al. LINE-1 methylation in plasma DNA as a biomarker of activity of DNA 

methylation inhibitors in patients with solid tumors. Epigenetics, v.4, n.3, p.176-184, 2009. 

Disponível em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19421002/. Acesso em: 20 jul. 2023. 

ARBYN, M.; et al. Estimates of incidence and mortality of cervical cancer in 2018: a 

worldwide analysis. The Lancet Global Health, v. 8, n. 2, p. e191–e203, 2020. Disponível 

em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31812369/. Acesso em: 19 jul. 2023. 

BOURNINE, L. et al. Evaluation of the cytotoxic and cytostatic activities of alkaloid extracts 

from different parts of Peganum harmala L. (Zygophyllaceae). European Journal of 

Integrative Medicine, v.9, p.91-96, 2017. Disponível em: 

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22147232/. Acesso em: 02 nov. 2023. 

BRADNER, J. E.; et al. Chemical phylogenetics of histone deacetylases. Nat. Chem. 

Biol., v. 6, p. 238–243, 2010. 

BYCHKOVSKY, B. L.; et al.  Cervical cancer control in Latin America: A call to action. 

Cancer, v. 122, n. 4, p. 502–514, 2016. DOI: 10.1002/cncr.29813. Disponível em: 

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26670695/. Acesso em: 20 jul. 2023. 

BAKER, C. C. et al. Structural and transcriptional analysis of human papillomavirus type 

16 sequences in cervical carcinoma cell lines. J Virol, v.61, p.962–971, 1987. Disponível 

em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/3029430/. Acesso em: 05 nov. 2023. 

CHENG, C. et al. Design, synthesis and biological evaluation of novel thioquinazolinone-

based 2-aminobenzamide derivatives as potent histone deacetylase (HDAC) inhibitors. 

European Journal of Medicinal Chemistry, v.173, p.185-202, 2019. Disponível em: 

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31003060/. Acesso em: 20 jul. 2023. 

MARTEL, C. de; et al. Global burden of cancer attributable to infections in 2018: a 

worldwide incidence analysis. Lancet Global Health, v. 8, n. 2, p. e180–e190, 2020. 

Disponível em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31862245/. Acesso em: 20 jul. 2023. 

FASS, D.M.; et al. Histone acetylation and deacetylation. In: MEYERS, R. A. (ed.). 

Reviews in cell biology and molecular medicine. 2. ed. 2012. Disponível em: 



34 
 

 

https://www.researchgate.net/publication/278306886_Encyclopedia_of_Molecular_Cell_Bi

ology_and_Molecular_Medicine. Acesso em: 20 jul. 2023. 

GIBBS, W. W. Além do DNA. Scientific American Brasil, São Paulo, n. 16, Edição 

Especial, Genoma: o código da vida, p. 44-51, 2007.  

GLOBAL OBSERVATORY OF CANCER (GLOBOCAN). [Site organizado pela 

Organização Mundial da Saúde e pela Agência Internacional para a Pesquisa do Câncer 

(IARC)]. 2020. Disponível em: https://gco.iarc.fr/today/. Acesso em: 18 jul. 2023. 

GRAHAM, S. Human papillomavirus: Gene expression, regulation and prospects for novel 

diagnostic methods and antiviral therapies. Future. Microbiol., v. 5, p. 1493–1506, 2010. 

Disponível em: https://doi.org/10.2217/fmb.10.107. Acesso em: 19 de julho de 2023. 

GUPTA, S. M.; MANIA-PRAMANIK, J. Molecular mechanisms in progression of HPV-

associated cervical carcinogenesis. Journal of Biomedical Science, v. 26, n. 1, p. 28, 

2019. Disponível em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31014351/. Acesso em: 20 de julho 

de 2023. 

GURVICH, N. et al. Histone deacetylase is a target of valproic acid-mediated cellular 

differentiation. Cancer Res., v. 64, p. 1079–1086, 2004. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-

03-0799. 

HAIGIS, M. C.; SINCLAIR, D. A. Mammalian sirtuins: biological insights and disease 

relevance. Annu. Rev. Pathol. Mech. Dis., v. 5, p. 253–295, 2010. 

HERFS, M. et al. A discrete population of squamocolumnar junction cells implicated in the 

pathogenesis of cervical cancer. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., v. 109, p. 10516–10521, 

2012. DOI: 10.1073/pnas.1202684109. 

HOPPE-SEYLER, K.; et al. The HPV E6/E7 oncogenes: key factors for viral 

carcinogenesis and therapeutic targets. Trends in Microbiology, v.26, p.158-168, 2018. 

