RESSALVA Atendendo solicitação do(a) autor(a), o texto completo desta tese será disponibilizado somente a partir de 11/04/2024. PRISCILA HELENA DOS SANTOS EFEITOS DA PROTEÍNA OVIDUTAL HSPA5 NA PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS Botucatu – SP 2022 PRISCILA HELENA DOS SANTOS EFEITOS DA PROTEÍNA OVIDUTAL HSPA5 NA PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS Tese apresentada ao programa de Pós-graduação do Instituto de Biociências de Botucatu, Universidade Estadual Paulista – UNESP, para a obtenção do título de Doutor em Farmacologia e Biotecnologia. Orientador: Prof. Doutor Anthony César de Souza Castilho Botucatu – SP 2022 Palavras-chave: BiP; GRP78; Heat shock protein; MIV; PIVE. Santos, Priscila Helena dos. Efeitos da proteína ovidutal HSPA5 na produção in vitro de embriões bovinos / Priscila Helena dos Santos. - Botucatu, 2022 Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Instituto de Biociências de Botucatu Orientador: Anthony César de Souza Castilho Capes: 21005001 1. Bovinos - Reprodução. 2. Proteínas de choque térmico. 3. Homeostase celular. 4. Fertilização in vitro. 5. Transcrição genética. DIVISÃO TÉCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAÇÃO - CÂMPUS DE BOTUCATU - UNESP BIBLIOTECÁRIA RESPONSÁVEL: ROSEMEIRE APARECIDA VICENTE-CRB 8/5651 FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA SEÇÃO TÉC. AQUIS. TRATAMENTO DA INFORM. Nome do autor: Priscila Helena dos Santos Título: EFEITOS DA PROTEÍNA OVIDUTAL HSPA5 NA PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS COMISSÃO EXAMINADORA Prof. Dr. Anthony César de Souza Castilho Presidente e Orientador Unoeste – Presidente Prudente – São Paulo Prof. Dr. João Carlos Pinheiro Ferreira Membro FMVZ, Unesp – Botucatu – SP Dra. Raquel Zaneti Puelker Membro Progest Biotecnologia em Reprodução Animal – Botucatu – SP Prof. Dr. Mateus José Sudano Membro UFSCar – São Carlos – SP Isabele Picada Emanuelli Membro UniCesumar – Maringá - SP Data da defesa: 11 de abril de 2022. “O que prevemos raramente ocorre; o que menos esperamos geralmente acontece. ” (Benjamin Disraeli) AGRADECIMENTOS Aos meus pais, meus maiores apoiadores desta jornada, que mesmo não entendendo o percurso, confiaram, acreditaram e me incentivaram do início ao fim. Ao meu marido, Guilherme, que além de estar pacientemente ao meu lado, me deu suporte, incentivo e deixou a vida mais leve. Às minhas avós pelas constantes orações e amor incondicional. Aos meus avôs, que levo no coração, pelo carinho que será sempre lembrado. Aos meus irmãos e cunhados por serem inspiração. Ao meu orientador, por acreditar em mim desde o início, pela oportunidade de fazer parte de um time de excelência e pela amizade além da pós-graduação. À minha amiga, madrinha, companheira de todas as horas, que mesmo na distância se faz presente, Fernanda (Tico). Obrigada por ouvir, respeitar e estar comigo. Às amigas que além do suporte científico, estiveram comigo nas alegrias e tristezas fora da pós-graduação, Sarah e Patrícia. Botucatu não seria a mesma sem vocês. Durante os cinco anos de estudo, tive a oportunidade (e sorte) de conviver com muitas pessoas que deixaram marcas e aprendizados. Agradeço a cada colega e amigo do LaMem, FitoFarmaTec e Biotera que compartilhou conhecimento, risadas e cafés filosóficos comigo. Talita, Ketlyn, Eduardo, Carol, Elisa, Erika, Vitória, Ana Elise e Alan. À Raquel, pelo companheirismo, por ser prestativa e salvar nossas vidas nas intercorrências. Ao professor Di Stasi pela confiança e acolhimento em seu laboratório. À Janete, que sempre cuidou tão bem dos alunos da Farmacologia e aos demais funcionários. À seção-técnica de pós- graduação do Instituto de Biociências de Botucatu, em especial ao Davi. Aos professores do Departamento de Farmacologia do Instituto de Biociências de Botucatu pelas disciplinas. Aos professores João Ferreira, Mateus Sudano, Isabele Picada e a Raquel Puelker, por atenderem prontamente meu convite para compor a banca de