RESSALVA Atendendo solicitação do(a) autor(a), o texto completo desta tese será disponibilizado somente a partir de 30/08/2026. UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA – UNESP CÂMPUS DE JABOTICABAL USO DE ADITIVOS FUNCIONAIS PARA CONTROLE DE FRANCISELOSE EM TILÁPIA Oreochromis niloticus (L.) Elielma Lima de Sousa Bióloga 2024 1 UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA – UNESP CÂMPUS DE JABOTICABAL USO DE ADITIVOS FUNCIONAIS PARA CONTROLE DE FRANCISELOSE EM TILÁPIA Oreochromis niloticus (L.) Discente: Elielma Lima de Sousa Orientadora: Fabiana Pilarski Co-orientador: Giovani Sampaio Gonçalves Tese apresentada à Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias – Unesp, Câmpus de Jaboticabal, como parte das exigências para a obtenção do título de Doutora em Microbiologia Agropecuária. 2024 S725u Sousa, Elielma Lima de Uso de aditivos funcionais para controle de franciselose em tilápia Oreochromis niloticus (L.) / Elielma Lima de Sousa. -- Jaboticabal, 2024 80 p. : tabs., fotos Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista (UNESP), Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Jaboticabal Orientadora: Fabiana Pilarski Coorientador: Giovani Sampaio Gonçalves 1. Fitoativos. 2. Imunomoduladores. 3. Planta. 4. Saúde. 5. Suplementação dietética. I. Título. Sistema de geração automática de fichas catalográficas da Unesp. Dados fornecidos pelo autor(a). DADOS CURRICULARES DO AUTOR Elielma Lima de Sousa – nascida em São Luis, Estado do Maranhão. Ingressou no Curso de Ciências Biológicas (Licenciatura e Bacharelado) em 2011 na Universidade Estadual do Maranhão– Câmpus Paulo VI, obtendo o título de bióloga em 2017. Possui Graduação com período sanduiche de 1 ano e 4 meses (2013- 2014) na Universidade de Alberta, Canadá. Como estudante de graduação realizou intercambio de idioma na Argentina financiado pela Fundação de Amparo a Pesquisa do Maranhão (FAPEMA). A vida acadêmica cientifica como pesquisador teve início no segundo ano de graduação (2012) quando executou o primeiro trabalho de Iniciação cientifica (2012-2013), onde pesquisou “Biomarcadores comportamentais associados aos aspectos reprodutivos de Colossoma macropomum da APA do Maracanã, São Luís-MA”. Após este trabalho tornou-se bolsista de Incitação cientifica por mais dois anos (2015-2017) atuando em pesquisas com ensaios ecotoxicológicos para avaliação da qualidade ambiental. Os trabalhos de pesquisa desenvolvidos resultaram em artigos e resumos apresentados e publicados em anais de eventos científicos locais e internacionais. Participou como membro da comissão organizadora de eventos científicos. Realizou três estágios extracurriculares. O primeiro deles foi realizado no Laboratório de Microbiologia de Alimentos e Água da UEMA, desenvolvendo atividades de investigação sobre qualidade microbiológica da água e alimentos. Posteriormente, durante o período sanduiche em Universidade Canadense, estagiou no Laboratório do Departamento de Ciências Biológicas da Universidade de Alberta, nesse trabalhou com pesquisas na área de toxicologia ambiental. Cursou mestrado de 2018 a 2020 no programa de Pós-graduação em Microbiologia Agropecuária na Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” – FCAV – Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (Câmpus Jaboticabal). Ingressou no curso de doutorado em agosto de 2020, no programa de Pós-graduação em Microbiologia Agropecuária na Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” – FCAV – Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (Câmpus Jaboticabal). AGRADECIMENTOS Gratidão a Deus pela minha existência e pelas experiências vividas. À minha família, especialmente aos meus amados pais Maria Nivia e Pedro, minha irmã e o Diego, pelo apoio, amor e confiança. Agradeço a Professora. Dra. Fabiana Pilarski pela oportunidade de fazer parte de seu grupo de pesquisa, por ter acreditado e confiado no meu trabalho. Obrigada pela orientação e por fazer parte da construção de minha formação profissional. Agradeço ao Dr. Giovani Gonçalves pela co-orientação, suporte e disponibilidade de tempo sempre apresentada de muito bom grado em todos os momentos que necessitei. Aos professores membros da banca examinadora pelo seu tempo e contribuição. Aos colegas do Laboratório de Microbiologia e Parasitologia de Organismos Aquáticos (LaPOA) por toda ajuda, pelo apoio e suporte técnico. Ao Instituto de Pesca de São José do Rio Preto, em especial ao Miguel por todo apoio e suporte no desenvolvimento