RESSALVA Atendendo solicitação do(a) autor(a), o texto completo desta tese será disponibilizado somente a partir de 06/01/2022. UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JÚLIO DE MESQUITA FILHO” FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E VETERINÁRIAS CÂMPUS DE JABOTICABAL CARACTERIZAÇÃO CITOGENÉTICA E MOLECULAR EM ACESSOS DE CANA-DE-AÇÚCAR (Saccharum spp.) Glêyce de Oliveira Ferreira Bióloga Jaboticabal – SP 2021 UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JÚLIO DE MESQUITA FILHO” FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E VETERINÁRIAS CÂMPUS DE JABOTICABAL CARACTERIZAÇÃO CITOGENÉTICA E MOLECULAR EM ACESSOS DE CANA-DE-AÇÚCAR (Saccharum spp.) Glêyce de Oliveira Ferreira Orientadora: Profa. Dra. Luciana Rossini Pinto Coorientadora: Dra. Maria Natália Guindalini Melloni Tese apresentada à Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias – Unesp, Câmpus de Jaboticabal, como parte das exigências para a obtenção do título de Doutor em Agronomia (Genética e Melhoramento de Plantas). Jaboticabal – SP 2021 F383c Ferreira, Glêyce de Oliveira Caracterização citogenética e molecular em acessos de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) / Glêyce de Oliveira Ferreira. -- Jaboticabal, 2021 101 p. : il., tabs. Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista (Unesp), Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Jaboticabal Orientadora: Luciana Rossini Pinto Coorientadora: Maria Natália Guindalini Melloni 1. Saccharum. 2. Diversidade genética. 3. Estrutura genética. 4. Cromossomos. 5. Citótipos. I. Título. Sistema de geração automática de fichas catalográficas da Unesp. Biblioteca da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Jaboticabal. Dados fornecidos pelo autor(a). Essa ficha não pode ser modificada. DADOS CURRICULARES DO AUTOR GLÊYCE DE OLIVEIRA FERREIRA – nascida em 29 de julho de 1981 na cidade de Trindade, Pernambuco. Em 2009, ingressou na Universidade Estadual de Pernambuco – UPE, Câmpus Petrolina, no Curso de Licenciatura em Ciências Biológicas, graduando-se em julho de 2012. Em setembro de 2010, iniciou estágio na Embrapa Produtos e Mercados – Petrolina/PE, na área de multiplicação de sementes de maracujá. Em outubro de 2012, entrou na equipe do Laboratório de Genética da Embrapa Semiárido como bolsista AT pelo CNPq sob a supervisão do Pesquisador Dr. Antônio Carlos Fernandes Santos. Em março de 2014 ingressou no programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, da Universidade Estadual de Feira de Santana – UEFS, tendo como orientador Dr. Antônio Carlos Fernandes Santos, sendo bolsista CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior) durante o curso. Em agosto de 2017 ingressou no curso de Doutorado em Agronomia (Genética e Melhoramento de Plantas), da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Câmpus de Jaboticabal, tendo como orientadora Dra. Luciana Rossini Pinto, pesquisadora do IAC/APTA – Centro de Cana, sendo bolsista CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior) durante os 3 primeiros anos do curso. Realizou Estágio Docência nas disciplinas Genética Geral do departamento de Biologia no primeiro semestre de 2019 e Doenças das Grandes Culturas do departamento Ciências da Produção Agrícola no segundo semestre de 2020, ambas disciplinas do Curso de Agronomia. “A vontade de vencer é o primeiro passo para a vitória.” À Bianca Carvalho, meu motivo para continuar acreditando que posso ser capaz cada vez mais. Dedico AGRADECIMENTOS A Deus, pelo meu existir... pelas experiências vivenciadas em prol do crescimento espiritual. Obrigada Senhor por me guiar neste mundo, por estar presente nos momentos mais difíceis da caminhada, aqueles momentos os quais penso em desistir e o SENHOR com teu imenso amor estendestes tua mão e me faz levar através de uma palavra amiga, de um ato desconhecido, de um momento involuntário... tudo que eu preciso é enxergar teus sinais e seguir na Fé porque sei que estará sempre a me proteger até de mim mesma. À minha família, minha mãe Maria Raimunda, mulher forte, vibrante, alegre que mesmo diante das adversidades