UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA 
“JÚLIO DE MESQUITA FILHO” 

 Instituto de Biociências 

Câmpus do Litoral Paulista 

 

 

 

 

 

 

Ecotoxicidade em água de amostras de óleo recuperadas de áreas 

afetadas no Litoral do Nordeste brasileiro 

 

 

 

 

 

 

 

 

Debora Cristina Nascimento de Santana 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

São Vicente 

2023



UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA 
“JÚLIO DE MESQUITA FILHO” 

Instituto de Biociências 

Câmpus do Litoral Paulista 

 

 

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA 

“Júlio de Mesquita Filho” 

INSTITUTO DE BIOCIÊNCIAS 

CÂMPUS DO LITORAL PAULISTA 

 

 

Ecotoxicidade em água de amostras de óleo recuperadas de áreas 

afetadas no Litoral do Nordeste brasileiro. 

 

 

 

DEBORA CRISTINA NASCIMENTO DE SANTANA 

ORIENTADOR: DENIS MOLEDO DE SOUZA ABESSA 

 

 

Dissertação apresentada ao Instituto de 

Biociências, Câmpus do Litoral Paulista, UNESP, 

para obtenção do título de Mestre no Programa 

de Pós-Graduação em Biodiversidade de 

Ambientes Costeiros. 

 

 

 

 

São Vicente  

2023 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Sistema de geração automática de fichas catalográficas da Unesp. Biblioteca do Instituto de 

Biociências, São Vicente. Dados fornecidos pelo autor(a). 

 
Essa ficha não pode ser modificada. 

 

 

 

 

 

   

S232e 
Santana, Debora Cristina Nascimento de 

Ecotoxicidade em água de amostras de óleo recuperadas de áreas 

afetadas no Litoral do Nordeste brasileiro / Debora Cristina 

Nascimento de Santana. -- São Vicente, 2023 

45 p. : tabs., fotos, mapas 
 

Dissertação (mestrado profissional) - Universidade Estadual 

Paulista (Unesp), Instituto de Biociências, São Vicente 

Orientador: Denis Moledo de Souza Abessa 

1. Ecologia marinha. 2. Água Conservação. 3. Água 
Poluição. 4. 

Ciências do mar. 5. Compostos policiclicos. I. Título. 



 

 

 

Agradecimentos 

Agradeço primeiramente a Deus, aquele que me direciona minha vida e me deu caminhos por 

onde eu nunca poderia ter imaginado estar, me fortaleceu em toda essa jornada me dando a 

oportunidade de aprender em diferentes caminhos 

Não poderia deixar de expressar o quão grata sou pela minha família, a meus pais,  por todo o 

suporte que me permitiram chegar aonde estou, pela paciência com os humores na íntegra, a 

falta de disponibilidade de tempo e todo o aconselhamento e sem os quais eu não poderia ter 

tido todas as conquistas ao longo dessa caminhada e que me permitiu construir o meu eu até 

aqui.  Assim como outros familiares que expressaram seu apoio de alguma maneira, meu irmão 

e primos principalmente. 

À toda a comunidade acadêmica em que estive envolvida, ao meu orientador que se dispôs a 

dar oportunidade de aprender mais sobre essa linda função que é estudo da ecotoxicologia 

disponibilizando de tempo muitas vezes inoportunos para me auxiliar. As pessoas na secretaria 

(principalmente Fabiana) que lidou com a minha desatenção com os prazos. As técnicas que 

sempre auxiliaram e se dispuseram a ajudar bem como o restante dos servidores, que de alguma 

maneira acrescentam em nossa rotina. Obviamente não serão nessas poucas linhas descritas que 

serão citadas todas as pessoas e profissionais que foram fundamentais para essa conquista, e 

que estiveram diretamente envolvidos no crescimento pessoal e profissional desde o começo 

deste curso. 

Aos que se dispuseram a me auxiliar, seja em testes ou correções, em especial, Carol, Lucas e 

Fernando e aos que prestaram apoio em múltiplas formas, Guacira e Caio, mas também todo o 

corpo do grupo de pesquisa do Nepea que em algum momento me auxiliou durante essa jornada 

como a Juliana Nicolau. Também devo mencionar o pessoal do Unisanta, em especial a Paloma 

que confiou em mim para me recomendar a ajudar a Juliana Pereira que se tornou uma grande 

parceira de (des)aventuras com experimentos várias vezes.  

E as dificuldades que nos confrontam e nos impulsionam a mudanças que geram o nosso 

desenvolvimento. 

  



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

"Tudo que o homem semear, isso também colherá" 

                                 gl 6:7 



 

 

 

Lista de Figuras 

Figura 1. Localidades verificadas quanto ao registro de novas manchas no litoral do estado da 

Bahia, considerando as áreas oleadas até a data de 12/03/2020. Dados da última vistoria. Os 

pontos em vermelho indicam as regiões onde foram coletadas as amostras usadas para os testes 

realizados nesta pesquisa. O ponto superior ao norte indica a praia do Massarandupió, enquanto 

o ponto inferior no sul, indica a praia do trancoso. (extraído de IBAMA, 2019). 

Figura 2. Amostras de óleo coletadas nas praias nordestinas onde ocorreram o derramamento 

em 2019. Notar diferenças visíveis entre a viscosidade e estado de intemperismo das amostras. 

Figura 3. Náuplio de Artemia sp. na fase de uso para o teste de toxicidade, metanáuplio II. 

Figura 4. Desenvolvimento embrionário do ouriço Echinometra lucunter nas diferentes 

diluições de FSA. Asterisco (*) significa diferença significativa com o controle (p<0.05). 

Figura 5. Taxa de sobreviventes de Artemia salina nas diferentes diluições de FSA realizadas 

com a amostra 1 em 24 e 48 horas. Asterisco (*) indica diferença significativa com o controle 

dentro do mesmo tempo de exposição (p <0.05). 

  



 

 

 

Lista de Tabelas 

Tabela 1. Amostras utilizadas para realização das frações solúveis para os organismos testes 

avaliados e seus respectivos tratamentos. 

Tabela 2. Concentrações de hidrocarbonetos alifáticos (HA) quantificado para todas as frações 

solúveis em água (FSA) das três amostras de petróleo analisadas. (<DL = concentrações abaixo 

do limite de detecção). 

Tabela 3. Concentrações de hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HPA) quantificado nas 

frações solúveis em água (FSA) das três amostras de petróleo analisadas em μg L-1 (<DL = 

concentrações abaixo do limite de detecção). 

Tabela 4. Dados estatísticos de concentrações inibitória para 50% dos organismos (C.I.50) e 

concentração de efeito observável e não observável (CEO e CENO) para o desenvolvimento 

embrionário de Echinometra lucunter nas diferentes diluições de FSA realizadas com as 

amostras 1, 2 e 3. (nd = não determinável) 

Tabela 5. Concentrações letais em 10% dos organismos e concentrações de efeito observável e 

não observável nos diferentes períodos de exposição, obtidas no teste de toxicidade com 

náuplios de Artemia sp exposta a fração solúvel de óleo encontrado na Bahia. 

Tabela 6. Estudos sobre toxicidade de frações solúveis de petróleo ou seus derivados, utilizando 

organismos marinhos. 

  



 

 

 

Resumo  

No segundo semestre de 2019 surgiram manchas de óleo que atingiram toda a extensão do 

nordeste brasileiro. Isso apresenta alto risco à saúde dos organismos marinhos em diversos 

âmbitos como o contato com as frações de óleo que se dissolvem na água.  A fim de avaliar os 

riscos deste composto foram realizadas análises ecotoxicológicas para averiguar os efeitos 

causados pela exposição desse material. Desse modo, foram preparadas, em laboratório, frações 

solúveis em água a partir de três amostras coletadas em diferentes pontos. Com estas frações 

foram realizadas análises químicas para quantificar o total de hidrocarbonetos policíclicos 

aromáticos (TPHA) e alifáticos (THA) presentes nas frações solúveis e realizados testes com o 

objetivo de avaliar a mortalidade em Artemia salina e o desenvolvimento embrionário em 

Echinometra lucunter. Os resultados encontrados nas análises químicas detectaram valores 

quantificáveis para HA e HPA que foram superiores nas FSA da amostra 3 em comparação às 

outras amostras avaliadas. Quanto aos testes de toxicidade, o organismo Artemia salina 

apresentou concentrações que obtiveram diferença significativa com o controle a partir de 5% 

após 48 horas de exposição para a amostra 1. Já no para os testes realizados com Echinometra 

lucunter, expostos às FSA de 3 amostras, encontrou-se diferença significativa com o controle a 

partir das concentrações de 50% após 48hs de exposição. Os organismos avaliados mostraram 

baixa sensibilidade nas frações avaliadas quando comparadas a estudos anteriormente 

estudados com frações solúveis de óleo. Todavia, encontrou-se nas frações solúveis avaliadas 

concentrações de hidrocarbonetos compatíveis com estudos realizados com amostras 

ambientais e que apresentaram toxicidade aos organismos avaliados demonstrando assim o 

potencial tóxico dessas frações aos organismos que possam ser expostos as frações solúveis 

destes materiais. Conclui-se que o óleo que atingiu as praias brasileiras no ano de 2019 

apresentava condições para contaminar a coluna d’água, pela solubilização de hidrocarbonetos, 

e afeta negativamente as populações de invertebrados marinhos após a exposição às frações 

solúveis deste óleo.  Mais estudos precisam ser realizados para aperfeiçoar a compreensão dos 

efeitos dos óleos encontrados nas praias nordestinas em organismos marinhos.   

