RESSALVA Atendendo solicitação do(a) autor(a), o texto completo desta tese será disponibilizado somente a partir de 01/08/2024. UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA E ZOOTECNIA CÂMPUS DE BOTUCATU ESTUDO PROTEÔMICO DO TECIDO HEPÁTICO E MUSCULAR DE FRANGOS DE CORTE SUPLEMENTADOS COM ÓLEO DA SEMENTE DE MARACUJÁ ANDREY SÁVIO DE ALMEIDA ASSUNÇÃO Tese apresentada ao Programa de Pós-graduação em Zootecnia como parte das exigências para obtenção do título de Doutor em Zootecnia BOTUCATU - SP Agosto – 2022 UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA E ZOOTECNIA CÂMPUS DE BOTUCATU ESTUDO PROTEÔMICO DO TECIDO HEPÁTICO E MUSCULAR DE FRANGOS DE CORTE SUPLEMENTADOS COM ÓLEO DA SEMENTE DE MARACUJÁ ANDREY SÁVIO DE ALMEIDA ASSUNÇÃO ZOOTECNISTA Orientador: Prof. Dr. Pedro de Magalhães Padilha Tese apresentada ao Programa de Pós-graduação em Zootecnia como parte das exigências para obtenção do título de Doutor em Zootecnia BOTUCATU - SP Agosto – 2022 FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA SEÇÃO TÉC. AQUIS. TRATAMENTO DA INFORM. DIVISÃO TÉCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAÇÃO - CÂMPUS DE BOTUCATU - UNESP BIBLIOTECÁRIA RESPONSÁVEL: ROSEMEIRE APARECIDA VICENTE-CRB 8/5651 Assunção, Andrey Sávio de Almeida. Estudo proteômico do tecido hepático e muscular de frangos de corte suplementados com óleo da semente de maracujá / Andrey Sávio de Almeida Assunção. - Botucatu, 2022 Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Orientador: Pedro de Magalhães Padilha Capes: 50403001 1. Frango de corte - Efeito do stress. 2. Estresse oxidativo. 3. Proteínas de choque térmico. 4. Sementes oleaginosas. 5. Maracujá. 6. Transtornos de estresse por calor. Palavras-chave: 2D-PAGE; Estresse cíclico por calor; Estresse oxidativo; Gel free; Proteínas de choque térmico. iii BIOGRAFIA DO AUTOR Andrey Sávio de Almeida Assunção, filho de Silnea Gonçalina de Almeida Assunção e Manoel Santana Araújo de Assunção, nasceu em 28 de novembro de 1992 na cidade de Várzea Grande - MT. Em fevereiro de 2012 ingressou no curso de Zootecnia da Universidade Federal de Mato Grosso – Campus Cuiabá e graduou-se em setembro de 2016. Durante a graduação foi bolsista do programa de bolsas de extensão (2014) e bolsista de iniciação tecnológica – PIBITI (2015). Em março de 2017 iniciou o curso de Mestrado pelo Programa de Pós-graduação em Zootecnia da Universidade Federal da Grande Dourados, sendo bolsista pela Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), concluindo o curso em fevereiro de 2019. Em março do mesmo ano iniciou o curso de Doutorado pelo Programa de Pós-graduação em Zootecnia da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” – Câmpus de Botucatu, onde foi bolsista pelo Conselho Nacional de Desenvolvimento e Tecnológico (CNPq). Em junho de 2021, ingressou na empresa BRF como Técnico de Produção II, atuando na Granja de Avós de Frango, unidade de Brotas/SP. iv DEDICATÓRIA À minha mãe, Silnéia Gonçalina de Almeida, que sempre esteve ao meu lado me apoiando ao longo de toda a minha trajetória, me incentivando, servindo de exemplo, se dedicando, esforçando e cuidando de mim, do meu sobrinho e das minhas irmãs. Meu eterno agradecimento, carinho e amor. Te amo! AGRADECIMENTO ESPECIAL À minha companheira, amiga e eterna namorada, Renata Aparecida Martins. Por acreditar no meu potencial, me incentivar, me guiar e ajudar em todos os momentos, pelo exemplo de mulher que és, pelo amor, atenção, carinho e por todos os momentos alegres que passamos juntos. Amo você! v AGRADECIMENTOS À Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” - UNESP, especialmente a FMVZ (Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia), pela oportunidade de realização deste curso. Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento científico e Tecnológico (CNPq), pela concessão da bolsa de estudos. Deixo um agradecimento especial ao meu orientador, prof. Dr. Pedro de Magalhães Padilha, pela orientação, atenção, amizade, oportunidades, ensinamentos e por sempre contribuir para o meu crescimento profissional. Ao prof. Dr. José Roberto Sartori pela orientação, oportunidades, confiança, atenção, pelos diálogos, ensinamentos e conhecimentos adquiridos. Ao Pós-doutorando José Cavalcante Souza Vieira pela ajuda no decorrer das análises, colaboração, pelos momentos divertidos, histórias engraçadas e amizade ao longo deste curso. Aos demais professores do Programa de Pós-graduação em Zootecnia da Faculdade de Medicina e Veterinária e Zootecnia (FMVZ) que de alguma forma