1 UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JÚLIO DE MESQUITA FILHO” FACULDADE DE MEDICINA Fabiane Valentini Francisqueti Inter-relação do Gama- orizanol e ativação dos receptores Adipo- R1 e Adipo- R2: possível efeito na melhora da função renal associada à obesidade Tese apresentada à Faculdade de Medicina, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Campus de Botucatu, para obtenção do título de Doutora em Patologia. Orientadora: Profa. Dra. Camila Renata Corrêa Coorientador: Prof. Dr. Igor Otávio Minatel Botucatu 2018 2 Fabiane Valentini Francisqueti Inter-relação do Gama- orizanol e ativação dos receptores Adipo- R1 e Adipo- R2: possível efeito na melhora da função renal associada à obesidade Obesidade, função renal e gama- orizanol Tese apresentada à Faculdade de Medicina, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Campus de Botucatu, para obtenção do título de Doutora em Patologia. Orientadora: Profa. Dra. Camila Renata Corrêa Coorientador: Prof. Dr. Igor Otávio Minatel Botucatu 2018 3 4 Dedicatória Dedico este trabalho aos meus pais, Moisés e Darlene, que nunca mediram esforços para que esse objetivo fosse alcançado. Que sempre estiveram ao meu lado apoiando, aconselhando e educando. Minha base, exemplo de vida! Ao meu irmão Gabriel, que mais que um irmão é um amigo e grande companheiro desde sempre. Ao meu noivo e futuro esposo, Artur, que mais do que meu companheiro para a vida, é parceiro de trabalho e amigo. Que me ajudou, apoio, aconselhou em toda essa caminhada até aqui. Amo você! À minha orientadora Camila, exemplo de mulher. Desde o mestrado foi uma amiga, ensinando e participando de todo o meu crescimento e evolução como profissional, nunca medindo esforços para que todas as oportunidades se concretizassem. Ao meu co-orientador, Igor, por toda ajuda, ensinamentos, correções e paciência nesses anos de caminhada. Ao meu orientador em Milão, Giancarlo Aldini, pela recepção, carinho e ensinamentos. Às minhas amigas: Jaqueline, Gabriela, Camila Maria que me fazem ter a certeza que uma amizade verdadeira resiste à distância de oceanos, continentes e fusos- horários. A Deus, base de força e fé, que mostra sempre que seus planos são sempre perfeitos e melhores do que podemos desejar. 5 Agradecimentos Agradeço à Profª. Dra. Camila Renata Corrêa e ao Prof. Dr. Igor Otávio Minatel pelos ensinamentos e dedicação. À coordenação do Programa de pós- graduação em Patologia: Profª. Dra. Denise Fecchio (2014-2016) e Profª. Dra. Márcia Guimarães da Silva (2016- atual). À Vânia do Amaral Soler, secretária do Programa de Pós- graduação em Patologia, por não medir esforços em ajudar os alunos sempre que preciso. Aos colegas de laboratório: Artur Ferron, Fernando Moreto, Jéssica Garcia, Ana Paula Ferraz, Fabiana Hasimoto, Pedro Alves, Koody Kitawara, Ângelo Lo e Klinsmann Carolo por toda a ajuda com os experimentos e análises nesses 4 anos. À Unidade de Pesquisa Experimental (UNIPEX) por viabilizar a execução desse projeto. Aos funcionários da UNIPEX: Paulo César Georgete, José Roberto de Oliveira, José Carlos Georgete, Dijon Henrique Salomé de Campos, Ana Paula Doria, e Corina Tomaseti por todo o auxílio no biotério, sacrifício dos animais e dosagens. À FAPESP pelo auxílio financeiro para execução desse projeto. À CAPES- PDSE, pela oportunidade de doutorado sanduíche no exterior. 6 À Università degli Studi di Milano por meio da profª. Marina Carini por me receber pelo para realização do doutorado sanduíche. Ao prof. Giancarlo Aldini, por toda a orientação durante o estágio no exterior. Aos colegas de laboratório da Università degli Studi di Milano: Paola Danelli, Marco Belli, Sarath Nookala, Alessandra Altomare, Genny Denagi, Giovana Baron, Marco Mol, Lucca Regazoni, Ettore Gillardone e Cristina Marinello que me acolheram durante os meses de doutorado sanduíche, me fazendo sentir parte da família e fizeram com que o tempo voasse, a saudade ficasse e as lembranças maravilhosas permanecessem. Grazie a tutti! Às professoras Ana Lúcia A. Ferreira e Clélia Hiruma pelas preciosas sugestões feitas no exame de qualificação. Aos funcionários da seção de Pós- graduação da FMB pela dedicação e gentiliza no atendimento. Às médicas Vanessa dos Santos Silva e profª. Dra. Silmeia Garcia Zanati Bazan. 7 Bene, bene...beníssimo!!! 