2024 

ANA BESSA MUNIZ TAIER 

 

 

APLICAÇÃO DE LÍQUIDOS ATIVADOS COM PLASMA FRIO NA 

ENDODONTIA 



 

   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

São José dos Campos 

2024 

ANA BESSA MUNIZ TAIER 

 

 

APLICAÇÃO DE LÍQUIDOS ATIVADOS COM PLASMA FRIO NA ENDODONTIA 

Tese apresentada ao Instituto de Ciência e Tecnologia, Universidade Estadual Paulista 

(Unesp), Campus de São José dos Campos, como parte dos requisitos para obtenção 

do título de DOUTORA pelo Programa de Pós-Graduação em CIÊNCIAS APLICADAS 

À SAÚDE BUCAL. 

Área: Microbiologia. Linha de pesquisa: Doenças Infecciosas de Interesse Médico-

Odontológico 

Orientadora: Profa. Dra. Cristiane Yumi Koga Ito 

Coorientador: Prof. Dr. Rodrigo Pessoa 

 



 

   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

   

IMPACTO POTENCIAL DESTA PESQUISA 

 

Candida albicans e Enterococcus. faecalis são os principais causadores de reinfecção 

dos canais radiculares após tratamento endodôntico, levando à necessidade de 

retratamento. Ambas as espécies demonstram alta patogenicidade e resistência aos 

tratamentos endodônticos convencionais. Além disso, os irrigantes convencionais 

apresentam limitações importantes, como a alta toxicidade aos tecidos do hospedeiro. 

Por isto, a determinação de novos procedimentos padrão e estratégias de desinfecção 

intracanal são necessárias. Os resultados deste estudo mostraram que a água ativada 

com plasma pode ser um potencial irrigante endodôntico, reduzindo significativamente 

os biofilmes mono e dual espécies formados por C. albicans e E. faecalis. 

 

POTENTIAL IMPACT OF THIS RESEARCH  

 

Candida albicans and Enterococcus faecalis are the main causes of root canal 

reinfection after endodontic treatment, leading to the need for retreatment. Both 

species demonstrate high pathogenicity and resistance to conventional endodontic 

treatments. Furthermore, conventional irrigants have important limitations, such as 

high toxicity to host tissues. Therefore, the determination of new standards and 

strategies for intracanal disinfection are necessary. The results of this study showed 

that plasma-activated water can be a potential endodontic irrigant, significantly 

reducing mono- and dual-species biofilms formed by C. albicans and E. faecalis. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

   

BANCA EXAMINADORA 

 

 

 

Professora Titular Cristiane Yumi Koga Ito 

Universidade Estadual Paulista (Unesp) 

Instituto de Ciência e Tecnologia 

Campus de São José dos Campos 

 

Professor Doutor João Carlos da Rocha 

Universidade Estadual Paulista (Unesp) 

Instituto de Ciência e Tecnologia 

Campus de São José dos Campos 

 

Professora Doutora Marianne Spalding 

Universidade Estadual Paulista (Unesp) 

Instituto de Ciência e Tecnologia 

Campus de São José dos Campos 

 

Professora Associada Flaviana Bombarda de Andrade 

Universidade de São Paulo (USP) 

Campus de Bauru 

 

Professora Doutora Fernanda Gonçalves de Oliveira 

Universidade Paulista 

Instituto Ciências da Saúde 

Campus Taubaté 

 

 

 

 

São José dos Campos, 26 de julho de 2024. 



 

   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Dedico este trabalho com muito amor a Deus, pois 

sem Ele nada é possível. À minha família, que é 

meu maior tesouro. Ao meu marido, que é meu 

companheiro em todas as jornadas, sempre me 

apoiando e cuidando de nós com tanto carinho. E à 

nossa filha, que já traz tanta alegria para nós, 

mesmo antes de nascer. Agradeço a Deus por nos 

abençoar com essa nova fase, cheia de amor e 

felicidade para todos nós. 

 



 

   

AGRADECIMENTOS 

 

Agradeço primeiramente a Deus, pela força e sabedoria concedidas ao longo 

desta jornada. Sem a Sua presença este trabalho não teria sido possível. 

À minha família, pelo amor, paciência e apoio constante desde minha infância. 

Aos meus pais, por sempre acreditarem em mim. Meu marido, por ser uma fonte 

constante de inspiração e apoio. 

À minha orientadora Profa Tit. Cristiane Yumi Koga-Ito, expresso minha 

profunda gratidão. Sua orientação e dedicação foram essenciais para a realização 

deste trabalho. Admiro muito a sua capacidade de equilibrar o imenso conhecimento 

acadêmico com uma abordagem humana e acolhedora. Sua confiança em mim foi 

uma grande motivação ao longo deste percurso, e sua amizade tornou esta jornada 

ainda mais especial. Sua dedicação como orientadora é uma inspiração para mim. 

Ao meu coorientador Prof. Dr. Rodrigo Sávio Pessoa pela assistência na 

execução deste projeto, principalmente por ter sido o suporte em toda a parte 

experimental dos líquidos ativados com plasma. 

À assistente de suporte acadêmico Clélia, gostaria de expressar minha sincera 

gratidão pela sua incrível ajuda, dedicação e contribuição com a parte experimental 

durante toda a pesquisa. Suas habilidades foram fundamentais para o sucesso deste 

estudo e sua amizade foi um grande presente na minha vida.  

Aos meus amigos do laboratório, Lady Daiane, Mariana Vegian, Diego Morais, 

Aline Sampaio, Victória Kelly e Noala Vicensoto, gostaria de expressar minha 

profunda gratidão pelo companheirismo, pela troca constante de conhecimento e pelo 

apoio inestimável ao longo desses anos. Cada um de vocês trouxe uma contribuição 

única para o nosso ambiente de trabalho no laboratório, enriquecendo não apenas o 

aspecto científico, mas também tornando nossos dias mais leves e agradáveis. Os 

momentos compartilhados, desde as longas horas no laboratório até as discussões 

sobre os resultados, foram fundamentais para meu crescimento pessoal e profissional. 



 

   

Agradeço por cada conselho, por cada risada compartilhada e por cada momento de 

solidariedade em que estivemos juntos. 

À minha amiga Ellen Bessa que conheci no início da pós graduação, gostaria 

agradecer por tudo que fez e faz por mim, você é um dos maiores presentes que já 

recebi na vida e estaremos sempre juntas (no tempo de plantar e tempo de colher). 

Agradeço as agências de fomento CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento 

de Pessoal de Nível Superior) e FAPESP (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado 

de São Paulo) pelo apoio financeiro concedido ao longo do desenvolvimento deste 

trabalho. O suporte destas instituições foi fundamental para o desenvolvimento da 

minha pesquisa.  

A todos que, de alguma forma, contribuíram para a realização desta tese, meu 

sincero agradecimento. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

" Confie no Senhor de todo o seu coração e não se apoie em seu próprio 

entendimento; reconheça o Senhor em todos os seus caminhos, e ele endireitará as 

suas veredas." (Provérbios 3:5-6) 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

   

RESUMO 

 
 
MUNIZ, AB. Aplicação de líquidos ativados por plasma frio na endodontia [tese]. São 
José dos Campos (SP): Universidade Estadual Paulista (Unesp), Instituto de Ciência 
e Tecnologia; 2024. 
 
 
 
O insucesso do tratamento endodôntico é decorrente principalmente da presença de 
microrganismos remanescentes no canal radicular decorrente da dificuldade de 
remoção de biofilmes e das limitações dos irrigantes convencionais. Por este motivo, 
há necessidade de novas alternativas para a desinfecção intracanal.  O objetivo deste 
estudo foi avaliar a atividade inibitória de líquidos ativados por plasma frio sobre 
biofilmes de interesse endodôntico, além de caracterizar as condições para obtenção 
do líquido ativado e analisar a citotoxicidade dos líquidos. Biofilmes mono e dual 
espécies de 24 horas foram obtidos a partir de suspensões padronizadas de Candida 
albicans (ATCC 18804) e Enterococcus faecalis (ATCC 29212). Os biofilmes foram 
expostos aos líquidos ativados, sendo estes água destilada, solução fisiológica e água 
mineral. Foram incluídos grupos de líquidos não ativados (controles negativos) e 
grupo controle de crescimento. Após 24 horas, os biofilmes foram expostos ao 
tratamento por 2 períodos, 1 minuto e 1,5 minutos. O número de células 
remanescentes foi determinado após semeadura da suspensão microbiana resultante 
em meios de cultura seletivos. A citotoxicidade dos líquidos ativados frente às células 
3T3 foi avaliada. O teste ex vivo foi realizado em canais radiculares de dentes 
humanos, no qual totalizou 54 dentes humanos unirradiculares que foram preparados, 
instrumentados e esterilizados para receberem tratamentos com água destilada 
ativada. Os dados foram analisados pelo software GraphPad Prism, versão 6.01. As 
comparações foram feitas utilizando testes de análise de variância (ANOVA One-way), 
seguidas do post-hoc de Tukey, adotando-se o nível de significância de 5%. A 
exposição dos líquidos ativados por plasma frio levou a reduções significativas 
(p<0.0001) em todos os grupos quando comparados ao grupo controle de crescimento 
e com os grupos dos líquidos não ativados, tanto para biofilmes mono e dual espécies. 
A Água destilada ativada levou à maior redução em relação aos demais líquidos e o 
tempo de tratamento mais efetivo foi de 1,5 minutos. Os líquidos ativados não foram 
citotóxicos para células 3T3. No teste ex vivo, a água destilada ativada levou à 
redução da viabilidade dos biofilmes em 80% a 91%. Conclui-se os líquidos ativadas 
com plasma frio apresentaram ação inibitória sobre biofilmes mono e dual espécies 
formados por C. albicans e E. faecalis, tanto em modelo in vitro quanto ex vivo, com 
ausência de toxicidade para células 3T3. 
 
 
Palavras-chave: Endodontia; Plasma atmosférico não-térmico; líquidos ativados por 
plasma. 



 

   

ABSTRACT  

 
 
MUNIZ, AB. Application of plasma-activated liquids in endodontics. [doctorate thesis]. 
São José dos Campos (SP): São Paulo State University (Unesp), Institute of Science 
and Technology; 2024. 
 
 
The failure of endodontic treatment is mainly due to the presence of remaining 
microorganisms in the root canal due to the difficulty in removing biofilms and the 
limitations of conventional irrigants. For this reason, there is a need for new alternatives 
for intracanal disinfection.  The objective of this study was to evaluate the inhibitory 
effect of by cold plasma activated liquids on biofilms of endodontic interest, in addition 
to characterizing the conditions for obtaining the activated liquid and analyzing the 
cytotoxicity of the liquids. 24-hours mono- and dual-species biofilms were obtained 
from standardized suspensions of Candida albicans (ATCC 18804) and Enterococcus 
faecalis (ATCC 29212). The biofilms were exposed to the activated liquids, which were 
distilled water, saline solution and mineral water. Non-activated liquid groups (negative 
controls) and growth control group were included. After 24 hours, the biofilms were 
exposed to treatment for 2 periods, 1 minute and 1.5 minutes. The number of remaining 
cells was determined by plating method using selective culture media. The cytotoxicity 
of activated liquids on 3T3 cells was evaluated. The ex vivo assays were carried out in
root canals of human teeth. A total of 54 single-rooted human teeth were prepared, 
instrumented and sterilized to receive treatments with activated distilled water. Data 
were analyzed using GraphPad Prism software, version 6.01. Comparisons were 
made using analysis of variance tests (One-way ANOVA), followed by Tukey's post-
hoc test, adopting a significance level of 5%. Significant reduction of cell viabilities 
(p<0.0001) in all groups were observed after exposure to plasma activated liquids 
when compared to the growth control group and the non-activated liquid groups, both 
for mono and dual species biofilms. Activated distilled water led to the greatest 
reduction compared to other liquids and the most effective treatment time was 1.5 
minutes. The activated liquids were not cytotoxic to 3T3 cells. In the ex vivo assay, 
activated distilled water led to a reduction in biofilm viability from 80% to 91%. It is 
concluded that plasma activated liquids showed inhibitory action on mono and dual 
species biofilms formed by C. albicans and E. faecalis, both in in vitro and ex vivo 
models, with no toxicity for 3T3 cells. 
 
 
Keywords: Endodontic; Cold atmospheric plasma; plasma activated liquids. 
 
 
 
 
 



 

   

LISTA DE FIGURAS 

 

Figura 1 – Ilustração esquemática da montagem experimental para ativar os líquidos.