da vida não retrocede, encara e luta, minha força vem de ti. Minha filha Bianca Carvalho, jovem de personalidade forte, carismática e amada por todos, minhas conquistas são para ti. Meu sobrinho Danilo Érikle, jovem determinado, sonhador, realizador, companheiro, o filho que Deus me presenteou. Meus irmãos, em especial José Evamberto que nestes últimos anos tem sido meu apoio nesta caminhada à conclusão do doutorado, sempre presente nos momentos mais difíceis. Meu pai, In memoriam, apesar de não ter sido um pai presente EU TE AMAVA muito, só o fato de ter contribuído para minha existência já é muito gratificante... a distância não permitiu o último abraço. À prima Ariadene Ferreira pela colaboração nas correções ortográficas. Ao meu orientador de mestrado Dr. Carlos Antônio Fernandes Santos, meu alicerce na pesquisa agropecuária, aquele que me incentivou a continuar no caminho do conhecimento e da pesquisa. À minha orientadora de doutorada, Luciana Rossini Pinto, mulher de todas as qualidades, aquela que te acolhe e te incentiva no progredir, amiga de todos e super carismática. À Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias – UNESP, Câmpus de Jaboticabal, pela infraestrutura e curso oferecido. Ao corpo docente do curso de pós-graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, pelo prazer em transmitir seus conhecimentos e nos motivar a seguir nossos sonhos e objetivos de vida como profissionais capacitados pelo conhecimento adquirido. Aos funcionários do curso de pós-graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, pela cordialidade, presteza e satisfação em servir. Aos colegas do curso de pós-graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, pelo companheirismo e parcerias nas atividades acadêmicas. Em especial ao Renato Marchini que muito contribuiu para a execução deste estudo e à Edicleide Macedo que sempre me ajudou em situações particulares e acadêmicas. Esses são amigos preciosos, frutos desta jornada, quero cultivá-los e mantê-los sempre presentes na minha vida. Ao IAC/APTA – Centro de Cana Ribeirão Preto/SP, por toda infraestrutura e insumos disponibilizados para a realização deste estudo. Aos funcionários, bolsistas e colegas pós-graduandos do Laboratório de Biotecnologia do IAC/APTA – Centro de Cana Ribeirão Preto/SP. Em especial à Thaís Monteiro, pela orientação na execução das análises moleculares; à Larissa Andrade, pela orientação na execução das análises citológicas, ao João Manechini, pela orientação na execução da genotipagem no Li-Cor; à Maria Natália Melloni pelas orientação na execução e conclusão das análises; à Lúcia Alves, pela amizade adquirida. Ao Prof. Dr. Mateus Mondin e a técnica de laboratório Silvia Cristina Menuzzo-Molina do Laboratório de Citogenética Molecular de Plantas do Departamento de Genética da ESALQ, pela valiosa orientação sobre o preparo das lâminas citológicas, À Universidade Virtual do Estado de São Paulo – UNIVESP, pela concessão da bolsa no Programa Formação Didático Pedagógico para Cursos de Modalidade a Distância – Facilitador. O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001. SUMÁRIO RESUMO............................................................................................................ iv ABSTRACT........................................................................................................ v CAPÍTULO I – CONSIDERAÇÕES GERAIS..................................................... 1 INTRODUÇÃO................................................................................................... 1 REVISÃO DE LITERATURA.............................................................................. 3 Cana-de-açúcar................................................................................................. 3 Origem e desenvolvimento dos primeiros híbridos....................................... 6 Importância econômica.................................................................................... 8 Poliploidia em cana-de-açúcar........................................................................ 11 Citogenética...................................................................................................... 