RESSALVA 

Atendendo solicitação do(a) 
autor(a), o texto completo desta 
dissertação será disponibilizado 
somente a partir de 19/07/2021. 



                

Programa de Pós-graduação em Biologia Geral e Aplicada 
Instituto de Biociências de Botucatu/ UNESP 
Rua Professor Doutor Antonio Celso Wagner Zanin, 250 - CEP 18618-689 - Botucatu - SP - Brasil 
Tel (14) 3880-0781 posgraduacao@ibb.unesp.br 

Campus de Botucatu 

Instituto de  
Biociências PG-BGA 

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA 

“Júlio de Mesquita Filho” 

INSTITUTO DE BIOCIÊNCIAS DE BOTUCATU 

EFEITOS DA RESTRIÇÃO PROTEICA MATERNA SOBRE O 

DESENVOLVIMENTO DO DUCTO MESONÉFRICO E DO 

EPIDÍDIMO NAS FASES INICIAIS EM RATOS WISTAR 

TALITA DE MELLO SANTOS 

PROFA DRA RAQUEL FANTIN DOMENICONI 

PROF DR LUIZ GUSTAVO DE ALMEIDA CHUFFA 

Tese apresentada ao Instituto de Biociências, Campus de 

Botucatu, UNESP, para obtenção do título de Doutora no 

Programa de Pós-Graduação em Biologia Geral e 

Aplicada, Área de concentração Biologia Celular 

Estrutural e Funcional. 

Profa Dra Raquel Fantin Domeniconi 

BOTUCATU – SP 

2019



                                                                                                                                                                               
 

 

Campus de Botucatu 

Instituto de  
Biociências PG-BGA 

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA 

“Júlio de Mesquita Filho” 

INSTITUTO DE BIOCIÊNCIAS DE BOTUCATU  

 

 

 

Efeitos da Restrição Proteica Materna sobre o Desenvolvimento do 

Ducto Mesonéfrico e do Epidídimo nas Fases Inicias em Ratos Wistar  

 

 

 

 

TALITA DE MELLO SANTOS 

 

 

 

 

 

 

Profa Dra Raquel Fantin Domeniconi 

Prof Dr Luiz Gustavo De Almeida Chuffa 

 

 

 

 

 

 

 

BOTUCATU – SP  

2019  

 



Palavras-chave: Desenvolvimento epididimário; Fatores de

crescimento; Programação fetal; Receptores hormonais;

Restrição proteica.

Santos, Talita de Mello.

   Efeitos da restrição proteica materna sobre o

desenvolvimento do ducto mesonéfrico e do epidídimo nas

fases inicias em ratos Wistar / Talita de Mello Santos. -

Botucatu, 2019

   Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista

"Júlio de Mesquita Filho", Instituto de Biociências de

Botucatu

   Orientador: Raquel Fantin Domeniconi

   Coorientador: Luiz Gustavo de Almeida Chuffa

   Capes: 20600003

   1. Epidídimo. 2. Desenvolvimento fetal. 3. Deficiência

de proteína. 4. Receptores hormonais. 

DIVISÃO TÉCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAÇÃO - CÂMPUS DE BOTUCATU - UNESP

BIBLIOTECÁRIA RESPONSÁVEL: LUCIANA PIZZANI-CRB 8/6772

FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA SEÇÃO TÉC. AQUIS. TRATAMENTO DA INFORM.



 

 

 

  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Pelo amor, pela inspiração, por toda a saudade, 

dedico este trabalho aos meus avós maternos Iná e 

Wilson, e paternos Milxe e Laudelino.  

 

 

 

 

 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Agradecimentos 



 

 

Não é fácil lidar com o desconhecido sem ter fé que todo o esforço será recompensado 

e principalmente sem acreditar em Deus. Por vezes sentimos que aquilo que fazemos não é 

senão uma gota de água no mar. Mas o mar seria então menor a cada gota que lhe faltasse. 

Agradeço primeiramente a Deus por ter me concedido a oportunidade de chegar aonde estou e 

por ter me dado sabedoria para lidar com as dificuldades. 

Agradeço ao programa de Pós-graduação em Biologia Geral e Aplicada, ao Instituto de 

Biociências de Botucatu e a UNESP pela estrutura e apoio para a realização deste trabalho, e a 

CAPES pelo suporte financeiro.  

Á todos os mestres que fizeram parte da minha formação acadêmica e, em especial, aos 

professores do departamento de Anatomia do IBB e aos professores da banca pela dedicação e 

profissionalismo. Com respeito, agradeço a minha orientadora, Professora Raquel Fantin 

Domeniconi por confiar em meu trabalho, ter me dado à oportunidade de crescer 

profissionalmente, pela paciência, pelo suporte intelectual e pela sua alegria que contagia os 

que com ela convivem. Exemplo de mulher e profissional que por muitas vezes com carinho 

me aconselhou, me apoiou e me espelhou também em minha vida pessoal. Ao meu coorientador 

Professor Luiz Gustavo de Almeida Chuffa, sou muito grata por ter me acolhido e me dado 

suporte em todos os momentos que precisei, foi um prazer trabalhar e conviver com um ser tão 

inteligente, profissional e alto-astral. Como disse Isaac Newton, se eu vi mais longe, foi por 

estar sobre ombros de gigantes. 

Aos colegas do departamento de Anatomia, sou grata pelo apoio nos experimentos e 

auxílio no dia a dia, e também pelos momentos de risada e descontração em nosso laboratório. 

Anos de convivência que nos tonaram amigos. Em especial, a minha colega de doutorado e 

amiga Marilia, a qual sem dúvida alguma, foi fundamental em todos esses anos. Ao longo 

desses quatro anos aprendi a respeitar mais os limites e as diferenças, e seu exemplo foi 

fundamental para isso. Sofremos e choramos, demos risadas e aproveitamos cada momento, 

incluindo o friozinho de Montreal e margueritas em Cancún. Obrigada por ser quem és. As 

minhas amigas Carina e Aninha, as quais participaram diariamente da minha vida profissional 

e pessoal, gratidão por serem tão importantes e especiais, cada uma em seu modo de ser. 

Gostaria de agradecer também o Professor Barry Hinton da Universidade da Virginia 

pela oportunidade profissional dada a mim. Além disso, pela primeira vez tanto tempo longe 

de casa, em um país diferente, outra língua e cultura, fui acolhida por pessoas tão especiais 

como o Prof Hinton e sua família. Tenho certeza de que esta experiência me fez crescer muito 

em minha vida profissional e também como ser humano.   



 

 

Este momento jamais seria o mesmo sem o apoio, o exemplo e incentivo da minha 

família. Minha mãe Silvia, meu pai Jádi, meu tio Júnior e meu padrasto Edson, que estiveram 

ao meu lado em todos os momentos me dando amor, suporte emocional, confiança e apoio 

financeiro. Não tenho palavras para dizer o quanto eu amo vocês e o tamanho da minha 

gratidão.  Espero que possa ser orgulho e retribuir tudo o que fizeram e fazem por mim. 

Tenho a sorte de viver rodeada de amor, carinho, incentivo e amizade. Aos meus 

amigos, que estão presentes fisicamente ou virtualmente nos diversos momentos da minha vida, 

minha gratidão. Minhas amigas de morada Ketlin e Priscila, minha professora de inglês Anita, 

nossa IC Dhrielly e a tantos encontros, que de alguma forma fizeram parte desses mais de 10 

anos em Botucatu, meu carinho. Seria difícil e injusto exemplificar cada um. Sei que cada um 

sabe o que significa para mim e o quão foram e são importantes para tornar os meus dias mais 

leves e alegres. Um sorriso pode mudar um dia e por isso sou grata a todos que de alguma forma 

contribuíram para a realização desde sonho. Muito obrigada!  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

“Quanto mais eu estudo a natureza,  

mais me maravilho com a obra do Criador.” 

                                                                                                        (Louis Pasteur) 

 

 

 

 

 

 



 

 

 

SUMÁRIO 

 

RESUMO ........................................................................................................................... 11 

ABSTRACT ....................................................................................................................... 14 

INTRODUÇÃO .................................................................................................................. 17 

Aspectos Gerais da Desnutrição Materna e o Desenvolvimento Fetal ............................... 18 

Origem do Desenvolvimento da Saúde e de Doenças e a Restrição Proteica ..................... 19 

Restrição Proteica Materna e o Sistema Genital Masculino .............................................. 21 

Epidídimo ........................................................................................................................ 23 

Morfogênese Epididimária ............................................................................................... 26 

CAPÍTULOS ...................................................................................................................... 37 

CAPÍTULO I...................................................................................................................... 39 

Maternal Low-Protein Diet During Gestation and Lactation Causes Estrogenization and 

lead to an Impairment an Epididymal Development in the Early Postnatal Development of 

Male Rat Offspring. ......................................................................................................... 40 

Abstract ........................................................................................................................... 40 

1. Introduction .................................................................................................................. 41 

2. Material And Methods .................................................................................................. 42 

3. Results ......................................................................................................................... 46 

4. Discussion And Conclusion .......................................................................................... 55 

5. References.................................................................................................................... 61 

CAPÍTULO II .................................................................................................................... 68 

Maternal Protein Restriction Modulates Angiogenesis and AQP9 Expression leading to a 

Delay in Postnatal Epididymal Development in Rat ............ Erro! Indicador não definido. 

Abstract .............................................................................. Erro! Indicador não definido. 

1. Introduction ..................................................................... Erro! Indicador não definido. 

2. Material And Methods ..................................................... Erro! Indicador não definido. 

3. Results ............................................................................ Erro! Indicador não definido. 

4. Discussion ....................................................................... Erro! Indicador não definido. 

5. Conclusion ...................................................................... Erro! Indicador não definido. 

REFERENCES ................................................................... Erro! Indicador não definido. 

