MMaarrccooss   JJaaccoobboovvii ttzz   
 
 
 
 
 
 
 

BIOLOGIA MOLECULAR-TÉCNICA PCR. MONITORAÇÃO DO 
EFEITO DE CURATIVOS DE DEMORA À BASE DE HIDRÓXIDO 
DE CÁLCIO NA MICROBIOTA DE CANAIS RADICULARES EM 
DENTES DE HUMANOS PORTADORES DE LESÃO PERIAPICAL 

CRÔNICA 
 
 
 
 
 
 
 

Tese apresentada à Faculdade de Odontologia de 

Araraquara, da Universidade Estadual Paulista, para a 

obtenção do título de Doutor em Endodontia. 

 
Orientadora: Profa. Dra. Izabel Yoko Ito 

 
 
 
 
 
 
 
 
 

ARARAQUARA 
2003 



 2

DDaaddooss   CCuurrrrii ccuull aarreess   
 

MMaarrccooss  JJaaccoobboovviittzz  
 
 
 
 
 

NASCIMENTO 3.7.1965 – RECIFE/PE 

FILIAÇÃO David Jacobovitz Netto  

Lêda Jacobovitz  

  

1984/1986 Curso de Graduação  

 Faculdade de Odontologia da Universidade Federal de 

Pernambuco 

  

1987/1989 Curso de Graduação  

 Faculdade de Odontologia de Araraquara-UNESP 

  

1990/1991 Curso  de  Pós-Graduação em Endodontia, nível de Especial ização 

na Escola de Aperfeiçoamento Prof issional da Associação 

Paulista de Cirurgiões Dentistas - Regional de Araraquara 

  

1992/1996 Curso de Pós-Graduação em Endodontia, nível de Mestrado, na 

Faculdade de Odontologia de Araraquara-UNESP 

  

1997/2003 Professor do Curso de Especial ização em Endodontia da Escola 

de Aperfeiçoamento Profissional da Associação Paulista de 

Cirurgiões Dentistas - Regional de São Carlos 

  

1999/2003 Curso de Pós-Graduação em Endodontia, nível de Doutorado, na 

Faculdade de Odontologia de Araraquara da Universidade 

Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” 



 3

Dedicatória 

 
Este trabalho é dedicado a meus pais David Jacobovitz Netto  

( in memoriam) e Lêda Jacobovitz .  Aqueles que me possibi l i taram a 

vida, o desenvolvimento, a formação, o equilíbrio e o permanente estado de 

fel icidade interna, apesar das adversidades que possam aparecer. Obrigado pela 

escola, obrigado pelo exemplo, obrigado pelos pi lares. 
 

 

É, ainda, dedicado a outra modalidade de “pais”: aqueles que transmitem 

conhecimento, f i losof ia e formação. Personal idades aqui latadas pela intel igência, 

sabedoria e amor ao próximo. Ícones que carregam em suas costas e corações, uma 

legião de indivíduos formados e envolvidos na luta em prol  de uma Odontologia de 

ponta. Parece simples, mas sem esquecermos que para tal propósito há que se optar 

pela total  absorção à vida acadêmica em detr imento da  t ranqüi l idade de uma vida 

comum. 

Prof. Dr. Mario Roberto Leonardo , Profa. 
Dra. Izabel Yoko Ito , Profa. Dra. Lea 
Assed Bezerra da Silva :  obrigado pela escola, obrigado pelo 

exemplo, obrigado pelos pi lares. 
 

 

Finalmente, este trabalho é dedicado a aquelas pessoas também responsáveis pela 

minha plenitude, vontade de ir à luta e por aquele sorriso interior que carrego ( já 

referido alí  em cima, no primeiro parágrafo): Daniela  ,  minha esposa, 

Bruno  meu f i lho, e, ao que virá :  obrigado pela escola, obrigado pelo 

exemplo, obrigado pelos pi lares. 



 4

Agradecimentos 
 

 

Professores da Discipl ina de Endodontia do Departamento de Odontologia 

Restauradora da Faculdade de Odontologia de Araraquara-UNESP: Prof. 
Dr. Mário Roberto Leonardo , Prof. Dr. 
Roberto Miranda Esberard , Prof. Dr. 
Idomeo Bonetti Filho , Prof. Dr. Renato de 
Toledo Leonardo , Prof. Dr. Mário Tanomaru 
Filho , Prof. Dr. Fabio Luiz Camargo 
Vilella Berbert ,  pelo espír i to fraternal, pela dedicação e pela genti l  

acolh ida 

 

 

Prof. Dr. Ariano Penteado Simões Filho  ( in 

memoriam) e Prof. Dr. Jayme Maurício Leal . 

Entusiastas da Endodontia. Também responsáveis por esta minha conquista. 

 

 

Prof. Dr. Reginaldo Bruno Gonçalves  e da 

colega C.D. Marlise Inêz Klein  da Discipl ina de Microbiologia do 

Departamento de Diagnóst ico Oral,  FOP-UNICAMP - Piracicaba-SP pela cessão de 

espaço físico, disponibi l idade pessoal e “ombro”, quando da anál ise laboratorial  dos 

espécimes objetos deste estudo. Apesar da fase atribulada pela qual passavam, não 

mediram esforços para assist i r  à concretização do presente trabalho. A vocês, meu 

respeito e admiração. 



 5

Profa. Gisele Faria  do Departamento de Clínica Infanti l  da 

Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto -USP, pela análise estatística dos dados 

aqui apresentados. Grato pela disposição e amizade. 
 

 

Prof. Dr. Otavio Henrique Thiemann  do Grupo de 

Cristalografia (GC) do IFSC (USP-Campus de S. Carlos) e Profa. Dra. 
Ana Paula Ulian de Araújo  do  Grupo de Biofísica 

Molecular (BIO) do IFSC (USP-Campus de São Carlos) pelos meus primeiros passos 

nesta empreitada. 
 

 

Prof. Dr. Raphael Carlos Comelli Lia – 
Lelo .  Magnitude e simpl ic idade em um só indivíduo. Grato pela acolhida e 

arranque in ic ia l  em minha v ida acadêmica. 
 

 

Prof. Dr. Carlos Benatti Neto  e Profa. 
Dra. Maria Rita Brancini de Oliveira : grato 

pelas oportunidades que aqui me conduziram. Grato pelo espaço que me deram em  

seus corações. 
 

 

Ao amigo, C.D. Paulo Tadeu da Silva : por todas as lutas 

travadas em conjunto. 
 

 

 

 



 6

Funcionários do Departamento de Odontologia Restauradora: Sra. Célia 
Regina Fachine Sanches Silva ,  pela amizade e 

prof issional ismo com que conduziu a digitação deste trabalho, e a Pedro 
Decário , Mercedes Emilia Rimoldi Guellis , 

Ivone Fornazari Domingues  e Edison Luiz 
Mori . 

 

Seção de Pos-Graduação - Faculdade de Odontologia de Araraquara-UNESP: 

Mara Cândida Munhoz do Amaral , Rosangela 
Ap. Silva dos Santos , Silvia Regina 
Rodrigues Soares de Azevedo e Vera Lucia 
Perruci Roque . 

 

Funcionários da Bibl ioteca da Faculdade de Odontologia de Araraquara-UNESP: 

Maria José Peron ,  pelo empenho sempre acompanhado de um 

sorriso, quando da revisão catalográfica deste trabalho, e demais amigos: 
Maria Helena Matsumoto Komatsi Leves, 
Ceres Maria Carvalho Galvão de Freitas, 
Marley Cristina Chiusoli Montagnoli, 
Eliane Cristina Marques de Mendonça 
Spera, Maria Aparecida Capela Carvalho, 
Odete Aparecida Camilo, Adriano Ferreira 
Luiz, Eliane Maria Sanches Scarso, Maria 
Inês Carlos, Silvia Helena Acquarone 
Lavras . 

 

 



 7

Profa. Dra. Miriam Aparecida Onofre  e Sra. 

Regina Sgobbi ,  do Comitê de Ética Profissional (CEP) da Faculdade de 

Odontologia de Araraquara, pela receptividade, orientação, paciência e carinho. 

 

Aos colegas de turma do Curso de Pós Graduação em Odontologia, nível Doutorado, 

área de Endodontia da Faculdade de Odontologia de Araraquara-UNESP (turma 

1999-2003): Antônio Roberto Salgado , Carlos 
Augusto Santos César , Celso Emanoel de 
Souza Queiroz , Etevaldo Matos Maia Campos , 

Janir Alves Soares , Marcone Reis Luiz . 

 

Aos demais colegas dos Curso de Pós-
Graduação  da Faculdade de Odontologia de Araraquara-UNESP. 

 

Aos alunos do Curso de Especialização em 
Endodontia  da EAP-APCD, Regional de São Carlos, pelo apoio direto neste 

trabalho, carinho e amizade. 



 8

Agradecimentos Institucionais 
 

Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” (UNESP), na pessoa do 

Digníssimo Reitor Prof. Dr. José Carlos Souza 
Trindade  

 

Faculdade de Odontologia de Araraquara-UNESP, na pessoa do Digníssimo Diretor, 

Prof. Dr. Ricardo Samih Georges Abi 
Rached . 

 

Grupo de Biofísica Molecular  (BIO) do Instituto de 

Física de São Carlos - Universidade de São Paulo (USP), Campus de São Carlos. 

 

Coordenação de Aperfeiçoamento de 
Pessoal de Nível Superior  (CAPES) pelo auxíl io 

pecuniár io. 

 

Disciplina de Microbiologia  do Departamento de 

Anál ises Clínicas, Toxicológicas e Bromatológicas - Faculdade de Ciências 

Farmacêuticas de Ribeirão Preto -USP, Ribeirão Preto, SP. 

 

Disciplina de Microbiologia  do Depto de Diagnóstico 

Oral ,  FOP-UNICAMP  Piracicaba-SP 

 

Associação Paulista de Cirurgiões Dentistas - Regional de São Carlos, na pessoa da 

digníssima presidente Dra. Wilma Yukiko Kawakame . 

 

E a todos os demais  que contr ibuíram direta ou indiretamente na 

confec ção deste trabalho. 



 9

SSuumm áárrii oo   
 

INTRODUÇÃO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   10 

 

REVISÃO DA LITERATURA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   19 

 

PROPOSIÇÃO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   75 

 

MATERIAL E MÉTODO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   76 

 

RESULTADO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   87 

 

DISCUSSÃO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   92 

 

CONCLUSÃO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  104 

 

REFERÊNCIAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  105 

 

Anexo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  133 

 

Apêndice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  136 

 

Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  143 

 

Abstract . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .  144 

 



 10

Introdução 

 

A Endodontia é a ciência e arte que envolve a etiologia, 

prevenção, diagnóstico e tratamento das alterações patológicas da polpa 

e de suas repercussões na região periapical e conseqüentemente no 

organismo (Leonardo & Leal73,  1998). 

Quando o complexo dentino pulpar é agredido pela cárie 

dentária a polpa pode reagir de várias maneiras à presença dos 

microrganismos, podendo chegar a um processo inflamatório irreversível, 

sempre acompanhado por resposta imunoinflamatória periapical. Essa 

reação, de cunho defensivo, pode tornar-se letal a este órgão devido às 

alterações vasculares, somadas às suas peculiaridades anatômicas (a 

polpa é cercada por paredes inexpansíveis). Ocorrendo a necrose pulpar, 

surge um ambiente propício à invasão microbiana (gangrena), de 

microrganismos provenientes principalmente da cavidade bucal, através 

das lesões de cárie ou restaurações deficientes (Sundqvist139,1976, 

Sundqvist140,1992, Sundqvist141,1994). Esse processo, em fase mais 

tardia, resulta em consumo de oxigênio por espécies aeróbias, e 

principalmente por interações nutricionais entre espécies, gerando um 

shift microbiano e levando futuramente, à instalação de uma microbiota 

prevalentemente anaeróbia estrita ou facultativa (Sundqvist141,  1994; 

Haapasalo et al.56). A atividade reabsortiva na região periapical ocorre 



 11

concomitantemente com o fluxo de produtos, subprodutos, toxinas e 

fragmentos de células microbianas para este sítio, gerando destruição 

óssea resultante da interação entre os agentes patogênicos e o arsenal 

de defesa do hospedeiro, constituído de células imunocompetentes ativas 

e seus produtos, caracterizando as lesões periapicais 1,17, 97 

A terapêutica endodôntica deve ser instituída, de acordo 

com cada fase da patogênese pulpo-periapical, assim, diagnosticar é 

preciso, para que se faça o uso correto e direcionado de agentes 

medicamentosos (Leonardo & Leal73,  1998). 

Os recentes avanços da Ciência e Tecnologia vêm 

imprimindo marcantes transformações nas diversas áreas do 

conhecimento. Grandes conquistas podem ser constatadas nas ciências 

aeroespaciais, bélica, e da informática. Em particular, as ciências 

biológicas dispõem atualmente de novas tecnologias, que permitem 

métodos de pesquisa revolucionários, entre estes, a bioengenharia que 

traz consigo novos materiais e instrumentos. A biologia molecular sinaliza 

com grandes avanços, possibil i tando a compreensão da “chave da vida”, o 

DNA, possibil itando a execução de técnicas sofisticadas como a própria 

clonagem de seres vivos. Na taxonomia, as técnicas de biologia molecular 

estão levando a descobertas de novas espécies de microrganismos, e 

consequentemente, de novas classificações, a partir de seqüências de 

nucleotídeos (constituintes dos ácidos nucléicos). 