dos experimentos. A Prevet – Sanidade Aquicola, em especial a Andressa e o Breno que ajudaram tornar esse trabalho ser possível. Ao Programa de Pós-graduação em Microbiologia Agropecuária e a Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias – FCAV/Unesp. À PHIBRO Animal Health Corporation® pelo apoio e condução desta pesquisa. À (CAPES) pela bolsa de estudos. O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001. Aos funcionários do Centro de Aquicultura da Unesp (CAUNESP). E a todas as pessoas que de alguma forma contribuíram para a conclusão deste trabalho. Obrigada a todos! i SUMÁRIO Página RESUMO............................................................................................................. iiv ABSTRACT .......................................................................................................... iv CAPITULO 1 – Considerações gerais ...................................................................6 1. INTRODUÇÃO ..................................................................................................6 2. REVISÃO DA LITERATURA .............................................................................7 2.1 Aquicultura Mundial ......................................................................................7 2.2 Aquicultura brasileira: Crescimento x Desafios ...........................................8 2.3 Sistema imunológico dos peixes ............................................................... 10 2.4 Bacterioses na Produção de Tilápia .......................................................... 13 2.5 Franciselose em tilápia do Nilo .................................................................. 15 2.6 Uso de antimicrobianos no Controle de Bacterioses .................................. 16 2.7 Aditivos ...................................................................................................... 19 REFERÊNCIAS ................................................................................................... 23 CAPÍTULO 2 – Plant derived feed additive improves immune response and resistance to Francisella orientalis in Nile tilapia ................................................. 34 Abstract ............................................................................................................... 34 1.INTRODUCTION .............................................................................................. 36 2.MATERIAL AND METHODS ............................................................................ 37 2,1 Animals, additives, and bacterial strain ...................................................... 37 2.2 Growth condions of F. orientalis ................................................................. 38 2.3 Diet preparation .......................................................................................... 38 2.4 Experimental design ................................................................................... 39 2.5 Biochemical and immunological analysis ................................................... 40 2.6 Bacterial challenge ..................................................................................... 41 ii 2.7 Histopathological assessment .................................................................... 41 2.8 Bacterial re-isolation ................................................................................... 42 2.9 Statistical analysis ...................................................................................... 42 3.RESULTS ......................................................................................................... 42 3.1 Biochemical and Immunological analysis ................................................... 42 3.2 Survival after F. orientalis infection ............................................................. 44 3.3 Histopathological findings .......................................................................... 46 3.4 Bacterial recovery of F. orientalis in surviving fish ...................................... 47 4. DISCUSSION .................................................................................................. 47 5. CONCLUSIONS .............................................................................................. 54 REFERENCES .................................................................................................... 54 CAPITULO 3 - Efeitos da suplementação dietética com Y. schidigera e Q. saponaria no desempenho produtivo e saúde de tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus) .... 