contribuíram para a conclusão deste curso. À minha mãe, pelo amor, carinho, cuidados, força, dedicação e ajuda em todos os momentos. Tudo que sou é graças à senhora. Meu eterno carinho, amor e agradecimento. Te amo! À minha companheira, amiga e eterna namorada, Renata Aparecida Martins. Pelo amor, atenção, carinho e companheirismo em todos os momentos difíceis e alegres que passamos juntos. Amo você! Às minhas irmãs, Andressa e Andrielly, da nossa união de sempre principalmente nos momentos difíceis, das brincadeiras e recordações alegres. Amo vocês! Ao meu amigo e padrasto Simão, exemplo de pessoa. Sempre disposto a ajudar. Obrigado pelo carinho, momentos divertidos e por cuidar das meninas “superpoderosas” (Andressa, Andrielly e Silnéia). Aos sobrinhos João Pedro (meu eterno “João bolão”) e Erik Martins, pelos momentos divertidos. Espero que este trabalho seja um exemplo de motivação para que no futuro sejam grandes profissionais. Amo vocês! Sou grato à minha família pelo apoio que sempre me deram durante toda a minha vida, especialmente, a minha vó (Juraci Curado) e madrinha Pedrosa, pela confiança e vi demonstração de fé inabalável, as minhas tias Sebastiana, Benedita e Marinei, aos tios Manoel, Jacó, Nei e Pedro (in memoriam), primos e primas pela presença constante. Aos integrantes do Laboratório de Bioanalítica e Metaloproteômica (LBM): José Cavalcante Souza Vieira, Grasieli de Oliveira, Renata Aparecida Martins, Leone Rocha, Wellington Luiz de Paula Araújo, Otávio Augusto de Freitas Apostólico e Maria Gabriela de Albuquerque Santiago, pelos momentos divertidos, aprendizagem constantes e ajuda durante a realização dos experimentos. Aos integrantes do Laboratório de Nutrição de Aves - LabAves, Cássio Yutto Oura, Jéssica Moraes Cruvinel, Julianna dos Santos Batistioli, Érica Santos Mello, Fernanda Kaiser de Lima, Priscila Michelin Groff-Urayama e Tatiane Souza dos Santos, pelas reuniões de estudo, dedicação e ajuda durante a realização dos experimentos. À Granja Avós Califórnia (BRF S.A.), pela oportunidade de experiência profissional durante a realização do doutorado, por todo conhecimento adquirido, pelos desafios propostos a cada dia, especialmente ao Marcelo Antônio, Valdinei Zandonay, Julianna Batistioli, Adriana Camargo, Dirceu Romualdo, Edir Andrade, Jurandir Paixão, Claudio Roberto, Luis Henrique e Natasha Risatto. O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001. A todos vocês, muito obrigado! vii “Não importa quanto a vida possa ser ruim, sempre existe algo que você pode fazer, e triunfar. Enquanto há vida, há esperança.” Stephen Hawking https://www.pensador.com/autor/stephen_hawking/ viii RESUMO GERAL Entre as alternativas estudadas para substituir o uso de antibióticos na avicultura industrial, destacam-se os produtos compostos por óleos essenciais e/ou extratos vegetais, denominados de aditivos fitogênicos. Esses produtos possuem potencial pois são naturais e livre de resíduos em comparação aos antibióticos. Dentre os aditivos naturais com potencial de serem utilizados na prática industrial, encontra-se o óleo da semente de maracujá (OSM). No entanto, não há relatos na literatura científica sobre a utilização de abordagens proteômicas para elucidar o efeito do OSM sobre o proteoma hepático e muscular de frangos de corte expostos ao estresse cíclico por calor. A proteômica permite avaliar as mudanças na expressão de proteínas de tecidos e fluídos, auxiliando dessa forma, na compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos na saúde, bem-estar, estresse e estados patológicos dos animais. Neste sentido, a tese foi dividida em dois capítulos principais correspondendo aos artigos científicos. Artigo 1 - O objetivo com o presente estudo foi investigar o efeito da suplementação do OSM sobre o perfil diferencial de proteínas expressas no tecido hepático de frangos de corte submetidos ao estresse cíclico por calor. Para isso, 225 pintainhos machos de 1 dia de idade foram alojados em gaiolas dispostas em câmara climática onde foram mantidos sob estresse cíclico por calor durante oito horas por dia. Foram formuladas cinco dietas experimentais a base de milho e farelo de soja, sendo uma dieta controle (sem adição de OSM) e quatro dietas nas quais foi realizada a inclusão de diferentes níveis de OSM (0,30; 0,50; 0,70 e 0,90%). Aos 36 dias de idade, nove aves de cada tratamento foram abatidas para coleta das amostras de fígado. A partir de pools das amostras de fígado, foi realizado o fracionamento do proteoma hepático por eletroforese bidimensional (2D-PAGE) e caracterização das proteínas por espectrometria de massas em sequência acoplada com cromatografia líquida (LC-MS/MS). A suplementação de 0,90% de OSM aumentou a expressão de sete proteínas de choque térmico, enquanto foi observado menor expressão de seis proteínas antioxidantes. Proteínas envolvidas no metabolismo lipídico e de carboidratos também apresentaram alterações na expressão. Estes resultados sugerem que a suplementação de OSM influencia a ativação de mecanismos de reparação dos danos provocados pela exposição cíclica ao calor por meio do aumento da expressão das chaperonas moleculares no tecido hepático. Artigo 2 - O objetivo com este estudo foi caracterizar as proteínas diferencialmente expressas no músculo Pectoralis major de frangos de corte suplementados com OSM em condições de estresse cíclico por calor. Para isso, 90 ix pintainhos machos de um dia de idade foram alojados em gaiolas dispostas em câmara climática onde foram mantidos sob estresse cíclico por calor durante oito horas por dia. As aves foram distribuídas em dois grupos experimentais, sendo um grupo suplementado com 0,90% de OSM e um grupo controle (CON) sem a suplementação de OSM. Aos 36 dias de idade, 18 aves foram abatidas para coleta das amostras de músculo. A partir de pools das amostras de filé de peito de cada grupo, foi realizado a clivagem proteolítica dos extratos proteicos e posteriormente a análise dos peptídeos por LC-MS/MS. A suplementação de 0,90% de OSM revelou a modulação de 57 proteínas no músculo Pectoralis major de frangos de corte expostos ao estresse cíclico por calor. Dentre elas, quatro proteínas foram reguladas positivamente e 46 proteínas foram reguladas negativamente. Além disso, sete proteínas foram expressas unicamente no grupo CON. Estes resultados sugerem que a suplementação de OSM demonstrou mecanismo adaptativo para aumentar a tolerância ao calor, reduzindo o estresse oxidativo. Além disso, promoveu ativação de mecanismos de neuroproteção, proteção celular contra ocorrência de apoptose celular, diminuição das respostas inflamatórias e regulação do metabolismo energético. Palavras-chave: 2D-PAGE, Gel free, estresse cíclico por calor, estresse oxidativo, proteínas de choque térmico x ABSTRACT Among the alternatives studied to replace the use of antibiotics in industrial poultry, products composed of essential oils and/or plant extracts, called phytogenic additives, stand out. These products have potential because they are natural and residue-free compared to antibiotics. Among the natural additives with the potential to be used in industrial practice, there is passion fruit seed oil (OSM). However, there are no reports in the scientific literature on the use of proteomic approaches to elucidate the effect of OSM on the liver and muscle proteome of broilers exposed to cyclic heat stress. Proteomics allows the evaluation of changes in the expression of proteins in tissues and fluids, thus helping to understand the molecular mechanisms involved in the health, welfare, stress, and pathological states of animals. Thus, the thesis was divided into two main chapters corresponding to the papers. Paper 1 - The aim of the present study was to investigate the effect of OSM supplementation on the differential profile of proteins expressed in the liver tissue of broilers subjected to cyclic heat stress. For this, 225 1-day-old male chicks were housed in cages in a climatic chamber where they were kept under cyclic heat stress for eight hours a day. Five experimental diets based on corn and soybean meal were formulated, being a control diet (without addition of OSM) and 4 diets in which different levels of OSM were included (0.30; 0.50; 0.70 and 0.90%). At 36 days of age, nine birds from each treatment were slaughtered to collect liver samples. From pools of liver samples from each treatment, fractionation of the liver proteome was performed by two- dimensional electrophoresis (2D-PAGE) and characterization of proteins by sequence mass spectrometry coupled with liquid chromatography (LC-MS/MS). Supplementation of 0.90% OSM increased the expression of seven heat shock proteins, while lower expression of six antioxidant proteins was observed. Proteins involved in lipid and carbohydrate metabolism also showed changes in expression. These results suggest that OSM supplementation influences the activation of damage repair mechanisms caused by cyclic exposure to heat by increasing the expression of molecular chaperones in liver tissue. Paper 2 - The aim of this study is to