CAPÍTULO III................................................................................................................... 94 

Dieta Materna de Baixa Proteína modula ERK/Src e Wnt9b nas fases iniciais do 

desenvolvimento epididimário na prole masculina de ratos Wistar. ...................................... 95 



 

 

CONCLUSÕES ................................................................................................................ 106 

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................ 108 

 

 

 

   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



11 

 

 

  

 

 

 

 

 

 

 

Resumo 

 

 

 

 

 

 

 

 

Resumo 

 

 

 

 

 

 



12 

 

O ambiente desempenha papel crucial durante o desenvolvimento fetal, podendo influenciar 1 

diretamente a saúde da prole. Assim, o estado nutricional materno é essencial para a saúde e 2 

bem-estar do feto. Há relatos de alterações em parâmetros relacionados à função epididimária, 3 

em animais adultos, cujas mães sofreram restrição de proteína durante as fases de gestação e 4 

lactação. A origem das alterações funcionais no epidídimo pode estar relacionada à fatores 5 

hormonais, bem como na expressão de seus receptores, e por meio da modulação de moléculas 6 

de sinalização como FGFs (Fator de crescimento de Fibroblastos), vias da ERK e Wnt, e à 7 

funcionalidade da Src, ou seja, proteínas relacionadas aos processos do desenvolvimento 8 

epididimário. No entanto, não há informações que esclareçam as causas dessas alterações ou 9 

como a restrição proteica atua ao longo do desenvolvimento pré e pós-natal do epididímo. Desta 10 

forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o impacto da restrição proteica materna, no ducto 11 

mesonéfrico e no epidídimo nas fases iniciais do desenvolvimento. Assim, ratas Wistar prenhes 12 

foram divididas em dois grupos experimentais que receberam uma dieta de normoproteica (NP; 13 

17% de proteína; n=19) ou hipoproteica (HP; 6% de proteína; n=19) durante a gestação e a 14 

lactação. Cinco ratas prenhes de cada grupo foram eutanasiadas para coleta dos ductos 15 

mesonéfricos dos embriões no dia gestacional (DG)17,5 e as demais permaneceram até os dias 16 

pós-natais (DPN) 7 ou 14. Os filhotes machos tiveram seus parâmetros biométricos aferidos e, 17 

em seguida, foram eutanasiados. Procedeu-se a coleta de sangue para análise dos hormônios 18 

sexuais e dos órgãos genitais, os quais foram pesados e armazenados. Durante toda a fase de 19 

gestação e lactação parâmetros maternos, como consumo alimentar e peso corpóreo, também 20 

foram aferidos. O epidídimo foi processado segundo técnicas histológicas, imuno-21 

histoquímicas e de Western blotting para detecção de AR, ERα, ERβ, 5α-red, P450aro, Wnt9b, 22 

Src Y416 e Y527, Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2), AQP1 e 9, FGFR1 e 2, VEGF, VEGFR, 23 

PCNA. As mães restritas tiveram seus parâmetros alimentares e corpóreos alterados pela dieta, 24 

assim como os filhotes machos, os quais nasceram menores e com redução da distância 25 

anogenital (DAG) e do peso dos órgãos genitais. Os ductos mesonéfricos do grupo HP tiveram 26 

comprimento menor nos tempos de 0h e 24h quando comparado ao grupo NP. No DPN7 houve 27 

aumento de estradiol sérico e dos níveis proteicos da ERK1/2, Src-426, ERα, ERβ, P450 e 28 

VEGFa e diminuição de AR, 5α-red, FGFR1, FGFR2, Src-527, AQP9 e VGFR2, e redução no 29 

diâmetro luminal e tubular na região proximal no grupo HP. No DPN14, houve redução dos 30 

níveis proteicos de AR, AQP9 e Wnt9b e aumento de ERα, P450aro e ERK2 nos animais 31 

restritos. Neste mesmo grupo, a altura do epitélio foi menor nas regiões do segmento inicial 32 

(SI) e corpo, e do diâmetro tubular no corpo. Além disso, o presente estudo foi o primeiro a 33 

realizar a imunolocalização da AQP1 no epidídimo de animais de 14 dias, bem como observar 34 



 

 

diminuição da microdensidade vascular no grupo HP quando comparado ao NP. Concluímos 35 

que a restrição proteica materna altera a morfogênese epididimária durante o desenvolvimento 36 

pré e pós-natal. Essas alterações estão associadas ao suprimento sanguíneo prejudicado, a falhas 37 

nas vias hormonais e a alterações na expressão de proteínas necessárias para a angiogênese, 38 

formação e manutenção do microambiente epididimário, bem como em proteínas responsáveis 39 

pelo crescimento e diferenciação epididimário. Assim, nossos dados sugerem que essas 40 

alterações durante os estágios iniciais do desenvolvimento do epidídimo podem estar 41 

relacionadas a alterações na qualidade dos gametas, já observada em animais adultos.42 



14 

ABSTRACT 

Abstract 



15 

 

The environment plays a crucial role during fetal development and can directly influence the 1 

health of the offspring. Thus, maternal nutritional status is essential for fetus' health and well-2 

being. There have been reports of alterations in parameters related to epididymal function in 3 

adult animals whose mothers suffered protein restriction during the gestation and lactation. The 4 

origin of the functional alterations in the epididymis can be related to the hormonal factors, as 5 

well as in the expression of its receptors, and on signaling molecules modulation like FGFs 6 

(Fibroblast Growth Factor), ERK and Wnt pathways, and functionality of Src, or proteins 7 

related to epididymal development. However, there is no information to clarify the causes of 8 

these changes or how protein restriction acts throughout pre and postnatal development. The 9 

aim of this study was to evaluate the impact of maternal protein restriction on the mesonephric 10 

duct and in the early stages of epididymal development. Pregnant female Wistar rats were 11 

divided into two groups that received either normoprotein (17%; NP) or low-protein (6%; LP) 12 

diet ad libitum during gestation and lactation. Five pregnant rats from each group were 13 

euthanized to collect the mesonephric ducts on gestational day (DG) 17.5 and the others rats 14 

remained until the postnatal days (PND) 7 or PND14. The male offspring had their biometric 15 

parameters verified and were euthanized. Blood was collected for sex hormones analysis and 16 

genital organs were weighted and stored. Throughout the gestation and lactation maternal 17 

parameters, such as food consumption and body weight, were also measured. The epididymis 18 

was processed according to histological, immunohistochemical and Western blotting 19 

techniques for AR, ERα, ERβ, 5α-RD, P450aro, Wnt9b, Src Y416 and Y527, Phospho-p44/42 20 

MAPK (ERK1/2), AQP1 and 9, FGFR1 and 2, VEGF, VEGFR and PCNA detection. Restricted 21 

mothers had their food consumption and body parameters altered by low-protein diet, as did 22 

the male offspring, which were born smaller and with anogenital distance (DAG) reduced. The 23 

HP mesonephric ducts lengths were shorter at 0h and 24h when compared to the NP group. At 24 

PND7 there was an increase in serum estradiol and in the ERK1 / 2, Src-426, ERα, ERβ, P450 25 

and VEGFα protein levels and a reduction in the AR, 5α-red, FGFR1, FGFR2, Src-527, AQP9 26 

and VGFR2 expression. Besides a reduction in the luminal and tubular diameter in the HP 27 

epididymal proximal region. At PND14, there was a reduction of AR, AQP9 and Wnt9b protein 28 

levels and an increase of ERα, P450aro and ERK2 expression in the restricted animals. In this 29 

same group, the epithelium height was smaller in initial segment (SI) and caput, and in the 30 

corpus' tubular diameter. In addition, the present study was the first to perform the AQP1 31 

immunolocalization at 14-day-old animals epididymis, as well as, to observe a decrease in 32 

vascular microdensity in the HP group when compared to NP. We conclude that maternal 33 

protein restriction alters epididymal morphogenesis during pre and postnatal development. 34 



 

 

These changes are associated with blood supply impairment and changes in hormonal pathways 35 

and proteins expression of those that are required for angiogenesis, formation and maintenance 36 

of the epididymal microenvironment, as well as proteins responsible for epididymal growth and 37 

differentiation. Thus, our data suggest that these changes during the early stages of epididymal 38 

development may be related to changes in spermatozoa quality already observed in adult 39 

animals. 40 



17 

 

 

 
 

INTRODUÇÃO 

 

 
 
 
 

Introdução 
 

 

 

 

 



18 

 

Aspectos Gerais da Desnutrição Materna e o Desenvolvimento Fetal 1 

O desenvolvimento embrionário e fetal dos mamíferos envolve eventos 2 

sequenciais altamente controlados e precisos. Esses eventos são amplamente regulados 3 

por meio de diferentes mecanismos e sinalizações moleculares do próprio embrião e, 4 

também podem estar relacionados com as interações do embrião com o ambiente materno. 5 

Assim, o ambiente materno precisa se adequar à gestação e este processo é determinado 6 

pela fisiologia materna e pelo genótipo materno e fetal (Grissom e Bowman, 2014).  7 

As interações entre fatores intrínsecos materno-fetal, como genética e epigenética 8 

e fatores maternos extrínsecos, como a exposição a estressores graves, p.e. agentes tóxicos 9 

ou infecciosos e a nutrição materna, influenciam os processos de desenvolvimento. 10 

Porém, quando esses processos não são orquestrados de maneira correta e/ou eficiente, 11 

podem levar a anormalidades ou desvantagens durante o desenvolvimento de uma nova 12 

vida (Bateson et al., 2004; Indrio et al., 2017).  13 

Está bem descrito na literatura que a má nutrição materna, seja a desnutrição ou 14 

supernutrição, é um dos fatores ambientais mais importantes que modifica o ambiente 15 

intrauterino (Skinner et al., 2010).  A desnutrição é caracterizada pelo desequilíbrio entre 16 

o fornecimento de nutrientes e a demanda corporal responsável por assegurar o bom 17 

funcionamento do organismo (Antiwi, 2008).  18 

Durante o desenvolvimento, o embrião/feto depende totalmente da mãe para que 19 

as suas necessidades nutricionais sejam supridas, e caso não haja uma alimentação 20 

materna equilibrada em seus nutrientes, como proteínas, por exemplo, o indivíduo em 21 

formação pode desenvolver desnutrição precoce (Antiwi, 2008). A desnutrição precoce 22 

pode não somente refletir em baixo peso ao nascimento, mas sim, no desenvolvimento 23 

anormal do embrião/feto levando a mudanças na expressão de genes e consequentemente, 24 

alterando permanentemente a formação do indivíduo. Assim, afetará a morfologia dos 25 

tecidos e o funcionamento dos órgãos e sistemas, bem como, poderá comprometer a 26 

longevidade do ser humano ou animal (Drake & Walker, 2004; Chmurzynska, 2010; Bale 27 

et al., 2010; Qasem et al., 2012). 28 

 29 

 30 

 31 

 32 

 33 



19 

 

Origem do Desenvolvimento da Saúde e de Doenças e a Restrição Proteica 34 

santosA hipótese de “Origem da Saúde e de Doenças durante o Desenvolvimento 35 

(DOHaD)”, amplamente aceita nas últimas décadas, é baseada na interação entre a 36 

plasticidade do desenvolvimento embrionário, os fatores ambientais maternos e o 37 

resultado da saúde e da doença do indivíduo quando jovem ou adulto (Bateson et al., 38 

2004; Barker, 2007).  39 

Conhecida também como programação fetal, estabelece que: as respostas do 40 

organismo em desenvolvimento frente a fatores estressantes ou ambientais não favoráveis, 41 

como a desnutrição materna, durante o período intrauterino e/ou perinatal, são 42 

“memorizadas” pelo embrião/feto, alterando a formação e funcionamento dos órgãos de 43 

maneira irreversível e podendo levar a doenças como câncer na idade adulta (Barker et 44 

al., 1989; Langley-Evans e McMullen, 2010, Santos, 2018). 45 

Nos anos 80, estudos epidemiológicos na Inglaterra e no País de Gales 46 

demonstraram uma associação entre baixo peso ao nascer e doenças cardiovasculares 47 

como hipertensão, infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral na idade adulta, e 48 

assim a hipótese de “origem fetal da doença” proposta por Barker foi apresentada (Barker, 49 

1989). A hipótese foi confirmada por estudos epidemiológicos também em outros países, 50 

os quais demonstraram que o feto pode ser programado para outras doenças crônicas que 51 

não cardiovasculares, como p.e., a diabetes mellitus tipo 2 ou síndrome metabólica. 52 

Assim, durante os anos subsequentes, pesquisas intensivas neste campo, tanto 53 

epidemiológicas quanto experimentais, ampliaram essa perspectiva (Gluckman e Hanson, 54 