 ................................................................................................................................. 29

Figura 2 – Esquema de divisão dos Grupos ............................................................. 35

Figura 3 – Espectro óptico do jato de plasma gerado em um sistema gliding arc com 

ar comprimido em diferentes fluxos de ar (1, 5 e 10 L/min) ...................................... 37

Figura 4 – Espectros ópticos da interação do plasma com as águas: solução fisiológica 

(a), destilada (b) e mineral (c) para fluxo de ar de 5 L/min ....................................... 40

Figura 5 – Espectros de absorção UV-Vis das águas ativadas com plasma: 

comparação entre água mineral, destilada e solução fisiológica. ............................. 43

Figura 6 – A Fitas colorimétricas para medição das concentrações aproximadas de 

H2O2, NO3- e NO2- nas diferentes águas ativadas analisadas. ................................. 45

Figura 7 – Resultados obtidos para avaliação de atividade antibiofilme de C. albicans, 

utilizando água destilada, solução fisiológica e água mineral ativada com plasma frio 

por 1 minuto ou 1 minuto e 30 segundos. ................................................................ 50

Figura 8 – Resultados obtidos para avaliação de atividade antibiofilme frente a E. 

faecalis, utilizando água destilada, solução fisiológica e água mineral ativada com 

plasma frio por 1 minuto e 1 minuto e 30 segundos. ................................................ 52

Figura 9 – Atividade inibitória da água destilada ativada por plasma sobre biofilmes 

dual espécies de E. faecalis e C. albicans em exposição de 1 minuto e 30 segundos.

 ................................................................................................................................. 53

Figura 10 – Resultados obtidos para avaliação de atividade antimicrobiana frente a 

biofilme dual espécie de E. faecalis e C. albicans, utilizando Solução Fisiológica por 1 

minuto e 30 segundos com plasma frio. ................................................................... 54

Figura 11 – Resultados obtidos para avaliação de atividade inibitória frente a biofilmes 

dual espécies de E. faecalis e C. albicans após exposição à água mineral ativada por 

plasma por 1 minuto e 30 segundos com plasma frio. ............................................. 55

Figura 12 –  Resultados obtidos nos ensaios de citotoxicidade, avaliando os efeitos 

dos diferentes líquidos ativados sobre fibroblastos 3T3. .......................................... 56



 

   

Figura 13 – Resultados obtidos para avaliação de atividade antibiofilme frente a 

biofilme dual espécie de E. faecalis e C. albicans, utilizando água destilada ativada 

por plasma por 1 minuto e 30 segundos com plasma frio no ensaio ex vivo. ........... 57



 

   

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS 

 

 

AD Água Destilada  

ADA Água Destilada Ativada 

AM Água Mineral  

AMA Água Mineral Ativada 

ATCC American Type Culture Collection 

C. Candida spp. 

CHX Clorexidina 

CO2 Dióxido de Carbono  

DBD Dielectric Barrier Discharge 

DMEM Dulbecco´s Modified Eagle’s Medium 

DMSO Dimetil Sulfóxido 

DO Densidade Óptica 

E. Enterococcus spp. 

EDTA Ácido Etilenodiaminotetracético 

FBS Soro Fetal Bovino 

FNS Sistema De Fluxos Nitrogenados 

FPS Sistema De Primeira Ordem Positivo 

H2O2 Peróxido de Hidrogênio 

HNO2 Ácido Nitroso 

KHZ Mil Kilohertz  

ML Mililitro 

MTT 3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-di-Fenil Brometo de Tetrazolina 

NACL Cloreto De Sódio 

N2 Nitrogênio 

NO Óxido Nítrico 

NO2- Nitrito 

NO3- Nitrato 

NTAP Plasma Atmosférico Não Térmico  

O3 Ozônio 



 

   

OH Emissão de Radical Hidroxila 

PAW Água Ativada por Plasma 

PBS Solução Salina Tamponada com Fosfato 

RONS Espécies Reativas De Oxigênio e Nitrogênio 

SD Ágar Sabouraud Dextrose 

SF Solução Fisiológica 

SFA Solução Fisiológica Ativada 

SPS Picos Associados Às Bandas Do Sistema De Primeira Ordem 

YNB Base Nitrogenada de Levedura sem Aminoácidos 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



 

   

SUMÁRIO 
 
 
 

1 INTRODUÇÃO ....................................................................................................... 17

2 REVISÃO DE LITERATURA .................................................................................. 22

2.1 Microbiologia endodôntica ............................................................................... 22

2.1.1 Irrigantes endodônticos convencionais ....................................................... 24

2.1.2 Vantagens da utilização do plasma na endodontia ..................................... 24

3 PROPOSIÇÃO ....................................................................................................... 27

3.1 Objetivo Geral ................................................................................................ 27

3.2 Objetivos Específicos ................................................................................... 27

4 MATERIAL E MÉTODOS ....................................................................................... 28

4.1 Condições de obtenção e de padronização do líquido ativado por plasma 28

4.1.1 Avaliação da atividade antibiofilme dos líquidos ativados ......................... 32

4.1.2  Avaliação da citotoxicidade do líquido ativado por plasma ...................... 33

4.1.3 Efeito da irrigação dos canais radiculares com água ativada com plasma 

sobre biofilmes dual espécies de E. faecalis e C. albicans em modelo ex vivo 34

4.2 Análise Estatística ............................................................................................. 36

5 RESULTADO ......................................................................................................... 37

5.1 Análise espectroscópica do plasma..................................................................37

5.1.1 Identificação dos picos e bandas e efeito do fluxo de gás ......................... 38

5.1.2 Efeito da interação do plasma com as águas: destilada, mineral e solução 

fisiológica..................................................................................................................39 

5.1.3 Solução fisiológica ......................................................................................... 41

5.2 Água destilada ................................................................................................... 41 

5.2.1 Água mineral ................................................................................................... 42

5.2.2 Análise de Espectroscopia UV-Vis: Efeito da Interação do Plasma com os 

Líquidos: Solução fisiológica, água destilada e água mineral ............................ 43

5.2.3 Parâmetros Físico-Químicos das Líquidos ativados com Plasma ............. 46 

5.3 Efeito da água ativada sobre os biofilmes microbianos – Testes in vitro 

 .................................................................................................................................. 49

5.3.1 Efeito da água ativada sobre biofilmes de Candida albicans .................... .49

5.3.2  Efeito da água ativada sobre biofilmes de Enterococcus faecalis............51



 

   

5.3.3 Efeito da água ativada sobre biofilmes dual espécies de Enterococcus 

faecalis e Candida albicans .................................................................................... 53

5.3.3.1 Avaliação da citotoxicidade da água ativada por plasma ........................ 55

5.3.3.2 Efeito da irrigação dos canais radiculares com água ativada com plasma 

sobre biofilmes dual espécies de E. faecalis e C. albicans – Ensaio ex vivo .... 56

6 DISCUSSÃO .......................................................................................................... 58

7 CONCLUSÃO ........................................................................................................ 65

REFERÊNCIA ........................................................................................................... 66

ANEXO ...................................................................................................................... 76

 

 
 
 
 



17 
 

   

1 INTRODUÇÃO 

 

 

No tratamento endodôntico, que engloba desde a abertura do dente até sua 

restauração, incluindo a remoção da polpa dentária, modelagem e desinfecção dos 

canais radiculares, a integridade da estrutura tratada não pode ser prejudicada, sendo 

estes fatores fundamentais para a sobrevivência dentária após o tratamento realizado 

(Gherardi, Tonini, Colombo, 2018; Fransson, Dawson, 2023). O sucesso do 

tratamento endodôntico depende do controle da infecção no sistema de canais 

radiculares, além da prevenção de uma possível reinfecção, já que a presença de 

micro-organismos patogênicos é considerada a principal responsável pelas doenças 

endodônticas, desde intrarradicular podendo até causar infecções extrarradicular 

(Paula et al., 2013; Prada et al., 2019). Nesse sentido, o insucesso é atribuído, em 

grande parte, à persistência de micro-organismos no interior dos canais radiculares. 

Por um lado, a desinfecção total do complexo pulpo-dentário é um processo 

crítico e, por outro, é um desafio clínico contínuo, pois os métodos tradicionais não 

garantem a completa desinfecção, considerando a complexidade do sistema de 

canais radiculares (Habib et al., 2014). A microbiota presente nos sistemas de canais 

radiculares é estruturada e complexa que apresenta irregularidades e variações 

anatômicas nos canais radiculares, juntamente com a natureza do biofilme, 

representam um desafio significativo para alcance de uma desinfecção eficiente 

durante o tratamento endodôntico (Cavalcante et al., 2023).  

Além disso, há que se considerar que as infecções endodônticas que são 

mediadas por biofilmes, os quais são estruturas muito organizadas e complexas, torna 

o tratamento ainda mais desafiador quando comparados com infecções que não 

apresentam esta conformação (Neelakantan et al. 2017; Siqueira, Rôcas, 2022). Além 

da estrutura que apresentam, a natureza multiespécies dos biofilmes e a 

complexidade e variedade do sistema de canal radicular fazem com que a desinfecção 

no tratamento endodôntico seja desafiadora (Neelakantan et al., 2017). Na prática, a 

identificação intracanal da composição exata do biofilme e do papel de cada espécie 

nos biofilmes específicos é muito difícil e poucas técnicas são capazes de fazê-lo 

(Neelakantan et al., 2017). Enterococcus faecalis e Candida albicans têm sido 

frequentemente isolados de casos de insucessos terapêuticos em endodontia 



18 
 

   

(Narayanan, Vaishnavi, 2010; Cavalcante et al., 2023). Ambas as espécies têm 

habilidade de formar biofilmes e mostram resistência aos tratamentos endodônticos 

convencionais (Duggan, Sedgley, 2007; Ran et al., 2015; Dubey et al., 2017; Godoi-

Jr et al., 2023). 

Pesquisas têm demonstrado que a presença de bactérias remanescentes 

após tratamento com as estratégias padrão de desinfecção intracanal pode variar 

entre 40% e 60% (Habib et al., 2014; NouroloyounI et al., 2023), o que tem impacto 

sobre a ocorrência de sintomatologia dolorosa (Neelakantan et al., 2017).  

Resultados de estudos clínicos apontaram 10% de falhas em tratamentos 

implementados por meio dessas estratégias tradicionais de desinfecção (Lu et al., 

2009). A desinfecção dos canais radiculares, de modo geral, implica o uso de métodos 

como limpeza mecânica, irrigação, utilização de ultrassom, irradiação a laser e 

aplicação de compostos antibacterianos distintos (Lu et al., 2009; Neelakantan et al., 

2017). Procedimentos de irrigação e medicação intracanal, podem ser feitos com 

diversas substâncias, como o gel de digluconato de clorexidina e hidróxido de cálcio. 

Porém, essas substâncias não são eficazes, de forma similar, frente a todos os micro-

organismos. O hidróxido de cálcio não apresenta boa efetividade frente a 

Enterococcus faecalis e a algumas cepas de Candida albicans (Armand et al, 2019). 

Algumas substâncias também apresentam limitações, tais como desconforto, 

decorrente da toxicidade da substância (Armand et al., 2019). Além disso, há relatos 

de que produtos químicos usados como irrigadores na endodontia podem promover 

alterações na composição da dentina por ser substrato dinâmico e sujeito a 

continuados processos fisiológicos e patológicos em sua estrutura e composição 

(Pascon et al, 2012). Essas alterações são clinicamente relevantes para o sucesso do 

tratamento endodôntico no médio e longo prazo, pois podem influenciar a aderência 

dos materiais obturadores à dentina (Pascon et al., 2012).  

A resistência aos antibióticos também tem atraído atenção com o 

desenvolvimento de técnicas de manejo antimicrobiano e de pesquisas voltadas para 

terapias alternativas de combate microbiano. Porém, a resistência aos antissépticos 

tem sido menos estudada. Vários patógenos tornam-se resistentes aos agentes 

convencionais de desinfecção e assepsia, como é o caso de compostos químicos, 

como os de amônio, cloro e outros utilizados pela área biomédica (Tsoukou et al., 

2020). Tendo em vista as limitações dos métodos de desinfecção dos sistemas de 



19 
 

   

canais radiculares atualmente utilizados, a busca por novas tecnologias eficazes e 

seguras é necessária (Tsoukou et al., 2020). 

Os irrigantes endodônticos convencionais são usados para desinfetar os canais 

radiculares durante o tratamento endodôntico. Embora sejam eficazes na eliminação 

de micro-organismos, esses agentes podem ter efeitos citotóxicos, ou seja, podem ser 

tóxicos para as células humanas (Sismanoglu et al, 2022). Entre as soluções irrigantes 

mais utilizadas na clínica endodôntica estão o hipoclorito de sódio (NaOCl) que está 

entre os mais empregados devido sua forte ação antimicrobiana e capacidade de 

dissolver matéria orgânica, mas este é o que apresenta maior citotoxicidade podendo 

causar danos aos tecidos periapicais caso haja extravasamento do material do canal 

radicular (Karkehabadi et al., 2018; Vouzara et al., 2016). 