characterize the proteins differentially expressed in the Pectoralis major muscle of broilers, supplemented with OSM under cyclic heat stress conditions. For this, 90 one-day-old male chicks were housed in cages in a climatic chamber, where they were kept under cyclic heat stress for eight hours a day. The birds were divided into two experimental groups, one group supplemented with 0.90% OSM and a control group (CON) without OSM supplementation. At 36 days of xi age, 18 birds were slaughtered to collect muscle samples. From pools of breast fillet samples (Pectoralis major muscle) of each group, the proteolytic cleavage of the protein extracts was performed and later the analysis of the peptides by LC-MS/MS. Supplementation of 0.90% OSM revealed the modulation of 57 proteins in the Pectoralis major muscle of broilers exposed to cyclic heat stress. Among them, four proteins were upregulated and 46 proteins were down-regulated. In addition, seven proteins were expressed only in the CON group. These results suggest that OSM supplementation demonstrated an adaptive mechanism to increase heat tolerance, reducing oxidative stress. In addition, it promoted activation neuroprotection mechanisms, cellular protection against the occurrence of cellular apoptosis decreased inflammatory responses and regulation of energy metabolism. Keywords: 2D-PAGE, Gel free, cyclic heat stress, oxidative stress, heat shock proteins xii LISTA DE ABREVIATURAS 2D-PAGE – Eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida BSA – Albumina de soro bovino Ca – Cálcio CEUA - Comitê de Ética no Uso de Animais CON – Controle CONCEA - Conselho Nacional de Controle da Experimentação Animal Da - Dalton DOWN - Downregulated DTT – Ditiotreitol EROS – Espécies reativas de oxigênio FDR – Taxa de descoberta falsa (False discovery rate) GO – Gene Ontology HSP – Proteínas de choque térmico (Heat shock protein) IEF – Focalização isoelétrica (Isoelectric focusing) KDa - Quilodalton KEGG - Enciclopédia de Genes e Genomas de Kyoto (Kyoto encyclopedia of genes and genomes) LC-MS/MS - Espectrometria de massas em sequência acoplada com cromatografia líquida (Liquid chromatography tandem mass spectrometry) MW - Molecular weight OSM – Óleo da semente de maracujá pH - Potencial Hidrogeniônico pI – Ponto isoelétrico PLGS - Protein Lynx Global Server SDS - Sodium Dodecyl Sulfate UP – Upregulated xiii LISTA DE ILUSTRAÇÕES CAPÍTULO 1 Figura 1. Principais tipos de maracujá: (A) Passiflora edulis sims e (B) Passiflora edulis f. flavicarpa. Fonte: Khuwijitjaru e Klinchongkon (2020) ............................................. 20 Figura 2. Principais abordagens proteômicas: baseado em gel e sem gel. Adaptado de Almeida et al. (2015) ...................................................................................................... 24 Figura 3. Eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida (2D-PAGE) do músculo Pectoralis major de frango. Fonte: Cai et al. (2018) ...................................................... 25 Figura 4. Fluxograma representando abordagem proteômica na investigação de biomarcadores de proteínas de estresse. Adaptado de Mouzo et al. (2020) ................... 27 CAPÍTULO 2 Figura 1. Gel de poliacrilamida 12,5% (m/v) obtido por 2D-PAGE (faixa de pH 3-10) do tecido hepático de frangos de corte suplementados com OSM sob estresse cíclico por calor. C: controle, OSM: óleo da semente de maracujá ................................................. 54 Figura 2. Classificação das proteínas caracterizadas no proteoma hepático de frangos de corte utilizando o software Blast2GO ............................................................................ 61 Figura 3. Rede de interação proteína-proteína das proteínas diferencialmente expressas do fígado de frangos de corte suplementados com OSM sob estresse cíclico por calor 62 CAPÍTULO 3 Figura 1. Classificação das proteínas diferencialmente expressas no tecido muscular de frangos de corte suplementados com OSM submetidos ao estresse cíclico por calor .... 89 Figura 2. Rede de interação proteína-proteína das proteínas upregulated e downregulated no tecido muscular de frangos de corte suplementados com OSM .... 90 file:///C:/Users/renat/OneDrive/Documentos/ANDREY/RESULTADOS%20SHOTGUNS%20IBTEC%20MUSCULO%20ANDREY/MÚSCULO/TESE%20FINAL%20-%20ANDREY.docx%23_Toc106744307 file:///C:/Users/renat/OneDrive/Documentos/ANDREY/RESULTADOS%20SHOTGUNS%20IBTEC%20MUSCULO%20ANDREY/MÚSCULO/TESE%20FINAL%20-%20ANDREY.docx%23_Toc106744307 xiv LISTA DE TABELAS CAPÍTULO 1 Tabela 1. Efeitos do estresse térmico por calor no proteoma de aves utilizando diferentes métodos proteômicos ...................................................................................................... 