doutorado. À Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) pelo financiamento à pesquisa (# 2018/06674-7; 2013/11480-3; 2015/04505-5) e à Coordenação de aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior – CAPES (Financiamento Cód 001) pelo tempo de bolsa concedida. RESUMO A proteína HSPA5 (do inglês, heat shock 70 kDa protein 5), também conhecida como GRP78 (do inglês, 78 kDa glucose-regulated protein) e BiP (do inglês, immunoglobulin-binding protein), é uma chaperona do retículo endoplasmático que desenvolve um papel fundamental na manutenção da homeostase celular. Relativamente recente, essa proteína foi descrita como um dos componentes do fluido ovidutal com capacidade de se ligar aos espermatozoides e aumentar a concentração de cálcio intracelular. Considerando que o ambiente ovidutal fornece substratos e fatores importantes para a fusão dos gametas e desenvolvimento inicial embrionário in vivo e que a proteína HSPA5está em alta concentração no fluido ovidutal, nós acreditamos que essa proteína pode exercer efeitos benéficos na produção de embriões in vitro. Hipotetizando que a HSPA5 pode interagir com o complexo cumulus-oócito (COC) durante a maturação in vivo (MIV) e também com o embrião em desenvolvimento durante o cultivo in vitro (CIV), a temática primordial desta tese foi testar a adição da HSPA5 recombinante humana na produção in vitro de embriões (PIVE). Em um primeiro momento, nós analisamos o efeito da HSPA5 nas últimas 4 horas da MIV sobre os níveis de espécies reativas de oxigênio (ROS) e potencial de membrana mitocondrial (MMP) dos oócitos e subsequentes embriões, os níveis de glutationa (GSH) nos COCs e meio de cultivo, a solubilidade da zona pelúcida e penetração espermática, sobre a taxa de embriões produzidos e o perfil de transcritos destes embriões. Na segunda abordagem nós testamos a adição da rHSPA5 nos oito dias de CIV e comparamos com o tratamento na MIV e a associação dos dois tratamentos. Foi avaliado a taxa de embriões produzidos e a transcrição gênica destes embriões. Em suma, os resultados indicaram que a rHSPA5 é capaz de interagir com o COC durante a MIV e com os embriões em desenvolvimento no CIV. A proteína foi capaz de aumentar taxa de embriões produzidos quando adicionada nas últimas 4 horas de MIV, manter os níveis de ROS e GSH nos COCs, mas não aumentou o tempo de solubilidade da zonna-pellucida (ZP) ou alterou a porcentagem de monospermia, mas a rHSPA5 na MIV foi capaz de modular positivamente a expressão gênica dos embriões produzidos. Já a inclusão da proteína no CIV, apesar de haver uma pequena modulação na expressão gênica, não foi capaz de aumentar a taxa de embriões produzidos. Com os presentes achados, concluímos que, a HSPA5 pode interagir com o COC e ser capaz de exercer funções ainda não determinadas, assim como o uso da rHSPA5 nas últimas 4 horas da MIV pode otimizar a PIVE e potencializar a qualidade embrionária. Palavras-chave: GRP78, BiP, heat shock protein, MIV, CIV, PIVE ABSTRACT The HSPA5 protein (heat shock 70 kDa protein 5), also known as GRP78 (78 kDa glucose- regulated protein) and BiP (immunoglobulin-binding protein), is a chaperone from the endoplasmic reticulum with an important role in cellular homeostasis. Relatively recent, this protein was described as an oviductal fluid component as well as, its ability to hardly bind the spermatozoa, and then, increase the intracellular calcium abundance. The oviduct provides an appropriate environment for gametes fusion and early embryo development. Once the HSPA5 is one of the main heat shock proteins from oviductal fluid, we have a hypothesis that this protein is able to be beneficial on in vitro embryo production. Hypothesizing that HSPA5 can interact with cumulus-oocyte complex (COC) during the in vitro maturation (MIV) and, also with developing early embryo on in vitro culture (CIV), the primordial thematic of this thesis tested the HSPA addition on in vitro embryo production. First of all, we analyzed