2004).  55 

Barker e colaboradores (2002) observaram que a má qualidade da nutrição, 56 

durante os períodos pré e pós-natal, desempenha um fator chave no desenvolvimento de 57 

vários tipos de doenças. Dentre os diversos trabalhos publicados, um estudo recente 58 

mostrou que adultos cujas mães eram obesas e/ou tinham diabetes gestacional adquiriram 59 

a pré-disposição a doenças metabólicas e cardiovasculares, devido a alterações no 60 

epigenoma durante a fase embrionária (Agarwal et al., 2018). 61 

A epigenética define uma variedade de processos que levam a mudanças 62 

hereditárias na expressão gênica sem alterar o sequenciamento do DNA, e ocorre com 63 

frequência durante os estágios iniciais de desenvolvimento (Egger et al., 2004). Como o 64 

genoma é evolutivamente e quimicamente estável, os fatores nutricionais, geralmente, não 65 

causam alterações genômicas nas sequências de DNA. Mas, causam mudanças 66 



20 

 

hereditárias por meio de manipulação independente da sequência de DNA (Skinner et al., 67 

2010). Assim, a má nutrição materna, durante a gestação, pode alterar os padrões de 68 

modificação epigenética, e consequentemente, o embrião/feto gera um fenótipo adaptado 69 

as condições intrauterinas no qual ele foi gerado. Estas alterações podem ser decorrentes 70 

da metilação no DNA, acetilação de histonas, imprinting hormonal e/ou alteração de 71 

fatores de transcrição e crescimento (Fowden e Forhead, 2009; Lee, 2015). 72 

Dependendo das condições do ambiente materno, o embrião/feto pode 73 

desenvolver alterações endócrinas e metabólicas momentâneas. Algumas dessas 74 

mudanças são adaptativas e podem ter efeito imediato, fazendo parte da estratégia de 75 

sobrevivência a uma condição intrauterina adversa pontual. No entanto, outras mudanças, 76 

sem benefícios imediatos, podem ser vistas como “respostas adaptativas preditivas”, no 77 

qual o organismo em formação tenta se preparar para condições pós-natais que também 78 

possam ser desfavoráveis (Maršál et al., 2018). 79 

Dentre os modelos conhecidos de programação fetal por nutrição materna, a 80 

restrição proteica na dieta oferecida a ratas gestantes e/ou lactantes é um dos modelos 81 

mais utilizados (Langley-Evans e McMullen, 2010; Fleming et al., 2017). A literatura 82 

reporta que os impactos da restrição proteica materna, durante a gestação e/ou lactação, 83 

induz alterações morfofuncionais em diferentes órgãos nos filhotes, evidenciando o efeito 84 

generalizado (sistêmico) da má-nutrição materna (Brameld et al., 1998). 85 

Diferentes estudos com roedores observaram nos filhotes adultos, cuja as mães 86 

foram alimentadas com uma dieta hipoproteica durante a gestação e/ou lactação, diversas 87 

alterações como: menor quantidade de células beta e de ilhotas de Langerhans no pâncreas 88 

(Dahri et al., 1991), proporção celular alterada entre os tipos celulares do fígado (Burns 89 

et al., 1997), alterações no metabolismo lipídico (Sosa-Larios et al., 2017), intolerância à 90 

glicose (Szlapinski et al., 2019), redução no número de capilares do cérebro (Bennis-91 

Taleb et al., 1999), menor número de neurônios que controlam o apetite no hipotálamo 92 

(Plagemann et al., 2001), alteração nos padrões de sono e ansiedade (Crossland et al., 93 

2018), alterações na memória a curto prazo (Gould et al., 2018), menor número de néfrons 94 

no rim (Habib et al., 2011), redução na produção de colágeno na pele (Yamane et al., 95 

2018), disfunção vascular e aumento da pressão arterial sistólica (Brawley et al., 2003) e 96 

menor número de ovócitos nas fêmeas (Winship et al., 2018). 97 

 98 

 99 



21 

 

Restrição Proteica Materna e o Sistema Genital Masculino 100 

Apesar do número crescente de estudos mostrando os diversos efeitos da 101 

programação fetal gestacional por restrição proteica sobre diferentes órgãos, aspectos 102 

reprodutivos, sobretudo os masculinos, são ainda relativamente escassos em comparação 103 

àqueles que abordam aspectos da síndrome metabólica ou em outros sistemas. Além do 104 

mais, os mecanismos que levam a estas alterações celulares e moleculares também ainda 105 

estão longe de ser totalmente conhecidos (Zambrano et al., 2005).  106 

Dados da literatura indicam que este modelo experimental provoca alterações na 107 

prole masculina de mães subnutridas durante a gestação. Dentre essas alterações 108 

destacam-se: redução da distância anogenital (Rinaldi et al., 2013; Santos et al., 2018), 109 

alteração na concentração sérica de testosterona, estradiol e di-hidrotestosterona (DHT) 110 

(Zambrano et al., 2005; Teixeira et al., 2007; Rinaldi et al., 2013, Santos et al., 2018), 111 

atraso no desenvolvimento do epitélio germinativo e na diferenciação das células de 112 

Sertoli (Rodriguez-Gonzalez et al., 2012) e atraso na instalação da puberdade em animais 113 

adultos (Zambrano et al., 2005; Toledo et al, 2011; Rodriguez-Gonzalez et al., 2014).  114 

A maioria dos artigos publicados mostrou alterações significativas na próstata da 115 

prole de mães restritas ao consumo de proteína. Os autores observaram diversos efeitos 116 

deste modelo de programação fetal, em ratos jovens, adultos e idosos. Dentre os resultados 117 

obtidos, os principais foram: atraso na morfogênese (Pinho et al., 2013, Colombelli et al, 118 

2017), alterações na microdensidade vascular em ratos jovens (Colombelli et al., 2017), 119 

alteração na expressão de receptores hormonais em ratos jovens (Ibrahim et al., 2014), 120 

menor quantidade e tamanho dos ácinos na próstata dorsolateral (Ramos et al., 2010) e 121 

ventral em ratos adultos (Rinaldi et al., 2013; Colombelli et al., 2017) e carcinogênese 122 

prostática em ratos idosos (Santos et al., 2018). Grande parte dos estudos relacionados ao 123 

sistema genital masculino utilizam a próstata como órgão alvo, tendo em vista sua 124 

suscetibilidade a desenvolver câncer. Apesar disso, outros aspectos reprodutivos devem 125 

ser investigados, como, os fatores que estão relacionados ao sucesso reprodutivo.   126 

Desde 1992, a infertilidade é considerada caso de saúde pública pela Organização 127 

Mundial da Saúde (OMS) (OMS, 1992). Esta doença acomete mundialmente cerca de um 128 

em cada seis casais em idade reprodutiva que desejam ter filhos, ou seja, 129 

aproximadamente 15% dos casais sofrem de subfertilidade involuntária, sendo o fator 130 

masculino responsável por 30-50% dos casos (Boivin et al., 2007; Miyamoto et al., 2017).  131 



22 

 

A infertilidade masculina geralmente é causada por condições que afetam a 132 

produção e/ou função dos espermatozoides, ou falhas na ejaculação que podem ser 133 

decorrentes de doenças inflamatórias pélvicas ou infecções sexualmente transmissíveis 134 

(Kamel, 2010; Miyamoto et al., 2017). No entanto, na última década, estudos tem 135 

relacionado a infertilidade masculina a defeitos congênitos ocasionados por falhas 136 

durante o desenvolvimento embrionário e fetal (Esteves et al., 2011).  137 

Estudos epidemiológicos e experimentais relacionados a aspectos reprodutivos 138 

em humanos, sobretudo os masculinos, mostraram que o baixo peso ao nascimento pode 139 

estar associado a subfertilidade masculina (Faure et al., 2015). Boeri e colaboradores 140 

(2016) observaram uma associação entre a infertilidade ou baixa fertilidade com o baixo 141 

peso ao nascimento. Os homens analisados apresentaram alterações associadas, 142 

principalmente, às funções do epidídimo, como motilidade espermática reduzida, 143 

incluindo astenozoospermia (redução ou ausência da mobilidade dos espermatozóides) e 144 

maiores taxas de teratozoospermia (alterações na morfologia espermática que podem 145 

levar a infertilidade). Outros estudos utilizando animais experimentais, cujas mães foram 146 

submetidas à restrição proteica gestacional, além de nascerem com baixo peso, mostraram 147 

alterações na organização dos túbulos seminíferos nos testículos (Rodriguez-Gonzalez et 148 

al., 2014) e também alterações associadas às funções do epidídimo, semelhantes às 149 

encontradas em homens com baixo peso ao nascimento, como: redução da motilidade, 150 

viabilidade e concentração espermática, alterações morfológicas e a presença de gota 151 

citoplasmática (Toledo et al., 2011). 152 

Nos últimos anos, a preocupação com o declínio na saúde reprodutiva vem 153 

crescendo, acompanhada por aumento na demanda de tratamentos para a infertilidade. No 154 

entanto, mesmo que esses tratamentos permitam que homens inférteis possam procriar, 155 

não se exclui a possibilidade de o problema permanecer e afetar a próxima geração (Wu 156 

et al. 2010). Entretanto, apesar dos estudos mostrarem efeitos da desnutrição materna, 157 

sobretudo da restrição proteica materna, associados a funções epididimárias, não há 158 

trabalhos na literatura que mostrem alterações diretas ou mecanismos que possam afetar 159 

o desenvolvimento do epidídimo, durante a vida perinatal da prole, e que possam estar 160 

ligados a funcionalidade deste órgão na idade adulta. 161 

 162 

 163 

 164 

 165 



23 

 

    Epidídimo  166 

O epidídimo, órgão par pertencente ao sistema genital masculino, é formado por 167 

um ducto único altamente enovelado, cuja função primária é transportar os 168 

espermatozoides que chegam dos testículos via dúctulos eferentes, até os ductos 169 

deferentes. Durante a passagem pelo epidídimo, os gametas interagem com o epitélio 170 

epididimário especializado e fatores luminais. Esta interação promove os processos de 171 

maturação, proteção e concentração espermática, por meio de transformações 172 

bioquímicas, morfológicas e fisiológicas, e, por fim, ocorre a estocagem dos gametas 173 

(Cosentino e Cockett, 1989; Hermo e Robaire, 2002, Gatti et al., 2004). 174 

Ao final da sua morfogênese, o ducto epididimário atinge mais de um metro de 175 

comprimento no camundongo, três metros no rato e seis metros no humano. Este ducto 176 

dobra-se em uma estrutura altamente organizada, a qual é composta por vários segmentos, 177 

com morfologias e funções específicas (Joseph et al., 2009). Assim, o processo de 178 

maturação do espermatozoide depende de seu trajeto ao longo de todos os segmentos do 179 

epidídimo, o qual, provavelmente sem o comprimento apropriado, não ocorreria a 180 

maturação dos gametas de forma adequada (Hinton et al., 2011).   181 

Anatomicamente, o epidídimo é dividido em cabeça, corpo e cauda, mas devido a 182 

importantes diferenças histológicas, bioquímicas e funcionais segmentares, presentes em 183 

diferentes mamíferos, foram descritas quatro regiões bem definidas. Assim, o ducto 184 

epididimário é compreendido em segmento inicial (SI), cabeça, corpo e cauda (Figura 1) 185 