Palavras-chave: Artemia salina, Fração solúvel do óleo, Echinometra lucunter, HPA, Desastre 

ambiental.  



 

 

 

Abstract 

In the second half of 2019, oil stains appeared that reached the entire length of the Brazilian 

northeast. This poses a high risk to the health of marine organisms in various areas, such as 

contact with oil fractions that dissolve in water. In order to assess the risks of this compound, 

ecotoxicological analyzes were carried out to investigate the effects caused by exposure to this 

material. Thus, water-soluble fractions were prepared in the laboratory from three samples 

collected at different points. With these fractions, chemical analyzes were carried out to 

quantify the total amount of polycyclic aromatic hydrocarbons (TPHA) and aliphatic 

hydrocarbons (THA) present in the soluble fractions, and tests were carried out with the aim of 

evaluating mortality in Artemia salina  and embryonic development in Echinometra lucunter. 

The results found in the chemical analyzes detected quantifiable values for HA and HPA that 

were higher in the FSA of sample 3 compared to the other evaluated samples. As for the toxicity 

tests, the organism Artemia salina showed concentrations that obtained a significant difference 

with the control from 5% after 48 hours of exposure for sample 1. As for the tests carried out 

with Echinometra lucunter, exposed to the ASF of 3 samples, a significant difference was found 

with the control from concentrations of 50% after 48 hours of exposure. The evaluated 

organisms showed low sensitivity in the evaluated fractions when compared to previously 

studied studies with oil soluble fractions. However, concentrations of hydrocarbons compatible 

with studies carried out with environmental samples were found in the evaluated soluble 

fractions, which showed toxicity to the evaluated organisms, thus demonstrating the toxic 

potential of these fractions to organisms that may be exposed to the soluble fractions of these 

materials. It is concluded that the oil that fed the Brazilian beaches in 2019 was able to 

contaminate the water column, due to the solubilization of hydrocarbons, and affected the 

appearance of marine invertebrates after exposure to the soluble fractions of this oil. More 

studies need to be carried out to improve the understanding of the effects of oils found on 

Northeastern beaches on marine organisms. 

Keywords: Artemia salina, Water Soluble fraction of oil, Echinometra lucunter, HPA, 

Environmental disaster.  



 

 

 

 

Sumário 

1. Introdução e Objetivo………………………………………………………………….…...11 

1.1. Derramamento de petróleo…………………………………………………………..…....11 

1.2. Caso de surgimento de manchas de óleo em praias do litoral brasileiro em 2019…...…….12 

1.3. Petróleo, hidrocarbonetos e fração solúvel……………………………..…………………16 

2. Metodologia…………………………………………………………….……………….….19 

2.1 Preparação da fração solúvel em água – FSA…………………………..……………….…19 

2.2 Análises químicas…………………………………………………….…………………...20 

2.3 Testes de ecotoxicidade…………………………………………….……………………..21 

2.3.1 Teste de toxicidade crônica - Desenvolvimento embrio-larval de ouriço-do-mar 

(Echinometra lucunter).............................................................................................................21 

2.3.2 Teste de toxicidade aguda com Artemia salina……….…………………………..……..22 

2.4 Análises dos dados………….………………………………………………………..……23 

3. Resultados……………………………………………………………………………...…..24 

3.1 Análises químicas………….……………………………………………………………...24 

3.2 Testes de ecotoxicidade………………………………………………………………..….28 

4. Discussão e Conclusões…….……………………………………………………………....31 

5. Referências....................…………………………………………………………………....36 

  



11 

 

 

1. Introdução e Objetivos: 

 

1.1. Derramamentos de petróleo 

 

O petróleo é um composto de alta relevância na sociedade e fundamenta boa parte da 

economia mundial, assim como o desenvolvimento econômico. Entretanto, os processos 

relacionados com sua extração, uso, transporte, beneficiamento e disposição de seus resíduos 

envolvem riscos e geram muitas questões ambientais, dentre elas, os derramamentos e acidentes 

que periodicamente ocorrem contaminando os ecossistemas, causando impactos ambientais 

com consequências graves (Parviainen et al, 2021). 

Os corpos hídricos são atingidos com frequência por estes acidentes envolvendo 

petróleo e seus derivados, e uma parte significativa desse material acaba sendo lançada nos 

oceanos. Ao longo da história ocorreram acidentes de grande relevância, principalmente pelas 

suas dimensões e impactos, que resultaram em um aumento exorbitante de estudos e avaliações 

sobre os efeitos da toxicidade do petróleo e seus derivados (Aranguren-Abadía et al, 2022).  

Dentre os casos com derramamento no oceano podemos citar os casos da plataforma 

Deepwater Horizon, que foi o maior incidente do tipo com a liberação de 5 milhões de barris 

de óleo no mar (Beyer et al, 2016). Outro evento importante foi o acidente com o navio Exxon 

Valdez, em 1989, com mais de 36.000 toneladas de petróleo bruto sendo liberadas no mar 

(Ramseur, 2010). No Brasil, podemos citar a explosão do cargueiro chileno Vicuña em 

novembro de 2004, no porto de Paranaguá, que havia sido considerado o maior acidente na Baía 

de Paranaguá até então, no qual 4 tripulantes morreram e cerca de 1 milhão de litros de metanol 

e 5 milhões de litros de óleo combustível vazaram no mar. Destes, apenas foram retirados do 

mar cerca de 1,2 milhões de litros de metanol e 2,5 milhões de litros de água oleosa, causando 

a morte de centenas de animais incluindo crustáceos, golfinhos, tartarugas e aves aquáticas 

(Silva, 2019). 

 Algumas ações vêm sendo tomadas para diminuir o risco de derramamentos, como 

melhorias nas embarcações, aprimoramento na capacitação das equipes envolvidas na 

manipulação e transporte do óleo, organização de ações preventivas e planos para ações de 

resposta, estas ações estão constantemente sendo revisadas. Também existem locais onde a 

regulamentação é mais rígida como as do Alasca e Mar Ártico adjacente, as quais exigem a 

diminuição das concentrações de enxofre para que o transporte seja autorizado (Szklo e 

Schaeffer, 2007). Contudo, os acidentes envolvendo petróleo continuam ocorrendo e gerando 

danos ambientais e socioeconômicos (Miranda et al, 2022) 



12 

 

 

As legislações abordando ações de resposta a estes tipos de acidentes têm sido 

aprimoradas no Brasil desde 1967, como a lei federal nº 5.357/1967 (Anexo 1), que apenas 

imputava multas àqueles que lançassem detritos ou óleo em águas jurisdicionais brasileiras, 

permanecendo em vigor até 2000, quando foi substituída pela Lei Federal nº 9.966/2000 (Anexo 

2). Traz consigo os princípios básicos a serem obedecidos na movimentação do óleo e outras 

substâncias nocivas. No âmbito internacional, a MARPOL 73/78 - Convenção Internacional 

para Prevenção da Poluição Causada por Navios já estabelecia regras para a prevenção da 

poluição causada por óleo, sendo internalizada no Brasil por meio do decreto legislativo nº60/95 

e do decreto executivo nº 20508/98 (Anexos 3 e 4) que também regulamenta as ações no caso 

de acidentes (Brasil, 2008). 

Além dos aparatos legais, o Brasil dispõe também de regulamentos para as ações de 

resposta e combate ao óleo no mar, em caso de acidentes, que incluem a elaboração e uso de 

cartas de sensibilidade ambiental ao óleo, planos de contingência e mobilização da estrutura 

institucional para tais ações (Oliveira et al, 2022). Porém, algumas falhas operacionais podem 

ser identificadas, evidenciando a necessidade de avanços e aprimoramentos como em 

distribuição de competências e ações rápidas de respostas. Por exemplo, o fato do Brasil não 

ser signatário do fundo internacional de compensação sobre derramamento de óleo impede o 

acesso do país a esses recursos para mitigação dos danos causados por derrames que 

ocasionalmente podem ocorrer. Em 2019, houve um incidente de grandes proporções no litoral 

brasileiro, com o aparecimento de toneladas de óleo, de origem desconhecida, que atingiram 

uma extensa área das regiões nordeste e sudeste. No caso desse incidente, os recursos foram 

obtidos apenas 3 a 4 meses após as primeiras observações de óleo nas praias, quando já se havia 

retirado boa parte do material e o surgimento de novas manchas já diminuía (Lima et al, 2021). 