A Endodontia tecnológica, que une aspectos técnicos 



 12

baseados em conhecimentos relacionados às ciências básicas, muito se 

beneficia deste contexto. Os aspectos microbiológicos que envolvem a 

patogênese da polpa e periápice,são estudados exaustivamente para 

determinação e conhecimento de espécies microbianas predominantes no 

sistema de canais radiculares infectados, norteando o tipo de terapêutica 

a ser empregada. 

Os líderes educacionais, responsáveis pela ciência 

endodôntica, deveriam ter um forte compromisso com o respeito ético ao 

paciente, isto é, buscar o elo que está sendo perdido entre a tecnologia e 

o desenvolvimento técnico desta especialidade. 

Assim, o aprimoramento de estratégias eficazes para a 

terapia endodôntica em casos de dentes portadores de gangrena pulpar e 

alterações imunoinflamatórias do periápice, depende diretamente da 

compreensão da microbiota que infecta o sistema de canais radiculares. 

À partir da análise pioneira de Mil ler86 da microbiota 

endodôntica em 1894, diversas são as técnicas, ao longo do século 

passado, uti l izadas na identif icação da microbiota dos canais radiculares: 

como cultura (Mil ler86, 1894; Brown & Rudolph20, 1957; Winkler & van 

Amerongen152, 1959; Keudell et al.69, 1976; Byström & Sundqvist21,  1981; 

Tronstad et al.147,  1987; Abou-Rass & Bogen1;  1998), microscopia de 

fase/campo escuro (Mil ler86, 1894; Brown & Rudolph20,  1957), 

Imunofluorescência (Assed8,  1993; Bohorques18,  1994), coloração de 

Brown & Brenn específicas para evidenciação de bactérias em 



 13

microscópio óptico (Bohorques18, 1994; Ribeiro111,  1997; Godoy47,  1999), 

microscópio eletrônico de varredura (Nair97, 1987; Tronstad et al146,  1990; 

Molven et al.89, 1991; Leonardo et al.76,  2002). 

Os microrganismos constituintes da microbiota de canais 

radiculares infectados, somente puderam ser isolados e estudados após o 

desenvolvimento  de técnicas de colheita, transporte e cultura (Brown & 

Rudolph20, 1957; Socransky et al.132,  1959; Winkler & van Amerongen152, 

1959; Sundqvist139,  1976; Haapasalo56, 1986; Sundqvist140,  1992). 

Até a década de 70, as bactérias mais comumente isoladas 

de canais radiculares infectados eram descritas como aeróbias e 

anaeróbias facultativas, como Streptococcus α  hemolíticos, Streptococcus 

γ hemolít icos, Enterococcus, e menos freqüentemente S. aureus e 

Streptococcus β  hemolíticos. As técnicas de cultura eram inadequadas 

para o isolamento de anaeróbios estri tos. Com o aprimoramento de 

técnicas de culturas em anaerobiose pôde-se constatar a grande 

representatividade de espécies bacterianas anaeróbias estritas na 

microbiota das infecções endodônticas (Kantz & Henry67, 1974; Keudell et 

al.69, 1976; Sundqvist140, 1992; Sundqvist141, 1994; Ribeiro111,  1997). 

A el iminação da microbiota de canais radiculares 

infectados,tem sido motivo de preocupação na Endodontia. Numerosos 

são os relatos sobre a avaliação da eficácia da instrumentação, soluções 

irr igadoras, e curativos de demora (Heithersay59, 1975; Tronstad et al.148, 

1980; Bystrom & Sundqvist21, 1981; Anthony et al.6, 1982; Bystrom et 



 14

al.22, 1985; Barbosa et al.12, 1997; Almyroudi et al.4, 2002; Berbert et 

al.14,  2002; Gomes et al.48, 2002; Peters & Wesselink105,  2002; Tanomaru 

Filho et al.144,  2002). 

É sabido que, bactérias podem sobreviver aos efeitos do 

preparo biomecânico de canais radiculares de dentes com necrose pulpar 

e portadores de lesão periapical crônica, representando fator de risco 

para o prognóstico da terapêutica instituída. Assim uma estratégia 

antimicrobiana deve ser direcionada para a el iminação de microrganismos 

residuais, erradicando a infecção, reduzindo os riscos de fracasso 

(Leonardo 71,  72,  1967, 1975). Desta forma, o uso de medicação tópica 

intracanal, entre sessões, deve ser considerado essencial como 

complementação terapêutica na terapia endodôntica (Leonardo et al.75, 

1992). 

O hidróxido de cálcio, dentre as substâncias medicamentosas 

empregadas  como curativo de demora em endodontia, tem sido a mais indicada, 

devido às suas propriedades biológicas, tanto para tratamentos conservadores 

do tecido pulpar, como para tratamento de lesões periapicais crônicas. Porém, 

necessita de tempo para que, através da difusão dentinária dos íons hidroxil ia 

possa atingir a microbiota localizada no sistema de canais radiculares, 

biof i lme, cementoplastos além dos microrganismos da infecção extra-radicular, 

exercendo sua ação deletéria sobre estes (Horiba et al .62; 1990; Nerwich et 

al.100, 1993; Nagaoka et al.96, 1995; Ribeiro 111, 1997; Silveira119,  1997), e seus 

produtos (Safavi & Nichols115, 1993, Safavi & Nichols116, 1994; Nelson Filho 

98,99,  2000, 2002). A eficácia da terapêutica empregada com medicamentos de 



 15

uti l ização intracanal deve também ser monitorada (Leonardo72, 1975; Cvek et 

al.28, 1976; Ørstavik104, 1981; Stevens & Grossman 135,1983; Bystrom et al.22,  

1985; Ferraresi & Ito 40, 1990; Foreman & Barnes42, 1990; Sjogren et al.130,  

1991; Stuart et al.136, 1991; Chong & Pitt Ford 25, 1992; Fava39, 1993; Leonardo 

et. al74, 1994; Estrela et al.38,36 ,37 , 1994, 1998, 1999; Siqueira & Uzeda121,  

1996; Alencar et al.3, 1997; Barbosa et al.12, 1997; Silveira119, 1997; Siqueira 

& Uzeda122, 1997; Siren et al.129, 1997; Leonard o et al.79, 1999).  

Alguns estudos de identif icação de microrganismos da 

cavidade bucal, com o emprego das novas técnicas moleculares, apontam 

para a presença de espécies bacterianas jamais cult ivadas naquelas 

lesões específicas, demonstrando maior acuracidade que quaisquer das 

técnicas util izadas até hoje (Conrads et al.26, 1997; Sachs & Hotzel114, 

1998; Gonçalves & Mouton52, 1999; Siqueira Jr. et al.124, 2000; Fouad et 

al.41,  2002; Munson et al.95,  2002). 

Para Kantz & Henry67 (1974), antes do advento das 

inovações das técnicas de coleta e cultura de microrganismos em 

anaerobiose, todos exames microbiológicos de canais radiculares 

falharam no isolamento de bactérias anaeróbias em níveis consideráveis, 

pois aqueles exames eram baseados na coloração de Gram, morfologia da 

colônia (culturas em aerobiose) e testes bioquímicos. Util izando a nova 

metodologia de cultura em anaerobiose, identif icaram Actinomyces 

israeli i , Bacteroides fragil is, Bacteroides melaninogenicus, Campylobacter 

sputorum, Eubacterium alactolyticum, Fusobacterium fusiformis, 

Fusobacterium varium, Peptococcus morbil lorum, Propionibacterium 



 16

acnes, Veil lonella parvula, além de várias outras. Nesse estudo não 

encontraram outras espécies de Actinomyces, bacilos anaeróbios 

formadores de esporos e treponemas. 

De acordo com Harper-Owen et al58 (1999), as espécies 

cultiváveis podem ser consideradas apenas nos estudos qualitativos de 

microrganismos. Em 1963, Socransky et al.  132 já alertavam para a 

imprecisão quanto às espécies que participam da colonização e patologia 

pulpar e periapical, afirmando naquela ocasião que 50% da microbiota 

oral não podiam ser cult ivadas. 

O desenvolvimento das técnicas moleculares trouxe um 

grande avanço para a microbiologia, podendo ser uti l izadas na endodontia 

para identificação de espécies bacterianas relacionadas ou não com a 

patogênese pulpar e periapical, até então não evidenciadas por meio das 

técnicas disponíveis (Menard & Mouton84, 1993; Conrads et al.26,  1997; 

Bogen & Slots 17,  1999; Gonçalves & Mouton52,  1999; Gonçalves et al.53,54,  

1999; Gatti et al.45, 2000; Siqueira et al.128, 2000; Sunde et al.138,  2000; 

Jung et al.65, 2001; Rolph et al.113 2001; Fouad et al.41,  2002; Munson et 

al.95, 2002). Exemplo disto é Bacteroides forsythus, jamais descrito na 

l iteratura como participante das lesões endodônticas ou periodontais, até 

o emprego de biologia molecular, que evidencia esta espécie bacteriana 

como sendo um dos microrganismos mais freqüentes nestas patologias 

(Guillot & Mouton55, 1996; Conrads et al.26,  1997; Meurman et al.85 1997; 

Gonçalves & Mouton52, 1999; Gatti et al.45, 2000; Siqueira Jr. et al.128, 



 17

2000, Sunde et al.138 2000). 

A técnica PCR ("polymerase chain reaction", ou reação em 

cadeia da polimerase), é um dos métodos de biologia molecular idealizada 

em 1983 por Mull is et al.34,92 ,93 ,94, que visa sintetizar, à partir de uma tira 

matriz de DNA proveniente de qualquer amostra biológica, por meio de 

reação enzimática in vitro,  amplif icações em grandes quantidades de 

seqüências específicas seccionadas daquele DNA, denominadas de 

amplicons ou produtos do PCR. A técnica permite identif icação da origem 

da amostra, com alto grau de sensibil idade. 

Diversas áreas da Ciência beneficiaram -se das aplicações 

do PCR. Útil na identif icação de microrganismos causadores de 

enfermidades; diagnóstico de doenças genéticas; na medicina forense, 

como meio para análise de vestígios mínimos de material biológico, 

viabil izando a identif icação de indivíduo do qual a amostra se originou 

(Alberts et al.2,  1997); pesquisa da evolução de espécies, além de outros 

empregos. 

Na Microbiologia sua importância é notória, identif icando 

taxonomicamente microrganismos, uma vez que os níveis de DNA 

microbiano presentes em amostras clínicas são freqüentemente muito 

baixos (Fredricks & Relman44, 1999). Devido ao fato de que cada 

microrganismo tem um único complemento de DNA (ou RNA), estas 

moléculas podem funcionar como uma “impressão digital”,  ajudando em 

suas identificações (Jung et al.64,  2000). 



 18

A vantagem da técnica está na rápida execução, e pode 

ser encarada como ferramenta adicional: se a adoção de testes 

bacteriológicos (baseados em culturas), outrora refutados (Leonardo72, 

1975), por não representar com exatidão correspondência com a 

microbiota endodôntica em tempo real, nos dias de hoje, pode-se lançar 

mão destas técnicas como complemento,  no  sentido de identif icar a 

microbiota com agil idade, e direcionar o arsenal terapêutico contra 

microrganismos patogênicos (Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus 

faecalis,  leveduras29 e bactérias entéricas com resistência intrínseca). 

Chong & Pitt Ford25 (1992) em revisão de l i teratura sobre 

curativos de demora em Endodontia, apontaram para a necessidade de 

testes bacteriológicos em casos refratários ao tratamento endodôntico, 

auxi l iando na seleção da medicação mais apropriada. A eficácia de novos 

medicamentos empregados como curat ivo de demora, pode (e deve) ser 

checada por estas técnicas. 

Os implementos desenvolvidos em decorrência de grandes 

saltos tecnológicos da Ciência, são de grande valor no tratamento de 

canais radiculares. Com o advento das técnicas moleculares, vislumbra-se 

uma nova fase da Endodontia tecnológica, onde o operador possa estar 

identif icando microbiota específica das pulpoperiapicopatias, com 

segurança e precisão, direcionando terapias apropriadas e elevando 

índices de sucesso de seus tratamentos. 

 



 19

Revisão da literatura 

 

§ M i c r o b i o t a  d a s  p a t o l o g i a s  p u l p a r e s  e  p e r i a p i c a i s  

 

Mi l ler86 (1894), em trabalho pioneiro, inicia uma l inha de 

estudo das patologias pulpares, correlaciondo-as à presença de 

bactérias. Profetizou que a nova abordagem, relacionando 

microrganismos às patologias pulpares, poderia apresentar não apenas 

valor experimental, mas aplicabil idade no tratamento de condições 

patológicas  dos dentes e tecidos vizinhos.  