59 Resumo ............................................................................................................... 59 1. INTRODUÇÃO ................................................................................................ 59 2. MATERIAL E MÉTODOS ................................................................................ 61 2.1 Aquisição dos Peixes ................................................................................. 61 2.2. Condições experimentais .......................................................................... 61 2.3 Dietas e Delineamento Experimental ......................................................... 62 2.4 Desempenho produtivo .............................................................................. 63 2.5 Análise hematológica, bioquímica e imunológica ....................................... 64 2.6 Análise histológica ...................................................................................... 65 2.7 Análise estatistica ....................................................................................... 65 3. RESULTADOS E DISCUSSÃO ....................................................................... 66 3.1 Desempenho produtivo .............................................................................. 66 3.2 Análise hematológica, bioquímica e imunológica ....................................... 66 iii 3.3 Alterações histológicas ............................................................................... 66 4. DISCUSSÃO: .................................................................................................. 70 REFERÊNCIAS: .................................................................................................. 75 iv USO DE ADITIVOS FUNCIONAIS PARA CONTROLE DE FRANCISELOSE EM TILÁPIA Oreochromis niloticus (L.) RESUMO - A busca pelo controle e prevenção de franciselose em tilápia é uma prática importante para uma produção economicamente viável. Os aditivos funcionais têm sido cada vez mais explorados na aquicultura como alternativas mais seguras e sustentáveis para promover a saúde dos peixes e aumentar sua resistência a doenças. Fitoativos como imunomoduladores são frequentemente utilizados para manter a saúde dos peixes e prevenir doenças bacterianas. Sendo assim, uma alternativa que pode garantir a saúde dos peixes, a segurança alimentar e a sustentabilidade da produção aquícola. O objetivo nesta pesquisa foi avaliar os efeitos da suplementação alimentar com aditivos na resistência da tilápia do nilo à franciselose. Diferentes doses de yucca e quillaja combinadas (2g/kg e 1g/kg), extrato de quillaja (0,5g/kg) e um produto à base de levedura (3g/kg) foram examinadas como aditivos alimentares quanto à sua influência na saúde e na resistência de tilápia a infecção causada por francisella orientalis. O estudo consistiu em experimentos de 30, 60 e 90 dias de suplementação dietética onde as tilápias foram alimentadas com uma dieta basal suplementada com aditivos. Após sessenta dias de alimentação suplementada, os aditivos influenciaram a concentração de proteína total e globulina. As taxas de sobrevivência foram significativamente maiores que as do controle no grupo alimentado com extrato de quillaja. Consequentemente, a sobrevivência em resposta à infecção foi marcadamente maior nos peixes que receberam aditivos em comparação com o grupo de controle. O uso de saponinas por mais 60 dias pode gerar danos a atividade respiratória dos leucócitos. Estas descobertas implicam que os aditivos funcionais têm o potencial de melhorar o sistema imunológico e melhorar a sobrevivência contra a infecção por franciselose, particularmente na suplementação dietética por 60 dias. Palavras-chave: Fitoativos, imunomoduladores, planta, saúde, sobrevivência, suplementação dietética v USE OF FUNCTIONAL ADDITIVES TO CONTROL FRANCISELLOSIS IN TILAPIA Oreochromis niloticus (L.) ABSTRACT - The quest for controlling and preventing francisellosis in tilapia is an important practice for economically viable production. Nutritional additives have increasingly been explored in aquaculture as safer and more sustainable alternatives to promote fish health and enhance their resistance to diseases. Phytoactives such as immunomodulators are often used to maintain fish health and prevent bacterial diseases. It is an alternative that can ensure fish health, food safety, and aquaculture production sustainability. The aim of this