A escassez de informações publicadas sobre espécies que podem ser afetadas e a 

dificuldade em acessar informações sobre os potenciais alvos do óleo levam a uma 

subestimativa, pelos planos de contingência, dos efeitos adversos causados nas áreas costeiras. 

Também faltam informações sobre endemismo, raridade e principalmente vulnerabilidade de 

espécies encontradas em determinadas áreas (Oliveira et al, 2022), necessárias para a atribuição 

de importância às áreas costeiras sob risco de exposição ao óleo. 

 

1.2.  Caso de surgimento de manchas de óleo em praias do litoral brasileiro em 2019 

 

Em 30 de agosto de 2019 foi registrado o surgimento de manchas de petróleo no 

Município do Conde, Paraíba, nas praias de Jacumã e Tambaba. Este foi o primeiro relato de 



13 

 

 

uma sequência trágica do que viria a ser o maior incidente no litoral já visto até então. Nos dias 

que se seguiram, esporádicas manchas oleosas surgiram nas praias nordestinas. Em cinco 

semanas, todos os nove estados já haviam apresentado aparecimento de manchas em alguma 

localidade (Miranda et al, 2022). 

Mesmo a maior parte dos registros sendo observada na região nordeste do Brasil. O 

mesmo aconteceu no sudeste, tendo o primeiro ocorrido na praia do Guriri, no litoral de São 

Mateus, no norte do Espírito Santo, em 7 de novembro. Fragmentos foram registrados também 

no Rio de Janeiro, em proporções muito menores em ambos os locais (Disner et al, 2022).  

O IBAMA informou que 5.300 toneladas de resíduo de óleo (ainda com algum agregado 

de areia) foram removidos do ambiente, sendo o estado de Alagoas, o que mais obteve 

quantidade coletada, com mais de 2000 toneladas (apresentação do governador do Estado na 

COMPESA, Secretaria de Planejamento e Gestão, SEPLAG, 29/10/2019). Apesar do grande 

volume de óleo removido ficou ainda uma quantidade do óleo retida. Podemos caracterizar este 

como um evento de grande escala (Baker, 1985), sendo o maior incidente de petróleo em áreas 

costeiras já ocorrido no Brasil.  

Logo após a ocorrência das primeiras manchas, as comunidades locais se mobilizaram 

para ajudar a remover o óleo das praias. Entre os milhares de voluntários, destacou-se a atuação 

daqueles que vivem de pesca artesanal ou do turismo local, que tiveram suas fontes de renda 

afetadas pela chegada do óleo, e não viam ações efetivas de limpeza nas praias, função esta que 

foi assumida em boa parte pela marinha do Brasil, na ausência do agente responsável. (Pena et 

al, 2020). Além disso, ocorreram relatos de intoxicação desses voluntários após exposição ao 

óleo que possui toxicidade já conhecida, principalmente pela inalação, podendo inclusive gerar 

irritações na pele, entre outros efeitos. Um risco a qual foram submetidos pois a maioria deles 

não utilizava equipamentos de segurança (Disner et al, 2020). 

Mesmo assim, o Ministério da Saúde e a Marinha do Brasil emitiram, apenas no dia 24 

de outubro, as recomendações para retirada do material, e também evitar o contato direto com 

o óleo, o qual contém substâncias cancerígenas. Em 25 de outubro, o governo anunciou a 

criação de uma página na internet contendo informações sobre o surgimento de manchas 

(IBAMA, 2019b). Só então houve detalhes específicos sobre locais e fauna afetados foram 

divulgados.  

Ao se tratar especificamente do estado da Bahia e sua vasta área litorânea que possui 

uma riqueza de biodiversidade da qual muito ainda há por ser descoberta. Esta possui diferentes 

áreas para preservação ambiental seja no sul da Bahia que conta por exemplo com o Parque 

Nacional de Abrolhos, a reserva extrativista Marinha de Ponta do Corumbau e a APA Caraíva/ 



14 

 

 

Trancoso, ou como no norte com a APA Litoral Norte. Estas áreas possuem praias voltadas ao 

oceano e à baía, mangues, estuários, costões e recifes de cora áreas de preservação com grupos 

taxonômicos abundantes como equidonermatas, Toxopneustidae, Arbaciidae e 

Mellitidae.(Amaral e Jablonski, 2005; Nunes e Matos, 2017) as quais são reconhecidas áreas 

por possuírem uma grande diversidade biológica e pelos serviços ecossistêmicos prestados, 

como fonte de recursos pesqueiros, fornecimento de proteção a costa contra ondas e geração de 

renda através do turismo (IMO/UNEP, 2009) 

As primeiras amostras do Estado da Bahia datam de 04 de outubro de 2019. O governo 

do estado da Bahia estimou em 459,59 toneladas o total recolhido das praias atingidas até o dia 

28/10/2019. (IBAMA, 2019) As praias atingidas foram demarcadas e a quantidade de material 

encontrado foi descrita para cada uma. O total de locais vistoriados e marcados na última 

vistoria realizada pelo Ibama em março de 2020 podem ser vistas na Figura 1 para este estado. 

 



15 

 

 

 

Figura 1. Localidades verificadas quanto ao registro de novas manchas no litoral do estado da Bahia, 

considerando as áreas oleadas até a data de 12/03/2020. Dados da última vistoria. Os pontos em vermelho 

indicam as regiões onde foram coletadas as amostras usadas para os testes realizados nesta pesquisa. O ponto 

superior ao norte indica a praia do Massarandupió, enquanto o ponto inferior no sul, indica a praia do trancoso. 

(extraído de IBAMA, 2019). 

 

 

 

 



16 

 

 

1.3. Petróleo, hidrocarbonetos e fração solúvel 

 

O petróleo bruto tem origem biológica, sendo originado a partir de matéria orgânica 

submetida a alta pressão e temperatura por milhões de anos em depósitos sedimentares, sendo 

que sua composição depende diretamente da fonte da matéria orgânica que a originou. 

Geralmente, é composto por uma mistura complexa com mais de 1000 compostos de 

hidrocarbonetos com peso molecular variando de baixo (de C1) a alto (mais de C38). Os 

principais grupos presentes nele são hidrocarbonetos saturados (alcanos e cicloalcanos) ou 

aromáticos, resinas, asfaltenos (compostos policíclicos contendo nitrogênio, enxofre e 

oxigênio), e compostos organometálicos (NRC, 2003). 

Após o derramamento, o óleo sofre vários processos de degradação, como 

espalhamento, evaporação, dispersão, emulsificação, dissolução, oxidação, sedimentação e 

biodegradação. Através da emulsificação, é gerado o mousse (óleo + água), promovendo o 

aumento significativo do volume deste poluente no ambiente. Devido à sua persistência no 

ambiente marinho, o mousse pode transportar os compostos aromáticos a longas distâncias 

(GESAMP, 1993).  

Por consequência do processo de intemperismo e perda dos compostos monoaromáticos 

(benzeno, tolueno, xileno) do mousse, os HPA são os principais contribuintes para a toxicidade 

dos óleos intemperizados (NRC, 2003). Os HPA formam uma vasta classe de substâncias 

orgânicas contendo dois ou mais anéis aromáticos fundidos, podendo ou não conter grupos 

substitutos ligados (Hylland, 2006).  

Apesar destes compostos apresentarem potencial carcinogênico em baixas 

concentrações, os HPA possuem baixa solubilidade em água. Devido a sua natureza 

hidrofóbica, a solubilidade aquosa dos HPA diminui quando estes fazem parte de uma mistura, 

pois os compostos tendem a permanecer no óleo devido a sua baixa polaridade. Contudo sua 

natureza hidrofóbica torna-o suscetível a se ligar à matéria orgânica e tecidos dos organismos 

(Shiu et al, 1990). Os HPA podem variar amplamente em suas propriedades devido à grande 

variedade de tamanhos e massa molecular (Newman e Unger, 2002). Compostos com grande 

massa molecular são considerados hidrofóbicos e tendem a acumular em sedimentos e nos 

organismos. Já os compostos de menor massa molecular têm propriedades tóxicas agudas 

(Newman e Unger, 2002). Quanto à solubilidade em água dos hidrocarbonetos aromáticos do 

petróleo, Xie et al, (1997) destacam que a salinidade interfere na solubilidade desses compostos, 

diminuindo suas concentrações solúveis.  



17 

 

 

Devido à alta detecção de HPA no meio ambiente e ao fato de esses compostos 

apresentarem toxicidade e potencial carcinogênico, a United States Environmental Protection 

Agency (USEPA), agência de proteção ambiental dos Estados Unidos da América, estabeleceu 

16 HPA prioritários, considerados particularmente importantes no monitoramento ambiental de 

poluentes orgânicos prioritários: Naftaleno, Acenaftileno, Acenafteno, Fluoreno, Fenantreno, 

Antraceno, Pireno, Fluoranteno, Benzo[a]antraceno, Criseno, Benzo[b]fluoranteno, 

Benzo[k]fluoranteno, Benzo-[a]pireno, Indeno[1,2,3-c,d]pireno, Dibenzo[a,h]antraceno e 

Benzo[g,h,i]perileno (USEPA, 1999).  