(Robaire e Hermo, 1988; Domeniconi et al., 2016). 186 

 187 



24 

 

Figura 1: Comparação das regiões do epidídimo com os segmentos do epidídimo no rato 188 

adulto. Os segmentos 1 a 4 correspondem ao segmento inicial, a zona intermediária (ZI), os 189 

segmentos 5 a 11 correspondem à região da cabeça, os segmentos 12, 13 e 14 correspondem à 190 

região do corpo, e os segmentos 14 a 19 correspondem à região da cauda. diagrama adaptado de 191 

Domeniconi et al. 2016.  192 

 193 

Todos os segmentos do epidídimo são importantes, pois são responsáveis por 194 

funções específicas. Por exemplo, as regiões proximais (SI e cabeça) são responsáveis 195 

pela a maturação espermática, enquanto a cauda mantém os espermatozoides em estado 196 

quiescente e desempenha papel no armazenamento dos gametas. Isto só é possível porque 197 

cada compartimento possui perfis distintos de expressão gênica que levam a expressão de 198 

moléculas de sinalização, proteínas reguladoras, transportadores e receptores específicos, 199 

os quais contribuem para a formação de um microambiente adequado em cada região. 200 

Assim, permite que o epitélio de cada segmento possa responder exclusivamente a 201 

diferentes estímulos, tais como hormônios e fatores de regulação (Cornwall, 2009; 202 

Bedford, 2015).  203 

O epidídimo é um órgão tubular epitelial formado por um epitélio 204 

pseudoestratificado composto por diferentes tipos celulares: as células principais, basais, 205 

claras, estreitas, apicais, halo e dendríticas (Fig. 2). As células principais, estreitas, claras 206 

e basais, aderidas com múltiplas junções, delimitam o compartimento intraluminal, 207 

formando a barreira hemato-epididimária responsável pela imunoproteção do ambiente 208 

intraluminal (Cyr, 2011; Breton et al., 2016).  209 

As células principais constituem 80% do epitélio epididimário e são responsáveis 210 

pela maior parte das proteínas que são secretadas no lúmen. A contribuição destas células 211 

para o estabelecimento de um ambiente luminal ácido é complexa e depende de diferentes 212 

mecanismos. Por exemplo: no SI, as células principais reabsorvem o bicarbonato, 213 

enquanto que na cauda, dependendo de sinais fisiológicos, elas têm a capacidade de 214 

secretar bicarbonato para a manutenção do pH intraluminal. Além disso, as células 215 

principais também contribuem para a regulação da secreção de prótons por meio de 216 

sinalização parácrina para as células claras (Breton et al., 2019). 217 

As células estreitas, presentes exclusivamente no SI, as células claras e as apicais 218 

são células epiteliais que apresentam atividade endocítica. Estas células contém a bomba 219 

vacuolar de prótons (V-ATPase) responsável pela acidificação intraluminal (Breton et al., 220 

1996; Breton & Brown, 2013). 221 

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25 

 

As células basais se encontram na base do epitélio, ao longo de todo o órgão, e 222 

possuem um prolongamento citoplasmático, o qual permite a regulação destas células. 223 

Dentre suas funções destacam-se a proteção do meio intraluminal do ducto contra 224 

espécies reativas de oxigênio, e também a secreção de prostaglandinas. Além disso, estas 225 

células apresentam características de células-tronco adultas, pois têm a capacidade de se 226 

diferenciar in vitro e potencialmente regenerar o epitélio epididimário (Shum et al., 2008; 227 

Mandon et al., 2015, Whitfield et al., 2016; Sullivan e Belleannee, 2018). E por fim, as 228 

células halo, que são as células imunes primárias do epidídimo (Sullivan et al., 2019).  229 

Os diferentes tipos celulares desempenham funções separadas e integradas. As 230 

interações combinadas representam um processo complexo pelo qual o epitélio 231 

epididimário estabelece e modula o ambiente apropriado para a maturação, proteção, 232 

seleção e armazenamento dos gametas. Assim, as interações célula-célula podem afetar 233 

diretamente o ambiente luminal e, consequentemente, a fertilidade do indivíduo (Breton 234 

et al., 2019). 235 

O ducto epididimário, como outros órgãos tubulares, é envolvido por múltiplas 236 

camadas concêntricas de células peritubulares ou mioides. Estas células são semelhantes 237 

às células musculares lisas e tem como função contribuir para a aquisição da motilidade 238 

dos espermatozoides ao longo do ducto (Oliveira et al., 2016). 239 

 240 

Figura 2: Diagrama esquemático da organização celular em uma seção representativa do 241 

epidídimo de rato. Adaptado de Knobil and Neill's Physiology of Reproduction, 2015.  242 



26 

 

              Morfogênese Epididimária 243 

O epidídimo é um dos órgãos tubulares epiteliais menos estudados na perspectiva 244 

da morfogênese. Esclarecer e compreender os processos do desenvolvimento epididimário 245 

como alongamento, enovelamento, expansão e diferenciação, vem atraindo o interesse de 246 

pesquisadores da área de reprodução (Joseph et al., 2009).  A formação da estrutura tubular 247 

é seguida por eventos morfogênicos únicos em cada órgão para gerar sua estrutura adulta 248 

final. A morfogênese do epidídimo exibe um padrão único, após sua formação, como um 249 

tubo simples, sistematicamente ele se alonga e se enrola, formando um tubo altamente 250 

enovelado em um pequeno espaço físico (Hinton et al., 2011). 251 

Para alcançar a forma, tamanho e comprimento ideal de um órgão tubular e, 252 

consequentemente, se tornar funcional é essencial que os complexos processos 253 

morfogênicos sejam regulados e que ocorram no tempo certo do desenvolvimento (Xu et 254 

al., 2014). A morfogênese do epidídimo não é exceção. Trata-se da transformação de um 255 

ducto para um órgão segmentado, altamente enovelado e que deve permanecer com 256 

comprimento e forma adequados, de modo que possa ser funcional (Xu et al., 2014).  257 

Os estudos que abordam a morfogênese epididimária ainda são escassos. Mas, 258 

estudos sobre a formação do rim têm contribuído para a compreensão dos processos 259 

envolvidos na organogênese do epidídimo, uma vez que ambos os órgãos tem a mesma 260 

origem embrionária (Joseph et al., 2009).  261 

Durante a embriogênese, para que ocorra a formação e o desenvolvimento do 262 

epidídimo ocorrem três processos importantes, sendo que cada processo é mediado por 263 

fatores hormonais e de crescimento. São estes: (1) formação do ducto mesonéfrico, (2) a 264 

estabilização do sistema ductal através da interação epitélio-mesênquima e (3) 265 

diferenciação pós-natal (Murashima et al., 2015). 266 

Durante o desenvolvimento embrionário, o mesoderme se divide em três regiões, o 267 

mesoderme paraxial, o mesoderme intermediário e o mesoderme lateral. Os mesonéfros, 268 

dos quais derivam os ductos mesonéfricos e Müllerianos, são formados a partir do 269 

mesoderme intermediário. Ainda não é bem conhecido(s) o(s) mecanismo(s) pelo(s) 270 

qual(is) o ducto mesonéfrico tem início na extremidade rostral do embrião, se alonga e se 271 

une à cloaca. No entanto, estudos utilizando o embrião de galinha mostraram que, uma vez 272 

que a extremidade rostral do embrião recebe a sinalização de um gradiente de fatores de 273 

crescimento de fibroblastos 8 (FGF8) e suas vias de transdução de sinalização, as células 274 

migram em direção à cloaca (Atsuta e Takahashi, 2015). Contanto que as células sejam 275 



27 

 

mantidas cercadas por altas concentrações de FGFs, elas mantêm um fenótipo 276 

mesenquimal semelhante à migração. As células que são mais distais, e, portanto, não são 277 

mais influenciadas pelas altas concentrações de FGF8, passam por uma transição 278 

mesênquima-epitelial e formam um lúmen. A maneira pela qual as células sofrem 279 

especificação no início deste evento não é conhecida. Porém, sabe-se que vários fatores de 280 

transcrição também são necessários para a formação e manutenção de ductos mesonéfricos, 281 

incluindo Gata3, Lim1, Pax2, Wt-1, Six1, Emx2 e Foxc1/Foxd1 (Murashima et al., 2015b; 282 

McMahon, 2016). Mutações de cada um desses genes resultam em vários graus de má 283 

formação dos ductos mesonéfricos, por exemplo, camundongos mutantes Gata3 não 284 

completam a migração celular para a cloaca (Grote et al., 2006). Além de fatores de 285 

transcrição, o ectoderma superficial próximo ao mesonéfro também desempenha um papel 286 

durante a formação do ducto mesonéfrico (Obara-Ishihara et al., 1999). 287 

À medida que as células mesenquimais migram em direção à cloaca, elas induzem 288 

o mesênquima adjacente a formar túbulos epiteliais em forma de S ou J, os quais são 289 

chamados de túbulos mesonéfricos. Entretanto, muitos regridem e os poucos que 290 

permanecem, aqueles que se encontram mais cranialmente e são opostos aos testículos, 291 

formam os ductos eferentes (Sainio et al., 1997). 292 

O número e padronização dos ductos eferentes em humanos difere 293 

consideravelmente de outras espécies. Em roedores, por exemplo, a região proximal, 294 

incluindo o segmento inicial e cabeça, é formada apenas pelo ducto epididimário. Enquanto 295 

que no humano, a região de segmento inicial e parte da cabeça do epidídimo são formadas 296 

principalmente pelos ductos eferentes, e tem uma contribuição limitada do ducto 297 

epididimário. Portanto, é importante levar em consideração essas diferenças ao comparar 298 

as funções do epidídimo humano com o de outras espécies (Hinton e Avellar, 2018). 299 

Estudar o desenvolvimento do epidídimo durante a fase embrionário em humanos, 300 

envolve uma série de fatores que geram dificuldades para tal. Assim, modelos animais, por 301 

exemplo, animais geneticamente modificados, são bons modelos experimentais utilizados 302 

em substituição ao humano. Esses modelos fornecem informações sobre os mecanismos 303 

dos processos que ocorrem durante a morfogênese epididimária, que são provavelmente 304 

semelhantes aos mecanismos que ocorrem no humano (Hinton e Avellar, 2018). 305 

Em camundongos e ratos, o ducto mesonéfrico permanece reto até o dia 306 

embrionário 14,5 e E17,5, respectivamente. Então, na região mais proximal (suposta região 307 

de SI) observa-se um enovelamento bidimensional inicial. O enovelamento progride 308 



28 

 

gradualmente ao longo do ducto e no E18,5, em camundongos e E20,5 em ratos, inicia-se 309 

o enovelamento tridimensional (Fig. 3) (Joseph et al., 2009; Hinton et al., 2011). 310 

 311 

 312 

Figura 3: Processo de enovelamento do ducto epididimário de camundongos em diferentes 313 

estágios. Publicado por Hinton et al., 2011. E= dia gestacional; P= dia pós-natal  314 