research was to evaluate the effects of dietary supplementation with additives on Nile tilapia resistance to francisellosis. Different doses of saponin (2g/Kg and 1g/Kg), Quillaja extract (0.5 g/Kg), and a yeast-based product (3kg/ton) were examined as feed additives regarding their influence on the survival of tilapia challenged with Francisella orientalis (Fo). The study consisted of two experiments where tilapia were fed a basal diet mixed with feed additives; the first lasting for 60 days and the second extended to 90 days of dietary supplementation. After sixty days of supplemented feeding, the additives influenced the concentration of total protein, globulin, and the innate immune system response. Survival rates were significantly higher than those of the control in the group fed with Quillaja extract. Consequently, survival in response to infection was markedly higher in fish receiving additives compared to the control group. The use of saponins for long time can cause damage to the respiratory activity of leukocytes. These findings imply that food additives have the potential to enhance the immune system and improve survival against francisellosis infection, particularly in 60-day dietary supplementation. KeyWords: Dietary supplementation, health, phytoactives, plant, survival vi 6 Capítulo 1 – Considerações gerais 1. INTRODUÇÃO A tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) é uma das espécies mais proeminentes na aquicultura, sendo cultivada em diversas regiões do mundo devido à sua adaptabilidade, crescimento rápido e carne de alta qualidade (Munguti et al., 2022). No entanto, a aquicultura enfrenta desafios sanitários que prejudicam a produtividade desses peixes. A franciselose, causada pela bactéria Francisella, é uma doença que afeta diversas espécies de peixes, incluindo a tilápia do Nilo. A disseminação da franciselose tem gerado crescente preocupação, uma vez que pode levar a sérios impactos econômicos nas operações aquícolas (Soto et al., 2009; Leal et al., 2014). O controle de doenças na aquicultura desempenha um papel crucial na manutenção da saúde e na sustentabilidade dos sistemas aquícolas. As infecções bacterianas representam uma ameaça significativa para os peixes cultivados (Teixeira-Alves et al., 2020; Ferreira et al., 2021;Bouwmeester et al., 2022). A importância desse controle consiste não apenas na proteção da saúde dos peixes, mas também na preservação do equilíbrio ecológico dos ecossistemas aquáticos. As bacterioses podem se espalhar rapidamente em ambientes de cultivo, afetando negativamente a qualidade da água, a eficiência do crescimento dos peixes e rentabilidade da produção aquícola (Chiew et al., 2019; Mzula et al., 2021). A prevenção e o controle das bacterioses na aquicultura contribuem para a minimização do uso de antibióticos, uma prática que pode levar ao desenvolvimento de resistência bacteriana. A resistência bacteriana e produção de residuos representam uma ameaça global à saúde pública e ambiental, destacando a importância de estratégias sustentáveis de controle de doenças na aquicultura (Assane et al., 2019; Assane et al., 2022). Técnicas de controle de bacterioses na aquicultura incluem medidas de biossegurança, práticas de manejo adequadas, uso responsável de agentes antimicrobianos e implementação de estratégias de vacinação (Freitas et al., 2020; 7 Scarfe et al., 2020. Além disso, a promoção da saúde dos peixes atravez do uso de aditivos pode fortalecer a resistência natural dos peixes contra patógenos bacterianos (Fazlolahzadeh et al., 2011; Harikrishnan et al., 2011). Portanto, é essencial compreender e desenvolver estratégias eficazes para controlar a franciselose, a fim de garantir a sustentabilidade da produção de tilápia. O uso de aditivos alimentares pode ajudar a garantir a produção de peixes saudáveis, minimizando riscos na cadeia produtiva. Nesse contexto, o objetivo nesta pesquisa foi avaliar os efeitos da inclusão de aditivos na alimentação de tilápia do Nilo para o controle da franciselose. 