Disponível em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28823569/ Acesso em: 20 jul. 2023. 

HULL, R.; et al. Cervical cancer in low and middle-income countries. Oncology Letters, v. 

20, n. 3, p. 2058–2074, 2020. Disponível em: 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7400218/. Acesso em: 19 jul. 2023. 

INSTITUTO NACIONAL DE CÂNCER (INCA). Câncer do colo do útero. Rio de Janeiro, 

2022. Disponível em: https://www.inca.gov.br/tipos-de-cancer/cancer-do-colo-do-utero. 

Acesso em: 19 jul. 2023. 



35 
 

 

JENDOUBI-FERCHICHI, M.; et al. Phylogeny and Classification of Human Papillomavirus 

(HPV)16 and HPV18 Variants Based on E6 and L1 genes in Tunisian Women with 

Cervical Lesions. Asian Pac. J. Cancer Prev., v. 19, p. 3361–3366, 2018. Disponível em: 

https://doi.org/10.31557/APJCP.2018.19.12.3361. Acesso em: 19 de julho de 2023. 

JONES, P.A.; BAYLIN, S.B. The fundamental role of epigenetic events in cancer. Nature 

Reviews Genetics, v.3, p.415-428, 2002. Disponível em: 

https://pure.johnshopkins.edu/en/publications/the-fundamental-role-of-epigenetic-events-

in-cancer-6. Acesso em: 20 jul. 2023. 

KAWAGOE, R.; KAWAGOE, H.; SANO, K. Valproic acid induces apoptosis in human 

leukemia cells by stimulating both caspase-dependent and -independent apoptotic 

signaling pathways. Leuk Res, v.26, p.495–502, 2002. Disponível em: 

http://www.medicinacomplementar.com.br/biblioteca/pdfs/Cancer/ca-3999.pdf. Acesso em: 

05 nov. 2023. 

KHAN, I. et al. LC/MS-based polar metabolite profiling identified unique biomarker 

signatures for cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia using global and 

targeted metabolomics. Cancers, v. 11, n. 4, p. 511, 2019. 

LEE, S. J.; et al. Transactivation of bad by vorinostat-induced acetylated p53 enhances 

doxorubicin-induced cytotoxicity in cervical cancer cells. Experimental and Molecular 

Medicine, v.46, p. e76, 2014. DOI: 10.1038/emm.2013.149. Acesso em: 06 nov. 2023. 

LIU, N.; et al. Histone deacetylase inhibitors inducing human cervical cancer cell apoptosis 

by decreasing DNA-methyltransferase 3B. Chinese Medical Journal, v.125, n.18, p.3273-

3278, 2012. Disponível em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22964322/. Acesso em: 20 

jul. 2023. 

LIU, S.; et al. The function of histone acetylation in cervical cancer development. 

Bioscience Reports, v.39, p.1-11, 2019. Disponível em: 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC9331760/. Acesso em: 20 jul. 2023. 

LUCKETT, R.; FELDMAN, S. Impact of 2-, 4- and 9-valent HPV vaccines on morbidity and 

mortality from cervical cancer. Human Vaccines & Immunotherapeutics, v. 12, p. 1332–

1342, 2015. Disponível em: 

https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/21645515.2015.1108500. Acesso em: 19 jul. 

2023. 

MAKI, P. et al. Ethnopharmacological nexus between the traditional Thai medicine theory 

and biologically based cancer treatment. Journal of Ethnopharmacology, v.287, 



36 
 

 

p.114932, 2022. Disponível em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34953977/. Acesso em: 

20 jul. 2023. 

MARKS, P.; BRESLOW, R. Dimetilsulfóxido para vorinostat: desenvolvimento deste 

inibidor de histona desacetilase como uma droga anticâncer. Nat Biotechnol, v.25, p.84-

90, 2007. Disponível em: https://doi.org/10.1038/nbt1272. Acesso em: 05 nov. 2023. 

MCBRIDE, A. A.; WARBURTON, A. The role of integration in oncogenic progression of 

HPV-associated cancers. PLoS Pathog., v. 13, p. 1–7, 2017. DOI: 

10.1371/journal.ppat.1006211. 

MCLAUGHLIN-DRUBIN, M. E.; MÜNGER, K. Oncogenic activities of human 

papillomaviruses. Virus Res., v. 143, n. 2, p. 19, 2009. 