32 CAPÍTULO 2 Tabela 1. Temperaturas médias registradas na câmara climática sob estresse cíclico por calor durante o período experimental ............................................................................. 47 Tabela 2. Composição percentual e nutricional calculada das dietas experimentais pré- inicial (1 a 7 dias de idade), inicial (8 a 21 dias de idade), crescimento (22 a 33 dias de idade) e final (34 a 42 dias de idade) .............................................................................. 49 Tabela 3. Proteínas identificadas no fígado de frangos de corte suplementados com OSM sob estresse cíclico por calor por espectrometria de massas em sequência acoplada com cromatografia líquida (LC-MS/MS) ................................................................................ 55 Tabela 4. Proteínas diferencialmente expressas (teste t, P<0,05) no fígado de frangos de corte suplementados com OSM (0,3; 0,5; 0,7 e 0,9%) sob estresse cíclico por calor em relação ao controle .......................................................................................................... 60 Tabela 5. Vias metabólicas significativamente enriquecidas utilizando Reactome ...... 62 CAPÍTULO 3 Tabela 1. Temperaturas médias registradas na câmara climática sob estresse cíclico por calor durante o período experimental ............................................................................. 80 Tabela 2. Composição percentual e nutricional calculada das dietas experimentais pré- inicial (1 a 7 dias de idade), inicial (8 a 21 dias de idade), crescimento (22 a 33 dias de idade) e final (34 a 42 dias de idade) .............................................................................. 81 Tabela 3. Proteínas upregulated (Up) ou downregulated (Down) no grupo suplementado com 0,9% de OSM em comparação com o grupo controle sem suplementação de OSM em condições de estresse cíclico por calor ..................................................................... 85 Tabela 4. Proteínas expressas unicamente no grupo controle (CON) ........................... 86 Tabela 5. Vias KEGG significativamente enriquecidas (FDR<0,05) utilizando o software Cytoscape com o plugin String ....................................................................................... 87 xv SUMÁRIO CAPÍTULO 1 ................................................................................................................ 17 CONSIDERAÇÕES INICIAIS ................................................................................... 18 1. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA ............................................................................. 19 1.1. Atividades biológicas e composição do maracujá amarelo ............................. 19 1.2. Uso de subprodutos do maracujá na alimentação de frangos de corte ............ 20 1.3. Óleo da semente de maracujá – OSM .............................................................. 21 1.4. Proteômica ....................................................................................................... 22 1.5. Diferentes abordagens proteômicas: 2D-PAGE e Shotgun .............................. 24 1.6. Proteômica na produção animal ....................................................................... 26 1.7. Abordagem proteômica do estresse térmico em frangos de corte ................... 27 2. JUSTIFICATIVA .................................................................................................. 33 3. OBJETIVO ............................................................................................................ 33 REFERÊNCIAS............................................................................................................ 34 CAPÍTULO 2 ................................................................................................................ 43 Óleo da semente de maracujá na dieta de frangos de corte altera o proteoma hepático em condições de estresse cíclico por calor .................................................................... 44 RESUMO ....................................................................................................................... 44 1. Introdução .............................................................................................................. 