Por sua vez, a fração solúvel em água (FSA) pode ser definida como a fase aquosa após 

a aplicação de energia que mistura a água, seja doce ou salina ocorrendo o envolvimento das 

moléculas do solvente (água)  nas partículas do soluto (petróleo), dissolvendo-as, com óleos 

brutos por longo período  variando do quanto e da força aplicada..(Shen e Yapa, 1988) A 

dissolução é um processo importante do ponto de vista de possíveis danos biológicos, embora 

seja responsável por apenas uma fração desprezível do balanço de massa do óleo.  Em sua 

composição contém abundância de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (Bera et al, 2019)  

e outras substâncias solúveis em água. E a capacidade destes compostos químicos para partição 

na fase aquosa é regida por propriedades físico-químicas comuns (principalmente polaridade, 

medida pelo coeficiente de partição octanol-água - Kow) (Liu e Kujawinski, 2015). 

O óleo entranhado na coluna d’água pode ser responsável por danos aos organismos 

marinhos por diferentes vias, como através da ingestão de gotículas de óleo e incorporação do 

óleo no zooplâncton (Lee et al., 1985). Nesse sentido, em alguns casos de derramamento foram 

avaliadas a presença de marcadores de petróleo e encontrados níveis elevados na coluna d’água, 

passados 1,5 anos, em locais próximos do acidente ocorrido no Golfo do México com a 

plataforma Deepwater Horizon (Paul et al., 2013), mantendo-se biodisponível para causar 

efeitos nos organismos a eles expostos.   

Recobrimento, inalação e ingestão de óleo por aves e mamíferos marinhos podem causar 

efeitos letais ou subletais devido à sua toxicidade, como danos ao sistema nervoso redução da 

habilidade de se alimentar ou digerir os alimentos (GESAMP, 1993; USEPA, 1999; Islam & 

Tanaka, 2004). Estudos de toxicidade mostram que o copépodo Tigriopus japonicus pode ser 

impactado negativamente pelo óleo e dispersantes em seu desenvolvimento e sua reprodução. 

(Lee et al, 2013). Mais além, o efeito tóxico do óleo pode causar uma série de problemas à 

saúde humana, através de sua inalação, contato com a pele ou até mesmo ingestão acidental. 

Esse contato do homem com o petróleo é mais intenso dentro das refinarias, terminais e navios, 

mas pode ocorrer também durante as operações de limpeza das áreas atingidas, e também por 



18 

 

 

meio do consumo dos pescados na região onde ocorreram. (Euzebio et al, 2019) Os efeitos 

toxicológicos do óleo no homem estão associados principalmente a irritação na pele e olhos, 

náuseas, vômitos, sensação de embriaguez e dores abdominais (NRC, 1985). Outros estudos 

indicaram a relação entre o aumento de casos de diabetes gestacional em mulheres que tiveram 

exposição prolongada e outros impactos no sistema reprodutor como a diminuição da qualidade 

do sêmen ou sua má-formação. 

Embora os HPA possam ser metabolizados pelos organismos vertebrados e 

invertebrados, em um processo iniciado pelo sistema citocromo P450, eles podem ser 

acumulados em invertebrados que possuem atividade metabólica reduzida. Porém, mesmo nos 

vertebrados, pode existir a baixa capacidade de eliminação dos HPA mais hidrofóbicos, os quais 

podem se acumular nos tecidos adiposos (Lourenço et al, 2021). Em peixes, a acumulação de 

hidrocarbonetos solúveis é extremamente rápida e esses compostos são metabolicamente 

degradados por biotransformação enzimática, sendo um mecanismo essencial para o modo de 

ação de compostos genotóxicos (Sorhus et al, 2021).  

Considerando que o aparecimento do óleo no litoral da região nordeste do Brasil como 

evento que gerou os impactos aos ecossistemas costeiros, o objetivo principal do presente 

estudo é avaliar a toxicidade da fração solúvel em água (FSA) de amostras ambientais de óleo 

coletadas em praias nordestinas. Foram usados como organismos modelos náuplios de Artemia 

salina, organismo de fácil obtenção e com resposta rápida e eficaz além de embriões de ouriço 

do mar Echinometra lucunter que também são organismos largamente utilizados em avaliações 

ecotoxicológicas já que estão amplamente distribuídos sendo assim fáceis de coletar e bons 

representantes para avaliação de impacto ambiental  É válido ressaltar também o baixo custo e 

a ausência de necessidade de manutenção de cultivo bem como a sensibilidade dos organismos 

nas fases de seus ciclos de vida que foram avaliadas.  

A hipótese deste trabalho foi de que o óleo derramado no ecossistema aquático pode 

produzir uma FSA que contém hidrocarbonetos e oferece riscos para os organismos marinhos, 

por produzir efeitos tóxicos. Para atingir este objetivo principal, foram estabelecidos os 

seguintes objetivos específicos: 

● Estimar a liberação de hidrocarbonetos (alifáticos e policíclicos aromáticos) na água 

através da análise química da fração solúvel preparada em laboratório; 

● Avaliar a toxicidade aguda da fração solúvel de amostra de óleo coletada nas praias do 

nordeste sobre a sobrevivência do crustáceo Artemia salina; 

● Avaliar a toxicidade das frações solúveis de amostras de óleo coletadas em praias do 

nordeste sobre o desenvolvimento embrio-larval do ouriço-do-mar Echinometra lucunter. 



19 

 

 

 

 

2. Metodologia:  

 

2.1 Preparação da fração solúvel em água - FSA  

 

Três soluções-estoque contendo as frações solúveis de óleo em água do mar foram 

preparadas, a partir de três amostras de óleo coletadas em diferentes pontos do litoral da Bahia, 

seguindo o protocolo ABNT/ NBR 15.469. As amostras contemplaram as praias de Trancoso 

(Litoral Sul) e Massarandupió (Litoral Norte). Estes fragmentos foram gentilmente cedidos pelo 

Prof. Dr. Rafael Lourenço, do Instituto Oceanográfico da USP. As amostras de óleo nas praias 

da Bahia foram coletadas durante o período de surgimento do óleo, quando estava sendo 

realizada a retirada do material bruto acumulado na linha de costa por meio dos voluntários 

onde parte do material foi entregue a grupos de pesquisas. Armazenou-se algumas amostras em 

marmitex de alumínio descartável e outras em potes de vidro as quais foram mantidas em 

refrigeração à 5º C ± 2. As amostras utilizadas foram enumeradas de acordo com o pote em que 

foram armazenadas em conjunto a localidade a qual estava demarcada sendo então referidas 

para o presente estudo como Amostras 1, 2 e 3. Tendo as duas primeiras tendo sido coletadas 

na praia do trancoso e a última na praia de Massarandupio como descritos na Tabela 1.     

Quanto ao preparo das frações solúveis, primeiramente a água do mar foi coletada no 

Parque Estadual Marinho da Laje de Santos (SP) para uso como controle e água de diluição, e 

posteriormente filtrada com membrana de 45μm e autoclavada para em seguida ser misturada 

ao petróleo coletado com proporção de 9/1 (água/óleo) seguindo o método padronizado por 

Nordtug et al (2011). Com o auxílio de um agitador magnético de baixa energia (160 rpm) 

durante o período de 20 horas a mistura foi homogeneizada para a formação das gotículas 

dissolvidas. A camada aquosa foi drenada após 2 horas de decantação depois de desligado o 

agitador magnético sendo colocado em garrafas de vidro âmbar limpas e posteriormente 

armazenadas em refrigerador em temperatura de cerca de 4ºC. Para o preparo dos testes, a 

solução estoque (100%) foi diluída em água do mar filtrada para a obtenção das concentrações 

de 0,1%; 1%, 10% e 50%.  



20 

 

 

 

Figura 2. Amostras de óleo coletadas nas praias nordestinas onde ocorreram o derramamento em 2019. Notar 

diferenças visíveis entre a viscosidade e estado de intemperismo das amostras. 