75 AGRADECIMENTOS À Coordenação de Aperfeiçoamento Pessoal de Nível Superior – Brasil (CAPES) pela bolsa de estudos - Código de Financiamento 001. REFERÊNCIAS: Abdel-Tawwab M, Mounes HA, Shady SH, Ahmed KM (2021) Effects of Yucca, Yucca schidigera, extract and/or yeast, Saccharomyces cerevisiae, as water additives on growth, biochemical, and antioxidants/oxidant biomarkers of Nile tilapia, Oreochromis niloticus. Aquaculture 533: 736122. Álvarez F, Illera JC, Redondo LM (2012) Effect of dietary Yucca schidigera supplementation on productive performance and egg quality of laying hens. Animal Feed Science and Technology 177: 181-186. Amillano-Cisneros JM et al. (2023) Prebiotics in global and Mexican fish aquaculture: A review. Animals 13: 3607. Amoah YT, Reddy AVB, Lee S, Bae J, Won S, Seong M, Bai SC (2017) Evaluation of different dietary additives based on growth performance, innate immunity and disease resistance in juvenile Amur catfish, Silurus asotus. International Aquatic Research 9: 351–360. Angeles IJ, Gallego LM, Navarro MAM, Chien YH (2017) Dietary effects of Quillaja saponaria and Yucca schidigera extract on rearing performance of Nile tilapia Oreochromis niloticus L. and its antioxidant capacity and metabolic response following hypoxic stress. International Journal of Agricultural Technology 13: 2249–2266. Baruah K, Pal AK (2020) Yucca schidigera extract in aquafeed: A promising natural feed additive for sustainable aquaculture. Aquaculture 528: 735567. 76 Bernet D, Schmid H, Meier W, Burkhardt-Holm P, Wahl T (1999) Histopathology in fish: proposal for a protocol to assess aquatic pollution. Journal of Fish Diseases 25-34. Borges SB, Geyer CK, Zuanon JÁ (2010) Effects of Quillaja saponaria saponins on the respiratory burst activity of leukocytes in fish. Journal of Fish Biology 76: 788- 800. Calderón K, Zúñiga-Hansen ME, Almara S et al. (2021) The utilization of Yucca schidigera extract as a feed additive in aquaculture: A review. Aquaculture Reports 21: 100910. Cheeke PR (1995) Endogenous toxins and mycotoxins in forage grasses and their effects on livestock. Journal of Animal Science 73: 909-918. Chen W, AI QH, Mai KS, Xu W, Liufu ZG, Zhang WB, Cai YH (2011) Effects of dietary soybean saponins on feed intake, growth performance, digestibility and intestinal structure in juvenile Japanese flounder (Paralichthys olivaceus). Aquaculture 318: 95–100. Citarasu, T. Herbal biomedicines: a new opportunity for aquaculture industry. Aquaculture International, v. 18, p. 403–414, 2010. Coutteau P, Van Halteren A, Ceulemans S (2011) Botanical extracts improve productivity of shrimp, Pangasius. Global Aquaculture Advocate 2011: 90-92. Dai Z et al. *2023) Comparison of the effects of Yucca saponin, Yucca schidigera, and Quillaja saponaria on growth performance, immunity, antioxidant capability, and intestinal flora in broilers. Animals 13: 1447. Dawood MAO et al. (2020) Interaction effects of dietary supplements of Aspergillus oryzae extract and β-glucan on growth, immune response, and resistance of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) against Streptococcus iniae. Aquaculture 519: 734917. 77 Dawood MAO et al. (2021) The regulatory roles of Yucca extract on the growth rate, hepato-renal function, histopathological alterations, and immune-related genes in common carp exposed to acute ammonia stress. Aquaculture 534: 736287. De Mesquita EDFM, Andrade FA (2021) Probiotics and Prebiotics in Fish Aquaculture. Probiotics and prebiotics in foods 263. Dutta HM (1996) A composite approach for evaluation of the effects of pesticides on fish. In: MUNSHI JSD, DUTTA HM (Eds.). Fish Morphology. Science Publishers Inc., 1996. ElbialY ZI et al. (2021) Exploring the multimodal role of Yucca schidigera extract in protection against chronic ammonia exposure targeting: Growth, metabolic, stress and inflammatory responses in Nile tilapia (Oreochromis niloticus L.). Animals 11, : 2072. Elkaradawy A, Abdel-Rahim MM, Mohamed RA (2022) Quillaja saponaria and/or linseed oil improved growth performance, water quality, welfare profile and immune- oxidative status of Nile tilapia, Oreochromis niloticus fingerlings. Aquaculture Research 53: 576-589. El-Keredy MSA, Naena NAA (2020) Yucca plant as treatment for Pseudomonas aeruginosa infection in Nile tilapia farms with emphasis on its effect on growth performance. Alexandria Journal of Veterinary Sciences 66: 64. Ellis AE (1990) Lysozyme assays. In: Stolen JS, Fletcher TC, Anderson DP, Robertson BS, Van Muiswinkel WB (Ed.). Techniques in Fish Immunology. [S.l.]: SOS Publications, p. 101-103. (Fish Immunology Technical Communications, 1). Fayed WM et al. (2019) Estimating the effective level of Yucca schidigera extract for improvement of the survival, haematological parameters, immunological responses and water quality of European seabass juveniles (Dicentrarchus labrax). Aquaculture Reports 15: 100208. 