MEDEIROS, M. Avaliação in vitro de efeitos sinérgicos de antibacterianos para o 

tratamento de infecções por Acinetobacter baymannii Multirresistentes produtoras 

de Carbapenemases tipo OXA endêmicas no Brasil. Dissertação (Mestrado) - 

Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. 

MESRI, E. A.; FEITELSON, M. A.; MUNGER, K. Human viral oncogenesis: a cancer 

hallmarks analysis. Cell Host Microbe, v. 15, p. 266–282, 2014. DOI: 

10.1016/j.chom.2014.02.011. 

MINISTÉRIO DA SAÚDE. Guia prático sobre o HPV: guia de perguntas e respostas para 

profissionais da saúde. Brasília: Ministério da Saúde, 2014. Disponível em: 

https://www.inca.gov.br/sites/ufu.sti.inca.local/files//media/document//guia-pratico-hpv-

2013.pdf. Acesso em: 11 de janeiro de 2023. 

OKUNADE, K.S. Human papillomavirus and cervical cancer. J. Obstet. Gynaecol., v. 40, 

p. 602–608, 2020. Disponível em: 

https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/01443615.2019.1634030?journalCode=ijog2

0. Acesso em: 19 de julho de 2023. 

OZI, J. M. et al. In vitro cytotoxic effects of Brazilian plant extracts on squamous cell 

carcinoma of the oral cavity. Brazilian oral research, v.25, n.6, p.519-525, 2011. 

RASHEED, W.K.; JOHNSTONE, R.W.; PRINCE, H. M. Histone deacetylase inhibitors in 

cancer therapy. Expert opinion on investigational drugs, v. 16, n. 5, p. 659-678, 2007. 

Disponivel em: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5535906/ . Acesso em: 20 

de jul. de 2023. 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5535906/


37 
 

 

RIVOIRE, W. A.; CORLETA, H. V. E.; BRUM, I. S. Molecular biology of cervical cancer. 

Ponto de Vista: Rev. Bras. Saude Mater. Infant., v. 6, n. 4, 2006. Disponível em: 

https://doi.org/10.1590/S1519-38292006000400012. Acesso em: 02 de nov. de 2023. 

SCHIFFMAN, M.; CLIFFORD, G.; BUONAGURO, F. M. Classification of weakly 

carcinogenic human papillomavirus types: addressing the limits of epidemiology at the 

borderline. Infect. Agent. Cancer, v. 4, p. 1–8, 2009. DOI: 10.1186/1750-9378-4-8. 

SEGRE, C. V.; CHIOCCA, S. Regulating the regulators: the posttranslational codemof 

class I HDAC1 and HDAC2. J. Biomed. Biotechnol., v. 2011, 690848–690862, 2011. 

SERRANO-OLVERA, A.; CETINA, L.; CORONEL, J.; DUEÑAS-GONZÁLEZ, A. Emerging 

drugs for the treatment of cervical cancer. Expert Opin. Emerging Drugs, v.20, n.2, p.1-

18, 2014. Disponível em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25578210/. Acesso em: 20 jul. 

2023. 

TEKALEGN, Y. et al. High parity is associated with increased risk of cervical cancer: 

Systematic review and meta-analysis of case–control studies. Women’s Health, 2022. 

TSANG, S.H. et al. Costa Rica HPV Vaccine Trial (CVT) Group. Durability of 

crossprotection by different schedules of the bivalent HPV vaccine: the CVT trial. J Natl 

Cancer Inst., v. 112, n. 10, p. 1030-1037, 2020. DOI: 10.1093/jnci/djaa010. 

WAWRUSZAK, A.; et al. Vorinostat (SAHA) and breast cancer: an overview. Cancers 

(Basel), v.13, n.18, p.4700, 2021. doi: 10.3390/cancers13184700. Disponível em: 

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34572928/. Acesso em: 03 nov. 2023. 

WILLIAMS, V. M.; et al. integration and carcinogenesis: Putative roles for inflammation 

and oxidative stress. Future Virol., v. 6, p. 45–57, 2011. Disponível em: 

https://doi.org/10.2217/fvl.10.73. Acesso em 19 de julho de 2023. 

WITT, O.; et al. HDAC family: What are the câncer relevant targets? Cancer Lett., v. 277, 

p. 8–21, 2009. 

ZHANG, S.; XU, H.; ZHANG, L.; QIAO, Y. Cervical cancer: Epidemiology, risk factors and 

screening. Chinese Journal of Cancer Research, v. 32, p. 720–728, 2020. Disponível 

em: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7797226/. Acesso em: 20 jul. 2023.