 

No que diz respeito à Amostra 1, observou-se alta concentração visível de material 

suspenso (partículas de óleo e sedimento) na solução inicial (100% da amostra 1), dessa forma, 

para o teste preliminar, esta amostra teve sua solução estoque diluída em mais 10x, obtendo-se 

assim uma solução de 10%, da qual foi gerada um novo range de diluição seriada para as 

concentrações. As amostras 1 e 3 seguiram as diluições a partir da concentração de 100%. As 

concentrações utilizadas para cada amostra seguem descritas na Tabela 1: 

 

Tabela 1. Amostras utilizadas para realização das frações solúveis para os organismos testes avaliados e seus 

respectivos tratamentos 

Organismo Concentração (%) Amostra (localidade) 

Artemia salina 0,01; 0,1; 1; 5 e 10 Amostra 1 (Trancoso) 

Echinometra lucunter 0,01, 0.1, 1, 5, 10, e 100 Amostra 1 (Praia do Trancoso)  

Echinometra lucunter 0,01, 0,1, 1, 10, 50, 100  Amostra 2 (Praia do Trancoso) 

Echinometra lucunter 0,1, 1, 10, 50, 100 Amostra 3 (Praia do Massarandupió) 

 

 

2.2 Análises químicas 

 

Foram realizadas análises para determinação dos hidrocarbonetos presentes nas 

amostras da solução estoque da fração solúvel. Essas análises foram conduzidas pelo grupo 

coordenado pelo Prof. Dr. Rafael Lourenço, do IOUSP, colaborador no presente trabalho. A 

extração dos compostos a partir da FSA foi realizada de acordo com protocolo descrito na 

Norma ABNT/NBR 15.469. Cerca de 500 mL do total preparado foi dividido em duas 

subamostras de 100 mL (réplicas) para as análises de hidrocarbonetos. Para a obtenção dos 

extratos orgânicos referentes a HPA nas frações aquosas FSA, foi empregado o método 

EPA3510C. Foram determinados os compostos totais de hidrocarbonetos aromáticos e 



21 

 

 

alifáticos por meio de cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas (GC-MS) e 

com detector de ionização de chama (GC-FID). O procedimento analítico está descrito em 

detalhes em Martins et al (2011). 

 

2.3 Testes de ecotoxicidade 

 

Foram realizados testes de toxicidade aguda (medindo sobrevivência) com Artemia 

salina e teste de toxicidade crônica de curta duração analisando desenvolvimento embrionário 

com o ouriço-do-mar Echinometra lucunter. As propriedades físico-químicas (temperatura, 

oxigênio dissolvido, pH e salinidade) das soluções teste e dos controles foram medidas no início 

e no final de todos os experimentos. 

 

 

2.3.1 Teste de toxicidade crônica - Desenvolvimento embrio-larval de ouriço-do-mar 

(Echinometra lucunter) 

 

Neste ensaio foram avaliados os efeitos sobre o desenvolvimento embrionário de 

ouriços-do-mar da espécie Echinometra lucunter após exposição às diferentes concentrações 

de FSA. Os testes foram realizados segundo metodologia descrita por NBR/ABNT 15.350 

(2006). Para tal, indivíduos adultos foram coletados em costões rochosos e foram induzidos a 

liberar seus gametas através da injeção de 2,5 mL de KCl (0,5M) em sua região peri-oral. Os 

óvulos foram examinados quanto a sua morfologia, em estereomicroscópio. Por sua vez, os 

espermatozóides foram ativados imediatamente antes do início da fecundação, por meio da 

adição de 0.5 ml de esperma em 24,5 mL de água do mar filtrada. 

Para o processo de fertilização, foram acrescentados aproximadamente 2 mL da solução 

de esperma ao béquer contendo os óvulos. Três sub-amostras foram retiradas para contagem 

dos ovos, identificados pela presença da membrana de fecundação à sua volta (para 

continuidade do teste deve-se obter um mínimo de 80% de ovos fecundados). Foram colocados 

aproximadamente 500 ovos em cada réplica contendo os tratamentos das FSA e nos respectivos 

controles. Os ovos então recém-fecundados foram introduzidos nos tubos de ensaio e após 36-

42 horas (tempo necessário para a formação da larva equinoplúteo, o teste foi finalizado com a 

adição de 0,5 mL de formol 10% tamponado com bórax em cada réplica. Posteriormente, foi 

realizada a contagem das 100 primeiras larvas encontradas em cada réplica, utilizando-se de 



22 

 

 

microscópio óptico (aumento de 100x) para observar o desenvolvimento embrionário normal 

em relação ao controle. 

 

2.3.2 Teste de toxicidade aguda com Artemia salina 

 

Os crustáceos do gênero Artemia, Ordem Anostraca, são organismos filtradores e 

cosmopolitas, estando amplamente presentes nos ambientes aquáticos, e consequentemente 

podendo estar expostos aos poluentes presentes na coluna d’água. Por seu hábito alimentar, 

atuam como elo trófico entre as comunidades fitoplanctônicas e os níveis tróficos superiores. 

Sua utilização em experimentos laboratoriais se dá pela alta sensibilidade, baixo custo e 

facilidade de cultivo (Ferreira et al, 2000). Além disso, caracteriza-se por ser um excelente 

bioindicador, proporcionando respostas robustas perante pequenas variações na qualidade do 

ambiente. Por esse motivo, são utilizadas para a avaliação de risco ecotoxicológico (Meyer et 

al, 1982). A utilização destes organismos tem também o intuito de reduzir a geração de resíduos 

produzidos durante o estudo (Blaise, 1998). 

Cistos de Artemia sp. têm sido obtidos junto ao comércio (criadores nacionais, no RN), 

sendo mantidos no laboratório e estando disponíveis para o uso. Para dar início aos testes foi 

necessária a indução da eclosão dos cistos. Para tal, os cistos foram imersos em água destilada 

por uma hora, descontaminados em solução de hipoclorito de sódio e água destilada por dois 

minutos, e posteriormente lavados em água corrente. Os cistos foram mantidos em água do mar 

filtrada com aeração salinidade a 35, temperatura 25 ± 2 ºC, e fotoperíodo de 12 h/12 h 

(claro/escuro) por 48 horas, ou seja, até atingirem a fase ideal (Figura 2) para a execução dos 

testes (metanáuplio II). Em cada réplica, foram introduzidos dez náuplios, selecionados 

aleatoriamente, consistindo cada réplica em tubos de ensaio de 15 mL preenchidos com um 

volume de 10 mL de solução teste, e mantidos em condições controladas. As soluções que 

foram utilizadas para este ensaio referem-se às frações solúveis de amostras de óleos nas 

concentrações pré-estabelecidas. 

Nos períodos de 24 e 48 horas de exposição, os organismos vivos e mortos foram 

observados e contados, utilizando como critério a ausência de movimento, de acordo com Veiga 

& Vital (2002).  

 

 



23 

 

 

 

Figura 3. Náuplio de Artemia sp. na fase de uso para o teste de toxicidade, metanáuplio II. 

 

 

2.4 Análises dos dados 

 

Para os testes de ecotoxicidade, os experimentos foram executados em um desenho 

experimental de fator fixo, sendo cada uma das diluições (tratamento experimental) um nível. 

Os resultados de cada ensaio foram primeiramente verificados por teste F comparativo para 

homocedasticidade e Shapiro-Wilks para verificar a normalidade, em seguida estimada, 

diferenças significativas em comparação ao controle (água do mar limpa, diluição 0%) e 

testadas estatisticamente através de análise de variância (ANOVA) seguida do teste de Dunnett 

o que permite encontrar a menor concentração de efeito observável (CEO) e a concentração de 

efeito não observável (CENO). Foram estimadas também a Concentração Efetiva a 50% dos 

organismos (CE50), como métrica de toxicidade. Neste caso, os dados de cada tratamento foram 

transformados para a escala logarítmica e modelo de regressão não-linear foi empregado para 

observação da relação entre as variáveis (diluição vs. efeito). As análises foram realizadas 

utilizando o programa estatístico GraphPad Prism versão 5.  Para que por meio da estimativa 

de concentrações tóxicas pudéssemos observar relações entre as concentrações totais de 

hidrocarbonetos (alifáticos e policíclicos aromáticos) e os efeitos tóxicos medidos (% de 

anormalidades no desenvolvimento larval e % que causa mortalidade em Artemia salina). 

 



24 

 

 

 

3. Resultados 

 

3.1 Análises químicas 

 

Quanto às análises de hidrocarbonetos, todas as amostras apresentaram quantidades 

mensuráveis de hidrocarbonetos alifáticos (HA) variando entre valores de 3,31 μg·L-1. e 17,85 

μg·L-1. Os valores identificados para cada amostra diferiram entre si para os mesmos 

compostos. Em questão de valores totais a amostra 3 apresenta a maior quantidade com 54,21 

μg·L-1 em sequência a amostra 2 com 11,95 μg L-1, e por fim a amostra 1 com 7,19 μg·L-1.   

Alguns grupos de HA apresentaram concentrações quantificáveis apenas para a amostra 

3 como é o caso da n-C19, nC24, nC25, n-C28 e n-C30, já o nC23 somente para a amostra 2, 

enquanto os do grupo n-C23 e n-C29 estavam presentes em todas as amostras. E apenas a 

amostra 1 não obteve quantidades de HA isoladamente detectáveis em comparação com as 

outras. Os dados completos específicos de cada HA identificado e quantificado estão descritos 

na Tabela 2: 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



25 

 

 

 

 

 

Tabela 2. Concentrações de hidrocarbonetos alifáticos (HA) quantificado para todas as frações solúveis em água 

(FSA) das três amostras de petróleo analisadas. (<DL = concentrações abaixo do limite de detecção). 