 

Brown & Rudolph20 (1957), selecionaram 70 pacientes 

cujos dentes apresentavam ausência de: exposição pulpar, lesões 

cariosas profundas, defeitos anatômicos, restaurações extensas, 

envolvimento periodontal e história de trauma, para estudo da microbiota 

pulpar. Efetuando culturas em aerobiose e anaerobiose e avaliação direta 

dos espécimes por microscopia de fase/contraste e campo escuro, 

observaram microrganismos em 90% dos casos. Apontaram para o fato 

que microrganismos não cult iváveis (anaeróbios estritos), podem ser 

observados na microscopia, enfatizando a importância das técnicas 

alternativas na evidenciação das bactérias. Pela cultura encontraram 

51,3% de anaeróbios facultativos, 23,9% de anaeróbios obrigatórios e 



 20

23,9% de aeróbios respectivamente presentes nos canais radiculares 

infectados. 

 

Winkler & van Amerongen152 (1959), apresentaram os 

resultados bacteriológicos de 4000 culturas de canais radiculares. 

Relataram o isolamento de estreptococos em 63% dos casos: hemolít icos, 

estreptococos facultativos, principalmente, perte ncentes aos grupos 

sorológicos F, G e C, e estreptococos do grupo D (especialmente o 

Streptococcus l iquefaciens)  e Streptococcus mitis. 

 

Kakehashi et al.66 (1965), observaram as alterações 

patológicas resultantes de exposições pulpares em ratos germ-free , 

comparadas com aquelas em ratos convencionais com microbiota normal. 

Os períodos pós-operatórios analisados variaram de 1 a 42 dias. Os 

animais foram mortos e as maxilas removidas processadas e corados 

pelas técnicas hematoxil ina-eosina, tr icrômico de Masson e Brown & 

Brenn. Em animais convencionais foi observada, a partir do oitavo dia, 

vital idade pulpar apenas na metade apical. Em casos de períodos mais 

prolongados, constataram necrose pulpar total com formação de 

granulomas e abscessos em todos espécimes. Em contrapartida, nos 

animais germ-free ,  não observaram necrose pulpar, granulomas apicais 

ou abscessos. A formação de ponte dentinária foi vista à partir do 14o dia. 

Concluíram, então, que a presença ou ausência de microbiota é o fator 



 21

primordial na reparação pulpar em roedores. 

 

Leonardo71 (1967), salientando as regiões do sistema de 

canais radiculares em que os microrganismos podem se propagar (zonas 

de propagação bacteriana), teceu considerações em torno dos métodos 

util izados para tratamento de canais radiculares de dentes despulpados e 

infectados. Evidenciou o valor temporário do preparo biomecânico na 

desinfecção, sugerindo a importância da aplicação tópica de medicação, 

tornando o canal radicular propício à recepção do passo subseqüente: a 

obturação.  

 

Berg & Nord15 (1973), em estudo in vivo, uti l izaram técnica 

especial de colheita para anaeróbios em dentes infectados de humanos, 

empregaram mistura gasosa de 3% de hidrogênio em nitrogênio, apl icada 

sobre o campo operatório (coroa e canal radicular), obtendo maior 

quantidade de bactérias anaeróbias, que as técnicas convencionais. 

 
Kantz & Henry67 (1974), coletaram amostras de 24 dentes 

necrosados de humanos com cavidade pulpar intacta de 20 pacientes. 

Desenvolveram nova metodologia para manter a anaerobiose durante a 

coleta de amostras de canais radiculares, como também para o transporte 

e identif icação. Isolaram um total de 104 anaeróbios de 377 

microrganismos, entre eles: Actinomyces israeli i, Bacteroides fragil is, 



 22

Bacteroides melaninogenicus, Campylobacter sputorum, Eubacterium 

alactolyticum, Fusobacterium fusiformis, Fusobacterium varium, 

Peptococcus morbil lorum, Propionibacterium acnes, Veil lonella parvula. 

Porém não encontraram outras espécies de Actinomyces, bacilos 

anaeróbios formadores de esporos e treponemas. 

 

Em 1975, Leonardo72 apontou para a controversa questão 

da importância do teste bacteriológico negativo de canais radiculares no 

momento de sua obturação, considerado de importância pela l i teratura. O 

autor comparou os resultados obtidos pelo tratamento de canais 

radiculares de dentes despulpados infectados e com reação periapical, 

obturados, quer com testes bacteriológicos negativos ou positivos. 

Efetuando o controle clínico radiográfico por um período mínimo de dois 

anos, concluiu que não existe diferença estatística significante entre os 

resultados obtidos. 

 

Keudell et al.69 (1976), analisaram a microbiota isolada de 

cavidades pulpares de 55 dentes de humanos (dos quais 13 com 

vital idade pulpar e 42 com necrose pulpar). As amostras foram colhidas 

dos dentes sob fluxo de dióxido de carbono (97%) e hidrogênio (3%) l ivre 

de oxigênio, direcionada ao redor da abertura coronária. A técnica de 

identif icação microbiológica uti l izada foi a preconizada pelo Laboratório 

de Anaerobiose do Instituto Po litécnico da Virgínia (VPI), para detecção 



 23

de anaeróbios obrigatórios. Anaeróbios facultativos foram identificados 

por procedimentos convencionais. Não foram detectadas bactérias 

anaeróbias nos 13 dentes com vital idade pulpar. Dos dentes com necrose 

pulpar, 64% apresentavam anaeróbios obrigatórios, indo ao encontro de 

achados microbiológicos relatados por outros autores. 

 

Sundqvist139 (1976), avaliou a microbiota endodôntica, 

uti l izando a técnica de cultura de microrganismos anaeróbios (câmara de 

anaerobiose com mistura de gases: hidrogênio, dióxido de carbono e 

nitrogênio, e eliminação catalít ica do oxigênio e umidade relativa entre 30 

e 50%). Para isso selecionou 32 dentes expostos a traumatismos. Destes, 

19 apresentavam lesões periapicais evidentes, radiograficamente visíveis, 

com variação de 2 a 10mm de diâmetro. Os demais (13 dentes) não 

apresentaram imagens de lesões periapicais. Dos dentes com lesão 

periapical,  detectaram microrganismos em 18, e nenhum em dentes sem 

lesão. Ao todo, 88 cepas bacterianas foram isoladas e constatou que 

quanto maior a lesão, maior o número de espécies bacterianas 

encontradas. Dentes portadores de quadros agudos, também, 

apresentavam maior número de bactérias.  

 

Bystrom & Sundqvist21 (1981), avaliaram a eficácia da 

instrumentação manual em 15 dentes unirradiculados, portadores de 

necrose pulpar e lesão periapical, empregando como solução irr igadora o 



 24

soro fisiológico. Verif icaram que o número de espécies bacterianas por 

canal radicular variou de 1 a 10, a média de células foi de 4 X 105, 

variando de 102  a 107,  e os anaeróbios obrigatórios representavam 88% 

da amostragem. Após cada preparo biomecânico, o número de células 

bacterianas nos canais radiculares reduziu de 102 a 103. Após quatro 

preparos biomecânicos, 47% da amostragem ainda apresentou 

crescimento bacteriano. As espécies mais comumente isoladas foram 

Peptostreptococcus micros, Fusobacterium nucleatum , Prevotella oralis, 

Peptostreptococcus anaerobius , Eubacterium alactolyticum e Prevotella 

intermedia . Os canais radiculares que permaneceram infectados ao final 

dos vários preparos biomecânicos,foram aqueles com elevado número de 

bactérias na amostra inicial. 

 

Morse91 (1981), realizou estudo onde caracterizou a 

microbiota relacionada às patologias da polpa e periápice. De acordo com 

o autor, antes de 1970, as espécies mais comumente isoladas dos canais 

radiculares eram de estreptococos de grupo alfa -hemolít icos (aeróbios 

facultativos gram -positivos), que eram isolados usando técnicas de 

cultura padronizadas em aerobiose. Posteriormente, com o advento de 

novas técnicas de colheita, transporte e cultura em anaerobiose, 

constataram considerável população de bactérias anaeróbias estritas em 

canais radiculares infectados. 

 



 25

Nair et al.97 (1987), avaliaram a microbiota do canal 

radicular e região periapical em 31 dentes infectados de humanos, 

portadores de necrose pulpar e lesão periapical crônica usando 

microscópio óptico e microscópio eletrônico de transmissão. 80,8% dos 

dentes estavam assintomáticos e todos os canais radiculares 

apresentaram microbiota mista. Das lesões avaliadas, apenas quatro 

granulomas e um cisto apresentaram bactérias localizadas intra e 

extracelularmente. Notaram predomínio de cocos, bacilos e formas 

fi lamentosas, e menos freqüentemente, densos agregados de bactérias 

aderidas à parede dentinária ou l ivres, cercadas de  PMN. Em alguns 

segmentos havia várias camadas de bactérias condensadas, consistindo 

de vários morfotipos, com as formas fi lamentosas e cadeias de cocos se 

orientando perpendicularmente à parede do canal. Raramente, quando 

espessas o bastante, eram vistas pelo microscópio óptico, como estrutura 

em paliçada. Quatro granulomas continham bactérias no seu interior, 

caracterizando actinomicose. Em três casos, a placa bacteriana 

constituída por cocos, bacilos, fi lamentosos e espiroquetas, estendia-se 

pelo corpo da lesão, causando, diversos graus de necrose tecidual ou 

resposta inflamatória aguda. Ocorreu uma lesão cística, onde, em seu 

lúmen foram observadas bactérias isoladas e agregadas. Observaram 

numerosos neutrófi los contendo fi lamentosos em seu interior. Apenas em 

uma amostra, a microbiota na área do forame apical não estava separada 

do corpo da lesão por barreira de PMNs ou tecido da lesão, sendo 



 26

considerado “granuloma dormente”.  

 

Tronstad et al.147 (1987), examinaram a presença de 

bactérias em 8 dentes com lesões periapicais e assintomáticas, 

refratárias ao tratamento endodôntico convencional. O acesso às lesões 

periapicais foi conseguido por meio de técnicas cirúrgicas assépticas. 

Curetas esterilizadas foram uti l izadas para a coleta do tecido mole das 

lesões e cortes superficiais das porções apicais. Uti l izaram o meio para 

transporte VMGA III de Moller, e as culturas efetuadas em anaerobiose.  

Evidenciaram o crescimento bacteriano nas amostras das 8 lesões, dentre 

as quais 2 apresentaram, exclusivamente, bactérias anaeróbias e 5 

lesões estavam intensamente colonizadas por anaeróbios.  Encontraram 

espécies de Bacteroides pigmentados de negro, assim como, baci los 

anaeróbios gram -positivos e cocos.  Espécies de estreptococos 

facultativos,foram raramente isolados. Concluíram que bactérias 

anaeróbias são capazes de sobreviver e manter o processo infeccioso nos 

tecidos periapicais. 

 

Ando & Hoshino5 (1990), investigaram a presença e os 

tipos de bactérias invasoras de camadas profundas (0,5 a 2,0mm da 

superfície da parede do canal radicular) de dentina de canais radiculares 

infectados de 8 dentes de humanos, recém -extraídos. Encontraram  

bactérias anaeróbias obrigatórias em 80% dos casos, com predominância 



 27

dos gêneros Lactobacil lus e Streptococcus.  Não encontraram nenhuma 

cepa de bacilos anaeróbios gram -negativos nas camadas profundas de 

dentina. Concluíram que a microbiota de camadas profundas da dentina 

apresenta similaridade com aquela coletada das camadas profundas de 

lesões cariosas de dentina coronária. 

 

Horiba et al.62 (1990), avaliaram a distr ibuição de 

endotoxina nas paredes de canais radiculares de dentes infectados, 

examinando o pó de dentina destas regiões, em várias profundidades. Os 

dentes com reação periapical radiograficamente visível apresentaram 

maior conteúdo de endotoxinas, que foram quantif icadas através de 

método colorimétrico. O conteúdo de LPS foi significativamente mais 

elevado em amostras da superfície  da parede pulpar até 300µm  em 

profundidade. Detectaram para todas as amostras a presença de 

endotoxinas. 

 

van Winkelhoff et al.149 (1992), teceram considerações 

quanto a espécies de bacteróides pigmentados de negro do gênero 

Porphyromonas: P. gingivalis, P. endodontalis e P. assacharolytica,  que 

diferenciam -se por suas características bioquímicas. P. endodontalis é 

um bacilo não fermentativo, que exige fatores de crescimento, e é uma 

espécie caracterizada pela alta sensibil idade ao O2, baixa virulência, 

resistência à fagocitose. 



 28

 

Drake et al.32 (1994), analisaram o efeito da camada 

residual  (smear layer) sobre a retenção de bactérias usando um modelo in 

vitro de colonização bacteriana do canal radicular. Uti l izaram 26 caninos 

extraídos de humanos, submetidos à biomecânica pela técnica de recuo 

progressivo, uti l izando solução de NaOCl a 2,5%. Em seguida os dentes 

foram randomicamente, divididos em dois grupos, baseados no t ipo de 

solução irr igadora f inal, a saber: I-20mL de solução salina esteri l izada ou 

II-10mL de EDTA seguido de 10mL de NaOCl a 2,5%, para a remoção da 

camada residual (para o segundo grupo). Como indicador ut i l izaram o 

Streptococcus anginosus (milleri)  em alíquotas de 3,0µL contendo 106ufc. 