the HSPA5 effect on the last 4 hours of MIV under reactive oxygen species (ROS) and mitochondrial membrane potential (MMP) levels and on the subsequent embryos. The glutathione (GSH) levels on COC and culture medium, the zona-pellucida (ZP) solubility, sperm penetration, and last, the rate of embryo production and transcript profile of them. The second point was tested the HSPA5 effect on the eight days of CIV to compare with MIV treatments and an association of both treatments (on the last 4 hours of MIV and 8 days of CIV). We assessed the embryo rate and transcriptome profile of them. In conclusion, the results indicated that HSPA5 was able to interact with the COC and the developing early embryo. This protein was capable to increase the embryo rate on the MIV treatment and maintaining the ROS and GSH levels on COC, but it did not increase the ZP solubility or monospermy rate. Mainly, the HSPA5 was able to positively modulate the gene expression of embryos. On the other hand, the HSPA5 on the CIV did not alter the embryo rate and found a lower modulation on the transcript profile. We conclude that HSPA5 interacts with COC and develops an unknown role and also, the inclusion of rHSPA5 on the last 4 hours of MIV can improve the in vitro embryo production and enhance the embryo quality. Keywords: GRP78, BiP, heat shock protein, MIV, CIV, PIVE SUMÁRIO PREFÁCIO ................................................................................................................... 11 CAPÍTULO I ................................................................................................................ 12 The functionality of oviductal heat shock proteins on gametes and embryos: an integrative review ......................................................................................................... 13 ABSTRACT ................................................................................................................ 13 INTRODUCTION ...................................................................................................... 14 METHODOLOGY ..................................................................................................... 15 RESULTS ................................................................................................................... 17 DISCUSSION ............................................................................................................. 25 CONCLUSION ........................................................................................................... 29 REFERENCES ........................................................................................................... 30 CAPÍTULO II ............................................................................................................... 35 EVIDENCE THAT HEAT SHOCK PROTEIN A5 (HSPA5) PLAYS A ROLE DURING BOVINE IN VITRO EMBRYO PRODUCTION ..................................................... 36 ABSTRACT ................................................................................................................ 36 INTRODUCTION ...................................................................................................... 37 RESULTS ................................................................................................................... 39 DISCUSSION ............................................................................................................. 43 MATERIALS AND METHODS ................................................................................ 48 REFERENCES ........................................................................................................... 55 CAPÍTULO III ............................................................................................................. 59 AS NOVAS ESTRATÉGIAS DO USO DA rHSPA5 HUMANA NA PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS ........................................................................... 