45 2. Material e Métodos................................................................................................ 46 2.1. Animais, tratamentos, delineamento experimental e coleta das amostras ....... 46 2.2. Preparação da amostra: extração, precipitação e quantificação das proteínas . 47 2.3. Eletroforese em gel bidimensional (2D-PAGE) .............................................. 48 2.4. Análise de imagem ........................................................................................... 51 2.5. Caracterização das proteínas por espectrometria de massas em sequência acoplada com cromatografia líquida (LC-MS/MS) ..................................................... 51 2.6. Análise estatística............................................................................................. 51 2.7. Vias metabólicas e interação proteína-proteína ............................................... 52 3. Resultados .............................................................................................................. 52 4. Discussão ................................................................................................................ 63 4.1. Chaperonas moleculares .................................................................................. 63 4.2. Proteínas antioxidantes .................................................................................... 64 4.3. Metabolismo de lipídeos .................................................................................. 65 xvi 4.4. Metabolismo de carboidratos ........................................................................... 66 5. Conclusão ............................................................................................................... 67 6. Referências ............................................................................................................. 68 CAPÍTULO 3 ................................................................................................................ 76 Proteômica shotgun revela alterações no músculo Pectoralis major de frangos de corte suplementados com óleo da semente de maracujá sob condições de estresse cíclico por calor ................................................................................................................................ 77 RESUMO ....................................................................................................................... 77 1. Introdução .............................................................................................................. 78 2. Material e métodos ................................................................................................ 79 2.1. Animais e grupos experimentais ...................................................................... 79 2.2. Coleta das amostras.......................................................................................... 80 2.3. Extração e quantificação das proteínas ............................................................ 80 2.4. Digestão das proteínas em solução .................................................................. 83 2.5. Identificação e análise de expressão das proteínas .......................................... 83 2.6. Análise de bioinformática ................................................................................ 84 3. Resultados .............................................................................................................. 84 4. Discussão ................................................................................................................ 90 4.1. Resposta ao estresse oxidativo ......................................................................... 90 4.2. Neurofilamento ................................................................................................ 91 4.3. Apoptose .......................................................................................................... 91 4.4. Via de ativação do fator de transcrição NF-κB ................................................ 93 4.5. Metabolismo energético ................................................................................... 93 5. Conclusão ............................................................................................................... 94 6. Referências ............................................................................................................. 94 CAPÍTULO 4 .............................................................................................................. 