Os dentes inoculados e incubados foram seccionados e processados para 

análise microbiológica. Houve diferenças estatisticamente significativas 

entre os dois grupos testados: 104ufc para dentes com camada residual 

preservada e 105ufc para aqueles sem camada residual. Sugeriram que a 

camada residual produzida durante o preparo biomecânico pode inibir a 

colonização bacteriana dos canais radiculares. Ainda, sugeriram  que a 

camada residual pode bloquear a entrada de bactérias em túbulos 

dentinários. 

 

Sundqvist141 (1994), em estudo taxonômico concluiu que 

durante o curso da infecção endodôntica, inter-relações nutricionais 

(cadeia al imentar) se desenvolvem entre espécies microbianas, e os 



 29

shifts microbianos ocorrem como resultado destas relações. A 

patogenicidade da microbiota polimicrobiana do canal radicular é 

dependente do sinergismo microbiano. 

 

Nagaoka et al.96 (1995), no intuito de estudar o padrão de 

invasão bacteriana de túbulos dentinários uti l izaram 19 pares de dentes 

de humanos (3os  molares) com ou sem vital idade pulpar. Em cada caso, 

30 ou 50 dias antes da exodontia, foram feitas, unilateralmente, 

pulpectomias e obturações dos canais.  Cavidades de classe V 

envolvendo tecido dentinário foram confeccionadas na face palatina de 

cada dente (bilateralmente), e deixadas sem proteção e em contato com a 

microbiota oral, até que as extrações fossem realizadas. Postularam 

assim que dentes com vitalidade pulpar foram mais resistentes à invasão 

bacteriana dos canalículos dentinários comparados a aqueles dentes que 

passaram pelo tratamento endodôntico, sugerindo que polpas vitais 

exercem importante papel no impedimento de colonização bacteriana dos 

túbulos dentinários. 

 

Assed et al.10 (1996), por meio de técnica de 

imunofluorescência indireta, estudaram a presença de 4 espécies 

bacterianas, Actinomyces viscosus, Prevotella intermedia, Fusobacterium 

nucleatum e Porphyromonas gingivalis em materiais colhidos antes da 

realização do preparo biomecânico de canais radiculares, de 25 dentes de 



 30

humanos com lesão de cárie, polpa necrótica e presença de reação 

periapical radiograficamente visível. A câmara coronária foi acessada sob 

condições assépticas, sendo o material recolhido com pontas de papel 

esteri l izadas e colocadas em tubos de ensaio com fluido para transporte 

reduzido (RTF). Relataram que a reação de imunofluorescência indireta 

foi positiva em 24 de 25 amostras. Quatorze foram posit ivas para a 

espécie Actinomyces viscosus,  12 para Prevotella intermedia,  10 para 

Fusobacterium nucleatum  e 4 para Porphyromonas gingivalis.  Concluíram 

que a técnica uti l izada para detecção de microrganismos apresentou 

maior acuracidade, se comparada às técnicas convencionais de cultura, 

além de ser uma técnica de rápida execução para detecção de anaeróbios 

em canais radiculares. 

 

Gomes et al.50 (1996), observaram que determinadas 

espécies bacterianas da microbiota endodôntica,estão relacionadas à 

presença de sinais e sintomas de origem endodôntica. Correlacionaram a 

presença de Prevotella spp/ Peptostreptococcus spp, Prevotella 

melaninogenica/Peptostreptococcus spp e Peptostreptococcus micros/ 

Prevotella melaninogenica à dor espontânea; Peptostreptococcus micros/ 

Prevotella spp, relacionados à inflamação periodontal e, Prevotella spp/ 

Eubacterium spp e Peptostreptococcus spp/ Eubacterium spp, nos casos 

de canais úmidos. Concluíram que as bactérias gram -negativas são de 

fundamental importância clínica, pois as endotoxinas podem ser l iberadas 



 31

no meio, ativando fator de Hageman e ativando a formação de 

bradicinina, potente mediador da dor. 

 

Bae et al.11 (1997), estudaram a ocorrência de Prevotella 

intermedia  e Prevotella nigrescens  em infecções endodônticas uti l izando 

a técnica sulfato dodecil de sódio poliacrilamida gel-eletroforese (SDS-

PAGE) para a detecção da totalidade das proteínas celulares destas 

bactérias, possibil itando a distinção entre espécies. Isolaram 56 cepas de 

bacilos pigmentados de negro(BPN) provenientes de infecção 

endodôntica, previamente identif icadas como P. intermedia.  Com o uso 

desta técnica laboratorial, puderam distinguir as duas espécies, através 

das diferenças de pesos moleculares, registrados em dife rentes bandas 

no processo de gel-eletroforese. Das 56 cepas de BPN, 41 (73,2%) foram 

identif icadas como P. nigrescens e 15 (28,8%) como P. intermedia. 

Concluíram que P. nigrescens (e não P. intermedia), apresenta -se como o 

BPN mais comumente isolado de infecção de origem endodôntica. 

 

Ribeiro111 (1997), analisou a distribuição das bactérias nas 

estruturas mineralizadas de dentes portadores de necrose pulpar e nos 

granulomas apicais. Uti l izou 32 raízes dentárias com lesões periapicais 

f i rmemente ader idas a seus ápices e 16 lesões isoladas, em cortes para 

f ins de diagnóstico microscópico com laudos conclusivos de granulomas 

apicais. Os espécimes foram analisados pelo microscópio óptico. 



 32

Evidenciaram alta freqüência de bactérias gram -positivas e gram -

negativas no lume do canal principal e nas ramificações constituintes do 

delta apical, e também, em menor proporção nos túbulos dentinários, 

cementoplastos, superfície radicular externa e nos granulomas apicais. 

Sugeriu a necessidade do preparo biomecânico auxil iado por substâncias 

químicas antibacterianas, emprego de curativo de demora, além de 

adequado selamento do canal radicular em tratamentos de dentes com 

necrose pulpar e lesão periapical crônica. 

 

Abou-Rass & Bogen1 (1998), estudaram a microbiota de 

lesões periapicais após uma seleção criteriosa de casos clínicos cujas 

lesões não apresentassem quaisquer possibi l idades de comunicação com 

a microbiota da cavidade oral,denominadas lesões fechadas. Treze casos 

de setenta, indicados para cirurgia parendodôntica foram selecionados 

para o estudo. Três amostras de cada caso foram coletadas pelo mesmo 

clínico: amostra 1- colhida com pontas de papel esteri l izadas da periferia 

da lesão; amostra 2- porção do tecido inflamado e enucleado, e a amostra 

3 -  coletada com pontas de papel esteri l izadas, do ápice, após a 

enucleação do tecido patológico. Todos os materiais foram submetidos à 

técnica de cultura anaeróbia. Em todos os 13 casos, as amostras 

coletadas do ápice mostraram presença de 63,6% de anaeróbios 

obrigatórios e 36,4% de anaeróbio facultativos. Com relação às espécies 

bacterianas  foram encontrados 31,8% de Actinomyces sp., 22,7% de 



 33

Propionibacterium sp., 18,2% de Streptococcus sp., 13, 6% de 

Staphylococcus sp., 4,6% de Porphyromonas gingivalis, 4,6% de 

Peptostreptococcus micros e 4,6% de bactérias entéricas gram -negativas. 

Mostraram que lesões periapicais fechadas abrigam bactérias e que a 

dif iculdade em erradicar os microrganismos do canal radicular durante o 

tratamento endodôntico, somados aos fatores anatômicos, pode facilitar a  

colonização do ápice radicular e tecidos periapicais circunjacentes, 

inibindo a reparação. 

 

Bonifácio19 (2000), uti l izando o microscópio eletrônico de 

varredura observou a prevalência de biofi lme apical bacteriano em 100% 

das amostras de dentes de humanos portadores de reação periapical 

radiograficamente visível, associado à formação de zonas de reabsorção 

(crateras apicais), no entanto em dentes diagnosticados como portadores 

de polpas vitais, ou necrosados sem reação periapical visível 

radiograficamente (Grupos I e II) apresentavam normalidade estrutural e 

ausência de biofi lme bacteriano apical. 

 

Peters et al.107 (2002) investigaram as combinações entre 

bactérias encontradas naas infecções endodônticas em dentes portadores 

de lesões periapicais sem sintomatologia nem sinais clínicos. Uti l izaram 

amostras provenientes de 58 canais radiculares que foram cult ivadas em 

anaerobiose, sendo os microrganismos contados e classif icados. Oitenta 



 34

e uma combinações entre microrganismos foram encontradas e testadas 

em relação simbiótica, uti l izando o teste exato de Fisher e Cálculo de 

razão de Odds. Todas as amostras continham microrganismos com uma 

média de ufcs/mL (-1) de 8 x 10(4) por amostra. Espécies anaeróbias 

estritas foram encontradas em 87% de toda microbiota. As espécies 

bacterianas mais prevalentes foram Prevotella intermedia, 

Peptostreptococcus micros e Actinomyces odontolyticus,  presentes em 

33, 29 e 19% respectivamente, dos canais radiculares testados. Uma 

signif icativa relação (p<0.05) e uma razão de Odds>2, foram encontradas 

entre P. intermedia e P. micros, P. intermedia e P. oralis, A. odontolyticus 

e P. micros, Biffidobacterium spp. e Veillonella spp. Concluíram que 

patógenos que contaminam o endodonto não ocorrem de maneira 

randômica, mas são encontrados em combinações específicas. 

 

 



 35

§ O  u s o  d o  h i d r ó x i d o  d e  c á l c i o  e  a s s o c i a ç õ e s  n a  r e d u ç ã o  

m i c r o b i a n a  d e  c a n a i s  r a d i c u l a r e s  i n f e c t a d o s  
 

Nygren102 (1838), é apontado como o autor do primeiro 

trabalho sobre o uso de hidróxido de cálcio contra afecções infecciosas 

dos dentes, preconizando  seu uso para tratamento de fístulas dentais. 

 

Em 1920, Herman introduz o hidróxido de cálcio na 

odontologia, empregando o Calxyl para capeamento de polpas expostas, 

observando reparo73. 

 

Rhoner110 (1940), pesquisa a util idade do Calxyl na 

obturação de canais radiculares.  No seu estudo in vivo, foram uti l izados 

20 dentes de humanos, submetidos à pulpectomia e preenchidos com o 

material. Posteriormente, foram analisados histologicamente 18 dentes, 

dos quais 13 considerados como casos de sucesso. 

 

Frank43 (1966), apresentou 3 casos clínicos, demonstrando 

o benefício do uso de pasta à base da associação de hidróxido de cálcio 

e paraclorofenol canforado no tratamento de dentes despulpados 

portadores de lesões periapicais e na rizogênese incompleta por induzir 

formação apical. 

 



 36

Binnie & Rowe 16 (1973), induziram infecção em canais 

radiculares de dentes de cães, e após a realização do preparo 

biomecânico, obturaram  com cimento de Grossman, Calxyl ou pasta de 

Ca(OH)2 veiculada em água desti lada. Observaram que este últ imo 

material proporcionou melhores resultados frente ao quadro infeccioso. 

Concluíram que o hidróxido de cálcio é um material biológico para 

obturação de canais radiculares. 

 

Heithersay59 (1975), relacionando os benefícios do 

emprego do hidróxido de cálcio em dentes de humanos portadores de 

polpa necrótica e lesão periapical, concluiu que seu emprego simplif ica o 

tratamento, e também colabora com a reparação tecidual. 

 

Kawahara et al.68 (1975), estudaram a eficácia 

antimicrobiana de concentrações reduzidas de paraclorofenol em solução 

aquosa contra 3 espécies bacterianas: o Streptococcus faecalis o 

Streptococcus mitis e o Staphylococcus epidermidis em câmaras 

coronárias de dentes extraídos de humanos. Observaram que,  em 

pequenas doses (10µL de solução aquosa a 2%), o produto teve ação 

ótima sobre a redução bacteriana em até 72h contra todas as espécies 

uti l izadas. Com estes resultados alertaram que o paraclorofenol não deve 

ser uti l izada em altas concentrações  (com o no caso da associação com a 

cânfora, com relação de 3,5:6,5) devido ao seu efeito deletério sobre os 



 37

tecidos vivos, e também por ser eficaz em quantidades reduzidas. 

 

Cvek et al.28 (1976), uti l izaram 141 incisivos permanentes 

de humanos, com rizogênese completa ou não, sem vital idade pulpar, 

com ou sem reações periapicais radiograficamente visíveis. Avaliaram o 

efeito do tratamento endodôntico, clínica, microbiológica e 

radiograficamente. Os casos foram divididos em três grupos, de acordo 

com a solução irrigadora empregada: (I) soro fisiológico, (II) líquido de 

Dakin e, (III) solução de hipoclorito de sódio a 5%. Todos os canais foram 

preenchidos na mesma sessão com hidróxido de cálcio veiculado em 

ringer, sendo analisados após os períodos de 3 e 6 meses. No período de 

observação inicial constataram ausência de crescimento bacteriano em 

90% dos casos, independente da condição pré-tratamento. Monitoraram 

as espécies bacterianas encontradas (com testes bioquímicos para 

bactérias aeróbias e análise cromatografia gasosa para anaeróbios) após 

o preparo biomecânico, e a uti l ização do curativo. Julgaram ser o 

hidróxido de cálcio eficaz em sua propriedade antimicrobiana, 

independente do acréscimo de quaisquer outras substâncias que 

pudessem lhe conferir potencialização. 