Nos últimos anos, plasmas frios atmosféricos têm se mostrado úteis para 

várias finalidades nas áreas médicas, inclusive na assepsia e desinfecção (Habib et 

al., 2014; Von Woedtke et al., 2020; Sampaio et al., 2022). O plasma é constituído de 

variadas espécies atômicas, moleculares, iônicas e radicais excitadas que coexistem 

com espécies reativas, como elétrons, íons positivos e negativos, radicais livres, 

gases, átomos e moléculas no estado fundamental ou excitado e radiação 

eletromagnética (Fridman, 2008; Bourke et al., 2017; Kerlikowski et al., 2020).  

O plasma é referido como um dos estados da matéria e o plasma frio ou não-

térmico é aquele formado em temperatura ambiente ou próximo a esta (Heimann et 

al., 2023; Zhao et al., 2023). Os gases frequentemente usados para produzir o plasma 

frio são: hélio, argônio, nitrogênio, ar ambiente ou a mistura deles (Kerlikowski et al., 

2020). A tecnologia do plasma frio atmosférico passou a ter importância em 

decorrência de sua eficácia antimicrobiana, tendo sido aplicado, inicialmente, na 

desinfecção de dispositivos médicos e de produtos alimentares (Zhao et al., 2023).  

A tecnologia dos plasmas frios evoluiu rapidamente como meio para a 

inativação microbiana e de outros tratamentos, resultantes da presença de radicais 

químicos e bioativos gerados, em sua maioria espécies reativas de oxigênio e de 

nitrogênio (Bourke et al., 2017). Há relatos do efeito inibitório do plasma frio sobre 

bactérias, fungos e vírus (Lu et al., 2009; Von Woedtke et al., 2020). Além do efeito 

antimicrobiano, o efeito anti-inflamatório, estimulador de reparo tecidual e no controle 

de células neoplásicas também foi relatado (Lima et al., 2021; Von Woedtke et al., 

2020). 



20 
 

   

Na odontologia, pesquisas apontam para potencial aplicação do plasma frio 

no tratamento de diversas doenças infecciosas bucais (Habib et al., 2014; Tanaka et 

al., 2016; Borges et al., 2017; Doria et al, 2018). O plasma de pressão atmosférica não 

térmico pode ser utilizado de forma direta e indireta sobre alvos biológicos. O 

tratamento direto se refere à aplicação clínica do jato de plasma diretamente na área 

de interesse e o indireto, ao uso do plasma por meio de líquidos ativados por plasma 

(Tanaka et al., 2016). O uso indireto é decorrente da exposição prévia do líquido ao 

plasma e tem ampliado bastante o potencial de aplicações dessa tecnologia na 

medicina e na odontologia (Jha et al., 2017; Sakudo; Yagyu; Onodera, 2019; 

Kerlikowski et al., 2020). Investigações sobre a aplicação de líquidos ativados com 

plasma na área biomédica têm sido desenvolvidas com grande intensidade no mundo 

(Li et al., 2017; Subramanian et al., 2020; Xu et al., 2020; Muntaz et al., 2023).  

Várias fontes de plasma são usadas para ativar a água, desde a corrente 

contínua, as descargas de baixa frequência, de radiofrequência, de barreira dielétrica 

e de micro-ondas, coronas pulsadas, jatos de plasma de pressão atmosférica e 

descarga de micro-ondas (Shen et al., 2016). As partículas criadas por ele entram em 

interação com as moléculas de água e desencadeiam reações químicas diversas. Tais 

reações promovem uma mistura única de reações bioquímicas e químicas que geram 

um produto denominado líquido ativado por plasma. Em decorrência das espécies 

reativas, o efeito antimicrobiano frente a várias espécies microbianas foi detectado e, 

em consequência, os líquidos ativados por plasma vêm ganhando atenção para a 

desinfecção e assepsia (Shen et al., 2016).  

Suspensões de Escherichia coli foram expostas à água ativada por plasma 

durante 15 minutos ou 3 horas, em um período de 7 dias após sua obtenção eles 

utilizaram uma descarga de barreira dielétrica (DBD - Dielectric Barrier Discharge) 

para gerar o plasma. Nos dois tempos de exposição, a atividade antibacteriana inicial 

produzida na área correspondeu à redução de ~ 5 log na viabilidade celular. 

Observou-se redução gradual para 2,4 log ao longo dos 7 dias. A composição da 

solução variou significativamente, com redução nos níveis de peróxido de hidrogênio 

e nitrito em alguns dias. Nesses dias, houve redução da eficácia antibacteriana de 

exposições de 15 minutos, enquanto a exposição por 3 horas levou à redução de 5 

logs ou mais. Esses resultados mostram a complexidade das soluções de água 



21 
 

   

ativada por plasma, pois componentes químicos distintos têm efeitos biológicos que 

variam em escalas diferentes de tempo (Traylor et al., 2011).  

Tsoukou e Bourke (2020) também observaram redução de até 5-log após 

contato de S. aureus e E. coli com líquido ativado com plasma. Verificaram que após 

o congelamento a -20°C, o líquido ativado manteve o efeito antimicrobiano por até 15 

dias. No líquido ativado armazenado a -80°C, o efeito desse manteve até 18 meses. 

Efeito antibiofilme sobre Staphylococcus aureus da água ativada por plasma foram 

investigados in vitro, com avaliação da viabilidade bacteriana, da capacidade 

metabólica, da integridade da membrana e da concentração de espécies. Os 

resultados mostraram que a aplicação da água ativada por 60 minutos teve efeito 

antibiofilme, reduzindo cerca de 4,74 ± 0,26 log10-CFU / ml (Xu et al., 2020).  

Estudo sobre o efeito inibitório e os mecanismos de espécies reativas de 

oxigênio de dose ultrabaixa produzida por água ativada por plasma sobre E. faecalis 

em estado planctônico demonstraram que a água ativada por plasma teve efeito 

inibitório sobre esse micro-organismo, com redução na expressão de genes de 

virulência (Li et al., 2018). Um efeito inibitório de líquido ativado com plasma gerado a 

partir de ar atmosférico sobre suspensão de C. albicans foi relatado (Laurita et al., 

2015).  

Estudos preliminares sobre o efeito do líquido ativado com plasma sobre 

células planctônicas de E. faecalis (Li et al., 2018) e C. albicans (Laurita et al., 2015) 

mostraram sua atividade inibitória, ambos utilizaram DBD para a ativação, sendo os 

resultados promissores. Mesmo doses baixas foram capazes de regular os fatores de 

virulência para E. faecalis. Para C. albicans mesmo utilizando DBD em nanosegundos, 

observou-se inativação fúngica. Este estudo visa analisar diferentes líquidos ativados 

com plasma frio para avaliar a eficácia da ação antibiofilme em microrganismos 

associados a insucessos endodônticos, especificamente E. faecalis e C. albicans. As 

análises serão conduzidas de forma isolada para cada espécie e em condições de co-

cultura, envolvendo ambas as espécies. Os biofilmes serão examinados tanto in vitro 

quanto ex vivo. Além disso, os líquidos testados também serão avaliados quanto à 

citotoxicidade em células 3T3. Este enfoque abrangente permitirá uma compreensão 

detalhada da eficácia dos tratamentos propostos, contribuindo para o avanço nas 

técnicas de combate a infecções endodônticas ainda não esclarecidos na literatura 

científica. 



22 
 

   

2 REVISÃO DE LITERATURA 

 

 

A utilização de plasmas não-térmicos nas ciências biomédicas tem surgido 

como uma alternativa promissora em diversas áreas. Suas propriedades, 

principalmente relacionadas à geração de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio 

permitem a inibição microbiana, tornando o uso dessa tecnologia vantajosa para a 

esterilização de implantes e instrumentos médicos e odontológicos. Além das 

propriedades antimicrobianas, a utilização do plasma não-térmico tem demonstrado 

efeitos anti-inflamatórios, favorecendo a reparação tecidual (Mirpour et al., 2020).  

Diferentes trabalhos focados no tratamento do câncer também investigaram como 

uma ferramenta promissora para atuar como terapia adjuvante. Além disso, 

propriedades antifúngicas, antibacterianas, antiparasitárias e antivirais foram 

descritas recentemente na literatura (Rezaeinezhad et al., 2023; Rovetta-Nogueira et 

al., 2023; Milhan et al., 2022; Lima et al., 2021; Leite et al., 2021; Borges et al., 2019) 

Tecido, células ou diversos materiais podem ser expostos ao plasma 

atmosférico não-térmico de duas maneiras diferentes: direta, quando é aplicado em 

um determinado substrato diretamente ou indireta, quando um líquido é ativado por 

plasma antes de sua aplicação no substrato. Ambos os métodos, diretos e indiretos, 

têm mostrado boas perspectivas em odontologia (Fridman et al., 2007). 

 

 
2.1 Microbiologia endodôntica 
 

 

A principal causa relacionada ao insucesso endodôntico é a presença de micro-

organismos que levam a infecções intra e extra-radiculares e tornam-se resistentes 

aos protocolos de desinfecção disponíveis atualmente. Embora fungos e vírus 

contribuam para a diversidade microbiana nas infecções endodônticas, as bactérias 

são os micro-organismos mais comuns presentes nessas infecções. Sua diversidade 

varia significativamente de acordo com o tipo de infecção. Além disso, diferentes 

níveis de penetração no espaço de invasão endodôntica podem ser observados em 

diferentes condições, como lesões de cárie, exposição pulpar traumática e fraturas 

(Siqueira et al., 2007). 



23 
 

   

As bactérias frequentemente associadas à infecção endodôntica persistente 

após o tratamento são Gram-positivas. Há uma distribuição igual de micro-organismos 

anaeróbios facultativos e obrigatórios, com prevalência de bactérias do gênero 

estreptococos e enterococos (Dioguardi et al., 2019). A espécie mais comumente 

envolvida na reinfecção apical é Enterococcus faecalis, que é responsável por 80% 

das infecções endodônticas em humanos. Sua patogenicidade pode ser atribuída à 

sua alta capacidade de sobrevivência dentro dos túbulos dentinários. Sua resistência 

deve-se a características como a capacidade da espécie em formar biofilmes e a 

capacidade de suportar pH elevado (Saleewong et al., 2018). Este patógeno tende a 

se destacar quando em uma microbiota multiespécie estável, tornando-se a espécie 

dominante (Dioguardi et al., 2019).  

Candida albicans é a espécie mais frequentemente relacionada à reinfecção 

endodôntica. Esta levedura está presente em baixa proporção na infecção 

endodôntica (em torno de 10%). No entanto, C. albicans, apresenta baixa 

suscetibilidade aos desinfetantes intracanais comumente usados, podendo sobreviver 

no interior dos túbulos dentinários devido à capacidade de formar biofilmes, podendo 

levar à reinfecção (Yoo et al., 2020). 

Durante décadas, os microbiologistas pesquisaram o papel das bactérias na 

etiopatogenia da infecção endodôntica. No entanto, atualmente, a pesquisa neste 

campo demonstrou um interesse emergente em micro-organismos de outros reinos 

como vírus e fungos. No reino Fungi, as espécies de C. albicans são as mais 

frequentemente relacionadas à reinfecção endodôntica Sua patogenicidade envolve a 

polpa dentária e as células do tecido perirradicular, principalmente em pacientes 

imunocomprometidos (Yoo et al., 2020). 

E. faecalis tem se apresentado como o micro-organismo mais resistente, 

enquanto E. coli tem sido mais suscetível ao tratamento com plasma frio (Ying Long 

et al., 2015; Armand et al., 2019). Streptococcus e Staphylococcus spp. mostraram 

suscetibilidade intermediária. O plasma atmosférico não-térmico pode ser eficiente em 

biofilmes recém-formados e em maduras de E. faecalis. A vulnerabilidade pode ser 

atribuída a diferentes composições da parede celular. As bactérias Gram-positivas 

possuem uma camada de peptideoglicanos mais espessa em sua parede celular 

quando comparadas às bactérias Gram-negativas, o que pode atuar como uma 

proteção contra a ação do plasma (Armand et al., 2019). 



24 
 

   

2.1.1 Irrigantes endodônticos convencionais  
 

 

A terapia endodôntica visa reduzir a carga microbiana, removendo o material 

necrótico e, principalmente, desinfetando o canal através do preparo químico 

mecânico e desinfecção com irrigantes e posterior medicação e obturação intracanal 

(Neelakantan et al., 2017). As soluções de desinfecção convencionais, como 

hipoclorito de sódio ou clorexidina e quelantes apresentam excelente desempenho 

durante a desinfecção (Simoncelli et al, 2015). Ademais, o hipoclorito de sódio é 

altamente tóxico e pode levar a um processo inflamatório nos tecidos vitais, levando 

à necrose tecidual devido ao alto potencial oxidativo do hipoclorito de sódio (Simoncelli 

et al, 2015).  