14 Melhoramento genético em cana-de-açúcar.................................................. 17 Marcadores moleculares.................................................................................. 19 REFERÊNCIAS.................................................................................................. 20 CAPÍTULO II – DIVERSIDADE GENÉTICA E ESTRUTURA GENÉTICA DE ACESSOS DE CANA-DE-AÇÚCAR DO GÊNERO Saccharum USANDO MARCADORES MICROSSATÉLITES (SSR).................................................... 37 RESUMO............................................................................................................ 37 INTRODUÇÃO................................................................................................... 38 MATERIAL E MÉTODOS................................................................................... 40 Material vegetal................................................................................................. 40 Extração e quantificação do DNA.................................................................... 42 Reação de amplificação dos loci de microssatélites..................................... 42 Genotipagem..................................................................................................... 44 Análise de dados............................................................................................... 45 RESULTADOS................................................................................................... 46 Amplificação de alelos..................................................................................... 46 Variabilidade genética e alelos exclusivos..................................................... 48 Análise genética de agrupamentos................................................................. 50 Estrutura genética entre os acessos............................................................... 53 Análise de Variância Molecular (AMOVA)....................................................... 55 DISCUSSÃO...................................................................................................... 56 REFERÊNCIAS………………………………………………………………………. 60 CAPÍTULO III – DETERMINAÇÃO DO NÚMERO CROMOSSÔMICO DE ACESSOS DE S. spontaneum........................................................................................................ 67 RESUMO............................................................................................................ 67 INTRODUÇÃO................................................................................................... 68 MATERIAL E MÉTODOS................................................................................... 70 Material Vegetal................................................................................................. 70 Preparação de lâminas citológicas de cromossomos mitóticos pelo método de coloração de Feulgen..................................................................... 71 Observação de lâminas citológicas e contagem de cromossomos.............. 72 RESULTADOS................................................................................................... 73 DISCUSSÃO...................................................................................................... 78 REFERÊNCIAS.................................................................................................. 79 CONSIDERAÇÕES FINAIS............................................................................... 85 LISTA DE FIGURAS Figura 1. Estágio inicial de brotação e perfilhamento da cana-de-açúcar........... 5 Figura 2. Tolete da cana-de-açúcar.................................................................... 5 Figura 3. Produção de cana-de-açúcar dos quatro principais países produtores do mundo entre os anos de 2015 e 2019............................................................. 9 Figura 4. Produtividade média (t/ha) dos quatro principais países produtores do mundo entre os anos de 2015 e 2019............................................................. 