 

Martin & Crabb82 (1977), real izaram uma revisão sobre o 

uso do hidróxido de cálcio como material endodôntico, e seu papel na 

endodontia conservadora. Com relação às suas propriedades 



 38

antimicrobianas, sugeriram o uso desta substância como alternativa ao 

uso de derivados fenólicos, apontando a ação higroscópica sobre a 

exsudação persistente quando usado no interior de canais infectados. 

 

Holland et al.60 (1978), testaram o poder antimicrobiano 

dos vapores do tr icresol formalina, paramonoclorofenol, 

paramonoclorofenol canforado, paramonoclorofenol + furacin, creosoto de 

faia, eugenol e da cresatina, contra microrganismos isolados de canais 

infectados de dentes de humanos. Realizaram testes microbiológicos por 

contato e à distância e mostraram eficiência do tricresol formalina e do 

paramonoclorofenol (tanto por contato como à distância). O 

paramonoclorofenol canforado, paramonoclorofenol + furacin, e o 

creosoto de faia apresentaram ação antibacteriana apenas por contato, e, 

por f im, o eugenol e a cresatina, não atuaram à distância e apresentaram 

pequena ação antimicrobiana por contato. 

 

Martins et al.83 (1979), estudaram em 60 dentes de 

humanos, com necrose pulpar, a ação antibacteriana de alguns curativos 

empregados em tratamentos endodônticos: pasta de hidróxido de cálcio, 

paramonoclorofenol aquoso a 1%, e mistura de ambos, uti l izados após a 

biomecânica, em períodos de 48 e 72h. Após a colheita, as amostras, 

foram submetidas a culturas em meio tioglicolato de Brewer, incubadas a 

37OC, por 7 dias, após os quais foram feitos esfregaços corados pelo 



 39

método de Gram. Os melhores resultados da redução da microbiota foram 

atribuídos à associação hidróxido de cálcio/paramonoclorofenol aquoso a 

1%, seguido da pasta de Ca(OH)2 e paramonoclorofenol a 1% (aplicado 

em cone de papel). 

 

Costa et al.27 (1981), analisaram a evolução clínica de 13 

canais radiculares em dentes de humanos portadores de extensas lesões 

periapicais, submetidas ao preparo biomecânico e preenchimento com 

hidróxido de cálcio associado ao paramonoclorofenol canforado. Após 

proservações de 2 a 10 meses, constataram reduções dimensionais das 

lesões e executaram as obturações definit ivas. Sugeriram que o curativo 

à base de hidróxido de cálcio pode potencializar o processo de reparação 

de dentes com lesões periapicais. 

 

Anthony et al.6 (1982), em estudo in vitro, utilizando 

dentes extraídos de humanos, avaliaram o pH de pastas de Ca(OH)2 

quando associado aos seguintes veículos: (a) cresatina, (b) PMCC e (c) 

soro f isiológico, nos períodos de 6, 24, 48 e 72 horas e 1 e 2 semanas. 

Concluíram que as pastas de Ca(OH)2 veiculadas em PMCC e soro 

f isiológico apresentaram pH mais elevado que aquela veiculada em 

cresatina. 

 

Di Fiore et al.30 (1983), avaliaram a ação antibacteriana in 



 40

vitro de quatro pastas à base de hidróxido de cálcio uti l izadas para 

indução de apicif icação, tendo como veículos: paraclorofenol canforado, 

acetato de metacresil, metil celulose (Pulpdent) e água destilada 

esteri l izada. Em placas de ágar-sangue inoculadas com  Streptococcus 

sanguis foram aplicados cil indros contendo as pastas e selados com 

Cavit. Um cil indro vazio e selado com Cavit foi usado como controle. As 

placas foram incubadas e os halos de inibição  registrados nos períodos 

de 2, 4, 6 e 8 dias. Mostraram ausência de halos de inibição para a pasta 

Ca(OH)2+ água desti lada e veiculada em metilcelulose (Pulpdent). 

Constataram a formação de halos de inibição para o Ca(OH)2 + PMCC e 

para o Ca(OH)2 + acetato de metacresil, para todos os períodos de tempo 

estudados, e também a redução de ati vidade com o tempo. 

 

Stevens & Grossman135 (1983), avaliaram o potencial 

antimicrobiano do hidróxido de cálcio (em forma de pasta, e o produto 

comercial -  Pulpdent), em comparação com o clorofenol canforado, frente 

à Serratia marcescens  e Streptococcus faecalis, tanto in vivo (dentes 

caninos de gatos) quanto in vitro (teste de difusão em ágar). Sobre o 

primeiro microrganismo notaram ação bactericida de todos os 

medicamentos uti l izados, ao passo que para o S. faecalis, os produtos à 

base de hidróxido de cálcio não foram tão eficazes quando comparados 

ao clorofenol canforado. 

 



 41

Byström et al.22 (1985), em estudo uti l izando 65 dentes de 

humanos, unirradiculados e portadores de reações periapicais 

radiograficamente evidentes, avaliaram pelo método bacteriológico o 

efeito dos curativos de demora: paramonoclorofenol canforado, fenol 

canforado e hidróxido de cálcio. Em 35 canais empregaram como 

soluções irrigadoras  o líquido de Dakin (20 casos), hipoclorito de sódio a 

5% (15 casos). Após a biomecânica, os canais foram secos e preenchidos 

com pasta Calasept. Os  30 dentes restantes foram irrigados com líquido 

de Dakin, e receberam curativo de paramonoclorofenol canforado (15 

casos), e fenol canforado (15 casos). Amostras bacterianas foram 

coletadas após o preparo biom ecânico e após os períodos de 15 dias 

(para os grupos dos curativos fenólicos) e 30 dias (para o Calasept). Uma 

terceira colheita foi realizada em 5 dentes medicados com a pasta 

Calasept, que  foram esvaziados, assim permanecendo por 2 a 4 dias 

após a 2a colheita. Todas as amostras foram cult ivadas em anaerobiose. 

Como resultados, observaram bactérias em apenas 1 dos 35 casos 

tratados com o Calasept, e que nos outros grupos (fenólicos), observaram 

bactérias em 10 dos 30 casos, comprovando eficácia do medicamento na 

redução bacteriana de canais infectados. 

 

Quackenbush (1986)109,  avaliou in vitro a at ividade de 3 t ipos 

de medicamentos endodônticos contra bactérias anaeróbias (monoclorofenol, 

iodo iodetado de potássio ( IKI)  e hidróxido de cálc io).  As cepas de 



 42

Peptostreptococcus sp. (anaeróbio obrigatório) e Streptococcus sanguis 

(anaeróbio facultativo) cultivadas em ágar-chocolate em anaerobiose por 24h a 

37ºC foram inoculadas em canais. Os medicamentos testados foram colocados 

nos canais e incubados em jarras de anaerobiose por 48h a 37 ºC. Findo o 

período, os canais foram irr igados com 3mL de soro f is iológico, sendo que 

0,1mL do irr igante removido foi  semeado sobre placas de Petr i  contendo ágar-

chocolate, incubados por 72h em jarra de anaerobiose. Constatou que  o  

monoclorofenol e o iodo iodetado de potássio não foram ef icazes in vitro 

contra anaeróbios, ao passo que o hidróxido de cálcio  foi   ef icaz contra as 

duas espécies anal isadas. 

 

Byström et al.23 (1987), uti l izando técnicas bacteriológicas 

de anaerobiose, demonstraram que bactérias foram eliminadas de canais 

radiculares que receberam, entre sessões, curativos à base de hidróxido 

de cálcio, antes da etapa final do tratamento endodôntico, a obturação. A 

reparação das lesões periapicais dos dentes foi acompanhada por 2 a 5 

anos. A maior parte das 79 lesões reparou completamente, ou decresceu 

dimensionalmente, compatível com quadro reparativo. Em 5 casos, 

encontraram ausência de regressão, ou diminuição insignif icante da 

lesão. Duas destas lesões apresentaram espécies bacterianas do gênero 

Actinomyces ou Arachnia.  Em outro caso, encontraram raspas de dentina 

presentes no tecido periapical. Concluíram que lesões periapicais 

refratárias ao tratamento, podem estar relacionadas ao estabelecimento 

de bactérias na região periapical, onde abrigam -se do tratamento 



 43

endodôntico convencional. 

 

Sjogren et al.130 (1991), uti l izaram 30 dentes 

unirradiculados de humanos com polpas necrosadas e reação periapical 

radiograficamente visível, para avaliação do efeito antibacteriano do 

hidróxido de cálcio. No preparo biomecânico, uti l izaram como solução 

irr igadora o líquido de Dakin, e como curativo de demora a pasta 

Calasept. A monitoração do efeito antimicrobiano foi feita antes do 

preparo biomecânico e após os períodos de tempo de 10 minutos (12 

casos) e 7 dias (18 casos), onde as amostras foram colhidas em 

condições de anaerobiose. Concluíram que a aplicação de pasta à base 

de hidróxido de cálcio por 10 minutos foi ineficaz, enquanto que o 

curativo por 7 dias eliminou as bactérias que sobreviveram ao preparo 

biomecânico. 

 

Chong & Pitt Ford25 (1992) reexaminaram o papel do uso 

de medicação endodôntica entre sessões. Na pulpectomia, ou em 

tratamentos que apresentem polpa com vital idade, ressaltam que a 

necessidade de medicação intracanal é duvidosa. Em dentes portadores 

de infecções, o uso deste recurso terapêutico é indicado pelas seguintes 

questões; (I) el imina bactérias remanescentes ao preparo biomecânico; 

(II) reduz  a resposta inflamatória dos tecidos apicais e periapicais; (III)  

promove neutralização dos resíduos presentes; (IV) age como barreira 



 44

contra a infi l tração que ocorre quando do uso de restaurações; (V) seca 

os canais persistentemente úmidos. Concluíram que estes medicamentos 

devem ser usados como parte de uma biomecânica com criteriosa 

assepsia, e que testes bacteriológicos podem ser uti l izados se o dente 

não responde ao tratamento, auxil iando na seleção da medicação mais 

apropriada. 

 

Gencoglu & Kuleckçi46 (1992), avaliaram a eficácia 

antibacteriana in vitro de quatro medicamentos de uso endodôntico: o 

Calasept, o paraclorofenol canforado, o Cresofene e o iodo iodetado de 

potássio (IKI), contra quatro espécies bacterianas anaeróbias: 

Streptococcus mutans, Peptostreptococcus anaerobius , Porphyromonas 

gingivalis e Fusobacterium nucleatum . Constataram que o IKI foi ativo 

apenas contra o Fusobacterium nucleatum  e  Porphyromonas gingivalis. 

Enquanto que os outros foram eficazes contra todas as espécies 

bacterianas util izadas. 

 

Leonardo et al.77 (1993), aval iaram in vitro a solubil idade, 

a concentração de íons Ca++, e o pH do hidróxido de cálcio associado ao 

PMCC. Util izaram as seguintes pastas à base de Ca(OH)2: (A) Calen; (B) 

Calen + 0,15mL de PMCC; e (C) Calen + 0,04g de paramonoclorofenol. 

Concluíram que: nas pastas à base de hidróxido de cálcio associadas ao 

PMC, a adição de cânfora é desnecessária; a formação de 



 45

paramonoclorofenolato de cálcio tornou mais prolongada a ação 

bactericida da pasta Calen + PMC; a solubil idade do  paramonoclorofenol 

em associação com a pasta Calen, não sofreu influência da ausência da 

cânfora; o pH foi semelhante nas 3 pastas analisadas, independente da 

presença de paramonoclorofenol e que a l iberação de íons Ca++ foi mais 

lenta nas pastas associadas ao paramonoclorofenol. 

 

Nerwich et al.100 (1993), aval iaram in vitro as alterações de 

pH na dentina de dentes extraídos de humanos, após a uti l ização do 

hidróxido de cálcio como medicação intracanal. Concluíram que esta 

substância alcança a dentina radicular externa entre 1 e 7 dias, e que no 

terço cervical, o pH atinge valores mais elevados, no entanto,  no terço 

apical necessitou de duas a três semanas para alcançar  na superfície 

externa da raiz um pH 9,0. Mostraram que o íon hidroxila derivados dos 

curativos se difundem através da dentina, sendo esta  difusão mais rápida 

na porção cervical do canal radicular. 

 

Safavi & Nichols115 (1993), anal isaram in vitro a ação do 

hidróxido de cálcio sobre endotoxinas. Util izaram no estudo  suspensões 

de 30µL lipopolissacárides (LPS) de Salmonella typhimurium, com ou sem 

a adição de 25mg/mL de Ca(OH)2.  As suspensões foram incubadas a 37oC 

por 7 dias. Os produtos das suspensões foram analisados por 

cromato grafia gasosa e espectrômetro de massa. Nas amostras tratadas 



 46

pelo Ca(OH)2, quantif icaram ácidos graxos l ivres de hidroxila (ácidos 

mirístico e palmítico). Os resultados sugeriram que o hidróxido de cálcio 

medeia a degradação do LPS, podendo ser esta, uma razão importante  

para os efeitos benéficos obtidos com o uso desta substância na prática 

endodôntica. 