Estudos recentes demonstram que que altas concentrações de hipoclorito de 

sódio podem causar desintegração da parte orgânica da dentina, resultando em uma 

redução da microdureza e resistência do tecido dentinário (Ledernez et al., 2019).  

Embora altamente eficazes, as soluções de hidróxido de cálcio têm capacidade 

de penetração limitada na parte apical e nos túbulos dentinários, principalmente em 

dentes bi ou multirradiculares com anatomia intrarradicular mais complexa (Habib et 

al., 2014).  

O plasma atmosférico não-térmico é atraente porque combina a eficiência do 

tratamento convencional com segurança apresentada por essa tecnologia. Diferentes 

fontes de geração podem estar relacionadas e demonstraram ser heterogêneas, 

principalmente devido às diferenças entre os parâmetros utilizados. Esses parâmetros 

incluem tempo de exposição, gás de trabalho e características da fonte de 

alimentação (Armand et al., 2019). 

 

 

2.1.2 Vantagens da utilização do plasma na endodontia 
 

 As bactérias frequentemente associadas à infecção endodôntica persistente 

após o tratamento são geralmente Gram-positivas. Nesse sentido, uma técnica 

inovadora de plasma atmosférico não-térmico direto ou indireto pode representar uma 

alternativa ao tratamento convencional. Estudos relatam a eficácia do jato de plasma 



25 
 

   

contra biofilmes no interior do canal radicular, o que sugere que essa tecnologia pode 

ser útil como adjuvante nas terapias convencionais de desinfecção, buscando diminuir 

as limitações discutidas anteriormente. Uma das vantagens do plasma é sua 

capacidade de atingir micro-organismos alojados em nichos estreitos, além da baixa 

toxicidade às células eucarióticas (Ledernez et al., 2019). 

Poucos estudos in vitro foram realizados com plasma na área endodôntica, mas 

também mostraram achados promissores com boas perspectivas para serem 

utilizados na área. Uma possível vantagem do uso dessa tecnologia é que o efeito 

antimicrobiano pode ser mantido por mais de um mês após sua geração, quando o 

líquido é armazenado em baixas temperaturas (Tsoukou et al., 2016). Dessa forma, 

os dentistas não necessitariam de adquirir o equipamento gerador de plasma para a 

clínica, o que pode ser uma limitação do uso do plasma em consultórios odontológicos. 

Além disso, a forma líquida poderia ser uma solução para a complexidade da anatomia 

do canal radicular, que também pode ser apontada como uma limitação da aplicação 

direta do plasma atmosférico-não térmico (Shen et al., 2016).  

De acordo com Bessa et al. (2023), as vantagens do uso do plasma atmosférico 

não térmico (NTAP) na endodontia são várias, as quais incluem propriedades 

antimicrobianas, pois este é eficaz contra uma ampla gama de patógenos, capacidade 

de penetrar em áreas de difícil acesso dentro do sistema de canais radiculares, como 

túbulos dentinários, ramificações e áreas de istmo, que muitas vezes não são 

alcançadas por irrigantes e medicações intracanais tradicionais, também demonstra 

eficácia na remoção de biofilmes microbianos, que são estruturas complexas e 

protegidas formadas por microrganismos, aumentando a efetividade do tratamento 

endodôntico, além de propriedades anti-inflamatórias, o que pode ajudar na redução 

da inflamação e na promoção da cicatrização de tecidos periapicais após o tratamento 

endodôntico, também é um tratamento que é seguro e tem boa compatibilidade 

biológica, causando mínima citotoxicidade às células humanas, isso é crucial para a 

segurança e eficácia dos tratamentos endodônticos. O plasma também pode ser 

usado em várias fases e momentos do tratamento endodôntico, incluindo durante a 

desinfecção inicial, entre sessões de tratamento e como um complemento à obturação 

final dos canais radiculares. Essas vantagens destacam o potencial do plasma 

atmosférico não térmico como uma ferramenta inovadora e eficaz na endodontia, 



26 
 

   

proporcionando melhor resultados no controle de infecções e na promoção da saúde 

oral. 

 



27 
 

   

3 PROPOSIÇÃO 

 

 

3.1  Objetivo Geral 
 

 

Avaliar a aplicabilidade do líquido ativado com plasma como irrigante 

endodôntico, visando a atividade antibiofilme sobre espécies microbianas 

relacionadas ao insucesso do tratamento endodôntico de dentes permanentes. 

 

 

3.2 Objetivos Específicos 
 

 

 

a) Caracterizar in vitro as condições de obtenção do líquido ativado com 

plasma com efeito antimicrobiano; 

 

b) Analisar ação antimicrobiana de três líquidos ativados com plasma, 

verificando a ação antibiofilme mono e multiespécies, formados por 

Enterococcus faecalis e Candida albicans;  

 

c) Analisar a citotoxicidade do líquido ativado com plasma com efetividade 

antimicrobiana comprovada; 

 

d) Analisar o efeito da irrigação nos canais radiculares com plasma sobre 

biofilmes dual espécies compostos por Enterococcus faecalis e Candida 

albicans em modelo ex vivo. 

 

 

 

 



28 
 

   

4 MATERIAL E MÉTODOS 

 

 

O protocolo do estudo foi submetido e aprovado pelo Comitê de Ética em 

Pesquisa com Seres Humanos, sob protocolo número 5.179.994. 

 

 

4.1 Condições de obtenção e de padronização do líquido ativado por plasma 

 

 

 Os líquidos ativados por plasma foram avaliados em suas propriedades 

químico-físicas, concentrações de nitrito, nitrato e de peróxido de hidrogênio, além da 

condutividade elétrica. 

A configuração experimental consiste em um reator de plasma, uma fonte de 

alimentação de alta tensão, um osciloscópio e um suporte de substrato (Figura 1). Um 

jato de plasma de arco deslizante é gerado em uma configuração Forward Vortex Flow 

Reactor e sua região externa compreende a pluma de plasma e as áreas pós-

descarga. No presente estudo, o gás empregado é o ar comprimido, produzido por um 

compressor de ar (Schulz CSD 9/50, Joinville, SC, Brasil) com vazão de 5 L min-1. 

Este fluxo de ar foi selecionado para facilitar a formação de uma descarga de arco 

deslizante contínua com o menor fluxo possível, como demonstrado por Doria et al., 

(2015). O sistema é alimentado por uma fonte de alimentação de alta tensão (modelo 

Arternis 0215, Inergiae, Florianópolis, SC, Brasil), operando na frequência de 20 kHz. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



29 
 

   

Figura 1 – Ilustração esquemática da montagem experimental para ativar os líquidos. 

 

Legenda: (a) Ilustração esquemática da montagem experimental (b) reator de arco deslizante utilizado 

para ativar os líquidos. Fonte: Pessoa, R.S. (2024). 

 

As formas de onda de tensão e corrente da descarga GAPJ foram adquiridas 

utilizando uma sonda de alta tensão (Tektronix P6015A, Tektronix, Beaverton, OR, 

EUA) e uma sonda de corrente autoajustável (Agilent N2869B, Agilent, Santa Clara, 

CA, EUA). Os sinais elétricos foram capturados por um osciloscópio digital (Keysight 

DSOX1202A, Keysight, Santa Rosa, CA, EUA), com o sinal de corrente sendo 

diretamente inferido do eletrodo aterrado. A equação (1) e a Fig. 3c foram utilizadas 

para calcular a potência dissipada no plasma. 

 

 =


21
∫ 

2
1

                                       (1) 

Onde, V(t) é a tensão, I (t) é a corrente elétrica e T2-T1é o intervalo de tempo.  

 

Os líquidos ativados por plasma (PAW) foram caracterizados por meio de um 

espectrofotômetro UV-Vis (Evolution 201/220, Thermo Fisher Scientific) foi 

empregado para detectar espécies reativas de oxigênio e nitrogênio (RONS) na PAW. 

Este equipamento permite medir a absorbância óptica na faixa UV-Vis (190–900 nm) 

a) b) 



30 
 

   

com alta precisão instrumental (0,001) e uma resolução espectral de 0,2 nm. A 

velocidade de varredura foi configurada em 120 nm/min. As amostras foram colocadas 

em cubetas quadradas de quartzo de 3,5 mL, que têm um caminho óptico padrão de 

10 mm e dois lados polidos. Para obter a curva de fundo, uma cubeta de quartzo vazia 

foi utilizada. A linha de base foi estabelecida utilizando uma cubeta de quartzo 

contendo 3,5 mL de água deionizada (pH = 6,7). Para preparação das amostras a 

obtenção da linha de base com a água deionizada, as cubetas foram limpas e 

alíquotas de PAW foram adicionadas. As amostras de PAW tinham diferentes pHs: 

2,7, 3,1 ou 3,5. Para análise foram usados os espectros de absorção UV-Vis relativos 

de cada PAW foram adquiridos. O objetivo era identificar espécies reativas de oxigênio 

e nitrogênio de longa duração, como peróxido de hidrogênio (H2O2), ácido nitroso 

(HNO2), nitrito (NO2-), nitrato (NO3-) e ozônio (O3). Para isso, foram utilizadas curvas 

de deconvolução, que são curvas ajustadas para separar e identificar os picos 

correspondentes a cada RONS. No processo de deconvolução, as funções 

gaussianas foram aplicadas nas curvas de deconvolução para obter melhores ajustes, 

representando os picos de cada espécie de RONS. A soma de todas as funções 

gaussianas que representam os respectivos RONS deve resultar em uma curva 

envelope que se ajuste aos dados experimentais obtidos. Essas condições e 

procedimentos foram empregados para caracterizar e analisar as propriedades da 

PAW, especialmente focando nas espécies reativas presentes e sua distribuição 

espectral na faixa UV-Vis. 

Foram realizados testes para identificação do líquido ativado com maior 

atividade antibiofilme e menor toxicidade. Para tanto, foram avaliados diferentes 

líquidos: água mineral, solução fisiológica e água destilada.  

Os grupos de biofilmes nos testes in vitro foram os líquidos ativados: 1) Água 

Destilada Ativada; 2) Solução Fisiológica Ativada; 3) Água Mineral Ativada. Os grupos 

controles com líquidos não ativados foram: 1) Água Destilada não ativada; 2) Solução 

Fisiológica Não Ativada; 3) Água Mineral não ativada; O grupo controle negativo foi 

solução fisiológica.  

Neste estudo, utilizamos a técnica desenvolvida por Liu et al. [61] para 

determinar as concentrações de H2O2, NO3-, NO2- e HNO2 (Tabela 1). Esta abordagem 

é empregada para minimizar erros significativos na concentração calculada de RONS, 

já que as linhas de absorção de H2O2, NO3- e NO2- se sobrepõem entre 190 e 230 nm, 



31 
 

   

como pode ser observado nas deconvoluções apresentadas na Fig. 4 [Liu]. Os 

espectros UV-Vis representados na Fig. 4 foram utilizados para esta análise. 

Utilizando a equação (1), a matriz (2) foi estabelecida e, em seguida, resolvida 

simultaneamente para obter as concentrações de H2O2, NO3- e NO2- em mg/L. 

 

 = 3
−

+ 
−

+ []                                          (1) 

 

 

(

3
−




−



[]

) = 
  

  
 




/                                 (2) 

 

 

Onde , e  são os coeficientes de absorptividade molar e  é o comprimento 

do caminho ótico. 

A solução simultânea foi realizada para os comprimentos de onda especificados 

em 230 nm, 235 nm e 250 nm. Utilizando a equação (3), a concentração de ácido 

nitroso (HNO2) foi determinada, pois, conforme afirmado por Tachibana et al. (2020) 

a composição de ácido nitroso (HNO2) e seu íon (NO2-) depende do nível de pH da 

solução, sendo a constante de acidez do HNO2 pKa=3,38 à temperatura ambiente. 

 

[] =


−


0−                                                     (3) 

 

Os espectros UV-Vis na região entre 190 a 280nm. As curvas de deconvolução 

utilizadas para identificar RONS de longa duração, especificamente peróxido de 

hidrogênio (H2O2), ácido nitroso (HNO2), nitrito (NO2-), nitrato (NO3-) e ozônio (O3), 

também estão ilustradas. Funções gaussianas foram empregadas para obter 

melhores ajustes nas curvas de deconvolução que representam os RONS. Todas as 

curvas exibem uma linha de base e um envelope. O objetivo principal é localizar os 

picos dos RONS usando funções gaussianas, e, por fim, a soma de todas as funções 

gaussianas que representam os respectivos RONS deve gerar uma curva envelope 

que se ajuste aos dados experimentais. 



32 
 

   

 

4.1.1 Avaliação da atividade antibiofilme dos líquidos ativados 

 

 

O efeito inibitório de líquidos ativados por plasma frio, obtidos em várias 

condições diferentes, foram avaliadas frente a biofilmes formados por Enterococcus 

faecalis e Candida albicans. 