9 Figura 5. Gráficos da variabilidade genética entre os acessos de Saccharum spp. com base nos dados SSR gerados dos 6 grupos predefinidos. ................... 49 Figura 6. Dendrograma obtido pelo método UPGMA, a partir da similaridade de DICE, para os 64 acessos de cana-de-açúcar (rcof. = 0,82)........................... 52 Figura 7. a) Análise do melhor valor de K para os 64 acessos, mostrando que o único valor significativo para a inferência dos agrupamentos está em K=2 (ΔK = 259,76); b) proporções de identidade entre os grupos para cada acesso................................................................................................................. 54 Figura 8. Metáfases mitóticas de acessos de S. spontaneum com diferenças no espalhamento, condensação cromossômica e qualidade das preparações... 73 Figura 9. Células somáticas obtidas de enraizamento de toletes mantidos em casa de vegetação, pré-tratadas com 8-hidroxiquinolina 0,04% durante 24 horas a 4ºC......................................................................................................... 75 Figura 10. Variação do número cromossômico encontrado nos acessos Q47125, Q46127, SES004A e SES220 obtidos do BAG de cana-de-açúcar do IAC/APTA – Centro de Cana Ribeirão Preto/SP.................................................. 76 Figura 11. Metáfases mitóticas de acessos de S. spontaneum pré-tratadas com 8-hidroxiquinolina 0,04% durante 24 horas a 4ºC........................................ 76 Figura 12. Boxplot da dispersão do número cromossômico encontrado nos acessos Q47125, Q46127, SES004A e SES220 obtidos do BAG de cana-de- açúcar do IAC/APTA – Centro de Cana Ribeirão Preto/SP................................. 77 LISTA DE TABELAS Tabela 1. Comparativo de área, produção e produtividade da cana-de-açúcar cultivada nas regiões brasileiras no ano de 2020................................................ 10 Tabela 2. Acessos do BAG do IAC/APTA – Centro de Cana, avaliados com 12 pares de primers de SSR.................................................................................... 41 Tabela 3. Relação dos pares de primers SSR com respectivas temperaturas de anelamento (T. A.), motivos de repetição, sequências forward e reverse (5' a 3'), amplitude dos produtos amplificados (A) em pares de bases (pb).............. 44 Tabela 4. Relação dos 12 pares de primers SSR com número total de alelos (n), estimativas de PIC e diversidade genética (D) analisados em 64 acessos de cana-de-açúcar.............................................................................................. 47 Tabela 5. Conteúdo de informação do polimórfica (PIC) e diversidade genética (D) de 12 pares de iniciadores SSR analisados em 64 acessos de cana-de- açúcar, grupos predefinidos: S. barberi, S. robustum, S. sinense, S. officinarum, Híbr/off e Híbridos Saccharum spp.................................................. 47 Tabela 6. Número de indivíduos amostrados em cada população (n), Número de alelos observados (Na), Número de alelos efetivos (Ne), Diversidade gênica de Nei (h), Índice de diversidade de Shannon (I), Índice de polimorfismo (PI) – Número de loci polimórficos (NPL) e Porcentagem de loci polimórficos (PLP) de 6 grupos predefinidos de cana-de-açúcar...................................................... 48 Tabela 7. Análise de Variância Molecular (AMOVA) dos grupos predefinidos (S. barberi, S. robustum, S. sinense, S. officinarum, Híbr/off e Híbridos Saccharum spp.) e dos grupos inferido pela análise de estrutura........................ 55 Tabela 8. Diferentes concentrações de pré-tratamentos e tempo utilizados para o preparo das lâminas citológicas............................................................... 