Concentração: μg L-1 Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 

n-C10 <DL <DL <DL 

n-C11 <DL <DL <DL 

n-C12 <DL <DL <DL 

n-C13 <DL 3,43 <DL 

n-C14 <DL <DL <DL 

n-C15 <DL <DL <DL 

n-C16 <DL <DL <DL 

n-C17 <DL <DL <DL 

Pristane <DL <DL <DL 

n-C18 <DL <DL <DL 

Phytane <DL <DL <DL 

n-C19 <DL <DL 4,93 

n-C20 <DL <DL <DL 

n-C21 <DL <DL <DL 

n-C22 <DL <DL <DL 

n-C23 3,31 3,67 7,02 

n-C24 <DL <DL 5,90 

n-C25 <DL <DL 8,35 

n-C26 <DL <DL <DL 

n-C27 <DL <DL <DL 

n-C28 <DL <DL 5,79 

n-C29 4,58 4,86 4,37 

n-C30 <DL <DL 17,85 

n-C31 <DL <DL <DL 

n-C32 <DL <DL <DL 

n-C33 <DL <DL <DL 

n-C34 <DL <DL <DL 

n-C35 <DL <DL <DL 

n-C36 <DL <DL <DL 

n-C37 <DL <DL <DL 

ΣAHs 7,89 11,95 54,21 

Limite de Detecção(DL) : 2,5 μg·L-1 

 

 

 

 

 



26 

 

 

 

 

Foi também quantificada a presença de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos nas 

amostras avaliadas, cada um dos principais HPA conhecidos na literatura foram descritos com 

a devida quantidade encontrada e representados na Tabela 3.  Em relação à quantidade total de 

HPA, a amostra 3 foi a que apresentou valores superiores em comparação às outras duas, sendo 

seguida em ordem decrescente pela amostra 1 e 2. Já quando referente aos tipos de HPA 

presentes em cada amostra, os mesmos foram o que apresentaram maior quantidade em todas 

as amostras sendo estes respectivamente o C2-Pireno-Fluoranteno, C2-Criseno e C1-Pireno-

Fluoranteno. Apesar das diferenças em quantidade, as proporções dos hidrocarbonetos são 

similares, ou seja, poucos tipos de HPA se encontravam ausentes em uma amostra e presentes 

em outras quando relativo aos HPA de alto peso molecular. Já para os de baixo peso molecular 

na amostra 3 foram obtidos alguns tipos, enquanto nas outras os mesmos não foram 

identificados.  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



27 

 

 

Tabela 3. Concentrações de hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HPA) quantificado nas frações solúveis em 

água (FSA) das três amostras de petróleo analisadas em μg L-1 (<DL = concentrações abaixo do limite de 

detecção). 

Baixo peso molecular Amostra 1  Amostra 2 Amostra 3 

Naftaleno 0,02 <DL <DL 

2-Metil-naftaleno 0,03 <DL 0,02 

1-Metil-naftaleno 0,02 <DL 0,03 

C2-Naftaleno <DL <DL 0,26 

C3-Naftaleno <DL <DL 0,59 

C4-Naftaleno <DL <DL 0,91 

Acenaftileno 0,07 0,04 0,24 

Acenafteno <DL <DL <DL 

Fluoreno <DL <DL 0,06 

C1-Fluoreno <DL <DL 0,35 

C2-Fluoreno <DL <DL 1,03 

C3-Fluoreno <DL <DL 3,24 

Dibenzotiofeno 0,03 0,01 0,15 

C1-Dibenzotiofeno 0,10 <DL 0,27 

C2-Dibenzotiofeno 0,54 <DL 0,80 

C3-Dibenzotiofeno 0,10 0,06 4,93 

Fenantreno 0,03 <DL 0,25 

C1-Fenantreno-Antraceno 0,24 0,08 1,18 

C2-Fenantreno-Antraceno 0,66 0,24 3,84 

C3-Fenanthrene-Antraceno 1,39 0,85 7,66 

C4-Fenantreno-Antraceno 2,65 1,71 13,48 

Antraceno 0,05 0,03 0,25 

Fluoranteno 0,08 0,05 0,31 

Total 6,01 3,07 39,85 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



28 

 

 

Alto peso molecular Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 

Pireno 2,12 1,07 11,19 

C1-Pireno-Fluoranteno 6,72 3,18 29,53 

C2-Pireno-Fluoranteno 20,20 8,38 86,83 

Benz[a]antraceno 1,10 0,52 5,80 

Criseno 0,38 0,34 2,71 

C1-Criseno 2,40 1,49 13,81 

C2-Criseno 9,92 5,33 49,50 

Benzo[b]fluoranteno 0,83 0,47 5,32 

Benzo[k]fluoranteno 0,29 0,18 1,08 

Benzo[e]pireno 2,10 1,32 10,86 

Benzo[a]pireno 2,16 0,91 9,73 

Perileno 0,58 0,22 2,65 

Indeno[1,2,3-c,d]pireno 0,32 0,14 1,43 

Dibenz[a,h]antraceno 0,64 0,28 2,67 

Benzo[ghi]perileno 1,36 0,84 6,23 

Total 51,12 24,67 239,34 

Σ EPA Prioritários-HPA 9,45 4,88 47,28 

Σ HPA 57,12 27,75 279,19 

Limite de Detecção (DL): 0,005 μg L-1 

 

 

3.2 Testes de ecotoxicidade 

 

Echinometra lucunter 

Para os embriões de E. lucunter expostos às diferentes concentrações encontradas na 

Tabela 1, após 36 horas, foram observadas diferenças estatísticas significativas na taxa de 

desenvolvimento dos indivíduos em comparação ao controle (Figura 4). 

Quanto à menor concentração com efeito observável (CEO), para as amostras 1 e 3 foi 

a concentração de 100%, enquanto para a amostra 2 a CEO foi de 50%. Já o resultado avaliando 

a concentração inibitória em 50% dos organismos (CI50) para as amostras 1 estão na Tabela 

4; não foi possível calcular a CI50 para a amostra 2 e 3. Também foi calculada a concentração 

inibitória para 10% dos organismos, e os valores 1,787% e 20,14% foram encontrados para as 

amostras 1 e 3. Os parâmetros físico-químicos estão apresentados nos anexos 5, 6 e 7. 

 

Tabela 4. Dados estatísticos de concentrações inibitória para 10% e 50% dos organismos (C.L10 e C.I.50) com 

seus respectivos intervalos de confiança (I.C.) e concentração de efeito observável e não observável (CEO e 

CENO) para o desenvolvimento embrionário de Echinometra lucunter nas diferentes diluições de FSA realizadas 

com as amostras 1, 2 e 3. (nd = não determinável) 

Amostra CL10 (I.C.%) CL50 (I.C.) %) CENO CEO 

Amostra 1  1,787 (0.5502 - 5.802) 15,94 (3,84 - 66,11) 10% 100% 

Amostra 2 nd nd 10% 50% 

Amostra 3 20,14 (7.246 - 56.01) nd 50% 100% 



29 

 

 

 

 

 

Figura 4. Desenvolvimento embrionário do ouriço Echinometra lucunter nas diferentes diluições de FSA. 

Asterisco (*) significa diferença significativa com o controle (p <0.05). 

 

Artemia salina 

 

Os resultados dos testes da fração solúvel da amostra 1 preliminares e com o intuito de 

analisar o padrão de toxicidade das amostras de óleo coletadas nas praias do nordeste estão logo 

em sequência. As análises estatísticas dos dados apresentaram homocedasticidade e 

normalidade. Os parâmetros físico-químicos (salinidade, oxigênio dissolvido e pH) foram 

coletados e estavam dentro dos padrões estabelecidos pela norma ABNT/NBR 16.530 de 

09/2021.  

A análise de variância mostrou que não houve diferença significativa entre as 

mortalidades no controle e as concentrações de FSA abaixo de 1% de diluição. Após 24 horas 

de exposição, houve mortalidade significativa na diluição de 10% e, após 48 horas de 

exposição, houve toxicidade nas concentrações de 5 e 10% (Figura 5). Os valores da 

concentração letal para 10% dos organismos se encontram na Tabela 5.  

 



30 

 

 

 

Figura 5. Taxa de sobreviventes de Artemia salina nas diferentes diluições de FSA realizadas com a amostra 1 

em 24 e 48 horas. Asterisco (*) indica diferença significativa com o controle dentro do mesmo tempo de 

exposição (p <0.05). 