Os biofilmes de C. albicans foram obtidos de acordo com metodologia descrita 

por Silva et al. (2008). A cepa de C. albicans (ATCC 18804) foi cultivada por 24h a 

37ºC em ágar Sabouraud dextrose (SD). As suspensões contendo 107 células/mL em 

em solução fisiológica esterilizada (NaCl 0,9%) foram padronizadas com auxílio de um 

espectrofotômetro, utilizando-se o comprimento de onda de 530 nm e densidade 

óptica (DO) de 0,381. Alíquotas de 250 µL das suspensões foram distribuídas nos 

poços de placas de 96 poços, as quais foram incubadas sob agitação (75 rpm) as 

37ºC por 1,5 horas. Após o referido período, os poços foram lavados com 250 µL de 

PBS e foi adicionado 250 µL de caldo yeast nitrogen base (YNB) enriquecido com 100 

mM de glicose. As placas foram incubadas a 37ºC por 24 horas.  

Para E. faecalis (ATCC 29212), foi utilizada a metodologia descrita por Li et al. 

(2015), com modificações. As suspensões foram padronizadas por espectrofotometria 

em solução fisiológica esterilizada (NaCl 0,9%) utilizando-se o comprimento de onda 

de 760nm por densidade óptica (DO). Os biofilmes foram formados em placas de 96 

poços utilizando-se caldo tríptico de soja. As placas foram incubadas a 37ºC por 24 

horas. 

Os biofilmes foram expostos ao líquido ativado por plasma por 1 minuto ou 1,5 

minutos. Para a obtenção dos biofilmes dual espécies, volumes iguais das 

suspensões padronizadas dos microrganismos foram simultaneamente inseridos nos 

poços de placas de 96 poços com caldo tríptico de soja, seguindo a incubação de 24 

horas a 37 °C. Após, os biofilmes formados foram lavados 3 vezes com solução 

fisiológica esterilizada. Os biofilmes foram expostos ao líquido ativado por plasma em 

dois tempos, por 1 minuto ou 1,5 minutos.  

Após o tratamento, os biofilmes foram submetidos à sonicação por 30 segundos 

e ressuspensos em solução fisiológica.  As suspensões finais foram semeadas em 

meios de cultura seletivos e as placas foram incubadas a 37 °C por 24 horas. Após o 



33 
 

   

período de incubação, foi realizada a contagem de colônias dos grupos tratamento e 

controle e calculado o número de unidades formadoras de colônia por biofilme 

(UFC/biofilme).  

 

 

4.1.2 Avaliação da citotoxicidade do líquido ativado por plasma 

 

A viabilidade celular foi realizada de acordo com a ISO 10993-5:2009 (2009). A 

linha celular utilizada foi de fibroblastos embrionários de camundongos (3T3), que 

foram cultivadas em meio modificado de DMEM (Dulbecco´s Modified Eagle’s

Medium) suplementado com 1% de penicilina (100U/mL) / estreptomicina (100 mg/mL) 

e 10% de soro fetal bovino (FBS). As células foram crescidas a 37°C em 5% de CO2. 

A densidade de 8 x 103 células/poço foi semeada em placas de 96 poços. Placas de 

96 poços foram incubadas por 24h a 37°C em 5% de CO2 para promover a adesão 

celular. 

         Em seguida, as células foram expostas aos líquidos ativados na proporção de 

1:1 (líquido/meio de cultura) por 1,5 minutos, que foi o maior tempo de contato durante 

o ensaio de atividade antimicrobiana.  

 Os testes foram realizados nos grupos com líquidos ativados por plasma: água 

destilada ativava (ADA), solução fisiológica ativada (SFA), água mineral ativada 

(AMA), os líquidos não tratados (controles negativos) foram: água destilada (AD), 

solução fisiológica (SF), água mineral (AM) e os controles de meio contendo apenas 

meio de cultura e o controle positivo contendo Hipoclorito de Sódio (1,0%) 

Após 1,5 minutos de contato, as suspensões foram removidas. As células foram 

lavadas com Hanks's Balanced Salt Solution (HBSS), o meio de cultura foi substituído 

e as placas foram reincubadas a 37°C em 5% de CO2 por 24 h. 

A viabilidade celular foi avaliada com o teste de citotoxicidade MTT. Após 24 h, 

100 µL de 3-Brometo de (4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazólio (MTT) foi 

adicionado a cada poço. As placas foram incubadas por 1,5 h. Em seguida, Dimetil 

Sulfóxido (DMSO) foi adicionado a cada poço e colocados em um shaker por 15 min 

para dissolver os cristais de formazan. A densidade óptica resultante da solução foi 

medido a 570 nm em um espectrofotômetro. Os dados de absorbância foram 

normalizados para o grupo de controle negativo (=100%). Seis repetições foram 



34 
 

   

realizadas em dois experimentos independentes (n=12). A viabilidade celular final 

abaixo de 70% foi considerada como citotóxica. 

 

 

4.1.3 Efeito da irrigação dos canais radiculares com água ativada com plasma 

sobre biofilmes dual espécies de E. faecalis e C. albicans em modelo ex vivo 

 

 

A eficácia do líquido ativado por plasma com maior atividade antibiofilme (obtida 

nos testes in vitro) foi avaliado como irrigante intracanal, frente a biofilmes formados 

por Candida albicans e Enterecoccus faecalis no interior de canais radiculares de 

dentes humanos. 

Para este propósito, foram obtidos 54 dentes humanos unirradiculares para o 

estudo, extraídos recentemente, sem presença de cáries ou fraturas. A metodologia 

utilizada foi baseada em Valera et al. (2009) e Valera et al. (2010).  

Os dentes foram desinfetados e os tecidos orgânicos foram retirados, 

raspando-se as superfícies externas das raízes com lâmina de bisturi. A seguir, as 

coroas foram removidas e o comprimento das raízes foi padronizado, considerando-

se a distância do ápice ao bordo cervical. As raízes foram seladas externamente com 

2 camadas de adesivo epóxi (Araldite, Brascola, São Paulo, Brasil), exceto a abertura 

cervical. Os espécimes foram colocados aleatoriamente em placas de cultura celular 

contendo 24 poços (Costar, New York, NY).  

Os canais radiculares foram irrigados de forma contínua com água destilada 

durante todo o processo. A seguir, todos os dentes foram submetidos a banho 

ultrassônico por 10 min em EDTA 17% seguido de 10 min em banho de hipoclorito de 

sódio a 5,25%, a fim de eliminar a smear layer produzida no preparo inicial. Após, os 

dentes foram posicionados na posição vertical nos poços de placas de 24 poços, 

utilizando resina acrílica para fixá-los. Os conjuntos foram enviados para esterilização 

por radiação gama (20 KGy por 6 horas).  

Suspensões padronizadas contendo 107 UFC/mL de E. faecalis (ATCC 29212) 

e C. albicans (ATCC 18804) foram obtidas com auxílio de espectrofotômetro. A seguir, 

alíquotas iguais das suspensões dos microrganismos foram transferidas para o interior 

dos canais radiculares para obtenção dos biofilmes para os testes ex vivo. 



35 
 

   

Os dentes foram divididos aleatoriamente de acordo com os tratamentos: a) 

água ativada com plasma; b) Hipoclorito de Sódio 1% (controle positivo) e c) solução 

fisiológica esterilizada (controle negativo). Foram utilizados 9 dentes para cada teste, 

totalizando n=54. Os testes foram realizados em placas de 24 poços, sendo 3 dentes 

para cada grupo teste (água ativada, hipoclorito e solução fisiológica), sendo uma 

placa para cada microrganismo (C. albicans e E. faecalis). Os testes foram realizados 

em triplicata, como demonstra o esquema de divisão dos grupos na figura 2.  

 

 

Figura 2 – Esquema de divisão dos Grupos 

Fonte: Elaborada pela Autora 
 

 

Os dentes foram preparados realizando irrigação com as soluções teste a cada 

troca de instrumento. O preparo mecânico foi realizado para remover o tecido pulpar 

e tornar visível a ponta do forame apical e canais radiculares instrumentados em um 

comprimento padronizado de 16 mm. A instrumentação inicial do canal radicular foi 

feita em toda sua extensão utilizando limas tipo K (Dentsply Sirona, Ballaigues, Suíça), 

* 

C. albicans (ATCC 18804)  

Legendas 

           grupo tratado com água ativada com plasma 

           grupo tratado com hipoclorito de sódio 1% 

grupo tratado com solução fisiológica 

ilustração da resina acrílica – dente – conduto 

E. faecalis (ATCC 29212)  

} * } * 



36 
 

   

sendo a instrumentação realizada na sequência #30, #35 e #40, sempre alternada de 

irrigação com 3 mL de solução fisiológica após cada instrumento. 

No grupo hipoclorito, ao final da instrumentação, os canais radiculares foram 

lavados com tiossulfato de sódio 0,06% para a neutralização do NaOCl (1x) e a seguir, 

com solução fisiológica esterilizada. Nos demais grupos foram lavados 3 vezes com 

solução fisiológica. Os biofilmes remanescentes foram ressuspensos em solução 

fisiológica com auxílio de limas endodônticas. A suspensão final foi semeada em Ágar 

Sabouraud Dextrose e Agar Base m-Enterococcus e incubadas a 37°C por 24 horas, 

em aerobiose. Após o período de incubação, as colônias características foram 

contadas e obtido o valor de unidades formadoras de colônia por mililitro (UFC/mL).  

 

 

4.2 Análise Estatística  
 
 
 

Os dados foram analisados estatisticamente por meio de técnicas descritivas, 

na forma de médias e desvios-padrão. Os testes apresentaram distribuição normal da 

amostra, as comparações por isto foram feitas utilizando testes de análise de variância 

(ANOVA One-way), seguidas do post-hoc de Tukey. As análises foram realizadas no 

software GraphPad Prism, versão 6.01. Para as conclusões das análises estatísticas 

foi utilizado o nível de significância de 5%.  

 

 

 



37 
 

   

5 RESULTADO 

 

 

5.1 Análise espectroscópica do plasma 

 

 

5.1.1 Identificação dos picos e bandas e efeito do fluxo de gás  

 

 

O espectro óptico do jato de plasma gerado em um sistema gliding arc 

utilizando ar comprimido foi analisado para diferentes fluxos de ar: 1, 5 e 10 L/min 

(Figura 3). Este espectro revela informações sobre as espécies excitadas e ionizadas 

presentes no plasma, bem como suas respectivas transições eletrônicas. 

 

 

Figura 3 – Espectro óptico do jato de plasma gerado em um sistema gliding arc com 

ar comprimido em diferentes fluxos de ar (1, 5 e 10 L/min). 

200 300 400 500 600 700 800 900

5000

10000

15000

20000

25000

30000

35000 O

N2
+(FNS) N2(FPS)

OH

N2(SPS)

In
te

ns
id

a
de

 (
u
.a

.)

Comprimento de onda (nm)

 1 L/min
 5 L/min
 10 L/min

NO

O

   
Legenda: NO: óxido nítrico, OH: emissão do radical hidroxila, N2: nitrogênio, FNS: sistema de fluxos 
nitrogenados. FPS: sistema de primeira ordem positivo, SPS: picos associados às bandas do sistema 
de primeira ordem. Fonte: Elaborado pela Autora. 



38 
 

   

Na faixa de 200 a 300 nm, os picos observados podem ser majoritariamente 

atribuídos às emissões do NO (óxido nítrico), especificamente às bandas de emissão 

β (NO-γ), que correspondem às transições eletrônicas B²Π → X²Π. Essas transições

são proeminentes entre 200 e 280 nm, com múltiplos picos significativos nesta faixa 

devido à alta densidade de NO excitado no plasma. Além das bandas de NO, outras 

possíveis contribuições podem vir de transições eletrônicas de moléculas diatômicas 

como N₂ e O₂, que são componentes principais do ar. Na faixa de 200 a 230 nm, 

podem aparecer picos associados ao sistema de Werner do O₂ e ao sistema de 

Schumann-Runge do O₂, que envolvem transições de estados excitados de oxigênio 

molecular. Entre 280 e 300 nm, as emissões de NO continuam a dominar, mas 

também há a possibilidade de contribuições menores das transições do sistema de 

segunda positiva do N₂ (C³Πu→ B³Πg), embora estas sejam menos pronunciadas em

comparação com as bandas de NO (Zaplotnik, Primic, Vesel, 2021).  

Região de 308 a 320 nm (OH): Entre 308 e 320 nm, é comum encontrar bandas 

de emissão do radical hidroxila (OH), que são importantes indicadores de processos 

de formação de radicais livres no plasma. A banda de emissão mais proeminente do 

OH nesta região é a transição A²Σ⁺ → X²Π (sistema de primeira positiva de OH), que

aparece tipicamente em torno de 308-309 nm. 308-309 nm: Este pico é devido à 

transição A²Σ⁺ → X²Π do OH, que é um importante marcador da presença de radicais

hidroxila no plasma (Faze-Chen et al., 2016). 