102 IMPLICAÇÕES.......................................................................................................... 103 34 REFERÊNCIAS ABDELNOUR, S. A. et al. Stress biomarkers and proteomics alteration to thermal stress in ruminants: A review. Journal of Thermal Biology, v. 79, n. September 2018, p. 120– 134, 2019. ACAMOVIC, T.; BROOKER, J. D. Biochemistry of plant secondary metabolites and their effects in animals. The Proceedings of the Nutrition Society, v. 64, n. 3, p. 403– 12, 2005. ALMEIDA, A. M. et al. Animal board invited review: Advances in proteomics for animal and food sciences. Animal, v. 9, p. 1–17, 2015. ALTENDORF, S. Minor tropical fruits - Mainstreaming a niche market. In: FAO (Ed.). . 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Foram formuladas cinco dietas experimentais a base de milho e farelo de soja, sendo uma dieta controle (sem adição de OSM) e quatro dietas nas quais foram realizadas a inclusão de diferentes níveis de OSM (0,30; 0,50; 0,70 e 0,90%). Aos 36 dias de idade, nove aves de cada tratamento foram abatidas para coleta das amostras de fígado. A partir de pools das amostras de fígado de cada tratamento, foi realizado o fracionamento do proteoma hepático por eletroforese bidimensional (2D-PAGE) e caracterização das proteínas por espectrometria de massas em sequência acoplada com cromatografia líquida (LC-MS/MS). A suplementação de 0,90% de OSM aumentou a expressão de sete proteínas de choque térmico, enquanto foi observado menor expressão de seis proteínas antioxidantes. Proteínas envolvidas no metabolismo lipídico e de carboidratos também apresentaram alterações na expressão. Estes resultados sugerem que a suplementação de OSM influencia positivamente a ativação de mecanismos de reparação dos danos provocados pela exposição cíclica ao calor por meio do aumento da expressão das chaperonas moleculares no tecido hepático. Palavras-chave: 2D-PAGE, estresse por calor, proteínas de choque térmico 68 prejudiciais do estresse térmico. A regulação das proteínas envolvidas no metabolismo de lipídeos e carboidratos foram melhoradas por meio da via biossintética de isoprenóides e diminuição da gliconeogênese e glicólise, respectivamente. 6. Referências Abdelnour, S. A., Abd El-Hack, M. E., Khafaga, A. F., Arif, M., Taha, A. E., & Noreldin, A. E. (2019). Stress biomarkers and proteomics alteration to thermal stress in ruminants: A review. Journal of Thermal Biology, 79(September 2018), 120– 134. https://doi.org/10.1016/j.jtherbio.2018.12.013 Ayala-Zavala, J. F., Vega-Vega, V., Rosas-Domínguez, C., Palafox-Carlos, H., Villa- Rodriguez, J. A., Siddiqui, M. 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As aves foram distribuídas em dois grupos experimentais, sendo um grupo suplementado com 0,9% de OSM e um grupo controle (CON) sem a suplementação de OSM. Aos 36 dias de idade, 18 aves foram abatidas para coleta das amostras de músculo. A partir de pools das amostras de filé de peito (músculo Pectoralis major) de cada grupo, foi realizado a clivagem proteolítica dos extratos proteicos e posteriormente os peptídeos foram analisados por espectrometria de massas em sequência acoplada com cromatografia líquida (LC-MS/MS). A suplementação de 0,9% de OSM revelou a modulação de 57 proteínas no músculo Pectoralis major de frangos de corte expostos ao estresse cíclico por calor. Dentre elas, quatro proteínas foram reguladas positivamente e 46 proteínas foram reguladas negativamente. Além disso, sete proteínas foram expressas unicamente no grupo CON. Estes resultados sugerem que a suplementação de OSM demonstrou mecanismo adaptativo para aumentar a tolerância ao calor, reduzindo o estresse oxidativo. Além disso, ativando mecanismos de neuroproteção, proteção celular contra ocorrência de apoptose celular, diminuição das respostas inflamatórias e regulação do metabolismo energético. Palavras-chave: estresse oxidativo, gel free, LC-MS/MS 96 breast (Pectoralis major) meat. Poultry Science, 95(11), 2696–2706. https://doi.org/10.3382/ps/pew213 Desouza, M., Gunning, P. W., & Stehn, J. R. (2012). The actin cytoskeleton as a sensor and mediator of apoptosis Melissa. BioArchitecture, 2(3), 75–87. https://doi.org/10.4161/bioa.20975 Duttaroy, A., Bourbeau, D., Wang, X. L., & Wang, E. (1998). Apoptosis rate can be accelerated or decelerated by overexpression or reduction of the level of elongation factor-1α. Experimental Cell Research, 238(1), 168–176. https://doi.org/10.1006/excr.1997.3819 Field, C. M., & Lénárt, P. (2011). 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