78 Francis G, Makkar HPS, Becker K (2001) Antinutritional factors present in plant- derived alternate fish feed ingredients and their effects in fish. Aquaculture 199: 197–227. Francis G, Makkar HPS, Becker K (2002) Dietary supplementation with a Quillaja saponin mixture improves growth performance and metabolic efficiency in common carp. Aquaculture 203: 311–320. Gannam AL et al. (2020) Dietary administration of β-glucan and glutamine improves the immune responses and resistance of Nile tilapia, Oreochromis niloticus against Aeromonas hydrophila. Fish & Shellfish Immunology 101: 202-209. Güroy B, Mantoğlu S, Kayali S, Şahin İ (2014) Effect of dietary Yucca schidigera extract on growth, total ammonia-nitrogen excretion and haematological parameters of juvenile striped catfish Pangasianodon hypophthalmus. Aquaculture Research 45: 647–654. Hai NV (2015) The use of medicinal plants as immunostimulants in aquaculture: A review. Aquaculture 446: 88-96. Jia J, Wang X, Zhang Y (2005) Effects of Yucca schidigera on liver function and enzyme activity in fish. Fish Physiology and Biochemistry 31: 215-224. kumar S, Patel T, Roy A (2008) Saponin-mediated modulation of liver enzyme activities in aquatic species. Aquaculture Research 37: 476-485. Lara-Flores M, Olvera-Novoa MA, Guzmán-Méndez BE, López-Madrid W (2003) Use of Yucca schidigera extract in aquaculture. Aquaculture Research 34: 867-876. Li Z et al. (2019) Effects of Yucca schidigera extract on growth performance, intestinal immune function, and gut microbiota of channel catfish (Ictalurus punctatus). Fish & Shellfish Immunology 93: 883-889. Montoya-Rodríguez A et al. (2020) Yucca schidigera and its uses in human and veterinary medicine. Journal of Ethnopharmacology 254: 112718. 79 Nakahara K, Nakaoka H, Nishida H (2005) Modulatory effects of saponins on phagocytic activity in teleost fish. Fish & Shellfish Immunology 18: 163-175. Njagi GW et al. (2017) Effects of dietary Yucca meal on growth, haematology, non- specific immune responses, and disease resistance of juvenile Nile tilapia (Oreochromis niloticus Linnaeus, 1758). Aquaculture Research 48: 4399–4408. Osti GM et al. (2020) Effects of dietary Yucca schidigera on growth performance, immune response and some haematological parameters in common carp (Cyprinus carpio L.). Aquaculture Nutrition 26: 260-271. Pal AK et al. (2018) Yucca schidigera extract modulates the expression of stress- associated genes and enhances growth and immune response in rohu (Labeo rohita Hamilton). Fish & Shellfish Immunology 77: 351-358. Reham AA, Mounes HAM, Ahmed KM (2019) Use of humic acid and Yucca extract as a benefactor on water quality and their impact on some hematological and histological parameters of Oreochromis niloticus. Egyptian Journal of Aquatic Biology and Fisheries 22: 447–460. Riche M et al. (2013) Effects of feeding Yucca schidigera to brook trout (Salvelinus fontinalis) on growth performance, nutrient digestibility, intestinal morphology, and faecal and body microflora. Aquaculture Nutrition 19: 548-560. Rodriguez-Estrada U et al. (2018) Yucca schidigera extract enhances growth and stress tolerance via oxidative status and non-specific immune response of juvenile red sea bream (Pagrus major). Aquaculture 483: 97-104. Shao Y, Zhang H, Lu Y (2015) Adaptation of liver enzyme activities in fish fed long- term dietary supplements. Aquaculture Nutrition 21: 556-564. Wang W et al. (2018) Effects of dietary nucleotides supplementation on growth performance, immune responses and intestinal structure of juvenile turbot (Scophthalmus maximus L.). Fish & Shellfish Immunology 82: 332-340. 80 Wang J et al. (2019) Effects of dietary saponins on non-specific immune responses, growth performance, digestive enzyme activities and the intestinal structure of juvenile golden pompano (Trachinotus ovatus). Fish & Shellfish Immunology 89, : 591-598. Xie S et al. (2017) Effects of dietary saponins from Quillaja saponaria on the growth, feed utilization, body composition, and liver histology of juvenile turbot (Scophthalmus maximus L.). Aquaculture 479: 196–202. Yuji-Sado R, Raulino-Domanski F, Freitas PFD, Baioco-Sales F (2015) Crecimiento, estado inmunológico y morfología intestinal de la tilapia del Nilo alimentadas con prebióticos (Mananoligosacáridos-MOS) en la dieta. Latin American Journal of Aquatic Research 43: 944-952. Zhou CX et al. (2018) Effects of dietary saponin on growth, non-specific immune responses, and resistance against Vibrio alginolyticus of juvenile sea cucumber (Apostichopus japonicus). Aquaculture 491: 259–265.