60 RESUMO .................................................................................................................... 60 INTRODUÇÃO .......................................................................................................... 61 MATERIAL E MÉTODO .......................................................................................... 63 RESULTADOS E DISCUSSÃO ................................................................................ 67 CONCLUSÃO ............................................................................................................ 79 REFERÊNCIAS .......................................................................................................... 80 CONSIDERAÇÕES FINAIS ....................................................................................... 83 ATIVIDADES ACADÊMICAS DESENVOLVIDAS DURANTE O DOUTORADO85 11 PREFÁCIO A presente tese a ser defendida pelo programa de Pós-graduação em Farmacologia e Biotecnologia está dividida em quatro sessões. A primeira, denominada Capítulo I, compreende uma Revisão Integrativa que traz um compilado de publicações que introduz a relação das Heat Shock proteins com os gametas e embriões, e mostra como essas proteínas, que estão presentes no oviduto, estão envolvidas com o processo reprodutivo. Essa revisão além de ser a base para uma futura revisão sistemática, foi utilizada como uma introdução à temática desta tese. Das duas partes subsequentes, o Capítulo II - “Evidences that heat shock protein A5 (HSPA5) plays role during bovine in vitro embryo production” e Capítulo III – “As novas estratégias do uso da rHSPA5 humana na produção in vitro de embriões”, correspondem um como uma proposta de manuscrito a ser submetido como artigo no periódico “Reproduction in Domestic Animals”, e o outro a descrição dos resultados recém obtidos pelo grupo, que será utilizado como base para o próximo artigo. Por fim, a sessão “Considerações finais” compreende as conclusões gerais (descrevendo de forma sucinta os resultados obtidos). Conforme normas do programa de Pós-graduação, o presente exemplar consiste na versão definitiva da tese a ser encaminhada à biblioteca e fará parte do conjunto de publicações do Instituto de Biociências de Botucatu da UNESP. No entanto, o manuscrito aqui apresentado está no prelo, mas não comprometido com a publicação em quaisquer periódicos, estando, assim, passível de correções e modificações por parte da banca de defesa. 30 estrous cycle. These chaperones can bind on spermatozoa and exert a fundamental role in the fertilization process but their action mechanism is not clear. Studies are necessary to completely understand the OF HSPs. 255 REFERENCES ABDI, Z. et al. The Effect of Hsp60 on Fertilization and Pre-Implantation Embryo Development in Mice: An in Vitro Study. Acta Endocrinol (Buchar), v. 15, n. 2, p. 153-157, Apr-Jun 2019. 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Nós avaliamos os níveis de ROS e MMP destes oócitos e dos subsequentes embriões produzidos, os níveis de GSH nos oócitos, células do cumulus e no meio MIV. Além disso, nós avaliamos o efeito da proteína sobre a solubilidade da ZP e a taxa de monospermia, a taxa e a expressão gênica dos embriões produzidos. A proteína não alterou o tempo de digestão da ZP e também não alterou a taxa de monospermia, demonstrando que aparentemente não produz efeito no enrijecimento da ZP. A rHSPA5 também não influenciou os níveis de ROS e GSH dos oócitos e embriões, mas diminuiu a atividade mitocondrial dos oócitos. Apesar desse resultado, a adição da proteína nas últimas 4 horas de MIV aumentou a taxa de embriões produzidos e foi capaz de modular positivamente a expressão de genes relacionados com a qualidade embrionária, demonstrando um efeito benéfico na produção in vitro e um forte potencial de inclusão no meio de MIV. Em um segundo momento nós adicionamos a rHSPA5 nos 8 dias de cultivo embrionário para comparar com o tratamento na MIV e com a