71 Tabela 9. Valores da contagem do número cromossômico dos acessos de S. spontaneum obtidos do BAG de cana-de-açúcar do IAC/APTA – Centro de Cana Ribeirão Preto/SP...................................................................................... 77 LISTA DE ABREVIAÇÕES 1G – Primeira geração 2G – Segunda geração 3G – Terceira geração 4G – Quarta geração AMOVA – Análise da variância molecular APTA – Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios B.O.D. – Câmara de germinação BAG – Banco Ativo de germoplasma CO2 – Dióxido de carbônico CONAB – Companhia Nacional de Abastecimento CTAB – Brometo de cetiltrimetilamônio CTC – Centro de Tecnologia Canavieira CV – CanaVialis cv – Coeficiente de variação EDTA – Ácido etilenodiamino tetra-acético FAO – Organização das Nações Unidas para a Alimentação e a Agricultura h – Diversidade genética de Nei HCl – Ácido clorídrico I – Índice de Shannon IAC – Instituto Agronômico IRDye – Tinta fluorescente ISSCT – International Society of Sugar Cane Technologists KCl – Cloreto de potássio MCMC – Markov Chain Monte Carlo Na – Alelos observados NaCl – Cloreto de sódio Ne – Número de alelos efetivos NPGS – National Plant Germplasm System NPL – Número de loci polimórficos PCR – Polymerase Chain Reaction PI – Índice de polimorfismo PIC – Conteúdo de Informação de Polimorfismo PLP – Porcentagem de loci polimórficos ppm – Partes por milhão Proálcool – Programa Nacional do Álcool QTL – Quantitative trait locus RIDESA - Rede Interuniversitária para o Desenvolvimento do Setor SUCROALCOOLEIRO RPM – Revolutions per minute SBI – Sugarcane Breeding Institute SC – SugarCane SSR – Simple sequence repeats TBE – Mistura de base T, ácido Bórico e EDTA TE – Mistura de Tris-HCl e EDTA UPGMA – Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Averages USDA – United States Department of Agriculture WCSRG – World Collections of Sugarcane and Related Grasses 𝛷𝑆𝑇 ̂ – Índice de fixação iv CARACTERIZAÇÃO CITOGENÉTICA E MOLECULAR EM ACESSOS DE CANA- DE-AÇÚCAR (Saccharum spp.) RESUMO – A cana-de-açúcar é uma cultura amplamente cultivada em regiões tropicais e subtropicais, de grande importância econômica, principalmente, na produção de açúcar e etanol. O bagaço resultante da moagem da cana é uma importante fonte de energia renovável utilizada na produção de energia elétrica pelas indústrias canavieiras brasileiras com excedente comercializado para complementar a geração hídrica no país. A cana energia é uma cultivar rica em biomassa, obtida de cruzamentos com S. spontaneum, uma espécie selvagem com alta diversidade genética e adaptável com número variável de citótipos na faixa de 2n = 40 – 128. O Programa de Melhoramento Genético de Cana-de-Açúcar do Instituto Agronômico (IAC/APTA) possui Banco Ativo Germoplasma (BAG) de cana-de-açúcar composto por diversos acessos do Complexo Saccharum. O estudo visou à caracterização via marcadores moleculares do tipo microssatélites (SSR) de acessos do germoplasma básico de cana-de-açúcar e avaliação do número cromossômico de acessos de S. spontaneum. Doze pares de primers de SSR foram utilizados para estabelecer o perfil molecular e avaliar a estrutura populacional e a diversidade genética entre 64 acessos de cana-de-açúcar. Os dados obtidos foram avaliados por meio de metodologias baseadas em distâncias genéticas e modelos probabilísticos, índices de diversidade genética obtidos pelo programa POPGENE versão 1.32, além das estimativas de similaridade genética entre os acessos, a análise de estrutura populacional obtidas pelos programas Structure v.2.3.4 e Structure Harvester. Raízes com aproximadamente 1cm de comprimento foram coletadas para confecção de lâminas citológicas aplicando o método de coloração de Feulgen para contagem de cromossomos em metáfases e investigar a presença de citótipos de quatro acessos de S. spontaneum. Os dados obtidos da contagem dos cromossomos foram avaliados por meio dos parâmetros: média, moda, desvio padrão, coeficiente de variação e gráfico Boxplot usado para avaliar a dispersão da contagem do número de cromossomos dos acessos de S. spontaneum. Todos os marcadores foram considerados informativos de acordo com seu valor de PIC, a análise estrutural da população e de similaridade revelou a formação de dois grupos e a contagem de cromossomos revelou a presença de três citótipos. Os resultados obtidos contribuirão para o manejo, conservação e utilização do germoplasma em programas de melhoramento genético de cana-de-açúcar para o desenvolvimento de cultivares melhoradas que atendam à necessidade do produtor e do