Faixa de 320 a 406 nm: Nesta faixa, podemos observar picos associados às 

bandas do sistema de primeira ordem do N₂ (N₂ SPS), particularmente as bandas de 

emissão C-B (segunda positiva), que são caracterizadas por transições vibracionais 

do nitrogênio molecular (Ji et al., 2015). Estas bandas são importantes para identificar 

a presença de N₂ excitado no plasma e geralmente aparecem de forma distinta nesta 

região do espectro.   

Faixa de 427 a 590 nm: Os picos nesta faixa podem estar relacionados às 

transições do N₂+ (primeiro sistema negativo) e outras transições do N₂ (Qayyum et 

al., 2005). A presença de N₂+ indica a ionização significativa do nitrogênio no plasma, 

resultando em transições eletrônicas características que aparecem claramente no 

espectro. 

A faixa de 590 a 800 nm inclui emissões das bandas de transição do sistema 

de primeira ordem do O₂, bem como possíveis transições de átomos excitados de 



39 
 

   

oxigênio (O) e nitrogênio (N). Estas bandas, menos intensas em comparação com 

aquelas em comprimentos de onda mais curtos, fornecem informações importantes 

sobre a composição e excitação no plasma. O sistema de primeira ordem positivo 

(FPS) de N₂ pode ser observado com picos no espectro da Figura 3, atribuídos aos 

processos de excitação e ionização resultantes de colisões de elétrons com moléculas 

de N₂ no estado fundamental (Zhou et al., 2018). 

Picos acima de 800 nm: Os picos nesta região podem ser atribuídos à emissão 

de átomos excitados de oxigênio (O) ou nitrogênio (N). Estas emissões ocorrem em 

comprimentos de onda mais longos e são indicativas de espécies atômicas presentes 

no plasma em estados altamente excitados. 

Ao comparar os espectros obtidos com diferentes fluxos de ar (1, 5 e 10 L/min), 

observa-se que a intensidade dos picos aumenta com o aumento do fluxo de ar. Isso 

sugere que um maior fluxo de ar resulta em uma maior densidade de espécies 

excitadas e ionizadas no plasma, devido ao aumento da taxa de entrada de ar e, 

consequentemente, maior número de colisões e processos de excitação e ionização. 

No entanto, pode haver um ponto de saturação onde o aumento do fluxo não resulta 

em um aumento proporcional na intensidade das emissões, possivelmente devido a 

efeitos de autoabsorção ou outras limitações intrínsecas ao sistema de plasma. Assim, 

escolhemos neste trabalho o fluxo de 5 L/min uma vez que este possui resultados 

relativamente próximos ao de 10 L/min. 

 
 
 

5.1.2 Efeito da interação do plasma com as águas: destilada, mineral e solução 

fisiológica 

 

 

As Figuras 4a, 4b e 4c apresentam os espectros ópticos da interação do plasma 

com as águas: solução fisiológica, destilada e mineral, respectivamente. 

 

 

 



40 
 

   

 

Figura 4 – Espectros ópticos da interação do plasma com as águas: solução fisiológica 

(a), destilada (b) e mineral (c) para fluxo de ar de 5 L/min 

Fonte: Elaborado pela Autora.  

 

 

A interação do plasma gerado em um sistema gliding arc com diferentes tipos 

de água – solução fisiológica, destilada e mineral - provoca alterações significativas 

na composição e nas características do plasma, refletidas nos espectros ópticos 

obtidos. 

 

 

 

 

200 300 400 500 600 700 800 900

5000

10000

15000

20000

25000

30000

35000

40000

In
te

ns
id

ad
e 

(u
.a

.)

Comprimento de onda (nm)

 sem água
 com água salina

(a)

200 300 400 500 600 700 800 900

5000

10000

15000

20000

25000

30000

(b)

In
te

ns
id

ad
e 

(u
.a

.)

Comprimento de onda (nm)

 sem água
 com água destilada

200 300 400 500 600 700 800 900

5000

10000

15000

20000

25000

30000
(c)

In
te

ns
id

ad
e 

(u
.a

.)

Comprimento de onda (nm)

 sem água
com água mineral

              sem água  

com s. fisiológica 



41 
 

   

5.1.3 Solução fisiológica 

 

 

Ao comparar o plasma sem água com o plasma interagindo com solução 

fisiológica, observa-se um aumento na intensidade dos picos em várias regiões do 

espectro, especialmente entre 200 e 400 nm. Essa faixa inclui bandas associadas às 

transições de NO e N₂. Além disso, há um aumento nos picos em torno de 590 nm e 

820 nm, indicando a possível presença de átomos de sódio (Na), um componente 

significativo do sal dissolvido na solução fisiológica. Essa observação pode ser 

explicada pela dissociação dos íons Na⁺ e Cl⁻ da solução fisiológica quando interagem 

com o plasma. O sódio, quando excitado, emite radiação característica em torno de 

590 nm (Melo et al., 2022). A presença desses íons aumenta a condutividade do 

plasma, resultando em maior excitação e ionização de outras espécies presentes. 

 

 

5.2 Água Destilada 

 

 

A comparação entre o plasma sem água e com água destilada revela uma 

modificação nas intensidades dos picos em várias regiões do espectro. No espectro 

ótico apresentado, observamos uma redução na intensidade dos sinais na faixa de 

200 a 400 nm quando a amostra contém água destilada em comparação com a 

amostra sem água. Essa redução pode ser atribuída à absorção ou interação da água 

destilada com os componentes presentes nessa faixa de comprimento de onda. Em 

contrapartida, a partir de 400 nm, há um aumento nas intensidades dos sinais na 

presença de água destilada. Este aumento é especialmente notável nos picos em 

torno de 777 nm e 840 nm, que são relativos ao oxigênio (O). Esse comportamento 

sugere que a água destilada influencia a formação de espécies ativas ou a 

intensificação de processos de emissão, possivelmente devido à interação da água 

com o plasma. A água destilada, por ser pura, não contém íons adicionais que 

poderiam alterar significativamente a condutividade do plasma. No entanto, a 

presença de H₂O contribui para a formação de radicais OH, que são importantes para 

a química do plasma. 



42 
 

   

5.2.1 Água Mineral 

 

 

O espectro do plasma com água mineral mostra um padrão distinto ao plasma 

sem água, com algumas diferenças notáveis. Observamos uma redução na 

intensidade dos sinais na faixa de 200 a 400 nm, o que pode ser atribuído à absorção 

ou interação dos componentes presentes nessa faixa de comprimento de onda com a 

água mineral. A composição química da água mineral, que inclui íons como cálcio, 

magnésio, sódio, potássio, bicarbonato, sulfato e cloreto, pode modificar a química do 

plasma e, consequentemente, as características do espectro. A partir de 400 nm, há 

um aumento moderado nas intensidades dos sinais na presença de água mineral. 

Particularmente, o sódio (Na), presente na água mineral em torno de 1,0 mg/L, quando 

excitado, emite radiação característica em torno de 590 nm (Melo et al., 2022). Além 

disso, a presença de picos em regiões acima de 700 nm sugere a excitação de outros 

elementos traços presentes na água mineral, como cálcio (Ca) e magnésio (Mg).  

Por fim, a interação do plasma com diferentes tipos de água resulta em 

modificações distintas no espectro óptico, refletindo a composição química e as 

características de cada tipo de água. A solução fisiológica aumenta significativamente 

a intensidade dos picos devido à presença de íons Na⁺ e Cl⁻, enquanto a água mineral 

modula as intensidades devido aos diversos minerais dissolvidos. A água destilada, 

embora pura, contribui para a geração de radicais OH, evidenciando a dissociação da 

água no plasma. Essas interações são fundamentais para entender a dinâmica e os 

efeitos químicos no plasma ao interagir com diferentes meios aquosos. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



43 
 

   

5.2.2 Análise de Espectroscopia UV-Vis: Efeito da Interação do Plasma com os 

Líquidos: Solução fisiológica, água destilada e água mineral 

 

 

A interação do plasma gerado em um sistema gliding arc com diferentes tipos 

de líquidos – solução fisiológica, água destilada e água mineral - provoca alterações 

significativas nos espectros de absorção UV-Vis dos líquidos ativados (Figura 5). 

Utilizou-se espectroscopia no UV-Vis para analisar as águas ativadas com plasma 

durante 30 minutos, utilizando uma cubeta de quartzo com um caminho óptico de 30 

mm. A análise UV-Vis fornece informações sobre a absorção de luz, indicando a 

presença de espécies reativas e produtos químicos formados durante a ativação com 

plasma.  

 

 

Figura 5 – Espectros de absorção UV-Vis dos líquidos ativados com plasma: 

comparação entre água mineral, destilada e solução fisiológica. 

 
 
Legenda: Sol. Fis.: solução fisiológica. Fonte: Elaborado pela Autora 

 

 

A água mineral apresenta um perfil de absorção relativamente estável em toda 

a faixa analisada, com um leve aumento na absorbância em torno de 250 nm, seguido 

200 250 300 350 400 450
0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

4,0

A
bs

or
ba

nc
ia

 (
u.

a.
)

Comprimento de onda (nm)

 Mineral
 Destilada
 SalinaSol. fis. 



44 
 

   

de uma queda acentuada e uma região de absorbância quase constante entre 300 e 

450 nm. A água destilada mostra um pico de absorção significativo em torno de 250 

nm, seguido de uma queda acentuada, com um aumento leve e contínuo na 

absorbância entre 300 e 450 nm, indicando a formação de novas espécies químicas 

durante a ativação. A solução fisiológica apresenta um padrão de absorção similar à 

água destilada, mas com intensidades ligeiramente menores em algumas regiões, 

especialmente no pico de 250 nm, que é menos pronunciado do que na água 

destilada. 

Para identificar as espécies específicas presentes nos espectros UV-Vis das 

águas ativadas, consideramos os seguintes padrões de absorção (Chipman, 2008; Liu 

et al., 2019): o íon nitrato (NO₃⁻) tem um pico de absorção característico em torno de 

200-210 nm, e a presença de um pico forte nesta faixa nos espectros das águas 

ativadas indica a formação de nitrato (vide fita colorimétrica na Figura 6).  

O íon nitrito (NO₂⁻) tem um pico de absorção característico em torno de 355 nm 

e uma absorção mais fraca em torno de 280 nm, e a presença de absorção na faixa 

de 280-355 nm pode indicar a formação de nitrito (Figura 5). O ácido nitroso (HNO₂) 

tem picos de absorção característicos em torno de 350 nm e uma absorção 

significativa em torno de 280 nm, e absorção nesta faixa, especialmente um aumento 

em torno de 280 nm e 350 nm, pode indicar a presença de HNO₂.  

A presença de um pico de absorção significativo em torno de 250 nm sugere a 

presença de radicais OH, que são comumente formados pela dissociação da água 

(H₂O) sob a ação do plasma. O peróxido de hidrogênio (H₂O₂) é um produto comum 

da reação entre radicais OH no plasma e apresenta absorção no UV, geralmente com 

um pico próximo de 260 nm, no entanto, conforme a Figura 6, sua concentração é 

mínima ou nula nas águas ativadas neste trabalho.  

A presença de picos menores e mais estáveis entre 300 e 450 nm pode ser 

atribuída à presença de íons como Ca²⁺ e Mg²⁺, que estão naturalmente presentes na 

água mineral. A interação do plasma com Cl⁻ pode gerar hipoclorito (OCl⁻), que tem 

uma absorção característica no UV próximo de 292 nm. 

 

 

 

 



45 
 

   

Figura 6 – A Fitas colorimétricas para medição das concentrações aproximadas de 

H2O2, NO3- e NO2- nos diferentes líquidos ativados analisados. 

PAW H2O2 NO3- e NO2- 

Solução fisiológica 

  

Água Destilada 

  

Água Mineral 

  

Legenda: PAW: água ativada por plasma. H2O2: Peróxido de Hidrogênio. NO3-: Nitrato.     
Fonte: Elaborado pela Autora 
 

 

Os resultados de OES mostraram diferentes padrões de emissão para os 

líquidos ativados, refletindo a interação do plasma com solução fisiológica, água 

destilada e mineral. A absorbância elevada em torno de 250 nm para todas as águas 

pode ser atribuída à presença de radicais OH e outras espécies reativas formadas 

durante a ativação com plasma. No espectro de emissão óptica, observamos um pico 



46 
 

   

significativo em torno de 308-309 nm, indicando a presença de OH no plasma. A 

absorbância na faixa de 300 a 450 nm é relativamente estável, mas com pequenos 

aumentos que podem indicar a presença de produtos secundários formados pela 

interação do plasma com os componentes dissolvidos nas águas. 