associação destes (últimas 4 horas de MIV mais 8 dias de CIV). Foi avaliada a taxa de embriões produzido com os tratamentos, assim como o perfil de transcritos destes embriões. O tratamento no cultivo e associação dos tratamentos não aumentou a taxa de embriões produzidos e apresentou uma pequena modulação nos genes expressos, comparado ao grupo controle e tratamento nas últimas 4 horas de MIV. 84 Com esses resultados, nós acreditamos que apesar da HSPA5 conseguir interagir com os embriões, ela não parece ter um efeito essencial nestes, diferente do oócito, A proteína parece exercer uma função nos oócitos durante as últimas horas de maturação e foi eficaz quando sua forma recombinante humana foi adicionada ao meio de MIV, melhorando a produção embrionária e impactando a qualidade molecular destes embriões. 85 ATIVIDADES ACADÊMICAS DESENVOLVIDAS DURANTE O DOUTORADO Artigos completos publicados em periódicos 1. P.H. SANTOS; S.G. NUNES; F.F. FRANCHI; A.B. GIROTO; P.K. FONTES; A.C.S. CASTILHO. Expression of bta-miR-222 and LHCGR in bovine cultured granulosa cells: Impact of follicle deviation and regulation by FSH/insulin in vitro. 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GIROTO, ALAN B; FONTES, PATRÍCIA K; FRANCHI, FERNANDA F; DOS SANTOS, PRISCILA H; RAZZA, EDUARDO M; NOGUEIRA, MARCELO F. G; MAIOLI, MARCOS A; NOGUEIRA, GUILHERME P; NUNES, GIOVANA B; MINGOTI, GISELE Z; MARECO, EDSON A; CASTILHO, ANTHONY C. S. Use of pregnancy-associated plasma protein-A during oocyte in vitro maturation increases IGF-1 and affects the transcriptional profile of 86 cumulus cells and embryos from nelore cows. Molecular reproduction and development, v. 86, p. 1694, 2019. 5. PAOLA FRANCINI FÁVERO; VICTOR AUGUSTO VIEIRA DE LIMA; PRISCILA HELENA DOS SANTOS; ANA PAULA MARQUES ANDRADE; LEONARDO OLIVEIRA MENDES; FRANCIS LOPES PACAGNELLI; ANTHONY CÉSAR DE SOUZA CASTILHO. Differential fractal dimension is associated with extracellular matrix remodeling in developing bovine corpus luteum. Biochemical and Biophysical Research Communications. v. 516, 3, p. 888-893. 2019. 6. GOUVEIA NOGUEIRA, MARCELO; BERTOGNA GUILHERME, VITÓRIA; PRONUNCIATE, MICHELI; DOS SANTOS, PRISCILA; LIMA BEZERRA DA SILVA, DIOGO; ROCHA, JOSÉ Artificial Intelligence-Based Grading Quality of Bovine Blastocyst Digital Images: Direct Capture with Juxtaposed Lenses of Smartphone Camera and Stereomicroscope Ocular Lens. SENSORS. v.18, p.4440 - , 2018. 7. SANTOS, P.H.; SATRAPA, R.A.; FONTES, P.K.; FRANCHI, F.F.; RAZZA, E.M.; MANI, F.; NOGUEIRA, M.F.G.; BARROS, C.M.; CASTILHO, A.C.S. Effect of superstimulation on the expression of microRNAs and genes involved in steroidogenesis and ovulation in Nelore cows. THERIOGENOLOGY. , v.110, p.192 - 200, 2018. 8. RAZZA, EDUARDO M.; SUDANO, MATEUS J.; FONTES, PATRICIA K.; FRANCHI, FERNANDA F.; BELAZ, KATIA ROBERTA A.; SANTOS, PRISCILA H.; CASTILHO, ANTHONY C. S.; ROCHA, DANIELE F. O.; EBERLIN, MARCOS N.; MACHADO, MARIANA F.; NOGUEIRA, MARCELO F. G. 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Lipid profiles of follicular fluid from cows submitted to ovarian superstimulation. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X19311131?via%3Dihub#! https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X19311131?via%3Dihub#! https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X19311131?via%3Dihub#! https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X19311131?via%3Dihub#! https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X19311131?via%3Dihub#! https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X19311131?via%3Dihub#! https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X19311131?via%3Dihub#! https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X19311131?via%3Dihub#! https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X19311131?via%3Dihub#! 