consumidor, a exemplo da cana energia. Palavras-chave: Saccharum, cromossomos, citótipos, SSR. v CYTOGENETIC AND MOLECULAR CHARACTERIZATION OF SUGARCANE ACCESSIONS (Saccharum spp.) ABSTRACT – Sugarcane crop is widely grown in tropical and subtropical regions, and has a great economic importance, mainly in sugar and ethanol production. The bagasse resulting from the sugarcane crushing is an important source of renewable energy used in the production of electric energy by the Brazilian sugarcane industries with surplus commercialized to complement the hydro generation in the country. Energy cane is a cultivar rich in biomass, obtained from crosses with S. spontaneum, a highly diverse and adaptable wild species with a variable number of cytotypes ranging from 2n = 40 – 128. The Sugarcane Genetic Breeding Program of the Agronomic Institute (IAC/APTA) has an Active Germplasm Bank (BAG) of sugarcane composed of several accessions of the Saccharum Complex. The study aimed the characterization of basic sugarcane germplasm accessions via microsatellite molecular markers (SSR) and the evaluation of the chromosome number of S. spontaneum accessions. Twelve SSR primer pairs were used to establish the molecular profile, genetic diversity and population structure among 64 sugarcane accessions. The data were evaluated using methodologies based on genetic distances and probabilistic models, genetic diversity indexes obtained by using the POPGENE version 1.32 software in addition to the genetic similarity estimates between accessions, analysis of population structure obtained by the Structure v.2.3.4 and Structure Harvester software. Roots of approximately 1cm length were collected for cytological slides confection using the Feulgen staining method for chromosome counting in metaphase and cytotype definition of four S. spontaneum accessions. The data from the chromosome count was evaluated using the parameters: mean, mode, standard deviation, coefficient of variation and Boxplot graphics applied to evaluate the dispersion of the chromosome number couting of S. spontaneum accessions. All markers were considered informative according to their PIC value, the population structure analysis and similarity revealed the formation of two groups and the chromosome count the presence of three cytotypes. The results will contribute to the management, conservation and use of germplasm in sugarcane genetic breeding programs for the development of improved cultivars that meet the needs of producers and consumers, such as energy cane. Keywords: Saccharum, chromosomes, cytotypes, SSR. 1 CARACTERIZAÇÃO CITOGENÉTICA E MOLECULAR EM ACESSOS DE CANA- DE-AÇÚCAR (Saccharum spp.) CAPÍTULO I - CONSIDERAÇÕES GERAIS INTRODUÇÃO A cana-de-açúcar pertence ao gênero Saccharum da família Poaceae. O gênero Saccharum é composto de seis espécies: S. officinarum, S. spontaneum, S. robustum, S. sinense, S. barberi e S. edule. As cultivares atuais originaram-se de hibridações interespecíficas, principalmente, entre as espécies de S. officinarum, espécie rica em sacarose e denominada de “cana nobre” e S. spontaneum, espécie selvagem com baixo teor de sacarose, rica em fibra e resistente a estresses bióticos e abióticos da época, (DANIELS; ROACH, 1987; D'HONT et al., 1996). Os primeiros híbridos interespecíficos foram retrocruzados com acessos de S. officinarum (parental recorrente) para recuperação dos teores de sacarose num processo denominado de nobilização (STEVENSON, 1965; ROACH,1971). O fato de os híbridos interespecíficos terem herdado a totalidade do genoma de S. officinarum proporcionou as cultivares atuais de cana-de-açúcar número cromossômico variando de 2n = 100 a 130 (PREMACHANDRAN et al., 2011), resultando também em uma base genética estreita de cultivares de cana-de-açúcar (LIMA et al., 2002). A cana-de-açúcar é uma cultura de grande importância econômica, cultivada amplamente em regiões tropicais e subtropicais, principalmente para produção de açúcar e recentemente para produção de biocombustíveis. Como uma planta C4, a cana-de-açúcar possui alta taxa fotossintética, capaz de converter boa parte da energia solar em energia química (ARAGÓN et al., 2009; MARAFON, 2012). A biomassa, resíduo da produção de açúcar e etanol, é uma importante fonte de energia renovável utilizada para produção de energia elétrica pelas indústrias canavieiras brasileiras, parte da energia gerada é comercializada para complementar a geração hídrica no país (RAMOS; NACHILUK, 2017). Outros subprodutos são produzidos a partir da cana-de-açúcar, estes incluem açúcar refinado, açúcar bruto, melaço, álcool, rum, fermento, bagaço, xaropes, cera bruta e glicose (ALLEN et al., 1997). 