 

Estrela et al.38 (1994), estudaram o efeito biológico do pH 

na atividade enzimática de bactérias anaeróbias, analisando diversos 

fatores entre os quais: concentração de íons H+, composição estrutural da 

membrana celular de bactérias gram -negativas, efeitos do pH sobre a 

atividade enzimática das bactérias gram -negativas, propriedades 

enzimáticas do hidróxido de cálcio -  inativação das enzimas bacterianas e 

efeito mineralizante. Aventaram a hipótese de uma inativação enzimática 

irreversível em condições extremas de pH por longo período de tempo, e 

também, uma inativação enzimática temporária, quando do retorno do pH 

ideal à ação enzimática, atuando também de maneira reversível. 

 

Safavi & Nichols116 (1994), estudaram a alteração das 

propriedades biológicas do l ipopolissacáride bacteriano (LPS) pelo 

tratamento com o hidróxido de cálcio. Para isso, monitoraram a l iberação 

de prostaglandinas E2 secretadas por culturas de monócitos humanos, 

quando expostas à suspensão de LPS bacteriano puro (originário da 

Prevotella intermedia e da  Salmonella typhimurium), ou tratado com 



 47

hidróxido de cálcio. A prostaglandina E2 foi detectada no sobrenadante 

das suspensões expostas ao LPS, ao passo que naquelas suspensões de 

LPS tratadas pelo hidróxido de cálcio não detectaram PGE2 .  Concluíram 

que o tratamento com o hidróxido de cálcio pode alterar as propriedades 

biológicas do LPS bacteriano. 

 

Kontakiotis et al.70 (1995), estudaram in vitro os possíveis 

mecanismos envolvidos na ação antimicrobiana do hidróxido de cálcio. 

Vinte cepas de bactérias anaeróbias obrigatórias e 20 cepas de 

facultativas colhidas de canais infectados, com espécies identificadas, 

foram util izadas. Alíquotas de 0,1mL, contendo cepas específicas de 

inóculo foram distribuídas em placas de ágar-sangue, e incubadas em 

câmara de anaerobiose de 5 a 7 dias. Um grupo experimental e um grupo 

controle foram estudados: o primeiro incluiu uma placa com espécies 

bacterianas em contato com o hidróxido de cálcio, e o segundo apenas 

culturas dos microrganismos isolados. Ambas as placas foram incubadas 

em câmara de anaerobiose por 72h. Após este período o número de 

espécies bacterianas foi contado nos dois grupos. A análise estatística 

mostrou redução bacteriana significativa no grupo do  hidróxido de cálcio. 

Concluíram que a propriedade do Ca(OH)2 em absorver dióxido de 

carbono, pode contribuir na sua atividade antibacteriana. 

 

Assed et al.9 (1996), aval iaram por meio de 



 48

imunofluorescência indireta, a presença de 4 espécies de bactérias 

anaeróbias (Actinomyces viscosus, Prevotella intermedia, Fusobacterium 

nucleatum e  Porphyromonas gingivalis) em materiais colhidos de 25 

canais radiculares de dentes de humanos, portadores de cáries, necrose 

pulpar e reação periapical radiograficamente visível, nas seguintes 

etapas: (I) antes do preparo biomecânico; (II) após o preparo 

biomecânico, uti l izando como soluções irr igadoras o hipoclorito de sódio 

de 4 a 6% e água oxigenada  10 volumes, alternadamente, e, (III) após o 

uso de curativo de demora à base de hidróxido de cálcio + PMCC (Calen 

PMCC, S.S.White). Relataram a redução bacteriana após o uso de 

soluções bactericidas enérgicas (NaOCl + H2O2 10vol), potencializada 

pelo uso do curativo de demora (Calen PMCC) com índice de redução de 

57,1% (estatisticamente não significativos (p<0,05), uma vez que o nível 

de significância estabelecido foi a 70%).   

 

Gomes I.C. et al.51 (1996), investigaram in vitro a difusão 

de íons cálcio através da dentina até a superfície radicular, util izando 

pastas de hidróxido de cálcio tendo como veículo a solução salina. Seis 

caninos de humanos, recém -extraídos, apresentando integridade, foram 

submetidos ao preparo biomecânico e aplicação de ácido cítr ico por 30 

segundos, para remoção da camada residual, irr igação f inal com soro 

fisiológico, e secos com pontas de papel absorvente. Selaram as 

extremidades apical e cervical. Dividiram o experimento em três etapas: 



 49

dissolução, dissolução e difusão I e, dissolução e difusão II. Na 

dissolução os canais permaneceram vazios, e estocados em 700mL de 

água deionizada, até que a l iberação de cálcio pela estrutura dentária 

fosse estabilizada. Na dissolução e difusão I, os canais foram 

preenchidos com uma pasta de hidróxido de cálcio veiculada em soro 

fisiológico, e os dentes colocados em solução como a anterior. Na 

dissolução e difusão II, os dentes foram divididos em 3 subgrupos: I -  

contendo a pasta original, II -  pasta original, di luída em 10mL de soro 

fisiológico, e III -  pasta original com excesso de hidróxido de cálcio. 

Aferiram o pH de cada solução.  Evidenciaram que a concentração iônica 

do cálcio alcançou picos 2 a 3 semanas após o preenchimento dos 

canais, tendendo à estabil ização após este período, mostrando a 

ocorrência a difusão do hidroxila através da dentina, até alcançarem a 

superfície externa do canal radicular. 

 

Alencar et al.3 (1997), para determinar a presença de 

paramonoclorofenol na pasta Calen (à base de hidróxido de cálcio)+ 

paramonoclorofenol,  ut i l izada como curativo de demora, induziram lesões 

periapicais em 60 canais radiculares de pré-molares inferiores e 

superiores de quatro cães. Após o preparo biomecânico, aplicaram o 

curativo de demora, e removido do terço apical após os períodos de 2, 4, 

7 e 14 dias para análise química por espectrofotometria. Demonstraram 

uma perda de paramonoclorofenol de aproximadamente 50% nos curativos 



 50

após 48h, sem perdas signif icantes nos períodos de tempo subseqüentes 

a 14 dias. 

 

Barbosa et al.12 (1997), avaliaram, em estudo clín ico e 

laboratorial, as atividades antibacterianas do Ca(OH)2, clorexidina (0,12 

e 0,2%) e PMCC como curativo de demora. No experimento clínico, canais 

com culturas posit ivas uma semana após o preparo biomecânico (com 

solução de NaOCl a 5,25% alternado com H2O2 a 3% e toilette final com 

ácido cítr ico, seguido da colocação de um penso de algodão com PMCC 

na câmara coronária) foram submetidos a ação do curativo de demora. 

Amostras foram coletadas do canal após uma semana. No experimento 

laboratorial util izaram  o teste de difusão em ágar para avaliar a atividade 

inibitória dos medicamentos contra bactérias comumente isoladas de 

infecções endodônticas: 5 anaeróbias estritas: P. endodontalis, P. 

gingivalis, A. israeli i, F. nucleatum e P. acnes; quatro anaeróbias 

facultativas: A. naeslundii, E. faecalis, S. aureus, S. mutans;  e uma 

espécie aeróbia: P. aeruginosa. Observaram que todos os curativos foram 

eficazes na redução ou eliminação da microbiota (demonstrada pelas 

culturas negativas). Não encontraram diferenças estatisticamente 

significativas entre os curativos de demora testados. Na avaliação 

laboratorial o PMCC mostrou os maiores halos de inibição bacteriana com 

ação sobre todas as cepas testadas. 

 



 51

Silveira119 (1997), com o objetivo de avaliar o tempo de 

ação de curativos de demora à base de hidróxido de cálcio, induziu 

formação de lesões periapicais crônicas em 80 raízes de dentes de cães. 

Realizou a primeira colheita bacteriana para determinação das ufc. Após 

o preparo biomecânico os canais receberam medicação intracanal à base 

de hidróxido de cálcio associado ao PMCC. Decorridos os períodos de 

sete, 15 e 30 dias, removeu a medicação e as cavidades oclusais 

seladas. Após sete dias, efetuou a segunda colheita. Observou maior 

redução bacteriana e reparação tecidual para o período de 30 dias. Para 

o período de sete dias foram considerados insatisfatórios, e no de 15 dias 

intermediários, porém mais próximos do período de 30 dias. 

 

Siqueira & Uzeda122 (1997), util izando o teste de difusão 

em ágar, avaliaram a atividade antibacteriana de medicamentos 

intracanal: gel de clorexidina a 0,12%, gel de metronidazol a 10% e 3 

pastas à base de hidróxido de cálcio (Ca(OH)2 associado a água 

desti lada, PMCC e glicerina). Contra bactérias anaeróbias: P. gingivalis, 

P. endodontalis, A. israelii, F. nucleatum , P. acnes e  C. rectus e bactérias 

aeróbias facultativas: E. faecalis, S. aureus, S. sanguis, A. viscosus, S. 

mutans e  S. salivarius.  Obtiveram melhores resultados com o Ca(OH)2 + 

PMCC. A clorexidina também inibiu o crescimento de todas as cepas 

estudadas. O metronidazol agiu contra todas espécies anaeróbias. Os 

medicamentos à base de hidróxido de cálcio, associados à água desti lada 



 52

ou glicerina não apresentaram halos de inibição, resultado talvez 

relacionado à l imitação quanto à difusão destes em ágar, além da 

natureza tampão do meio (neutralizando bases fortes). 

 

Leonardo et al.79 (1999), aval iaram in vitro a atividade 

antimicrobiana de duas pastas à base de hidróxido de cálcio: o Calen, o 

Calasept e uma pasta de óxido de zinco misturado à água destilada frente 

a sete cepas bacterianas incluindo aeróbios estritos e facultativos, gram -

negativos e gram -positivos, tidos como resistentes aos curativos de 

demora, uti l izados no tratamento endodôntico: Micrococcus luteus, 

Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, 

Pseudomonas aeruginosa , Enterococcus faecalis e Streptococcus mutans. 

As pastas foram avaliadas pelas técnicas de difusão em ágar pelo método 

do poço e pela técnica da ponta de papel absorvente. Verificaram que a 

pré- incubação das placas, para a difusão das pastas e a otimização do 

meio de cultura pelo gel de TTC a 0,05% foram fatores importantes para a 

avaliação da atividade antibacteriana. Constataram que todas as cepas 

bacterianas foram inibidas por todos os materiais avaliados. 

 

Siqueira & Lopes120 (1999) real izaram uma revisão de 

l i teratura concernente aos mecanismos de atividade antimicrobiana de 

materiais à base de hidróxido de cálcio. Apontaram para as seguintes 

observações: o espectro antibacteriano l imitado das preparações à base 



 53

de hidróxido de cálcio não afeta todos os membros da microbiota 

endodôntica; que devem ser usados em canais radiculares infectados 

como curativo de demora, embora apresentem a controvérsia a respeito 

de um tempo ideal de manutenção; que devem estar associados a outros 

medicamentos para que possam agir de forma sinérgica, aumentando o 

espectro de ação antimicrobiana frente às bactérias resistentes, 

enfatizando o uso do PMCC; e por fim que estes curativos parece atuar 

como uma barreira mecânica às reinfecções quando o curativo de demora 

entra em contato com a saliva. Concluíram enfatizando a necessidade da 

realização de mais estudos sobre mecanismos de ação e eficácia 

antibacteriana, da sua associação com outros medicamentos. 

 

Nelson Filho98 (2000), em estudo in vivo, radiográfico e 

histopatológico, util izando dentes de cães, testou o efeito da endotoxina 

liofil izada de Escherichia coli, sobre os tecidos apicais e periapicais, LPS 

+ PBS (Grupo I), LPS + PBS associado ao hidróxido de cálcio P.A. (Grupo 

II). Para controles negativo e positivo, respectivamente, util izou dentes 

preenchidos com soro fisiológico (Grupo III) e dentes com lesões 

periapicais induzidas (Grupo IV). Após o período de 30 dias, efetuou 

tomadas radiográficas. Constatou lesões periapicais em dentes dos 

Grupos I e IV e  integridade periapical para elementos dos Grupos II e III. 

O quadro histopatológico, evidenciou infiltrado neutrofíl ico/macrofágico 

intenso, reabsorção dos tecidos mineralizados, espessamento do espaço 



 54

periodontal para elementos do Grupo I e IV, ao passo que para aqueles 

dos Grupos II e III apresentaram integridade estrutural dos tecidos 

periapicais, infi ltrado inflamatório suave e, em especial para o Grupo II 

observou massas basófi las, sugerindo mineral ização ao redor do material 

extravasado. Concluiu que o LPS, por si só, ocasionou o desenvolvimento 

de reação periapical e que o Ca(OH)2 foi capaz de detoxificar o LPS in 

vivo. 