87 THERIOGENOLOGY. v.94, p.64 - 70, 2017. Capítulos de livros publicados 1. Castilho, Anthony C.S.; Fontes, Patrícia K.; FRANCHI, FERNANDA F.; SANTOS, PRISCILA H.; RAZZA, EDUARDO M. Renin-Angiotensin System on Reproductive Biology In: Renin-Angiotensin System - Past, Present and Future.1 ed.: InTech, 2017, p. 71-81. Trabalhos publicados em anais de eventos (resumo) 1. PIOLTINE, E. M.; COSTA, CAMILA BORTOLIERO; FRANCHI, F. F ; SANTOS, P. H.; NOGUEIRA, M. F. G. Molecular effects of TUDCA addition during in vitro maturation of bovine oocytes. In: Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, 2020, Online. XXXIV Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, 2020. 2. VIEIRA DE LIMA, VICTOR AUGUSTO; DELLAQUA, T. T; GIROTO, A. B; FRANCHI, F. F; SANTOS, P. H; CASTILHO, A. C. S. Impacto da adição da proteína sérica-a associada à prenhez (papp-a) durante a maturação oocitária in vitro sobre o perfil e metabolismo lipídico de embriões bovinos. In: Encontro Nacional de Ensino, Pesquisa e Extensão (ENEPE), 2020, Online. Encontro Nacional de Ensino, Pesquisa e Extensão (ENEPE), 2020. 3. DELLAQUA, T. T.; RAZZA, E. M.; GUILHERME, V. B.; GIROTO, A. B.; NEVES, S.; SANTOS, P.H.; SUDANO, M. J.; MULLER, D. B.; CASTILHO, A. C. S. Addition of pregnancy-associated plasma proteins-A during in vitro maturation did not impact the lipid content of in vitro-matured bovine oocytes In: 10 International remunants reproduction symposium, 2018, Foz do Iguaçu. Proceedings of the 10th International Ruminant Reproduction Symposium (IRRS 2018). 2018. v.15. p.1055 - 4. CHAVES, M. P.; SANTOS, P.H.; MENDES, L. O.; CASTILHO, A. C. S. 88 Differential expression of LH receptor, LHR mRNA binding protein (LRBP) and bta-miR- 222 in the developing bovine ovary In: 10th International Ruminant Reproduction Symposium, 2018, Foz do Iguaçu. Proceedings of the 10th International Ruminant Reproduction Symposium (IRRS 2018). 2018. v.15. p.1066 - 5. FRANCHI, F. F.; SANTOS, P.H.; FONTES, P. K.; RAZZA, E. M.; MARECO, E.; NOGUEIRA, M. F. G.; CASTILHO, A. C. S. Equine chorionic gonadotropin (eCG) impacts the transcriptional profile of genes involved with competence of cumulus-oocyte complexes and embryo quality in superstimulated Nelore cows. In: 10th International Ruminant Reproduction Symposium, 2018, Foz do Iguaçu. Proceedings of the 10th International Ruminant Reproduction Symposium. 2018. v.15. p.1122 - 6. GIROTO, A. B.; AMORIS, J. V.; FRANCHI, F. F.; FONTES, P. K.; SANTOS, P.H.; MAIOLI, M. A.; NOGUEIRA, G. O.; NUNES, G. B.; MINGOTI, G. Z.; NOGUEIRA, M. F. G.; CASTILHO, A. C. S. Evidence that pregnancy-associated plasma protein A (PAPP-A) plays a role in bovine in vitro- embryo production In: 10th International Ruminant Reproduction Symposium, 2018, Foz do Iguaçu. Proceedings of the 10th International Ruminant Reproduction Symposium. 2018. v.15. p.1123 - 7. SANTOS, P.H.; FRANCHI, F. F.; MENDES, L. O.; FONTES, P. K.; PINHEIRO, V. G.; CASTILHO, A. C. S. Expression of bta-miR-222 in bovine granulosa cells: effect of follicle deviation and regulation by FSH/insulin in vitro. In: XXXII Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society (SBTE), 2018, Florianópolis. Proceedings of the 32nd Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society. 2018. v.15. p.453 - 8. SANTOS, P.H.; FONTES, P. K.; FRANCHI, F. F.; GIROTO, A. B.; NUNES, S. G.; GUILHERME, V. B.; CASTILHO, A. C. S. HSPA5 and in vitro embryo production: effect of addition of the protein during in vitro embryo culture in cattle. In: 10th International Ruminant Reproduction Symposium, 2018, Foz do Iguaçu. Proceedings of the 10th International Ruminant Reproduction Symposium. 2018. v.15. 89 p.1070 - 9. SANTOS, P. H.; FONTES, P. K.; FRANCHI, F. F.; GUILHERME, V. B.; NOGUEIRA, M. F. G.; BARROS, C. M.; CASTILHO, A. C. S. Changes in MicroRNAs expression in granulosa cells from superstimulated cows In: XXXI Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society, Cabo de Santo Agostinho. Proceedings of the 31st Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society. 