 

 

Tabela 5. Concentrações letais em 10% dos organismos e concentrações de efeito observável e não observável 

nos diferentes períodos de exposição, obtidas no teste de toxicidade com náuplios de Artemia sp exposta a fração 

solúvel de óleo encontrado na Bahia. (nd= não determinável) 

 

Tempo de exposição CL10 (C.I.) CENO CEO 

24 hs nd 5% 10% 

48 hs 2,155 (0.09833 - 47.22) 1% 5% 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



31 

 

 

4. Discussão e Conclusões:  

 

A composição das frações solúveis foi predominantemente de hidrocarbonetos de alto 

peso molecular, que em geral possuem baixa solubilidade e alta hidrofobicidade. Por isso, é 

pressuposto que haverá maior concentração de hidrocarbonetos de baixo peso molecular nas 

frações solúveis. Contudo, o petróleo bruto e óleos mais pesados, já tem maior concentração de 

HPA de alto peso molecular, liberado-os nas frações solúveis geradas por esses mesmos 

compostos. Quando comparada com a quantidade total presente na fração solúvel, outros 

trabalhos obtiveram uma quantidade maior de hidrocarbonetos totais de baixo peso molecular, 

como naquelas em que a extração foi feita com óleos que passaram por um processo de 

destilação diferente, como é o caso do diesel marítimo (Santana et al, 2021). Assim também foi 

achado em trabalhos que buscaram avaliar diferentes tipos de petróleo e seus derivados bem 

como sua composição como da gasolina (Saeed e AI-Mutairi, 1998) e óleo cru Kuwait, ou 

outros que puderam quantificar os hidrocarbonetos identificando as suas diferenças quanto à 

composição, tendo maior presença de compostos de baixo peso molecular (Saeedu e AI-

Mutairi, 2000; Richika et al, 2022; Zanardi-Lamardo, et al; Magalhães et al, 2022)  

Um trabalho avaliou a presença de hidrocarbonetos em amostras de água de praias 

nordestinas afetadas pelo óleo derramado em 2019 (Campelo et al, 2021). Nesse estudo, 

conduzido na região de Tamandaré-PE, em outubro de 2019, foram verificadas gotículas de 

óleo, com volume médio individual de 315,55 μm3, sendo que nas áreas estuarinas houve a 

maior quantidade, com valores médios que alcançaram 97.30 ± 84.70 gotículas por metro 

cúbico. Esses valores são equiparáveis aos encontrados nas amostras avaliadas no presente 

trabalho. Lima et al (2021), por sua vez, realizaram coleta de amostras de água em uma área 

recifal com presença de placas de óleo em uma praia de difícil acesso, onde possivelmente o 

material ficou por um maior período até ser retirado. Cinco dos HPA mais presentes foram o 

Naftaleno (4,9 mg/L) 2 Metilnaftaleno (9,7 mg/L), fenantreno (300 mg/L), fluoreno (6,8 mg/L) 

e Pireno (10,9 mg/L). Estes estudos corroboram com os dados encontrados no presente estudo, 

com valores muito maiores no que diz respeito à presença de HPAs solúveis a partir do óleo 

que atingiu o NE das três amostras avaliadas, que apresentaram toxicidade para os organismos 

demonstrando o seu potencial tóxico para os organismos marinhos que habitam as regiões 

atingidas pelo acidente.  

Contudo, sabe-se que com a dinâmica marinha as frações de óleo podem se dissipar 

mais ou menos rápido. Segundo Vitório et al (2022) as quantidades de hidrocarbonetos 

dissolvidos não diminuíram um ano após o ocorrido, a partir do estudo feito com amostras 



32 

 

 

coletadas no Rio Formoso, também no município de Tamandaré-PE. Estas quantidades são 

compatíveis com as concentrações testadas no presente estudo, estando na faixa em que se 

observou toxicidade para náuplios de A. salina e embriões de E. lucunter. Como estes estudos 

indicam a presença do óleo em longo prazo, há evidências de que mesmo após meses da 

remoção do material, os níveis de hidrocarbonetos na água podem ser suficientes para causar 

toxicidade nos organismos avaliados. 

 A resolução CONAMA N° 357, de 17 de março de 2005 estabelece valores limites para 

a qualidade de águas salinas, para algumas substâncias tóxicas, como o benzo(a)pireno e outros 

HPA, estabelecendo valores máximos de 0,018  µgL-1 para águas de classe 1 onde ocorra pesca 

e aquicultura. Nas amostras de FSA houve níveis acima desses limites legais para a maioria dos 

hidrocarbonetos quantificados, inclusive para o benzo(a)pireno, principalmente na amostra 3. 

Alguns estudos também propõe valores de linha de base para águas costeiras tropicais e não 

tropicais estabelecendo quantidades que estão de 0,06 μgL-1 (Zanardi-Lamardo e  Schettini,  

2022) para o primeiro e entre  10 μgL-1 e 500 μgL-1 no segundo (Hook et al, 2020). Assim, tanto 

os dados do presente estudo quanto aqueles da literatura indicam que o óleo foi capaz de causar 

contaminação da água por hidrocarbonetos solubilizados, em concentrações que ultrapassaram 

os limites legais. Além disso, as amostras de FSA analisadas causaram efeito significativo aos 

organismos-teste, desde a concentração de 50%.  

A diversidade de condições e o tipo de óleo além da composição irá refletir na natureza 

e no comportamento da frações aquosas, mesmo as amostras tendo demonstrado, através dos 

marcadores de petróleo, que possuem a mesma fonte de origem, as condições a que eles foram 

expostas variam de um lugar para o outro. As amostras 1 e 2 se encontravam com mais 

sedimento agregado e menos viscosidade, enquanto a amostra 3 tinha maior viscosidade e 

menor presença de sedimento, o que pode gerar uma variação na quantidade dos 

hidrocarbonetos liberados nas frações aquosas. Neste estudo a amostra 3 apresentou tanto a 

maior quantidade de HPA quanto de HA em comparação com as outras amostras avaliadas. 

Outra implicação da presença do óleo, decorre do fato dele ficar preso no sedimento, 

podendo ser ressuspendido e formar frações dissolvidas. Na última vistoria realizada pelo 

IBAMA, em março de 2020, muitas praias ainda apresentavam manchas de óleo vestigiais. A 

retirada destes materiais era em locais de difícil acesso, o que impedia sua retirada completa. 

Sendo o óleo um material resistente, do qual 1 litro pode se espalhar por 10000 m em questão 

de horas, e uma parte desse óleo na forma dissolvida e suscetível ao intemperismo pode 

apresentar risco para os organismos expostos. (Huetteli et al, 2022) 



33 

 

 

No caso do presente estudo, as amostras apresentaram toxicidade sobre o 

desenvolvimento larval de E. lucunter, sendo que a amostra 1 apresentou maior toxicidade 

enquanto a terceira amostra demonstrou menor potencial tóxico para E. lucunter. As três 

amostras de fração solúvel também apresentaram valores relativamente diferentes no total de 

hidrocarbonetos poliaromáticos (THP) e no total de Hidrocarbonetos alifáticos (TA) sendo a 

terceira amostra a apresentar maiores quantidades em relação a todas. Artemia salina 

apresentou sensibilidade ao óleo (amostra 1) em menores concentrações em comparação aos 

embriões de ouriço-do-mar, demonstrando maior sensibilidade pelos parâmetros de análise de 

variância aqui realizados. Apesar disso, a toxicidade para Artemia salina não mostrou valores 

absolutos expressivos de mortalidade, ou seja, mesmo apresentando diferença significativa com 

o controle, a sobrevivência não foi menor que 50% dos indivíduos expostos.   

Alguns trabalhos como o de Andrade et al (2022) avaliaram a sobrevivência de 

copepoditos de Tisbe biminiensis em 9 pontos amostrais em praias pernambucanas. As amostras 

incluíam águas intersticiais e de águas superficiais durante os períodos de mar/21 e out/21 sendo 

a primeira apresentando pontos com maior redução da sobrevivência dos organismos em 

relação à segunda. Estes resultados demonstram a sensibilidade dos organismos ao óleo 

presente nas águas em que ocorreu o derramamento e corroboram com os dados encontrados 

no presente estudo que apresentaram toxicidade para o crustáceo Artemia salina.   

Entre os efeitos que os componentes do óleo podem causar aos invertebrados  marinhos, 

como os crustáceos, e que geram a sua mortalidade, podemos citar a ingestão e/ou adsorção dos 

hidrocarbonetos e acumulação em seus tecidos. Por sua vez, a bioacumulação de 

hidrocarbonetos em crustáceos, como os copépodos, também pode gerar a contaminação de 

larvas de peixes que se alimentam destes organismos. Zhang et al (2022) avaliaram as 

concentrações de HPAs em organismos de uma região estuarina de aquicultura, obtendo 

concentrações entre 68,43 a 536,20 ng g-1 em pepinos do mar. Em crustáceos, as concentrações 

totais de HPAs variaram de 358,95 a 396,46 ng/g. Entre as substâncias mais encontradas 

estavam o fenantreno e o naftaleno, a primeira tendo uma das maiores proporções encontradas 

nas três amostras avaliadas no presente trabalho.  Essas substâncias podem se acumular em 

organismos ao longo da cadeia trófica, assim como causar efeitos tóxicos na biota, como 

observado em Artemia salina e embriões de Echinometra lucunter. 