 

Han et al.57 (2001), real izaram estudo com proposição de 

avaliar os efeitos antimicrobianos do hidróxido de cálcio contra bactérias 

presentes nos túbulos dentinários e sua relação com a presença de 

camada residual. Para tal, uti l izaram 68 raízes padronizadas de dentes de 

humanos, que foram contaminadas por Enterococcus faecalis por 3 

semanas após a remoção da camada residual. Passado este período, a 

camada residual foi recomposta e em metade das amostras, esta camada 

foi novamente removida. Uti l izaram curativos à base de hidróxido de 

cálcio nas amostras que foram divididas em  4 grupos: (a) ausência de 

camada residual sob ação de pasta de Ca(OH)2  em veículo aquoso; (b) 

ausência de camada residual sob ação de pasta  de Ca(OH)2 veiculada 

em óleo de si l icone; (c) presença de camada residual sob ação de pasta  

de Ca(OH)2  em veículo aquoso; (d) presença de camada residual sob 

ação de pasta de Ca(OH)2 veiculada em óleo de sil icone. As pastas 

medicamentosas foram colocadas nos canais radiculares por 7 dias. Após 



 55

a remoção destas, chips de dentina foram coletados e incubados para 

verif icação da presença bacteriana. Concluíram que todas as pastas  à 

base de Ca(OH)2 foram eficazes na eliminação das bactérias nos túbulos 

dentinários, exceto no grupo D (presença de camada residual sob ação de 

pasta de Ca(OH)2 veiculada em óleo de si l icone). 

 

Almyroudi et al.4 (2002), em estudo in vitro, util izando 

dentes de humanos previamente contaminados com Enterococcus faecalis 

avaliaram a eficácia de 4 desinfetantes como medicação intra-canal em 

experimento: hidróxido de cálcio, gel de clorexidina, clorexidina na forma 

de l iberação controlada (PerioChip) e uma combinação de gel de 

clorexidina com hidróxido de cálcio. Uma solução de soro fisiológico foi 

uti l izada como controle. Os desinfetantes foram testados em 3 períodos 

distintos (3, 8 e 14 dias). Observaram que o Ca(OH)2 foi eficaz na ação 

bactericida nos períodos de 3 e 8 dias, porém ineficaz para o período de 

14 dias. As diferentes formulações à base de clorexidina foram eficazes 

para todos os períodos de tempo estudados. A combinação de gel de 

clorexidina apresentou ação l igeiramente melhor que a forma em chip, 

sem que fosse significativa a diferença entre estas medicações. 

 

                     Berbert et al.14 (2002) avaliaram a resposta histopatológica 

de tecidos periapicais após o tratamento endodôntico de dentes de cães 

com polpas necróticas e com periodontite apical crônica, uti l izando 2 



 56

curativos de demora à base de hidróxido de cálcio. Setenta e oito canais 

radiculares foram instrumentados uti l izando como solução irr igadora o 

hipoclorito de sódio a 5,25%, e tendo seus interiores preenchidos com  

curativos de demora (Calen PMCC ou Calasept) que al i  permaneceram 

por 30 dias. Os canais radiculares foram posteriormente obturados por 

condensação lateral ativa de cones de guta percha e cimento endodôntico 

(Sealapex ou AH Plus), após 360 dias, os animais foram mortos por sobre 

dose anestésica, e os dentes foram preparados histologicamente, 

seccionados e corados com hematoxil ina e eosina para análise por 

microscopia óptica da reparação dos tecidos apicais e periapicais. A 

análise estatística mostrou que os resultados histopatológicos mais 

pobres foram observados no grupo  Calasept/AH Plus, e que o cimento 

Sealapex para todos os casos em que foi uti l izado, resultou em melhor 

reparo apical e periapical quando comparado ao grupo do cimento AH 

Plus. Os resultados histopatológicos do Calen PMCC tanto associado ao 

cimento AH Plus e Sealapex e a pasta Calasept associada apenas ao 

Sealapex, foram similares estatisticamente, porém diferentes dos 

resultados apresentados na associação Calasept com AH Plus. 

Concluíram que os resultados deste estudo em cães apresentou 

diferenças na reparação tecidual de dentes com periodontite apical 

crônica pelo uso de dois curativos de demora à base de hidróxido de 

cálcio e dois cim entos. Recomendaram novas pesquisas necessárias na 

determinação da melhor combinação entre curativo de demora e cimento 



 57

obturador. 

 

Gomes, B.P. et al.48 (2002), investigaram a suceptibil idade 

de alguns microrganismos comumente isolados de canais radiculares ao 

hidróxido de cálcio em combinação com vários veículos, pelo método de 

difusão em ágar. Cil indros de aço inoxidável foram posicionados em cada 

meio de ágar inoculado. Os medicamentos testados e seus controles 

foram colocados no interior dos cil indros. As zonas de inibição de 

crescimento foram medidas e registradas após o período de incubação 

para cada placa, e os resultados foram submetidos à análise estatística. 

Enterococcus faecalis foi a espécie bacteriana mais resistente, ao passo 

que Porphyromonas endodontalis foi mais suscetível a todos os 

medicamentos seguido de Porphyromonas gingivalis e Prevotella 

intermedia/intermedia. O hidróxido de cálcio+PMCC+ glicerina apresentou 

zonas de inibição com as médias mais elevadas quando comparado com 

as outras m edicações. Concluíram que bactérias anaeróbias gram -

negativas são mais suscetíveis às pastas de hidróxido de cálcio que 

microrganismos gram -positivos facultativos. 

 

Holland et al.61 (2002), uti l izaram 24 dentes de humanos, 

extraídos por finalidade ortodôntica e preparados biomecanicamente, 

submetidos à remoção de cemento e tratados por 5 minutos com EDTA. 

Preencheram os canais com pasta de hidróxido de cálcio em água 



 58

desti lada, selando em seguida as aberturas coronárias. Os dentes foram 

mergulhados em água desti lada e o pH avaliado diariamente. Observaram 

aumento gradativo do pH, que chegou a 8,6 aos 30 dias.  Após a remoção 

do curativo, os canais foram submetidos à obturação com óxido de zinco 

ou Sealapex, e novamente mergulhados em água desti lada e tendo o pH 

avaliado diariamente até 30 dias Constataram neste período de tempo 

que o Sealapex apresentou um pH 8,40, ao passo que o óxido de zinco e 

eugenol apresentou pH 7,26. Concluíram que o aumento de pH da dentina 

é lento e progressivo, e que dentre os cimentos estudados, apenas o 

Sealapex manteve o pH alcançado pela pasta de hidróxido de cálcio. 

 

Leonardo et al.81 (2002) aval iaram a reparação apical e 

periapical uti l izando curativos de demora para canais radiculares à base 

de hidróxido de cálcio para diferentes períodos de tempo em dentes com 

lesões periapicais induzidas. Um total de 61 canais radiculares de pré-

molares superiores e inferiores de 4 cães foram uti l izados. Após o 

preparo biomecânico dos canais radiculares através de técnica coroa-

ápice e solução irr igadora de hipoclorito de sódio a 5,25%, os forames 

apicais foram alargados em todos os casos. Foi aplicado curativo de 

demora à base de hidróxido de cálcio, sendo que  o grupo não recebeu 

este medicamento. Os animais foram mortos após 7, 15 ou 30 dias. Após 

preparação histológica, secções seriadas foram coradas com hematoxil ina 

e eosina e tr icrômico de Mallory. Concluíram que os melhores resultados 



 59

histopatológicos ocorreram aos 15 e 30 dias, e os piores resultados aos 7 

dias e com o grupo controle.  

 

Nelson Filho et al.99 (2002), avaliaram através de 

radiografias as regiões apical e periapical de dentes de cães submetidos 

à colocação intracanal de endotoxina bacteriana (l ipopolissacáride, LPS), 

associada ou não ao hidróxido de cálcio. Após a remoção do tecido 

pulpar, dividiram 60 prémolares em 4 grupos dist intos, que foram 

preenchidos com: toxina bacteriana (Grupo I), toxina bacteriana mais 

hidróxido de cálcio (Grupo II), solução salina (Grupo III), e lesões 

periapicais induzidas sem tratamento (Grupo IV) por um período de 30 

dias. Lesões periapicais semelhantes foram observadas nos Grupos I e 

IV. A presença de lâmina dura intacta foi observada nos Grupos II e III. 

Concluíram que o LPS determinou a lesão periapical visível 

radiograficamente, entretanto, quando associada ao Ca(OH)2, esta 

substância foi detoxicada. 

 

Peters et al.107 (2002), aval iaram a reparação das lesões 

periapicais relacionadas a canais radiculares com culturas negativas ou 

posit ivas no momento da obturação, além da avaliação da reparação 

periapical de dentes tratados em apenas uma sessão, ou em duas 

sessões com a uti l ização de curativo de demora à base de hidróxido de 



 60

cálcio entre estas. Para tal, 39 pacientes foram submetidos à terapia 

endodôntica. Na primeira sessão os dentes foram instrumentados, e 18 

destes dentes foram preenchidos com hidróxido de cálcio em veículo 

aquoso (solução salina), após coleta microbiana. Os outros 21 dentes 

restantes,foram obturados com cones de guta -percha e cimento AH-26, 

após coleta microbiana. Após quatro semanas, os dentes preenchidos 

com pasta de hidróxido de cálcio foram novamente acessados e 

novamente foi realizada coleta microbiana, sendo em seguida obturados 

com guta -percha e cimento AH-26. A reparação da radiolucência 

periapical foi registrada ao longo de um período de até 4,5 anos. 

Observaram que todas as lesões periapicais reduziram dimensionalmente 

de maneira signif icativa quando da proservação. A reparação radiográfica 

completa foi observada em 81% dos casos executados em uma sessão, e 

7 1 %  e m  casos onde foram executadas duas sessões intermediadas pelo 

curativo de demora à base de hidróxido de cálcio. Sete de 8 casos 

(87,5%) que apresentaram cultura positiva de material coletado  dos 

canais radiculares, na hora da obturação, repararam. O número de 

unidades formadoras de colônias (ufc), em 6 de 8 casos posit ivos foi  

<102 ufc/mL. Concluíram que dentro das l imitações deste estudo, não 

foram significativas as diferenças de reparação das lesões vistas 

radiograficamente entre grupos tratados em uma ou duas sessões. 

Segundo os autores a presença de culturas bacterianas positivas no 

momento da obturação dos canais radiculares, não influenciou no sucesso 



 61

do tratamento. 

 

Tanomaru Filho et al.143 (2002), aval iaram o reparo apical 

e periapical após o tratamento endodôntico de dentes com necrose pulpar 

e lesão periapical crônica em cães. Setenta e dois canais radiculares de 

quatro cães sem raça definida foram submetidos ao preparo biomecânico, 

uti l izando as soluções irrigadoras: hipoclorito de sódio 5,25% ou 

digluconato de clorexidina 2%. Subseqüentemente os dentes foram 

divididos, naqueles obturados imediatamente com Sealapex e técnica de 

condensação ativa, e nos que foram submetidos à colocação de curativo à 

base de Ca(OH)2, Calen PMCC, e obturados após o período de 15 dias 

com Sealapex. Após 210 dias, os animais foram mortos e t iveram as 

secções removidas e processadas laboratorialmente para análise 

histológica. Observaram melhor reparo histológico nos grupos que 

receberam medicação intracanal (p<0.05), e nos grupos que foram 

irr igados com solução de clorexidina. 

 

 



 62

§ Biologia Molecular na Endodontia 

 

Mullis et al.92,93 ,94,  do Departamento de Genética Humana 

(Cetus Corporation-Emeryvil le-CA), relataram o sistema de amplif icação 

de DNA específico da β -globulina humana e para o diagnóstico pré-natal 

de anemia falciforme pela técnica  de reação em cadeia da polimerase 

(PCR-polymerase chain reaction). A patente da técnica foi registrada sob 

o número 4.683.202 (U.S. Patent) em 28 de julho de 1987. Em 1993 foi 

agraciado com o prêmio Nobel em Química pelo desenvolvimento da 

técnica PCR. 

 

Joshi et al.63 (1991), empregaram a técnica PCR em 

células bacterianas inteiras como material inicial. Até então, não havia 

estudos sistemáticos suficientes sobre a necessidade do isolamento do 

DNA como material inicial para a execução da técnica. A partir do uso de 

Salmonella typhimurium e Escherichia coli cultivadas tanto em meios 

l íquidos como em sólidos, propuseram uma metodologia onde estas 

podem ser usadas diretamente na técnica, sem  quaisquer pré-

tratamentos, el iminando assim a necessidade de isolamento prévio do 

DNA. 

 

Menard & Mouton84 (1993), investigaram aspectos 

taxonômicos de Porphyromonas gingivalis,  de origem humana e de outras 



 63

espécies animais, pela técnica PCR com primer  arbitrário (AP-PCR). 

Concluíram que este tipo de teste apresenta util idade para estudos 

epidemiológicos de patógenos periodontais, pois identif ica a 

heterogenicidade e biótipos e subtipos de diversas cepas. 

 

Chen & Slots 24 (1994), em estudo similar, examinaram a  

utilidade do AP-PCR (PCR com primers  arbitrários) para detecção 

genotípica por meio de amplicons de Porphyromonas gingivalis, 

possibilitando a distinção de cepas virulentas e não virulentas. O DNA foi 

extraído de acordo com método convencional. 10 primers 

(oligonucleotídeos), com seqüências arbitrárias foram uti l izados na 

reação em cadeia da polimerase para amplif icar o DNA genômico desta 

espécie. Os produtos de amplif icação foram analisados por eletroforese 

em gel de agarose. Concluíram que o AP-PCR representa um método 

valoroso e de fácil execução para análise clonal de P. gingivalis. 