2017. v.15. p.786 - 10. FRANCHI, F. F.; FONTES, P. K.; SANTOS, P.H.; RAZZA, E. M.; RODRIGUES, R. B.; CARVALHO, A.; NOGUEIRA, M. F. G.; CASTILHO, A. C. S. Pregnancy-associated plasma protein-A (PAPP-A) added during in vitro maturation: effects on meiosis progression, oocyte DNA fragmentation and gene expression in bovine cumulus-oocyte complexes. In: XXXI Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society, 2017, Cabo de Santo Agostinho. Proceedings of the 31st Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society. , 2017. v.15. p.830 - Demais produções bibliográficas 1. GUILHERME, V. B.; PRONUNCIATE, M.; SANTOS, P.H.; CINICIATO, D.S.; TAKAHASHI, M.B; ROCHA, J. C.; NOGUEIRA, M. F. G. Distinct Sources of a Bovine Blastocyst Digital Image do not Produce the Same Classification by a Previously Trained Software using Artificial Neural Network. preprint. Cold Spring Harbor, NY, USA:Cold Spring Harbor Laboratory, 2018. (Outra produção bibliográfica) Demais produções técnicas 1. SANTOS, PRISCILA H. Obtenção dos ovócitos a partir do líquido folicular, 2021. Aula ministrada para alunos da Pós-graduação em Reprodução Assistida Núcleo Semear 2. SANTOS, PRISCILA H. Cultivo e Seleção embrionária, 2021. Aula ministrada para alunos 90 da Pós-graduação em Reprodução Assistida Núcleo Semear 3. SANTOS, PRISCILA H.A atuação do biomédico na Reprodução Humana Assistida. Palestra ministrada para a V Jornada acadêmica de Biomedicina e Farmácia da Faculdade Marechal Rondon 4. GIROTO, A. B.; PIOLTINE, E. M.; SANTOS, P.H. Produção in vitro de embriões bovinos: propósito da técnica, 2017. Curso de curta duração ministrado. Participação em banca examinadora 1. SANTOS, P. H.. Participação em banca de Aline Gonçalves Sawa. Efeito do TUDCA sobre a progressão da meiose e a concentração de espécies reativas de oxigênio na maturação in vitro de complexos cumulus-oócito bovinos. 2018. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Engenharia de Biotecnologia) - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho. 2. SANTOS, P. H.. Participação em banca de Thaisy Tino Dellaqua. Efeitos da adição da proteína sérica A associada à prenhez (PAPP-A) sobre o perfil e metabolismo lipídico de oócitos bovinos maturados in vitro. 2018. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Engenharia de Biotecnologia) - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho. 3. SANTOS, P. H.; GARCIA, P. C.; FONTES, P. K.. Participação em banca de Natalia Pereira.Adição da proteína GRP78 na etapa de fertilização in vitro de embriões bovino: benefícios na produção in vitro de embriões bovino. 2017. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biomedicina) - Universidade Paulista. 4. SANTOS, P. H.. Participação em banca de Suellen Neves. Trabalho de Conclusão de Curso e Relatório de Estágio Supervisionado. 2017. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Medicina Veterinária) - UniCesumar. http://lattes.cnpq.br/7099833345225219 http://lattes.cnpq.br/7099833345225219 http://lattes.cnpq.br/7099833345225219 http://lattes.cnpq.br/7099833345225219 91 5. SANTOS, P. H.. Participação em banca de Alexandre Mendes de Almeida Junior.Efeitos da utilização do ácido tauroursodesoxicólico sobre a progressão meiótica na maturação in vitro de oócitos bovinos. 2017. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Engenharia de Biotecnologia) - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho. 6. SANTOS, P. H.. Participação em banca de Camila Motta Boverio. Caracterização da cinética de expressão dos genes dos receptores de FSH, LH e AREG durante a maturação in vitro de complexos cumulus-oócito bovinos. 2017. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Engenharia de Biotecnologia) - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho. http://lattes.cnpq.br/7099833345225219 http://lattes.cnpq.br/7099833345225219 1712a8618ae424834aeb50c8e44ad2cf8f86bce6c402d8ee4e17b474593a0d08.pdf 62617b36dae6023b0453f4fe3c749a8216dbfa25bad18beccabcaf0a38814651.pdf 1712a8618ae424834aeb50c8e44ad2cf8f86bce6c402d8ee4e17b474593a0d08.pdf