 315 

Concomitantemente ao enovelamento, o processo de alongamento do ducto ocorre 316 

através de dois eventos principais: proliferação de células epiteliais e rearranjos destas 317 

células por meio da intercalação médio-lateral (Xu et al., 2016). O enovelamento e o 318 

alongamento ainda continuam durante o período pós-natal, juntamente com a formação dos 319 

septos que permitem a divisão do ducto em vários segmentos. Embora existam diversos 320 

mediadores dos processos de alongamento e enovelamento, ainda não está claro como os 321 

mecanismos modulam o comprimento e a forma do ducto epididimário. No entanto, sabe-322 

se que, se estes processos não ocorrerem de maneira adequada, o epidídimo não conseguirá 323 

desempenhar sua função e consequentemente, levará o indivíduo à infertilidade (Kumar e 324 

Tanwar, 2016). 325 

A estabilização e diferenciação do ducto mesonéfrico é dependente de vários 326 

fatores, que incluem hormônios sexuais e fatores de crescimento. Os andrógenos 327 

produzidos pelos testículos fetais são responsáveis pela estabilização do ducto e, 328 



29 

 

posteriormente, essenciais para coordenar diferentes mecanismos durante a morfogênese 329 

epididimária (Welsh et al., 2009). 330 

Diferentemente de outros órgãos dependentes de andrógenos, tais como próstata e 331 

glândula seminal, tem sido sugerido que, para a estabilização do ducto mesonéfrico é 332 

necessária a chegada dos andrógenos, não só pela circulação sistêmica, mas também 333 

através do fluido seminal proveniente dos testículos (Shima et al., 2013). Assim, em 334 

roedores, observou-se que a rede testicular se liga ao ducto eferente no E13,5, e tem início 335 

o transporte do fluido testicular (Tong et al., 1996, de Mello Santos e Hinton, 2019).  336 

Os andrógenos são hormônios esteroides que exercem seus efeitos através da 337 

ativação de seu receptor de andrógeno (AR), membro da superfamília de receptores 338 

hormônio-esteroide ativado por ligante. O AR pode ser ativado tanto pela testosterona, 339 

como pela di-hidrotestosterona (DHT), potente metabólito resultante da conversão da 340 

testosterona pela 5-alfa-redutase (Gloyna e Wilson, 1969; Cohen et al., 1981; Shaw e 341 

Renfree, 2014). 342 

A testosterona, mas não a DHT, é responsável por orquestrar o desenvolvimento do 343 

ducto mesonéfrico. Pacientes com deficiência de 5-alfa-redutase mostraram ter o 344 

desenvolvimento epididimário pré-natal normal, e de fato, a DHT não está presente no 345 

ducto até o nascimento do indivíduo (Fig. 4).  346 

O AR age como um fator de transcrição o qual regula a expressão de genes alvo 347 

específicos (sinalização androgênica genômica clássica), desempenhando um papel 348 

importante no desenvolvimento do ducto mesonéfrico. Durante o período embrionário, o 349 

AR é expresso pelas células mesenquimais, e está ligado aos processos de 350 

proliferação/alongamento celular e enovelamento, por meio da modulação de fatores de 351 

crescimento, incluindo inibina betaA (Inba), Wnt5a, Fgf8, Dusp6, Hoxa10, entre outros 352 

(Murashima et al., 2015). 353 

Murashima e colaboradores (2011), avaliando tecidos nocaute específicos para AR, 354 

demonstraram que a estabilização do ducto mesonéfrico, o alongamento e a indução do seu 355 

enovelamento, não ocorrem na ausência de AR, demonstrando a importância deste receptor 356 

no mesênquima. Portanto, a exposição pré-natal a compostos que reduzem a síntese ou a 357 

ação da testosterona podem interferir no desenvolvimento epididimário frequentemente 358 

resultando na disgênese ou agenesia do órgão. 359 

 360 



30 

 

 361 

Figura 4: Diagrama esquemático representando eventos chaves da ação dos andrógenos 362 

no desenvolvimento do ducto mesonéfrico no embrião de ratos Wistar. DM= ductos mesonéfricos; 363 

DE= ductos eferentes; DD= ductos deferentes. Adaptado de Hinton e Avelar, 2018. 364 

 365 

Hinton e colaboradores (2011) observaram que na região onde o looping ou 366 

dobramento ocorrem, há remodelação assimétrica extracelular considerável, tornando-se 367 

evidente que para que ocorra o enovelamento do epitélio é necessária interação entre 368 

epitélio e mesênquima. Assim, ficou evidente que o mesênquima circundante ao epitélio 369 

apresenta papel fundamental para o enovelamento do ducto. 370 

Como pode ser observado na Figura 5, o mesênquima circundante (setas) ao epitélio 371 

epididimário em desenvolvimento, influencia no enovelamento do ducto. Ou seja, as 372 

limitações de espaço conforme estabelecido pelas fronteiras do mesênquima circundante, 373 

desempenham papel fundamental no início do enovelamento 3D (Hinton et al., 2011). 374 



31 

 

 375 

Figura 5: Padrão de enovelamento do ducto mesonéfrico nas regiões do segmento inicial 376 

e cabeça no DG18.5 em camundongos. As setas apontam para a movimentação das células 377 

mesenquimais que tem influência sobre a formação das dobras epiteliais. Publicado por Hinton et 378 

al., 2011. 379 

 380 

Além da testosterona, alguns fatores de crescimento também regulam a expressão 381 

gênica e as interações epitélio-mesenquimal no epidídimo. O fator de crescimento de 382 

fibroblastos (FGF) atua em eventos de sinalização durante a formação do ducto 383 

mesonéfrico e no desenvolvimento epididimário pós-natal. Diferentes tipos de FGF se 384 

ligam e ativam cascatas intracelulares através de quatro receptores tirosina-quinase de FGF 385 

(FGFR 1-4). No mesênquima, ocorre a expressão do FGFR1 e no epitélio do FGFR2, tendo 386 

como função principal regular a proliferação celular durante a fase pré-natal e atuar na 387 

promoção da citodiferenciação na fase pós-natal (Kitagaki et al., 2011; Ornitz e Itoh, 2001). 388 

Cabe ressaltar que os FGFs são modulados por fatores androgênicos, porém os mecanismos 389 

moleculares dessa interação ainda não conhecidos (Donjacour et al., 2003; Murashima et 390 

al., 2015). 391 

Outras proteínas, como as Wnts, também estão relacionadas com processos que 392 

ocorrem durante o desenvolvimento, incluindo a proliferação e a polaridade celular. As 393 

Wnts são altamente expressas nos órgãos precursores dos genitais, como o ducto 394 

mesonéfrico e ducto de Müller. A ausência de sinalização destas proteínas leva ao 395 

desenvolvimento incorreto dos órgãos reprodutivos derivados desses precursores (Carrol 396 

et al., 2005., Tanwar et al., 2010). 397 

Durante a morfogênese pré e pós-natal, o epidídimo expressa diversas Wnts. Dentre 398 

elas estão as Wnt4 e a Wnt9b, sendo que a Wnt9b é a mais expressa, atua com um sinal 399 



32 

 

parácrino e está relacionada aos primeiros sinais do desenvolvimento do ducto mesonéfrico 400 

(Carroll et al., 2005).  401 

Nos mamíferos, em geral, o desenvolvimento pós-natal do epidídimo pode ser 402 

dividido em três períodos que ocorrem em duas fases: primeira fase – período 403 

indiferenciado; segunda fase – período de diferenciação e expansão (Hinton et al., 2011). 404 

A primeira fase em roedores tem início no DPN1 e segue até DPN7. Nos primeiros dias 405 

após o nascimento inicia-se a segmentação anatômica do epidídimo. O epitélio é ainda 406 

indiferenciado e é caracterizado por células colunares. A diferenciação celular terá início 407 

somente com o aparecimento de células halo após o DPN7 (Robaire et al., 2006). 408 

A segunda fase se inicia no DPN7 e termina próximo ao DPN44-50. O epitélio do 409 

epidídimo se diferencia então, nas seguintes células: basal, apical, principais e células 410 

claras. Mas somente no início da puberdade, próximo ao DPN44, é que ocorre a completa 411 

diferenciação celular e a expansão do epidídimo. Este período de expansão descreve o 412 

crescimento contínuo do epidídimo e o aparecimento de espermatozoides no lúmen (De 413 

Miguel et al., 1998; Dacheux et al., 2005; Cornwall, 2009; Robaire et al., 2006). 414 

Na primeira fase, as células epiteliais e mesenquimais do epidídimo tem altos 415 

índices de proliferação, principalmente na região proximal. No seguimento inicial, a 416 

proliferação celular é regulada via proteínas quinases reguladas por sinal extracelular 417 

(ERK1/2). ERK1 e ERK2 são proteína-serina/treonina quinases que participam da cascata 418 

de transdução do sinal Ras-Raf-MEK-ERK. Esta cascata participa na regulação diversos 419 

processos, a ERK1 sendo mais responsiva na sobrevivência celular, transcrição, adesão 420 

celular e progressão do ciclo celular; e a ERK2 na migração celular, citodiferenciação, 421 

remodelação do citoesqueleto e metabolismo (Roskoski, 2012).  422 

A ERK1/2 pode ser ativada via fosforilação de diferentes substratos, incluindo 423 

fatores de transcrição, proteínas quinases e outras proteínas funcionais. A ativação de Src, 424 

proteínas quinases não receptoras, é um dos fatores que leva à estimulação da cascata de 425 

sinalização Raf-MEK-ERK e atua na proliferação e no crescimento celular (Roskoski, 426 

2012). 427 

As proteínas Src desempenham papel chave na regulação da transdução de sinal por 428 

um conjunto diverso de receptores da superfície celular no contexto de múltiplos ambientes 429 

celulares (Parsons and Parsons, 2004). Recentemente tem se destacado o papel essencial 430 

das Src no desenvolvimento epididimário e também em alterações importantes 431 

relacionadas à capacidade de maturação dos espermatozoides (Krapf et al., 2012).  432 



33 

 

Krapf e colaboradores (2012) mostraram que camundongos Src nocaute 433 

apresentaram alterações na estrutura do epidídimo e espermatozoides com motilidade 434 

reduzida e incapazes de fertilizar um ovócito in vitro. Baseado nos resultados desse estudo, 435 

os autores atribuíram papel essencial para Src no desenvolvimento epididimário e 436 

sugeriram que a Src também é responsável por importantes alterações na capacidade de 437 

maturação dos espermatozoides que ocorrem durante sua passagem pelo epidídimo (Krapf 438 

et al., 2012). 439 

Como mencionado anteriormente, o SI tem papel fundamental na maturação dos 440 

espermatozoides, e assim sua correta formação é fundamental (Xu et al., 2014). O SI 441 

contém altos níveis de atividade dos componentes da via ERK1/2. Durante o 442 

desenvolvimento pré-púbere, a primeira onda de fluido luminal testicular entra no 443 

epidídimo e ativa os componentes da via de ERK no epitélio do SI. Assim a via ERK inicia 444 

a promoção da diferenciação do epitélio, atuando principalmente nas células principais e 445 

células basais (Xu et al., 2014; 2010; Rodriguez et al., 2002). 446 

Em relação aos componentes da via ERK, existem dois níveis de atividades no 447 

epitélio do epidídimo: nível basal e nível elevado (Xu et al., 2011). Xu e colaboradores 448 