 

Socransky et al.133 (1994), introduziram um método para 

hibridação de várias amostras de DNA simultaneamente, cruzando-as com 

um grande número de sondas de DNA na superfíc ie de uma membrana de 

nylon. A técnica denominada hibridação checkerboard  DNA-DNA, consiste 

na desnaturação de DNA de até 43 amostras, que são dispostas em 

faixas horizontais. A membrana é girada a 90o no mesmo aparelho, em 43 

faixas verticais são vertidas as sondas de DNA com marcadores. Onde 



 64

houver recombinação gênica do DNA, nas interseções amostra/sonda, 

evidencia a presença de determinada espécie. A técnica permite 

determinação simultânea da presença de múlt iplas amostras em apenas 

um exame. 

 

Conrads et al.26 (1997) uti l izaram o PCR direcionado ao 

gene 16S rDNA, para detecção e diferenciação de bactérias de amostras 

colhidas de canais radiculares necrosados. O exame priorizou espécies 

fastidiosas, ou que apresentassem dificuldade de identificação por 

métodos bioquímicos após técnica de cultura. Encontraram as espécies 

do gênero Actinomyces, Fusobacterium nucleatum, Streptococcus mil leri, 

e presumidamente, descrito pela primeira vez, Bacteroides forsythus. A 

identidade dos amplicons foi confirmada pelas seqüências geradas e 

comparação das informações com dados de bancos de genes. 

 

Bogen & Slots 17 (1999), avaliaram a presença de bacilos 

anaeróbios, gram -negativos pigmentados de negro (Porphyromonas 

endodontalis, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia e  

Prevotella nigrescens) em lesões periapicais fechadas, em dentes de 

humanos apresentando afecções endodônticas refratárias ao tratamento  

endodôntico convencional e com indicação cirúrgica. Uti l izaram a reação 

em cadeia da pol imerase (PCR) baseada no gene 16S rRNA, com alto 

grau de sensibil idade na identificação de espécies bacterianas de difícil 



 65

detecção por técnicas microbiológicas convencionais. Não identif icaram 

P. endodontalis, P. intermedia nem P. nigrescens em nenhum dos casos. 

P. gingivalis foi isolada em apenas um dos casos (associado à dor 

moderada), mostrando a menor freqüência neste t ipo de lesão. 

 

Gonçalves & Mouton52 (1999), avaliaram a prevalência de 

Bacteroides forsythus em 11 canais radiculares, de dentes com polpas 

necrosadas e lesões periapicais, empregando 4 técnicas, dentre as quais 

2 baseadas na  biologia molecular (o PCR e o slot-blot). Após a 

imunocaptura, com o método PCR (IM -PCR-DNA), evidenciaram a maior 

prevalência (6/11), enquanto o menor valor foi obtido pelo slot-blot (3/11), 

5/11 pelo ELISA e 4/11 pela imunofluorescência. Concluíram que 

Bacteroides forsythus não são identificados nestes casos por técnicas  de 

cultura por serem de difícil crescimento. 

 

Gonçalves et al.53 (1999), colheram amostras de canais 

radiculares infe ctados e de biofi lme microbiano subgengival de dentes de 

10 pacientes sem cáries ou restaurações profundas, por técnica em 

anaerobiose para anaeróbios pigmentados de negro. Destas amostras, 

colônias de Porphyromonas gingivalis e Prevotella nigrescens, isoladas 

de 4 pacientes, foram identif icadas pela amplificação PCR espécie-

específica. A técnica PCR com primer  arbitrário (AP-PCR) foi realizada 

para examinar a diversidade genética dos microrganismos isolados, 



 66

revelando que P. gingivalis ou P. nigrescens tanto no sistema de canais 

radiculares como na placa subgengival, em todos os 4 pacientes, 

mostraram -se indistinguíveis. Concluíram que o endodonto e o periodonto 

podem ser colonizados pelos mesmos t ipos clonais de anaeróbios 

pigmentados de negro. 

 

Tran & Rudney145 (1999), uti l izaram a técnica PCR 

multiplex para detecção simultânea de três espécies de bactérias, 

envolvidas na etiologia da periodontite. Compararam Actinobacillus 

actinomycetemcomitans, Bacteroides forsythus e Porphyromonas 

gingivalis, isoladas de biofi lmes bacterianos supra e subgengivais de 

pacientes com periodonto saudável, e do biofi lme bacteriano subgengival 

de pacientes portadores de periodontite. Observaram que esta técnica é 

simples, rápida,econômica e eficaz na amplif icação, multiplex,  em  única 

reação. 

 

Baumgartner et. al.13 (2000) aval iaram a presença de 

Candida albicans em 24 amostras de canais radiculares infectados e de 

fluidos aspirados de processos patológicos periapicais 

(celulites/abscessos). As amostras foram submetidas à técnica PCR. 

Detectaram C. albicans em 5 das 24 amostras provenientes de canais 

radiculares (21%). Entretanto, não encontraram este fungo em quaisquer 

das amostras aspiradas da região periapical. Concluíram que o PCR é 



 67

uma técnica extremamente sensível na identifi cação de C. albicans em 

amostras coletadas de canais radiculares contaminados. 

 

Siqueira et al.128 (2000), verif icaram a presença de 

espécies bacterianas em 28 amostras de canais radiculares usando 42 

sondas de DNA e hibridação checkerboard  DNA-DNA. Para confirmar a 

presença de DNA bacteriano nas amostras clínicas, foi executado um 

teste PCR com primers  comuns à maioria das espécies bacterianas. Com 

hibridação checkerboard  DNA-DNA, mostraram que 22 de 42 sondas 

uti l izadas foram reativas com uma ou mais amostras. O número de 

espécies bacterianas nas amostras de canais,  variaram de 1 a 17 (média 

4,7). Dezessete de 28 amostras foram posit ivas ao menos para uma 

sonda. As espécies mais prevalentes foram as seguintes: Bacteroides 

forsythus (39,3%); Haemophilus aphrophilus (25%); Corynebacterium 

matruchoti i  (21,4%); Porphyromonas gingivalis (17,9%) e Treponema 

denticola (17,9%). Concluíram que os métodos baseados na biologia 

molecular podem propiciar conhecimento adicional signif icativo 

concernente à microbiota endodôntica pela detecção de bactérias que não 

desenvolvem em meios de cultura. 

 

Oliveira et al.103 (2000), aval iaram a ocorrência de 

Porphyromonas endodontalis  em infecções endodônticas, sintomáticas ou 

assintomáticas, usando a técnica PCR gene-direcionado. Detectaram a 



 68

espécie em 39,5% dos casos (17 de 43 dentes). Quatro casos de seis 

com abscesso periapical agudo (66,7%) e em 13 de 37 outros casos 

(35,1%). A presença de P. endodontalis estava associada com lesão 

periapical assintomática em 6 casos (25%) e em 10 dentes sensíveis à 

percussão (52,6%). A espécie foi detectada em um caso assintomático, 

sem evidência de lesão periapical. Concluíram que apesar de ser 

comumente detectados em casos sintomáticos, Porphyromonas 

endodontalis pode estar presente em casos assintomáticos. 

 

Sunde et al.138 (2000), identif icaram bactérias das lesões 

periapicais de dentes assintomáticos. Selecionaram 34 dentes com canais 

obturados, e portadores de lesões periapicais, divididos em dois grupos 

de 17 indivíduos. No Grupo I, executaram a técnica cirúrgica usando 

incisão marginal, até a exposição da lesão, e no Grupo II, realizaram uma 

incisão submarginal. As lesões foram removidas uti l izando curetas 

esteri l izadas, e imediatamente colocadas em recipientes contendo 10mL 

de meio para transporte, pré-reduzido para anaeróbios e esteri l izados 

(PRAS). Executaram a técnica de hibridação checkerboard DNA-DNA, 

uti l izando 40 diferentes sondas de DNA completo. A maioria das sondas 

evidenciou a presença de bactérias no Grupo I em relação ao Grupo II, 

sugerindo que na incisão marginal, bactérias da bolsa periodontal, podem 

alcançar os tecidos subjacentes por ação iatrogênica. Demonstraram que 

bactérias invadem os tecidos das lesões periapicais de dentes 



 69

assintomáticos. Concluíram que a detecção de mais espécies bacterianas, 

que escaparam às técnicas de cultura em anaerobiose, com a hibridação 

checkerboard  DNA-DNA deve  redefinir a evidenciação de microbiota por 

métodos moleculares. 

 

Jung et al.65 (2001), com o propósito de identif icar 

espécies de espiroquetas originárias de infecções endodônticas e 

determinar a associação deste gênero com Bacteroides forsythus e 

Porphyromonas gingivalis,  selecionaram 79 dentes portadores de 

periodontite apical. Com amostras de material coletadas de maneira 

asséptica de canais radiculares, executaram a técnica PCR para 

amplif icação do gene 16 rRNA. Subseqüentemente, a hibridação dot-blot 

foi realizada com 8 sondas de oligonucleotídeos espécie-específicas. As 

associações microbianas foram analisadas através de razão de 

imparidade. Encontraram como espécie mais freqüente Porphyromonas  

gingivalis seguido de Treponema maltophilum , Bacteroides forsythus e 

Treponema socranskii. Outros treponemas, incluindo Treponema 

denticola, não foram detectados. Associações microbianas significantes 

foram identifi cadas  entre T. maltophilum, B. forsythus e P. gingivalis. 

Concluíram que Treponema maltophilum  deve ser incluído em estudos 

etiológicos das patologias endodônticas. 

 

Rolph et al.113 (2001) usaram o PCR 16S rRNA, seguido por 



 70

clonagem e seqüenciamento de amplicons 16S rRNA em pequeno subconjunto 

de amostras, para averiguar a diversidade das bactérias presentes em canais 

radiculares infectados. Uti l izaram um total de 41 amostras clínicas de 15 casos 

(DE NOVO) e 26 casos refratários de infecções endodônticas. Destas 

amostras, 44% foram positivas por cultura, e 68%  positivas ao PCR. Oito 

amostras foram selecionadas para posterior análise. Destas, os dois casos 

portadores de gangrena pulpar e lesão periapical (DE NOVO) revelaram 

seqüênc ias relacionadas aos gêneros Enterococcus ,  Lactobacillus ,  

Propionibacterium e  Streptococcus  e dois clones foram relacionados a 

bactérias previamente não cult ivadas, enquanto o trajeto f istuloso associado 

dos casos revelaram seqüências para os gêneros Lactobacillus ,  Pantoea,  

Prevotella e  Selenomonas .  Os 5 casos refratários eram de clones relacionados 

aos gêneros Capnocytophaga,  Cytophaga,  Dialister,  Eubacterium,  

Fusobacterium,  Gemella,  Mogibacterium,  Peptostreptococcus ,  Prevotella,  

Propionibacterium,  Selenomonas ,  Solobacterium,  Streptococcus  e  Veillonella e  

dois clones representando bactérias não cult ivadas até então. As posições 

f i logenét icas de vár ios clones associados aos subgrupos Clostridiaceae e  

Sporumosa do grupamento Firmicutes ,  também foram detectados. Este estudo 

demonstrou que técnicas moleculares podem detectar as bactérias em 

infecções endodônticas, quando técnicas de cultura revelaram resultados 

negativos e podem ser ut i l izadas para identi f icar um amplo espectro de 

bactérias relacionadas às infecções endodônt icas, incluindo a presença de 

espécies jamais identi f icadas ou cult ivadas. 

 

Siqueira et al.127 (2001) uti l izaram o método PCR 16S  



 71

rDNA direcionado com o intuito de investigar a ocorrência de quatro 

bacilos anaeróbios pigmentados de negro (Porphyromonas gingivalis, 

Porphyromonas endodontalis , Prevotella intermedia e Prevotella 

nigrescens) em infecções endodônticas. Obtiveram amostras de 54 dentes 

infectados de humanos, dos quais 10 casos apresentaram afecção 

supurativa (abscesso dento -alveolar agudo). A técnica molecular 

empregada permitiu a detecção de bactérias anaeróbias pigmentadas de 

negro em 59,3% dos dentes. Doze casos apresentaram mais de uma 

espécie de bactéria pigmentada de negro. Quantif icaram a presença das 

espécies, onde da totalidade dos casos 42,6% apresentaram P. 

endodontalis, 27,8% P. gingivalis, 7,4% P. nigrescens e 5,6% P. 

intermedia . Nos quadros de abscesso as espécies bacterianas foram 

encontradas nas seguintes proporções: P. endodontalis 70%, P. gingivalis 

40% e P. intermedia  10%, sem evidenciar P. nigrescens para estes casos. 

Concluíram que a alta prevalência de P. endodontalis e P. gingivalis 

sugere que estas espécies podem desempenhar um importante papel na 

patogênese das alterações periapicais. 

 

Fouad et al.41 (2002), uti l izaram primers  direcionados a 

genes 16S rRNA (à partir de genes provenientes do gênero Enterococcus)  

para identif icar 10 supostos patógenos bacterianos em canais radiculares 

com polpas necrosadas. Adicional