 

 

5.2.3 Parâmetros Físico-Químicos das Líquidos ativados com Plasma 

 

 

A ativação de diferentes tipos de líquidos (solução fisiológica, água destilada e 

água mineral) com plasma resulta em mudanças significativas nos parâmetros físico-

químicos desses líquidos. A seguir, discutimos as alterações observadas com base 

nos dados físico-químicos coletados das águas antes e após a ativação, 

apresentando-os em tabelas para melhor organização e compreensão.  

Solução Fisiológica: Antes e depois da ativação com plasma, os parâmetros 

físico-químicos da solução fisiológica mostraram mudanças notáveis (conforme 

demonstra a Tabela 1).  

 

 

Tabela 1. Parâmetros físico-químicos da solução fisiológica (salina) antes e após o 

processo de ativação com plasma gerado em reator gliding arc. 

 

Fonte: Elaborado pela Autora 
 

 

Sol. fisiológica Sol. fisiológica



47 
 

   

A solução fisiológica ativada com plasma (PAW salina) apresenta uma redução 

significativa no pH, indicando uma acidificação acentuada. A condutividade aumenta, 

sugerindo uma maior presença de íons dissolvidos, provavelmente devido à ionização 

de compostos presentes no líquido. O potencial redox aumenta drasticamente, 

refletindo um ambiente altamente oxidante, possivelmente devido à geração de 

espécies reativas de oxigênio (ROS), incluindo ozônio (O₃). A TDS e a salinidade 

mostram aumentos moderados, indicando mudanças na composição iônica. 

Água Destilada: A água destilada também sofreu alterações significativas após 

a ativação com plasma (conforme demonstra a Tabela 2).  

 

 

Tabela 2. Parâmetros físico-químicos da água destilada antes e após o processo de 

ativação com plasma gerado em reator gliding arc. 

 
Fonte: Elaborado pela Autora 

 

 

A água destilada ativada com plasma mostra uma redução significativa no pH, 

tornando-se altamente ácida. A condutividade aumenta, indicando uma maior 

presença de íons, resultado da ionização de moléculas de água e formação de novas 

espécies químicas. O potencial redox, que era inicialmente negativo, se torna 

altamente positivo, indicando a formação de um ambiente oxidante. A TDS e a 

salinidade aumentam ligeiramente, refletindo a formação de novas espécies químicas 

dissolvidas.  

Água Mineral: A água mineral possui uma composição química específica, que 

inclui cálcio (Ca), magnésio (Mg), sódio (Na), potássio (K), bicarbonato (HCO₃), sulfato 



48 
 

   

(SO₄) e cloreto (Cl). Estes componentes influenciam significativamente as 

propriedades da água mineral ativada com plasma (Tabela 3). A água mineral ativada 

com plasma apresenta uma redução no pH, tornando-se mais ácida, embora menos 

pronunciada em comparação com as outras águas. A condutividade e o TDS 

diminuem, sugerindo que alguns íons podem ter precipitado ou reagido para formar 

compostos menos solúveis. O potencial redox aumenta, mas não tanto quanto nas 

outras águas, indicando um ambiente oxidante moderado. A presença de ozônio é 

detectada, mas em uma concentração menor do que nas outras águas. De um modo 

geral, a ativação com plasma induz mudanças significativas nos parâmetros físico-

químicos da solução fisiológica, água destilada e mineral. Observa-se uma 

acidificação geral e um aumento no potencial redox, refletindo a formação de um 

ambiente altamente oxidante. A condutividade e o TDS aumentam ou diminuem 

dependendo da composição inicial da água, indicando a formação de novas espécies 

iônicas e reações químicas complexas. A presença de ozônio (O₃) em todas as águas 

ativadas destaca a produção de espécies reativas de oxigênio como um efeito comum 

da ativação com plasma. Estas mudanças são fundamentais para entender os efeitos 

e as aplicações das águas ativadas com plasma em diversas áreas. 

 

 

Tabela 3. Parâmetros físico-químicos da água mineral antes e após o processo de 

ativação com plasma gerado em reator gliding arc.  

 
Legenda: Composição química da água mineral: Cálcio (Ca): 30 mg/L; Magnésio (Mg): 10 mg/L; Sódio 
(Na): 10 mg/L; Potássio (K): <1 mg/L; Bicarbonato (HCO₃): 80 mg/L; Sulfato (SO₄): 10 mg/L; Cloreto 
(Cl): 10 mg/L. Fonte: Elaborado pela Autora 
 
 



49 
 

   

5.3 Efeito da água ativada sobre os biofilmes microbianos – Testes in vitro 
   

 

5.3.1 Efeito da água ativada sobre biofilmes de Candida albicans   
 

 

Os resultados dos testes nos grupos com Água Destilada frente a biofilmes de 

C. albicans estão apresentados na Figura 7 – a, onde os grupos com água destilada 

não ativada não apresentaram reduções significativas no número de células viáveis 

quando comparados ao grupo controle e em ambos os tempos de exposição. Houve 

redução de 3,9% após exposição por 1 minuto. Após 1,5 minutos, houve aumento na 

contagem de células viáveis de 2,1%. A exposição à água destilada ativada com 

plasma por 1 minuto levou à redução de 36,7%. Após exposição por 1,5 minutos, 

observou-se redução de 47,2%. Ambos os grupos de Água Destilada ativada 

apresentaram diferenças significativas na redução da viabilidade do biofilme quando 

comparado ao grupo controle tratado com solução fisiológica (p<0.0001). 

Quanto aos grupos Solução Fisiológica frente a biofilmes de C. albicans, os 

resultados estão demonstrados a Figura 7 – b. Os grupos expostos à água destilada 

não ativada não apresentaram diferenças significativas quando comparados ao grupo 

controle nos dois tempos de exposição. A redução foi de 8,8% após 1 minuto de 

exposição e de 5,4% após 1,5 minutos. A solução fisiológica ativada com plasma, no 

tempo de tratamento de 1 minuto levou à redução de 28,5%. Após exposição por 1,5 

minutos, observou-se redução de 35,4%. Ambos os grupos expostos à solução 

fisiológica ativada apresentaram diferenças significativas em relação ao controle 

negativo(p<0.0001). 

Os resultados da Água Mineral frente a biofilmes de C. albicans, podem ser 

visualizados na Figura 7 – c, os grupos com água mineral sem ativação não 

apresentaram redução do biofilme, ao contrário apresentaram crescimento, no tempo 

de 1 minuto o crescimento foi de 10,5% e no tempo de 1 minuto e 30 segundos o 

crescimento foi de 12,8%. A água mineral ativada por plasma levou à redução de 

28,5% após 1 minuto de exposição. Após exposição por 1,5 minutos, houve redução 

de 35,4%. Ambos os grupos de água mineral ativada apresentaram diferenças 

significativas quando comparado ao Grupo Controle (p<0.0001). 

 



50 
 

   

Figura 7 – Resultados obtidos para avaliação de atividade antibiofilme de C. albicans, 

utilizando água destilada, solução fisiológica e água mineral ativada com plasma frio 

por 1 minuto ou 1 minuto e 30 segundos. 

C. 3,9% > 2,1% 36,7% 47,2%
0

2×10 6

4×10 6

6×10 6

8×10 6

1×10 7

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle (-)

U
F

C
/m

L

a

b

b

a a <0.0001

a) C. albicans / Água destilada

C 8,8% 5,4% 28,5% 35,4%
0

2×10 6

4×10 6

6×10 6

8×10 6

1×10 7
<0.0001

a a a

b b

U
F

C
/m

L

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle (-)

C. albicans / Solução Fisiológicab)

C. >10,5%>12,8% 17,4% 37,8%
0

5×10 6

1×10 7

1.5×10 7

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/m

L

<0.0001

a

a
a

a
b

c) C. albicans / Água Mineral

Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Solução fisiológica não ativada (1min)

Solução fisiológica não ativada (1m30s)

Solução fisiológica ativada(1min)

Solução fisiológica ativada (1m30s)

Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Água destilada não ativada (1min)

Água destilada não ativada (1m30s)

Água destilada ativada(1min)

Água destilada ativada (1m30s)

Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Água mineral não ativada (1min)

Água mineral não ativada (1m30s)

Água mineral ativada(1min)

Água mineral ativada (1m30s)

 
Legendas: Letras diferentes indicam diferença estatisticamente significante (One-way ANOVA/post hoc 
teste de Tukey). Fonte: elaborado pela autora. 
 



51 
 

   

5.3.2 Efeito da água ativada sobre biofilmes de Enterococcus faecalis  
 

 

Os resultados dos grupos com Água Destilada frente a biofilmes de E. faecalis 

estão demonstrados na Figura 8 – a. Os grupos com água destilada não ativada não 

levaram a reduções significativas nas contagens de células viáveis quando 

comparados ao grupo controle, observando-se redução de 3,1% após 1 minuto de 

exposição e de 12,8% após 1,5 minutos (p=0,5552). A água destilada ativada, levou 

à redução de 45,9% no número de células viáveis após 1 minuto de exposição. No 

tempo de exposição de 1 minuto e 30 segundos, apresentou redução de 60,8%%. 

Ambos os grupos de água Destilada ativada apresentaram diferenças significativas 

na redução do biofilme quando comparado ao grupo controle tratado com solução 

fisiológica (p<0.0001). 

Os resultados do grupo solução fisiológica frente a biofilmes de E. faecalis, 

estão apresentados na Figura 8 – b. Os grupos expostos à solução fisiológica não 

ativada não apresentaram diferenças significativas no número de células viáveis entre 

todos os grupos (p=0,2580). Nos grupos com Solução fisiológica ativada, a redução 

foi de 32,7% no tempo de 1 minuto e 53,7% de redução no tempo de exposição de 1 

minuto e 30 segundos. Houve diferença significativas entre os grupos tratados grupo 

controle negativo (p<0.0001). 

Os resultados dos grupos que analisaram Água Mineral frente a biofilmes de E. 

faecalis estão apresentados na Figura 8 – c. Os grupos com água mineral sem 

ativação não apresentaram redução na viabilidade do biofilme. A água mineral 

ativada, no tempo de tratamento de 1 minuto apresentou redução de 31,4% e no 

tempo de exposição de 1 minuto e 30 segundos, apresentou redução de 42,2%. 

Ambos os grupos de água mineral ativada apresentaram diferenças significativas 

quando comparado ao grupo controle (p<0.0001). 

 

 

 

 

 



52 
 

   

Figura 8 – Resultados obtidos para avaliação de atividade antibiofilme frente a E. 

faecalis, utilizando água destilada, solução fisiológica e água mineral ativada com 

plasma frio por 1 minuto e 1 minuto e 30 segundos. 

C. 3,1% 12,8% 45,9% 60,8%
0

1×10 8

2×10 8

3×10 8

4×10 8

E. Faecalis / Água destilada

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/m

L

a a a

b
b

<0.5552

a)

C. 24,9% 25,7% 32,7% 53,7%
0

1×10 8

2×10 8

3×10 8

4×10 8

E. faecalis / Solução fisiológica

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/m

L

a

b

b

a a
<0.2580

b)

C. >1,3% >3,0% 31,4% 42,2%
0

1×10 8

2×10 8

3×10 8

4×10 8

5×10 8

E. faecalis / Água mineral

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/m

L

<0.0001

a

a
a

b
b

c)

Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Água destilada não ativada (1min)

Água destilada não ativada (1m30s)

Água destilada ativada (1min)

Água destilada ativada (1m30s)

Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Solução fisiológica não ativada (1min)

Solução fisiológica não ativada (1m30s)

Solução fisiológica ativada (1min)

Solução fisiológica ativada (1m30s)

Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Água mineral não ativada (1min)

Água mineral não ativada (1m30s)

Água mineral ativada (1min)

Água mineral ativada (1m30s)

 

Legendas: Letras diferentes indicam diferença estatisticamente significante (One-way ANOVA/post hoc 
teste de Tukey). Fonte: elaborado pela autora. 
 



53 
 

   

5.3.3 Efeito da água ativada sobre biofilmes dual espécies de Enterococcus 

faecalis e Candida albicans 

 

 

Os resultados do efeito da Água Destilada frente a biofilmes dual espécies de 

24 horas compostos por Enterococcus faecalis (ATCC 2921) e C. albicans (ATCC 

18804) estão demonstrados nas Figuras 9. A Figura 9 – a apresenta os resultados de 

C. albicans, 9  – b apresenta os resultados de E. faecalis.  

As figuras 9 – a e 9 – b demonstram não apresentam diferenças estatísticas 

significativas nos valores de UFC/biofilme nos grupos de água destilada sem ativação 

(p=0,0085 e p=0,0037, respectivamente). Quanto aos resultados da Água Destilada 

ativada, observou-se que houve redução de 52,8% no número UFC/biofilme de C. 

albicans e 64,7% de redução de UFC/biofilme de E. faecalis, quando comparados ao 

Grupo Controle (p<0.0001).  