2 Os programas de melhoramento genético de cana-de-açúcar têm investido no desenvolvimento de cultivares ricas em biomassa, as cultivares de cana energia. Tais cultivares têm sido desenvolvidas por cruzamentos entre cultivares comerciais e acessos de germoplasma básico de cana-de-açúcar, mais especificamente S. spontaneum. Esta espécie selvagem é altamente polimórfica e adaptável, com mais de 30 citótipos na faixa de 2n = 40 – 128 (PRANEETHA; NAIR, 2005; MUKHERJEE, 1950). Apesar da base genética relativamente estreita de Saccharum spp., a diversidade genética existente entre os diferentes acessos dentro do Complexo Saccharum permite a exploração de sua base genética afim de identificar genes de interesse no melhoramento genético de cana-de-açúcar. Os marcadores moleculares são de grande importância no melhoramento genético de plantas, pois eles auxiliam os melhoristas na seleção de genótipos superiores aumentando a eficácia e rapidez no processo de melhoramento (BRAMMER, 2000). A citogenética também tem um papel importante em programas de melhoramento, uma vez que permitem análises como o padrão de transmissão dos cromossomos na introgressão do genoma selvagem em Saccharum e à identificação de materiais euplóides citologicamente estáveis e preferíveis para uma utilização efetiva (SUGAYA et al., 2012). Portanto, a caracterização citogenética e molecular realizada em bancos de germoplasma são de grande importância para a obtenção de novas cultivares, os dados obtidos dessas análises permitem uma melhor gestão do BAG (Banco Ativo de Germoplasma), possibilitando o melhorista escolher genótipos com características de interesse para a obtenção da cultivar desejada. O programa de melhoramento genético de cana-de-açúcar do Instituto Agronômico (IAC/APTA), iniciou em 2010 a importação de germoplasma básico de cana-de-açúcar, provenientes, em sua maioria, da Coleção Mundial de Germoplasma de Cana-de-Açúcar e Gramíneas, situado em Miami, Flórida, Estados Unidos. Marcadores moleculares do tipo microssatélites (SSR) estão sendo utilizados para estabelecer o perfil molecular (fingerprint) destes acessos, como também quantificar os níveis da variabilidade genética do BAG, identificar acessos duplicados e estabelecer coleções nucleares, permitindo uma gestão eficiente do banco (MANECHINI et al., 2018; MARCHINI, 2019). Além do estudo com marcadores moleculares, análises citogenéticas como contagem do número de cromossomos dos 3 acessos estão sendo realizadas, as quais permitirão determinar os citótipos dos acessos de Saccharum spontaneum (MELLONI et al., 2016). Nesse contexto, o presente estudo visa à continuidade da caracterização citogenética e molecular de acessos do BAG de cana-de-açúcar do IAC/APTA – Centro de Cana, por meio da contagem cromossômica e genotipagem, estabelecendo citótipos e perfil molecular (fingerprint) para auxiliar programas de melhoramento de cana-de-açúcar em futuros cruzamentos que visem a introgressão genética para obtenção de cultivares superiores, principalmente aquelas ricas em biomassa. 20 REFERÊNCIAS ABBAS, S. R.; GARDAZI, S. D. A.; IQBAL, M. Z.; KHAN, M. Y.; BATOOL, A.; ABBAS, M. R.; SHAZAD, S.; KHAN, A. M.; SHAH, S. H. Characterization of twenty-six genotypes of sugarcane using SSR markers. International Journal of Scientific & Engineering Research, V. 4 (7), p. 1002-1007, 2013. 21 ABDULLAH, B.; MUHAMMAD, S. A. F. S.; SHOKRAVI, Z.; ISMAIL, S.; KASSIM, K. A.; MAHMOOD, A. N.; AZIZ, M. M. A. Fourth generation biofuel: A review on risks and mitigation strategies. 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