As múltiplas substâncias que compõem o petróleo e seus derivados torna complexa a 

compreensão sobre os mecanismos de ação que geram a toxicidade do petróleo. Alguns estudos, 

como os descritos na Tabela 6, buscaram avaliar algumas substâncias presentes no petróleo, de 

modo isolado, para entender como se dão tais efeitos. Um dos compostos com maior presença 



34 

 

 

nas amostras avaliadas neste estudo foi o Fenantreno, este pode afetar o crescimento, as taxas 

de gordura corporal e causar atraso na muda em larvas de invertebrados com concentração letal 

de 1,21 mg L-1 e alta taxa de absorção, ás vezes 100% para os Chironomus sancticaroli 

(Richardi et al, 2018) avaliados no experimento. Concentrações mais altas foram encontradas 

na amostra 3 para Fenantreno-Antraceno na solução inicial.  

 

Tabela 6. Estudos sobre toxicidade de frações solúveis de petróleo ou seus derivados, utilizando organismos 

marinhos.  

Organismo Autor, ano 
CL50/CENO-

CEO 
Tipo de óleo 

Tempo de 

exposição 

(h) 

Endpoint 

Artemia 

franciscana 

Philibert et a.l, 

2022 
3.2 μmol/L Fenantreno  Mortalidade 

Gadus morhua 

(peixe) 

Aranguren-

Abadía et al., 

2022 

4,02 e 4,15 

μg/L∑ PAH 

(CL10) 

Petróleo bruto  Mortalidade 

Artemia salina 
Qin et al., 

2022 
0,974 mg/L Fenantreno  Mortallidade 

Tigriopus 

japonicus 

Qin et al., 

2022 
2,126 mg/L Fenantreno  Fertilização 

Litonapaeus 

Vannamei 

Qin et al., 

2022 
0,265 mg/L Fenantreno  Mortalidade 

Acartia Tonsa 
Hafez et al., 

2022 
74%,52%,40% 

IFO100 - óleo 

pesado com óleo 

gasoso 

48, 72, 96 h Mortalidade 

Acartia tonsa 
Hafez et al., 

2022 

100%, 74%, 

52% 
Óleo naftênico 48, 72, 96 h Mortalidade 

Acartia tonsa 
Hafez et al., 

2022 
34%,10%,8% 

MGO -óleo 

combustível 
48, 72, 96 h Mortalidade 

Artema salina Este estudo 5% 
Óleo 

intemperizado 
48 h Mortalidade 

Echinometra 

lucunter 
Este estudo 

100%,10%,10

0% 

Óleo 

intemperizado 
36 h Desenvolvimento 

 

 

Os níveis de contaminação e toxicidade após um acidente podem reduzir ou não, sendo 

específicos em cada caso. Acidentes amplamente estudados, como é o caso da DeepWater 

Horizon, mostram uma recuperação da abundância da macrofauna bentônica (Carassou et al, 

2015) ao longo do tempo. O mesmo pôde ser observado no caso do Hebel Spirit, onde a 

concentração de HPA diminuiu drasticamente após um mês do acidente na Coréia do Sul (Yin 



35 

 

 

et al, 2017). Contudo, foram observados no Golfo do México aumento dos encalhes de 

tartarugas, diminuição da abundância de larvas de peixes pelágicos, e aumento no surgimento 

de lesões cutâneas em peixes demersais (Hook et al, 2020). No caso do acidente com o Exxon 

Valdez, esperava-se uma melhor recuperação da abundância de organismos (Peterson et al, 

2003). Devido à longa exposição dos organismos ao óleo sequestrado do sedimento os efeitos 

tóxicos foram mais persistentes. Já para o caso do navio Prestige os compostos de alto peso 

molecular persistiram por mais de dois anos afetando a saúde de mexilhões que foram 

expostos.(Hook et al, 2020) Os fenômenos envolvendo a toxicidade das frações solúveis de 

óleo em água do mar aos organismos marinhos expostos  envolvem uma complexa dinâmica à 

qual estudos como este auxiliam a entender como os organismos marinhos se comportam 

quando expostos a diferentes tipos de óleo, ajudando a compreender melhor os efeitos causados 

pelos derramamentos.  

Com isso, podemos afirmar que as amostras de petróleo coletadas nas praias nordestinas 

apresentavam quantidades mensuráveis de HPA, predominantemente de alto peso molecular, 

principalmente C2-Pireno-Fluoranteno, C2-Criseno e C1-Pireno-Fluoranteno. Sendo assim, 

registrou-se a presença de compostos reconhecidamente tóxicos associados ao óleo que chegou 

à costa. As frações solúveis em água, obtidas a partir de fragmentos do óleo, apresentaram 

toxicidade para os organismos expostos. Para a amostra a qual foi exposta, Artemia salina 

apresentou toxicidade em menores concentrações em comparação com Echinometra lucunter, 

cuja sensibilidade foi menor quando exposto a amostra 1, tendo diferenças entre as amostras a 

qual não foi possível comparar através da IC50, tendo efeitos majoritariamente observados em 

altas concentrações (50% e 100%), o que condiz com outros exemplos reportados na literatura, 

onde após derramamentos de óleo foram observados efeitos deletérios diversos em 

invertebrados marinhos. Estas diferenças entre as amostras poderiam ser justificadas tanto pela 

presença de materiais não avaliados no presente estudo quanto por diferenças no estado de 

intemperismo, nesse sentido, mais estudos precisam ser realizados para averiguar estas 

questões.  Portanto, conclui-se que o óleo que atingiu as praias brasileiras no ano de 2019 

apresentava condições para contaminar a coluna d’água, pela solubilização de hidrocarbonetos, 

e afeta negativamente as populações de invertebrados marinhos após a exposição às frações 

solúveis deste óleo.  

 

 

 

 



36 

 

 

 

 

  

 

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GARCIA, T.M.; ARAÚJO, J.T.; CAMPOS, C.C.; FERREIRA, S.M.C.; MATTHEWS-

CASCON, H.; FROTA, A.; MONT’ALVERNE, T.C.F.; SILVA, S.T.; RABELO, E.F.; 

BARROSO, C.X.; FREITAS, J.E.P.; MELO JÚNIOR, M.; CAMPELO, R.P.S.; 

SANTANA, C.S.; CARNEIRO, P.B.M.; MEIRELLES, A.J.; SANTOS, B.A.; 



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42 

 

 

ANEXOS 

 

 

Anexo 1. Lei federal nº 5.357/1967  

 
Anexo 2. Lei federal nº 9.966/2000 

 

 

 
 

Anexo 3. Decreto nº60/95 



43 

 

 

 
 

Anexo 4. Decreto nº 2.508/98 

 

 

 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



44 

 

 

 

Anexo 5. Parâmetros físico químicos do teste de desenvolvimento embrio larval de 

Echinometralucunter com a amostra 1.  

Diluição 

(%) 

Salinidade pH OD (mg/L) 

Inicial Final Inicial Final Inicial Final 

100 35 36 8,07 8,10 5,08 4,40 

50 35 37 8,09 8,09 4,79 4,99 

10 35 38 7,82 7,99 5,22 5,52 

1 35 36 8,02 8,14 4,49 4,92 

0,10 35 35 7,78 8,01 5,21 5,31 

0,01 35 35 7,75 8,00 6,11 4,93 

Controle 35 35 8,09 8,31 5,10 4,90 

 

 

Anexo 6. Parâmetros físico químicos do teste de desenvolvimento embrio larval de 

Echinometralucunter com a amostra 2.  

Diluição 

(%) 

Salinidade pH OD (mg/L) 

Inicial Final Inicial Final Inicial Final 

100 35 40 7,84 8,00 5,48 5,80 

50 35 37 7,85 7,94 5,42 5,45 

10 35 35 7,89 7,92 5,69 5,49 

1 35 34 7,92 7,87 4,97 5,46 

0,10 35 35 7,93 7,44 5,38 6,42 

Controle 30 33 7,86 7,86 5,11 5,59 

 

 

 

Anexo 7. Parâmetros físico químicos do teste de desenvolvimento embrio larval de 

Echinometralucunter com a amostra 3.  



45 

 

 

Diluição 

(%) 

Salinidade pH OD (mg/L) 

Inicial Final Inicial Final Inicial Final 

100 35 37 8,34 7,90 5,67 4,81 

50 35 37 8,06 8,12 5,62 5,12 

10 35 37 8,15 8,24 5,80 4,64 

1 35 37 7,86 8,26 5,90 5,01 

0,01 35 37 8,15 8,30 5,98 5,26 

Controle 35 37 8,11 8,17 6,54 6,81 

 

 

 

Anexo 8. Parâmetros fisico químicos do teste de agudo com Artemia salina com a amostra 1 

diluída em 10 vezes (14-16/06/2021) 

Diluição 

(%) 

Salinidade pH OD (mg/L) 

Inicial Final Inicial Final Inicial Final 

100 20 20 7,62 7,11 7,82 7,10 

50 25 30 7,76 7,15 7,43 7,15 

10 35 35 7,68 7,68 7,13 7,23 

1 35 36 7,54 7,54 6,87 7,64 

0,10 35 35 7,45 7,45 8,04 7,56 

Controle 35 37 7,18 7,18 7,18 6,85 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



46