(2010) observaram que o nível de atividade basal dos componentes da via ERK foi 449 

encontrado nas células epiteliais, em todas as regiões do epidídimo, antes do período de 450 

diferenciação celular. Se as atividades desta via forem interrompidas no epitélio do SI de 451 

ratos jovem, a proliferação e diferenciação celular deste segmento cessam. Fato este, que 452 

resulta em uma onda de apoptose no epitélio do SI dos ratos na fase adulta. Portanto, o 453 

nível elevado de atividade dos componentes da via ERK é essencial para a proliferação 454 

celular, diferenciação e para a sobrevivência do epitélio que constitui o epidídimo antes da 455 

fase de citodiferenciação (Xu et al., 2010; 2011). 456 

Na segunda fase do desenvolvimento pós-natal do epidídimo, fase em que as células 457 

epiteliais iniciam a diferenciação, as células principais são as primeiras células a se 458 

diferenciarem. Nestas células, a presença da Aquaporina 9 (AQP 9) na região apical é sinal 459 

que esta diferenciação já teve início (Pastor-Soler, 2001; Badran e Hermo, 2002; 460 

Domeniconi et al., 2008; Hermo et al., 2008).  461 

Na região mesenquimal, as células mesenquimais adjacentes às epiteliais, se 462 

diferenciam em células musculares lisas. As células endoteliais dos canais vasculares, os 463 

quais estão presentes no mesênquima epididimário, também se diferencia e ambos os tipos 464 

celulares passam a expressar a Aquaporina 1 (AQP1) (Huang, 2006; Domeniconi et al., 465 

2008; Teixeira et al., 2012). 466 



34 

 

As aquaporinas (AQPs) são proteínas transmembranas que atuam como canais de 467 

água aumentando a permeabilidade da membrana celular. Até o momento, nove mRNAs 468 

codificantes para AQPs (Aqp1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9 e 11) estão presentes no epidídimo, entre 469 

elas as AQP1 e AQP9 (Agre, 2004; Da Silva et al., 2006; Domeniconi et al., 2008; 470 

Schimming et al., 2015). No epidídimo, a presença da AQP1 é importante para manter o 471 

equilíbrio de fluidos no tecido e a AQP9 é a principal AQP do epitélio epididimário, onde 472 

contribui para a permeabilidade da membrana apical à água e solutos neutros. A AQP9 473 

contém um local putativo de ligação esteroide e é afetada diretamente pelo equilíbrio 474 

estrogênio/androgênio. Por outro lado, a AQP1 parece não ser diretamente afetada pelos 475 

hormônios sexuais 476 

Arrighi e colaboradores (2010) observaram que a expressão de AQP9, no epidídimo 477 

de ratos adultos, foi modificada pela subnutrição no início da vida desses animais. Filhotes 478 

cujas mães sofreram restrição alimentar, durante a gestação e lactação, apresentaram 479 

diminuição na marcação desta proteína nas microvilosidades das células principais. Estes 480 

resultados sugeriram que a diminuição ou ausência desta proteína prejudica as funções do 481 

epidídimo e, possivelmente, compromete a fertilidade destes animais na vida adulta. 482 

Recentemente nosso grupo de pesquisa mostrou que a restrição proteica materna 483 

altera os padrões de expressão das AQP1 e AQP9 no epidídimo de ratos jovens e adultos 484 

afetando a dinâmica dos fluidos e a angiogênese em estágios importantes do 485 

desenvolvimento do epidídimo. A restrição proteica materna diminuiu a expressão das 486 

AQP1 e AQP9 no SI e cabeça do epidídimo dos filhotes com 21, 44 e 120 dias pós-natais. 487 

Além disso, houve redução da densidade microvascular nos DPNs 21 e 44, relacionada a 488 

queda na expressão do Fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) e seu receptor 489 

(VEGFr-2), os quais são os principais reguladores da promoção da angiogênese e também 490 

estão associados a fertilidade masculina. Contudo, nos animais adultos a densidade 491 

microvascular do epidídimo parece ter sido reestabelecida (Cavariani et al., 2019). 492 

O modelo de restrição proteica materna é um dos modelos de restrição precoce do 493 

crescimento mais caracterizados e utilizados para observar alterações que a mudança 494 

nutricional gera no desenvolvimento, e as consequências sobre o sistema genital masculino 495 

da prole. Tendo em vista o importante papel do epidídimo para a fertilidade masculina, pois 496 

é durante a passagem pelo epidídimo que os espermatozoides adquirem motilidade e 497 

capacidade fértil, passa a ser essencial entender os mecanismos que regulam o seu 498 

desenvolvimento.  499 



35 

 

Foram observadas alterações em parâmetros relacionados à funcionalidade do 500 

epidídimo, bem como, alterações morfofuncionais deste órgão nas fases pré-pubere e 501 

adulta, em ratos que foram submetidos à restrição proteica durante a gestação e lactação.    502 

No entanto, não há informações na literatura que mostrem se a restrição proteica, 503 

em fase inicial do desenvolvimento, pode afetar a morfogênese epididimária durante as 504 

fases embrionárias e iniciais do desenvolvimento pós-natal. Assim, sugere-se que a origem 505 

das alterações funcionais no epidídimo adulto, descritas anteriormente, possam estar 506 

relacionadas a falhas em vias que atuam desde as fases iniciais do desenvolvimento 507 

epididimário, refletindo nos processos de diferenciação e maturação na vida pós-natal, e 508 

consequentemente, na funcionalidade do órgão. 509 

Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi investigar se dieta materna com baixa 510 

quantidade de proteínas pode alterar a morfogênese epididimária nos filhotes machos em 511 

fases iniciais do desenvolvimento em ratos Wistar, e assim, contribuir com novos dados 512 

para a biologia da reprodução e esclarecer possíveis lacunas sobre a baixa fertilidade 513 

relacionada ao epidídimo após restrição proteica materna.  514 

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546 

“Os que se encantam com a prática sem a ciência são como os timoneiros que 547 

entram no navio sem timão nem bússola, nunca tendo certeza do seu destino”. 548 

(Leonardo da Vinci) 549 

550 

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555 



106 

CONCLUSÕES 

Conclusões 



107 

 

Nossos resultados mostraram que programação fetal por restrição proteica materna leva 1 

ao aumento de estradiol sérico na prole masculina e causa alterações importantes nas fases 2 

iniciais do desenvolvimento epididimário pós-natal, como: diminui a densidade microvascular; 3 

compromete o microambiente luminal; causa estrogenização do tecido epididimário; 4 

compromete a citodiferenciação modulada por hormônios e fatores de crescimento; altera a 5 

expressão de proteínas importantes que atuam na interação epitélio-mesênquima; altera a 6 

atividade de proteínas que modulam a proliferação celular e citodiferenciação, e ainda na fase 7 

embrionária, atrasa o desenvolvimento do ducto mesonéfrico. Assim, constrói-se a hipótese de 8 

que essas alterações durante as fases iniciais do desenvolvimento possam estar relacionadas às 9 

alterações encontradas nas funções do epidídimo em ratos adultos cujas mães sofreram restrição 10 

proteica nas fases de gestação e lactação. 11 



108 

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 

Referências 
Bibliográficas 



109 

 

Agarwal P, Morriseau T S, Kereliuk S M, Doucette C A, Wicklow B A, Dolinsky V W. Maternal obesity, 

diabetes during pregnancy and epigenetic mechanisms that influence the developmental origins of 

cardiometabolic disease in the offspring. Crit Rev Clin Lab Sci,. 2018. 

 

  Agre P. Aquaporin water channels (Nobel Lecture). Angew Chem Int Ed Engl.  43:4278-90, 2004. 

 

Arrighi S, Aralla M, Genovese P, Picabea N, Bielli A. Undernutrition during fetal to prepubertal life affects 

aquaporin 9 but not aquaporins 1 and 2 expression in the male genital tract of adult rats. Theriogenology. 

74:1661-9, 2010. 

 
  Antiwi S. Malnutrition: Missed Opportunities for Diagnosis. Ghana Med J. 42:101-104, 2008. 

 

Atsuta Y, Tadokoro R, Saito D, Takahashi Y. Transgenesis of the Wolffian duct visualizes dynamic behavior of 

cells undergoing tubulogenesis in vivo. Dev Growth Differ. 55: 579-90, 2013. 

 

Badran H H, Hermo L S. Expression and regulation of aquaporins 1, 8, and 9 in the testis, efferent ducts, and 

epididymis of adult rats and during postnatal development. J Androl. 23:358-73, 2002. 

 

Bale T L, Baram T Z, Brown A S, Goldstein J M, Insel T R, McCarthy M M, Nemeroff C B, Reyes T M, Simerly 

R B, Susser E S, Nestler E J. Early life programming and neurodevelopmental disorders. Biol Psychiatry. 68:314–

319, 2010. 
 

Barker D J. The origins of the developmental origins theory. J. Intern. Med. 261:412-7, 2007. 

 

Barker D J P. The developmental origins of adult disease. European Journal of Epidemiology. 18:733-736, 2003. 

 

Barker DJ, Eriksson JG, Forsén T, Osmond C. Fetal origins of adult disease: strength of effects and biological 

basis. Int J Epidemiol. 2002. 

 

Barker D J P, Hales C N, Fall C H D, Osmond C, Phipps K, Clarck P M S. Type 2 (non-insulin dependent) 

deabetes mellitus, hypertension and hyperlipdemia (syndrome X): Relation to reduced fetal growth. 

Diabetologia. 36:62-67, 1993. 
 

Barker D J P, Osmond C, Golding J, Kuh D, Wadsworth M E J. Growth in utero, blood pressure in childhood 

and adult life, and mortality from cardiovascular disease. BMJ. 298:564-567, 1989. 

 

Biason-Lauber A, Konrad D, Navratil F, Schoenle EJ. A WNT4 mutation associated with Müllerian-duct 

regression and virilization in a 46,XX woman. N Engl J Med. 2004. 

 

Bennis-Taleb N, Remacle C, Hoet J J, Reusens B. A low-protein isocaloric diet during gestation affects brain 

development and alters permanently cerebral cortex blood vessels in rat offspring. J Nutr. 129:1613-9, 1999. 

 

Boivin J. et al., International estimates of infertility prevalence and treatment-seeking: potential need and demand 

for infertility medical care. Human reproduction (Oxford, England), 22(6), pp.1506–12, 2007. 
 

Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the 

principle of protein-dye binding. Anal Biochem, v. 72, p. 248-54, May 07. ISSN 0003-2697. 1976 

 

Brameld J M, Buttery P J, Dawson J M, Harper J M. Nutritional and hormonal control of skeletal-mucle cell 

growth and differentiation. Proc Nutr Soc. 57:107-117, 1998. 

 

Burns S P, Desai M, Cohen R D, Hales C N, Iles R A, Germain J P, Going T C, Bailey R A. Gluconeogenesis, 

glucose handling, and structural changes in livers of the adult offspring of rats partially deprived of protein during 

pregnancy and lactation. J Clin Invest. 100:1768-74, 1997. 

 
Carroll T J, Park J S, Hayashi S, Majumdar A, McMahon A P. Wnt9b plays a central role in the regulation of 

mesenchymal to epithelial transitions underlying organogenesis of the mammalian urogenital system. Dev Cell. 

9: 283-92, 2005. 