 

 

Figura 9 – Atividade inibitória da água destilada ativada por plasma sobre biofilmes 

dual espécies de E. faecalis e C. albicans em exposição de 1 minuto e 30 segundos. 

C. 8,7% 52,8%
0

1×10 6

2×10 6

3×10 6

C. albicans / Água Destilada

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/m

L

a a

b

a)

C. 23,7% 64,7%
0

1×10 8

2×10 8

3×10 8

4×10 8

5×10 8

E. faecalis / Água Destilada

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

a

a

b

U
F

C
/m

L

b)

Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Água destilada não ativada (1m30s)

Água destilada ativada (1m30s)

 
Legendas: Letras diferentes indicam diferença estatisticamente significante (One-way ANOVA/post hoc 
teste de Tukey). Fonte: elaborado pela autora. 
 

 

Os resultados dos grupos com Solução Fisiológica frente a biofilmes dual, os 

quais receberam tratamento de 1 minuto e 30 segundos, estão demonstrados na 



54 
 

   

Figura 10. As figuras 10 – a e 10 – b demonstram que não houve diferenças 

estatísticas significativas no número de células viáveis nos biofilmes (p=0,0143 e 

p=0,0035, respectivamente). Após exposição à solução fisiológica ativada, houve 

redução de 44,9% no número de UFC/biofilme de C. albicans e 40,6% de redução de 

UFC/mL de E. faecalis quando comparados ao Grupo Controle (p<0.0001). 

 

 

Figura 10 – Resultados obtidos para avaliação de atividade antimicrobiana frente a 

biofilme dual espécie de E. faecalis e C. albicans, utilizando Solução Fisiológica por 1 

minuto e 30 segundos com plasma frio. 

C. 6,1% 44,9%
0

1×10 6

2×10 6

3×10 6

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/B

io
fi

lm
e

a
a

b

C. albicans / Solução fisiológicaa)

C. 0,30% 40,6%
0

1×10 8

2×10 8

3×10 8

4×10 8

5×10 8

E. faecalis / Solução Fisiológica

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/B

io
fi

lm
e

a

a

b

b)

Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Solução fisiológica não ativada (1m30s)

Solução fisiológica ativada (1m30s)

 
Legendas: Letras diferentes indicam diferença estatisticamente significante (One-way ANOVA/post hoc 
teste de Tukey). Fonte: elaborado pela autora. 
 

 

Os resultados dos grupos com água mineral frente a biofilmes dual, os quais 

receberam tratamento de 1 minuto e 30 segundos, estão demonstrados na Figura 11. 

As figuras 11 – a e 11– b demonstram que os biofilmes não apresentam diferenças 

estatísticas significativas (p=0,0143 e p=0,0035, respectivamente) quanto a redução 

de quantidade de UFC/mL nos grupos de água mineral sem ativação, sendo a redução 

de 31,6% para C. albicans e 53,3% para E. faecalis. Quanto aos resultados da Água 

Mineral ativada, ambos levaram redução de 61,6% de UFC/mL de C. albicans e 76,2% 

de redução de UFC/mL de E. faecalis quando comparados ao grupo controle 

(p<0.0001). 

 



55 
 

   

Figura 11 – Resultados obtidos para avaliação de atividade inibitória frente a biofilmes 

dual espécies de E. faecalis e C. albicans após exposição à água mineral ativada por 

plasma por 1 minuto e 30 segundos com plasma frio. 

C. 31,6% 61,6%
0

1×10 6

2×10 6

3×10 6

C. albicans / Água mineral

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/B

io
fi

lm
e

a

b

<0.0001

a)

a

C. 53,3% 76,2%
0

1×10 8

2×10 8

3×10 8

4×10 8

5×10 8 <0.0009
 a

b

E. faecalis / Água mineralb)

U
F

C
/B

io
fi

lm
e

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

a Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Água Mineral não ativada (1m30s)

Água Mineral ativada (1m30s)

 

Legendas: Letras diferentes indicam diferença estatisticamente significante (One-way ANOVA/post hoc 
teste de Tukey). Fonte: elaborado pela autora. 
 

 

5.3.3.1 Avaliação da citotoxicidade da água ativada por plasma  
 

 

Observou-se viabilidade celular final de 0,36% após a exposição ao hipoclorito 

de sódio 1% por 1,5 minutos, o que é considerada altamente citotóxica para células 

3T3. Os demais grupos avaliados apresentaram viabilidade celular acima de 70%, 

sendo considerados não citotóxicos (Figura 12). 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



56 
 

   

Figura 12 – Resultados obtidos nos ensaios de citotoxicidade, avaliando os efeitos 

dos diferentes líquidos ativados sobre fibroblastos 3T3. 

Legenda: (hipoclorito de sódio-hipoclorito, água destilada - AD, água destilada ativada - ADA, solução 

fisiológica - SF, solução fisiológica ativada - SFA, água mineral – AM e água mineral ativada - AMA) e 

hipoclorito de sódio 1% (controle) frente a células 3T3. Fonte: elaborado pela autora. 

 

 

5.3.3.2 Efeito da irrigação dos canais radiculares com água ativada com plasma 

sobre biofilmes dual espécies de E. faecalis e C. albicans – Ensaio ex vivo 

 

 Os resultados da ação antibiofilme em modelos ex vivo, estão demonstrados 

na Figura 13, Reduções significativas de UFC/mL foram detectadas para ambas as 

espécies quando comparados ao grupo controle (p<0.0001).  

A água destilada ativada levou à redução de UFC/mL de 80,3% para C. albicans 

e 91% para E. faecalis. A redução dada pelo Grupo controle positivo, no qual foi 

utilizado hipoclorito de sódio 1,0%, apresentou redução de 96,8% para C. albicans e 

96,2% para E. faecalis. 

 

- AD 

Ensaio MTT – Células 3T3 

Viabilidade Celular (%) 

120 

100 

80 

0 

20 

40 

60 

Grupos: 
- Controle 
- SF 
- Hipoclorito 

- SFA 
- AM  
- AMA  

- ADA 



57 
 

   

 

Figura 13 – Resultados obtidos para avaliação de atividade antibiofilme frente a 

biofilme dual espécie de E. faecalis e C. albicans, utilizando água destilada ativada 

por plasma por 1 minuto e 30 segundos com plasma frio no ensaio ex vivo.  

 

C. 80,3% 96,8%
0

5×10 4

1×10 5

1.5×10 5

2×10 5

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/m

L

C. albicans / Água Destilada

a

b

b

a)

C. 91,0% 96,2%
0

5×10 4

1×10 5

1.5×10 5

2×10 5

Porcentagem de redução
em comparação ao Grupo Controle

U
F

C
/m

L

<0.0001

E. faecalis / Água destilada

a

bb

b)

Legendas dos Grupos

Controle / Salina

Água destilada ativada (1m30s)

Hipoclorito de Sódio (1m30s)

 

Legendas: Letras diferentes indicam diferença estatisticamente significante (One-way ANOVA/post hoc 
teste de Tukey). Fonte: elaborado pela autora. 



58 
 

   

6 DISCUSSÃO 

 

 

 A água ativada por plasma (PAW) tem emergido como uma promissora 

ferramenta na odontologia, oferecendo uma abordagem inovadora para a desinfecção 

de superfícies e materiais odontológicos (Milhan et al., 2022). Estudos têm explorado 

a eficácia da PAW na inativação de patógenos orais e na redução de biofilmes em 

diferentes ambientes clínicos, destacando seu potencial como agente antimicrobiano 

como demonstra os estudos de Chen et al. (2019) e Miranda et al. (2024). Além disso, 

a pesquisa de Lee et al. (2020) investigou a aplicação da água ativada por plasma na 

esterilização de instrumentos odontológicos, evidenciando sua capacidade de eliminar 

micro-organismos e reduzir o risco de infecções cruzadas em ambientes 

odontológicos.  

 A utilização da água ativada por plasma na odontologia não se limita apenas à 

desinfecção de superfícies e instrumentos, mas também se estende à terapia 

antimicrobiana, regeneração tecidual e endodontia. Estudos como o de Kim et al. 

(2021) exploraram o potencial da PAW como um agente terapêutico para o tratamento 

de doenças periodontais, demonstrando sua capacidade de reduzir a carga bacteriana 

e promover a cicatrização periodontal. Além disso, Song et al. (2018) investigaram os 

efeitos da água ativada por plasma verificando a biocompatibilidade, destacando sua 

segurança e potencial para aplicações clínicas em procedimentos restauradores e de 

regeneração óssea. Esses estudos evidenciam a crescente relevância da água 

ativada por plasma na odontologia e sua diversidade de aplicações clínicas, 

oferecendo novas perspectivas para a prática odontológica moderna. 

Cada irrigante endodôntico possui componentes específicos que contribuem 

para suas propriedades antimicrobianas e de limpeza do canal radicular. A escolha e 

combinação desses irrigantes durante o tratamento endodôntico visam maximizar a 

eliminação de microrganismos e detritos, promovendo um ambiente ideal para o 

sucesso do tratamento (Gomes, Aveiro, Kishen, 2023). O hipoclorito de sódio é um 

dos irrigantes endodônticos mais utilizados devido à sua potente ação antimicrobiana. 

Sua eficácia se deve à liberação de íons cloro e oxigênio, que são fortes agentes 

oxidantes, estes íons atacam e oxidam componentes celulares essenciais das 

bactérias, como proteínas e ácidos nucleicos, resultando na destruição das células 



59 
 

   

microbianas (Ruksakiet et al., 2020). Além disso, o NaOCl é capaz de dissolver 

matéria orgânica, incluindo tecido pulpar necrótico e biofilmes bacterianos, tornando-

se um excelente agente de limpeza e desinfecção dos canais radiculares. Entretanto, 

sua alta citotoxicidade e potencial para causar irritação aos tecidos periapicais são 

considerações importantes no seu uso clínico (Coaguila-Llerena et al., 2023). 

A clorexidina é um agente antimicrobiano de amplo espectro frequentemente 

utilizado em soluções de 0,2% a 2% na endodontia. A clorexidina atua interagindo 

com as membranas celulares das bactérias, levando à ruptura e aumento da 

permeabilidade celular, o que resulta na morte celular, também causa a precipitação 

de proteínas citoplasmáticas, inativando os microrganismos de forma eficaz (Pałka et

al., 2022; Neelakantan et al., 2019). Embora o EDTA não tenha propriedades 

antimicrobianas diretas, ele desempenha um papel crucial na preparação do canal 

radicular para a ação de outros irrigantes, pois é um agente quelante que remove íons 

cálcio da dentina, desmineralizando-a e expondo os túbulos dentinários, essa 

desmineralização facilita a penetração e a ação antimicrobiana de outros irrigantes, 

como o hipoclorito de sódio e a clorexidina (Haapasalo et al., 2014).  

O uso do peróxido de hidrogênio como irrigante endodôntico é vantajoso por 

sua capacidade de liberar radicais livres que exercem uma potente ação 

antimicrobiana como demonstra o estudo de Ibi e colaboradores (2017). Por outro 

lado, a solução fisiológica e a água destilada, apesar de não possuírem propriedades 

antimicrobianas intrínsecas, são essenciais no protocolo de irrigação, além disso, 

essas soluções são biocompatíveis e seguras, minimizando o risco de irritação ou 

danos aos tecidos periapicais (Wagner et al., 2017). 

O presente estudo demonstrou eficácia antimicrobiana dos líquidos ativados 

frente a C. albicans e E. faecalis. Chiappim et al. (2021) utilizaram água de torneira 

ativada por plasma em seu estudo e demonstraram que a água de torneira ativada 

por plasma apresentou excelentes resultados na inativação de Staphylococcus 

aureus e Escherichia coli, porém não apresentou atividade antimicrobiana significativa 

com a espécie C. albicans, divergindo dos resultados alcançados em nosso estudo, 

onde demonstramos atividade antifúngica para C. albicans. Esta diferença pode estar 

relacionada à utilização de diferentes líquidos neste estudo (água mineral, solução 

fisiológica e água mineral). As diferenças na composição química, origem e uso dos 

líquidos parecem influenciar os resultados para atividade antimicrobiana, mesmo que 



60 
 

   

todos sejam submetidos ao mesmo protocolo de ativação por plasma. De fato, os 

diversos líquidos possuem composições diferentes. A água mineral contém minerais 

e oligoelementos dissolvidos, como cálcio, magnésio, potássio e sódio, que variam 

conforme a fonte natural, nascentes ou poços profundos, o consumo deste líquido é 

devido ao seu conteúdo mineral e os benefícios que acarreta para saúde. A solução 

fisiológica é uma mistura de cloreto de sódio (NaCl) em água purificada, o que a torna 

isotônica em relação aos fluidos do corpo humano, sendo bastante utilizada em 

procedimentos médicos, como limpeza de feridas, hidrata