 



110 

 

Cavariani MM, de Mello Santos T, Pereira DN, de Almeida Chuffa LG, Felipe Pinheiro PF, Scarano WR, 

Domeniconi RF. Maternal protein restriction differentially alters the expression of AQP1, AQP9 and VEGFr-2 

in the epididymis of rat offspring. Int J Mol Sci. 2019. 

 

Chmurzynska A. Fetal programming: link between early nutrition, DNA methylation, and complex diseases. 

Nutrition Reviews. 68:87-98, 2010. 

 

Cohen J, Ooms M P, Vreeburg J T. Reduction of fertilizing capacity of epididymal spermatozoa by 5α-steroid 

reductase inhibitors. Experientia 37:1031–1032, 1981. 

 
Collins P, Webb C. Estrogen hits the surface. Nat Med. 1999. 

 

Colombelli, K.T, Santos, S.A, Camargo, A.C, Constantino, F.B, Barquilha, C.N, Rinaldi, J.C, Felisbino, S.L, 

Justulin, L.A. Impairment Of Microvascular Angiogenesis Is Associated With Delay In Prostatic Development 

In Rat Offspring Of Maternal Protein Malnutrition. Gen Comp Endocrinol. May, 2017. 

 

Cornwall G A. New insights into epididymal biology and function. Hum Reprod., 15: 213-227, 2009. 

 

Cosentino M J, Cockett A T.K. Structure and Function of the Epididymis. Urological Research, v. 14, n. 5, p. 

229-240, ISSN 0300-5623, 1986. 

 
Crossland R F, Balasa A, Ramakrishnan R, Mahadevan S K, Fiorotto M L, Van den Veyver I B. Chronic 

Maternal Low-Protein Diet in Mice Affects Anxiety, Night-Time Energy Expenditure and Sleep Patterns, but 

Not Circadian Rhythm in Male Offspring. PLoS One. 2018. 

 

Da Silva N. et al. Segmental and cellular expression of aquaporins in the male excurrent duct. Biochimica Et 

Biophysica Acta-Biomembranes, 1758:1025-1033, 2006. 

 

Dahri S, Snoeck A, Reusens-Billen B, Remacle C, Hoet J J. Islet function in offspring of mothers on low-protein 

diet during gestation. Diabetes. 40:115-20, 1991. 

 

Dacheux J L, Castella S, Gatti J L, Dacheux F. Epididymal cell secretory activities and the role of proteins in 
boar sperm maturation. Theriogenology. 63(5):219-341, 2005. 

 

De Mello Santos, T e Hinton, B T. We, the developing rete testis, efferent ducts and Wolffian duct all hereby 

agree that we need to connect. Andrology. 2019. 

 

De Miguel M P, Mariño J M, Martínez-García F, Nistal M, Paniagua R, Regadera J. Pre- and post-natal growth 

of the human ductus epididymidis. A morphometric study. Reprod Fertil Dev. 10(3):271-7, 1998. 

 

Domeniconi R. F. et al. Is the Epididymis a Series of Organs Placed Side By Side? Biology of Reproduction 

95(1):10, 1–8, 2016. 

 

Domeniconi R F. et al. Immunolocalization of aquaporins 1, 2 and 7 in rete testis, efferent ducts, epididymis and 
vas deferens of adult dog. Cell Tissue Res. 332:329-35, 2008. 

 

Donjacour A A, Thomson A A, Cunha G R. FGF-10 plays an essential role in the growth of the fetal prostate. 

Dev Biol. 261: 39-54, 2003. 

 

Drake A J, Walker B R. The intergenerational effects of fetal programming: non-genomic mechanisms for the 

inheritance of low birth weight and cardiovascular risk. J. Endocrinol. 180:1–16, 2004. 

 

Egger G, Liang G, Aparicio A, Jones P A. Epigenetics in human disease and prospects for epigenetic therapy. 

Nature, 2004. 

 
Elloumi-Mseddi J, Jemel-Oualha I, Beji A, Hakim B, Aifa S. Effect of estradiol and clomiphene citrate on Erk 

activation in breast cancer cells. J Recept Signal Transduct Res. 2015. 

Esteves S C, Miyaoka R & Agarwal A. An update on the clinical assessment of the infertile male. Clinics, 66(4), 

pp.691–700, 2011. 

 



111 

 

Faure C, Dupont C, Chavatte-Palmer P, Gautier B, Levy R; ALIFERT Collaborative Group. Are semen 

parameters related to birth weight? Fertil Steril. 103(1):6-10, 2015. 

 

Fleming T P, Watkins J A, Sun C, Velazquez M A, Smyth N R, Eckert J J. Do little embryos make big decisions? 

How maternal dietary protein restriction can permanently change an embryo’s potential, affecting adult health. 

Reproduction, Fertility and Development. 27:684–692, 2017. 

 

Fowden A L, Forhead A J. Endocrine regulation of feto-placental growth. Horm Res. 72:257-65, 2009. 

 

Gatti J L.  et al. Post-testicular sperm environment and fertility. Anim Reprod Sci, v. 82-83, p. 321-39, Jul. ISSN 
0378-4320, 2004. 

 

Gloyna R E, Wilson J D. A comparative study of the conversion of testosterone to 17-"-hydroxy-5-α-androstan 

3-one (dihydrotestosterone) by prostate and epididymis. J Clin Endocrinol Metab 29:970 – 977, 1969. 

 

Gluckman P D, Hanson M A. Maternal constraint of fetal growth and its consequences. Semin Fetal Neonatal 

Med. 2004. 

 

Godfrey K M, Costello P M, Lillycrop K A. The developmental environment, epigenetic biomarkers and long-

term health. Jour of Develop Orig of Heal and Dis. 1-8, 2015. 

 
Gould J M, Smith P J, Airey C J, Mort E J, Airey L E, Warricker F D M, Pearson-Farr J E, Weston E C, Gould 

P J W, Semmence O G, Restall K L, Watts J A, McHugh P C, Smith S J, Dewing J M, Fleming T P, Willaime-

Morawek S. Mouse maternal protein restriction during preimplantation alone permanently alters brain neuron 

proportion and adult short-term memory. Proc Natl Acad Sci U S A. 2018. 

 

Grissom N, Bowman N, Reyes T M. Epigenetic programming of reward function in offspring: a role for maternal 

diet. Mamm Genome. 25:41–48, 2014. 

 

Habib S, Zhang Q, Baum M. Prenatal programming of hypertension in the rat: Effect of postnatal rearing. 

Nephron Extra. 1:157-65, 2011. 

 
Hadziselimovic F. Involvement of Fibroblast Growth Factors and Their Receptors in Epididymo-Testicular 

Descent and Maldescent. Mol Syndromol. 2016. 

 

Hermo L, Schellenberg M, Liu L Y, Dayanandan B, Zhang T, Mandato C A, Smith C E. Membrane domain 

specificity in the spatial distribution of aquaporins 5, 7, 9, and 11 in efferent ducts and epididymis of rats. J 

Histochem Cytochem, 2008. 

 

Hermo L, Robaire B. Epididymal cell types and their functions. In: ROBAIRE B.; HINTON, B. T. (Ed.). The 

Epididymis: from molecules to clinical pratice. New York: Kluwer Academic/ Plenum Publisher, v.1, cap. 5, 

p.81-102, 2002.  

 

Hinton, B.T.; Avellar, M.C.W. Wolffian Duct Development; Second Edi.; Elsevier, 2018. 
 

Hinton B T, Galdamez M M, Sutherland A, Bomgardner D, Xu B, Abdel-Fattah R, Yang L. How do you 

get six meters of epididymis inside a human scrotum? J Androl. 32: 558-64, 2011. 

 

Hinton B T, Setchell B P. Fluid movement in the seminiferous tubules and the epididymal duct of the rat 

[proceedings]. J Physiol., 1993. 

 

Huang H F.  et al. Function of aquaporins in female and male reproductive systems. Hum Reprod Update. 

12:785-95, 2006.  

 

Hunter T. A tail of two src's: mutatis mutandis. Cell. Apr 10;49(1):1-4, 1987. 
 

Indrio F, Martini S, Francavilla R, Corvaglia L, Cristofori F, Mastrolia S A, Neu J, Rautava S, Russo Spena G, 

Raimondi F, Loverro G. Epigenetic Matters: The Link between Early Nutrition, Microbiome, and Long-term 

Health Development. Front Pediatr., 2017. 

 



112 

 

Joseph A, Yao H, Hinton B T. Development and morphogenesis of the Wolffian/epididymal duct, more twists 

and turns. Dev Biol. 325: 6-14, 2009. 

 

Jost A. Recherches sur la différenciation sexuelle de l'embryon de Lapin. Arch Anat Microsc Morphol Exp. 

36: 151-315, 1947. 

 

Kamel R M. Management of the infertile couple: an evidence-based protocol. Reproductive biology and 

endocrinology : RB&E, 8, p.21, 2010. 

 

Karner C M, Chirumamilla R, Aoki S, Igarashi P, Wallingford J B. Wnt9b signaling regulates planar cell polarity 
and kidney tubule morphogenesis. Nat Genet. 41: 793-9, 2009. 

 

Kitagaki J, Ueda Y, Chi X, Sharma N, Elder CM, et al. FGF8 is essential for formation of the ductal system in 

the male reproductive tract. Development. 138: 5369-78, 2011. 

 

Krapf D, Ruan Y C, Wertheimer E V, Battistone M A, Pawlak J B, Sanjay A, Pilder SH, Cuasnicu P, Breton S, 

Visconti P E. cSrc is necessary for epididymal development and is incorporated into sperm during epididymal 

transit. Dev Biol. 369:43-53, 2012. 

 

Krutskikh A, De Gendt K, Sharp V, Verhoeven G, Poutanen M, Huhtaniemi I. Targeted inactivation of the 

androgen receptor gene in murine proximal epididymis causes epithelial hypotrophy and obstructive 
azoospermia. Endocrinology. 2011. 

 

Kumar M, Tanwar P S. Canonical Wnt/β-Catenin Signaling Regulates Postnatal Mouse Epididymal 

Development but Does Not Affect Epithelial Cell Differentiation. Endocrinology. Dec 1;158(12):4286-4299, 

2017. 

 

Kumar M, Syed S M, Taketo M M, Tanwar P S. Epithelial Wnt/βcatenin signalling is essential for epididymal 

coiling. Dev Biol. Apr 15;412(2):234-49, 2016. 

 

Langley-Evans S C, McMullen S. Developmental origins of adult disease. Med Princ Pract. 19:87-98, 2010. 

 
Lee H E, Ayarpadikannan S, Kim H S. Role of transposable elements in genomic rearrangement, evolution, gene 

regulation and epigenetics in primates. Genes Genet Syst., 2015. 

 

Maršál K. Physiological adaptation of the growth-restricted fetus. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2018. 

 

Miyamoto T, Minase G, Shin T, Ueda H, Okada H, Sengoku K. Human male infertility and its genetic causes. 

Reprod Med Biol. 16(2):81-88, 2017. 

 

Moore K L, Persaud T V N. Embriologia Básica. Ed. Elsevier: 7ª Ed, Rio de Janeiro, p.376, 2008.  

 

Murashima A, Bingfang Xu B, Hinton B T. Understanding normal and abnormal development of the 

Wolffian/epididymal duct by using transgenic mice. Asian J Androl., 2015. 
 

Murashima A, Miyagawa S, Ogino Y, Nishida-Fukuda H, Araki K. Essential roles of androgen signaling in 

Wolffian duct stabilization and epididymal cell differentiation. Endocrinology 2011. 

 

Oliveira CA, Carnes K, França LR, Hermo L, Hess RA. Aquaporin-1 and -9 are differentially regulated by 

oestrogen in the efferent ductule epithelium and initial segment of the epididymis. Biol Cell. Jun;97(6):385-95, 

2005. 

 

Okazawa M, Murashima A, Harada M, Nakagata N, Noguchi M, Morimoto M, Kimura T, Ornitz DM, Yamada 

G. Region-specific regulation of cell proliferation by FGF receptor signaling during the Wolffian duct 

development. Dev Biol. 2015. 
 

Ornitz D M, Itoh N. Fibroblast growth factors. Genome Biol. 2001. 

 

Pastor-Soler N. Aquaporin 9 expression along the male reproductive tract. Biol Reprod. 65:384-93, 2001. 

 



113 

 

Parsons S J, Parsons J T. Src family kinases, key regulators of signal transduction. Oncogene. 18;23(48):7906-

9. Review, 2004. 

 

Plagemann A, Harder T, Rake A, Melchior K, Rohde W, Dörner G. Hypothalamic nuclei are malformed in 

weanling offspring of low protein malnourished rat dams. J Nutrition. 130:2582-9, 2001. 

 

Preston G M, Agre P. Isolation of the cDNA for erythrocyte integral membrane protein of 28 kilodaltons: member 

of an ancient channel family. Proc Natl Acad Sci U S A. Dec 15;88(24):11110-4, 1991. 

 

Qasem R J, Yablonski E, Li J, Tang H M, Pontiggia L, D'mello A P. Elucidation of thrifty features in adult rats 
exposed to protein restriction during gestation and lactation. Physiol Behav. 105:1182-93, 2012. 

Ramos C da F, Babinski M A, Costa W S, Sampaio F J The prostate of weaned pups is altered by maternal 

malnutrition during lactation in rats. Asian J Androl. 12:180-5, 2010. 

 

Rinaldi J C, Justulin L A Jr, Lacorte L M, Sarobo C, Boer P A, Scarano W R, Felisbino S L. Implications of 

intrauterine protein malnutrition on prostate growth, maturation and aging. Life Science. 92:763-4, 2013. 

 

Robaire B, Hinton BT, Orgebin-Crist MC. The epididymis. In: The physiology of reproduction. Knobil E., 

Neill J.D eds. Elsevier: 3rd Ed, New York:1071-1148, 2006. 

 

Robaire B, Hinton B T. The Epididymis. From Molecules to Clinical Practice. KluwerAcademic/Plenum 
Publishers; New York: 2002. 

 

Robaire B, Hermo L. Efferent ducts, epididymis, and vas deferens structure, functions, and their regulation. In: 

KNOBIL, E., NEILL, J.D. The Physiology of Reproduction. New York: Raven Press., 23:999-1080, 1988. 

 

Roskoski R Jr. ERK1/2 MAP kinases: Structure, function, and regulation. Pharmacological Research 66:2, 105-

143, 2012. 

 

Saxen, L. Organogenesis of the Kidney. Cambridge University Press.  1987. 

 

Santos S A A, Camargo A C, Constantino F B, Colombelli K T, Mani F, Rinaldi J C, Franco S, Portela L M F, 
Duran B O S, Scarano W R, Hinton B T, Felisbino S L, Justulin L A. Maternal Low Protein Diet Impairs Prostate 

Growth in Young Rat Offspring and Induces Prostate Carcinogenesis with Aging. J Gerontol A Biol Sci Med 

Sci. 2018. 

 

Santos A M, Ferraz M R, Teixeira C V, Sampaio F J, da Fonte Ramos C. Effects of undernutrition on serum and 

testicular testosterone levels and sexual function in adult rats. Horm Metab Res. 36:27-33, 2004. 

 

Schimming B C. et al. Immunolocalization of Aquaporins 1 and 9 in the Ram Efferent Ducts and Epididymis. 

Reprod Domest Anim, 50:617-24, 2015. 

 

Setchell B P, Maddocks S, Brooks D E. Anatomy, vasculature, innervation, and fluids of the male reproductive 

tract. In: The physiology of reproduction. Knobil E., Neill J.D. eds. Raven Press. 8:1063-1147, 1994. 
 

Shaw G, Renfree M B. Wolffian duct development. Sex Dev. Review 8(5):273-80, 2014. 

 

Shima Y, Miyabayashi K, Haraguchi S, Arakawa T, Otake H, et al. Contribution of Leydig and Sertoli cells to 

testosterone production in mouse fetal testes. Mol Endocrinol. 27: 63-73, 2013. 

 

Skinner M K. Manikkam M, Guerrero-Bosagna C. Epigenetic transgenerational actions of environmental factors 

in disease etiology. Trends in Endocrinology and Metabolism, 2010. 

 

Sosa-Larios T C, Milliar-Garcia A, Reyes-Castro L A, Morimoto S, Jaramillo-Flores M E. Alterations in lipid 

metabolism due to a protein-restricted diet in rats during gestation and/or lactation. Food Funct. 2017. 
 

Snyder E M, Small C L, Bomgardner D, Xu B, Evanoff R, Griswold M D, Hinton B T. Gene expression in the 

efferent ducts, epididymis, and vas deferens during embryonic development of the mouse. Dev Dyn. 239:2479-

91, 2010. 

 



114 

 

Staack A, Donjacour AA, Brody J, Cunha GR, Carroll P. Mouse urogenital development: a practical 

approach. Differentiation. 71: 402-13, 2003. 

 

Sullivan R. Male fertility markers, myth or reality. Anim Reprod Sci. 82-83:341-7, 2004. 

 

Rodriguez C, Kirby J, Hinton B. The development of the epididymis. The Epididymis: From Molecules to 

Clinical Practice, eds Robaire B, Hinton B (Kluwer Academic/ Plenum, New York), pp 251–267, 2002. 

 

Rodríguez-González G L, Vigueras-Villaseñor R M, Millán S, Moran N, Trejo R, Nathanielsz F, Larrea, 

Zambrano E. Maternal protein restriction in pregnancy and/or lactation affects seminiferous tubule organization 
in male rat offspring. Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 3:321-326, 2012. 

 

Rodríguez-González GL, Reyes-Castro LA, Vega CC, Boeck L, Ibáñez C, Nathanielsz PW, Larrea F, Zambrano 

E. Accelerated aging of reproductive capacity in male rat offspring of protein-restricted mothers is associated 

with increased testicular and sperm oxidative stress. Age (Dordr). 2014. 

 

Tanwar P S, Kaneko-Tarui T, Zhang L, Rani P, Taketo M M, Teixeira J. Constitutive WNT/beta-catenin 

signaling in murine Sertoli cells disrupts their differentiation and ability to support spermatogenesis. Biol Reprod. 

Feb;82(2):422-32, 2010. 
 

Teixeira C V, Silandre D, de Souza Santos A M, Delalande C, Sampaio F J, Carreau S, da Fonte Ramos C. 
Effects of maternal undernutrition during lactation on aromatase, estrogen, and androgen receptors expression in 

rat testis at weaning. J Endocrinol. 192:301-11, 2007. 

 

Teixeira G R. et al. The expression of aquaporins 1 and 9 in adult rat epididymis is perturbed by chronic exposure 

to ethanol. Tissue & Cell. 44:47-53, 2012. 

 

Toledo F C, Perobelli J E, Pedrosa F P, Anselmo-Franci J A, Kempinas W D. In utero protein restriction causes 

growth delay and alters sperm parameters in adult male rats. Reprod Biol Endocrinol. 24;9:94, 2011. 

 

Tong SY, Hutson JM, Watts LM. Does testosterone diffuse down the Wolffian duct during sexual differentiation? 

J Urol. 155:2057-97,1996. 
 

Thomas S M, Brugge J S. Cellular functions regulated by Src family kinases. Annu Rev Cell Dev Biol. 13:513-

609, 1997. 

 

Verkman AS, Mitra AK. Structure and function of aquaporin water channels. Am J Physiol Renal Physiol. 

Jan;278(1):F13-28. Review, 2000. 

 

Xu B, Washington AM, Hinton BT. Initial Segment Differentiation Begins During a Critical Window and Is 

Dependent upon Lumicrine Factors and SRC Proto-Oncogene (SRC) in the Mouse. Biol Reprod. Jul;95(1):15, 

2016. 

 

Xu B, Washington A M, Hinton B T. PTEN signaling through RAF1 proto-oncogene serine/threonine kinase 
(RAF1)/ERK in the epididymis is essential for male fertility. Proc Natl Acad Sci. 111: 18643-8, 2014. 

 

Xu B, Yang L, Hinton B T. The role of fibroblast growth factor receptor substrate 2 (FRS2) in the regulation of 

two activity levels of the components of the extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway in the mouse 

epididymis. Biology of reproduction. 48:1–13, 2013. 

 

Xu B, Abdel-Fattah R, Yang L, Crenshaw S A, Black M B, Hinton B T. Testicular lumicrine factors regulate 

ERK, STAT, and NFKB pathways in the initial segment of the rat epididymis to prevent apoptosis. Biol Reprod. 

84:1282–1291, 2011. 

 

Xu B, Yang L, Lye R J, Hinton B T. p-MAPK1/3 and DUSP6 regulate epididymal cell proliferation and survival 
in a region-specific manner in mice. Biol Reprod. 83:807-17, 2010. 

 

Yamane T, Konno R, Iwatsuki K, Oishi Y. Protein-restricted maternal diet during lactation decreases type I and 

type III tropocollagen synthesis in the skin of mice offspring. Biosci Biotechnol Biochem, 2018. 

 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19794154
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19794154


115 

 

Yeung C H, Sonnenberg-Riethmacher E, Cooper T G. Receptor tyrosine kinase c-ros knockout mice as a model 

for the study of epididymal regulation of sperm function. J Reprod Fertil Suppl. 53:137-47, 1998. 

 

Zambrano E, Rodríguez-González GL, Guzmán C, García-Becerra R, Boeck L, Díaz L, Menjivar M, Larrea F, 

Nathanielsz PW. A maternal low protein diet during pregnancy and lactation in the rat impairs male reproductive 

development. J Physiol.;563:275-284, 2005. 

 

Welsh M, Sharpe R M, Walker M, Smith L B, Saunders P T. New insights into the role of androgens in Wolffian 

duct stabilization in male and female rodents. Endocrinology 150: 2472-80, 2009. 

 
Winship AL, Gazzard SE, Cullen-McEwen LA, Bertram JF, Hutt KJ. Maternal low-protein diet programmes low 

ovarian reserve in offspring. Reproduction. 2018. 

 

Wong CW, McNally C, Nickbarg E, Komm BS, Cheskis BJ. Estrogen receptor-interacting protein that modulates 

its nongenomic activity-crosstalk with Src/Erk phosphorylation cascade. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002. 

 

Wu W, Shen O, Qin Y, Niu X, Lu C, Xia Y, Song L, Wang S, Wang X. Idiopathic male infertility is strongly 

associated with aberrant promoter methylation of methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR). PLoS One. 

2010