8 Sumário Revisão de Literatura Obesidade e hábitos alimentares ........................................................................12 Obesidade e função cardíaca ..............................................................................14 Tecido adiposo ...................................................................................................16 Obesidade e doença renal ..................................................................................18 Arroz (Oriva sativa L.) .........................................................................................21 Referências bibliográficas ...................................................................................23 Justificativa ..........................................................................................................30 Hipótese ...............................................................................................................31 Objetivo ................................................................................................................32 Considerações gerais sobre os resultados ..........................................................33 Artigo publicado Effect of Gamma-Oryzanol as Therapeutic Agent to Prevent Cardiorenal Metabolic Syndrome in Animals Submitted to High Sugar-Fat Diet …………...36 Artigos a serem publicados Protective effect of gamma- oryzanol on adipose tissue dysfunction and related disorders ...........................................................................................................51 Gamma-oryzanol recovery obesity-induced kidney injuries by modulating inflammatory-oxidative response .....................................................................70 9 Resumo A obesidade está associada a diversas comorbidades, como dislipidemia, hipertrigliceridemia, resistência à insulina (RI) e diabetes mellitus tipo 2, além de estresse oxidativo e inflamação. Além disso, na obesidade ocorre um desequilíbrio na produção de adipocinas, com aumento de citocinas proinflamatórias e diminuição de adiponectina, o que pode ocasionar disfunções renais e metabólicas. O γ-orizanol, composto presente no arroz, têm demonstrado potencial ação antiadipogênica, anti-inflamatória e antioxidante. Sendo assim o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do γ-orizanol sobre a ativação dos receptores Adipo- R1 e Adipo- R2 e seus papéis na melhora da função renal. Foram utilizados ratos Wistar machos (n=60 animais), 21 dias de idade, provenientes Biotério Central da Faculdade de Medicina de Botucatu. Os animais foram divididos em seis grupos (n=10 animais/grupo) para receberem dieta padrão (G1), dieta padrão + γ-orizanol (G2), dieta rica em carboidratos (G3), dieta rica em carboidratos no início e depois com γ-orizanol (G4), dieta rica em carboidratos no início e depois dieta padrão + γ-orizanol (G5) e dieta rica em carboidrato + γ-orizanol (G6) por 30 semanas. Detectada a proteinuria, o grupo G4 começou a receber γ-orizanol e o grupo G5 teve a troca da ração. A obesidade foi caracterizada pelo índice de adiposidade e comorbidades: pressão arterial sistêmica, perfis glicêmico, lipídico e hormonal. No tecido adiposo foi analisado o perfil inflamatório por ELISA. A função renal foi avaliada pela proteinuria e foi também analisado o perfil inflamatório e estresse oxidativo. Após o período experimental, os animais que receberam o tratamento com o composto tiveram uma recuperação da função renal, melhora da inflamação e estresse oxidativo renais. Como conclusão, o composto se mostrou efetivo na recuperação da função renal associada à obesidade. Palavras chave: doença renal; gama- orizanol; high sugar- fat diet; obesidade 10 Abstract Obesity is associated with several comorbidities such as dyslipidemia, hypertriglyceridemia, insulin resistance (IR) and diabetes mellitus type 2, and also oxidative stress and inflammation, situations that trigger an imbalance in production adipokine, or increase of proinflammatory cytokines and decreased adiponectin. This condition can lead renal and metabolic disorders. γ-oryzanol, main phytosterol present in rice has shown potential antiadipogênica, anti-inflammatory and antioxidant action. Thus the aim of this study was to evaluate, the effects of γ-oryzanol on the activation of Adipo-R1 and Adipo-R2 receptors and their role in improvement of renal function. It was used male Wistar rats (n = 60 animals), 21 days old, from Central Animal Laboratory of the Botucatu Medical School. The animals were be divided into six groups (n = 10 animals / group) to receive standard diet (G1), standard diet + γ-oryzanol (G2), high-carbohydrate diet (G3), high-carbohydrate diet at first and then with γ-oryzanol (G4), high-carbohydrate diet at first and then standard diet + γ-oryzanol (G5) and high carbohydrate diet + γ-oryzanol (G6) for 30 weeks. When detected proteinuria, the G4 group started receiving γ- oryzanol and the G5 group was the exchange of the feed. Obesity was characterized by adiposity index and co-morbidities: blood pressure, blood glucose, lipid and hormonal. In adipose tissue was analyzed the inflammatory profile for ELISA. Renal function was evaluated by proteinuria. It was analyzed the inflammatory status and oxidative stress in renal tissue. After the treatment, the animals presented a recovery of renal function, improvement of inflammation and oxidative stress. So, it is possible to conclude that γ-oryzanol was effective to recovery renal function associated to obesity. Keywords: renal disease; gamma- oryzanol; high sugar- fat diet; obesity 11 Capítulo 1- Revisão de Literatura 12 Obesidade e hábitos alimentares A obesidade é definida como um acúmulo excessivo de gordura corporal que pode prejudicar a saúde, apresentando como causa fundamental o desequilíbrio crônico entre a quantidade de energia ingerida e o gasto energético, condição que favorece um balanço energético positivo (1). Estimativas apontam que no mundo em 2025 cerca de 2,3 bilhões de adultos estejam sobrepeso e mais de 700 milhões, obesos (2). A obesidade é considerada uma doença preocupante, por ser um fator de risco para complicações e comorbidades como resistência à insulina (RI), dislipidemia, hipertensão arterial sistêmica, diabetes tipo II, síndrome metabólica (SM), doenças renais e cardiovasculares (3). A mudança de hábitos alimentares e estilo de vida têm sido apontados como principais causas de obesidade entre adultos e crianças em todo o mundo (4). Dados relativos à alimentação nos Estados Unidos, por exemplo, mostra que nos últimos 100 anos o consumo de gordura e açúcar cresceu 67% e 64%, respectivamente; por outro lado, o consumo de verduras e legumes diminuiu 26% e o de fibras 18% (5). Essa transição nutricional também tem acontecido no Brasil, no qual dados apontam para uma mudança no padrão alimentar da população brasileira. Os dados das POF de 2008-09 mostram um aumento do consumo de produtos industrializados com participação na ingestão calórica do dia - como pães, biscoitos, refrigerantes e refeições prontas - e uma participação insuficiente de frutas e de verduras e legumes quando comparados aos resultados das POF de 2002-03 (6). Dessa forma, observa-se as dietas hipercalóricas, ricas em açúcar e gordura, são um dos principais fatores para o aumento no número de casos de obesidade mundial. Além do consumo de dietas hipercalóricas, o consumo de alguns componentes alimentares tem sido associados à obesidade. Uma maior proporção de ácidos graxos saturados (Mirístico- C14, Palmítico- C16 e 13 Esteárico- C18) em relação aos insaturados (mono e polinsaturados) tem mostrado relação com alta adiposidade e depósito central de gordura (7). Além disso, ácidos graxos trans, que não são encontrados na natureza e resultam de um processamento humano (hidrogenação) também mostraram forte associação com a obesidade (8). Carboidratos são outros constituintes de alimentação que mostram efeitos no organismo associados à obesidade. Sacarose, frutose e glicose são os adoçantes naturais mais comuns na nossa alimentação. Frutose e glicose são monossacarídeos presentes em pequenas quantidades em frutas e mel, enquanto a sacarose é um dissacarídeo formado pela união de glicose e frutose, encontrada em quantidade considerável na cana- de- açúcar e beterraba (9). Dentre os carboidratos, a frutose tem sido associada a efeitos negativos. Quando a frutose está presente no intestino, seja pelo seu consumo puro, ou de xarope de milho ou ainda pela quebra da sacarose, sua absorção na borda em escova acontece por meio de um transportador específico (GLUT-5), um processo que não requer hidrólise de ATP e é independente da absorção de sódio. Uma vez no enterócito, ela é transportada para a circulação por meio do GLUT-2 (9). Após a ingestão de frutose, uma grande proporção é convertida à glicose no fígado, que pode ser estocada como glicogênio ou liberada no plasma como glicose; parte é convertida a lactato nos enterócitos e fígado, o que aumenta seus níveis. Uma pequena porção da frutose é convertida a ácidos graxos, um mecanismo importante para o desenvolvimento de esteatose hepática e dislipidemia (9). Dessa forma, nota-se que dietas ricas em açúcares e gorduras, principalmente saturadas, são prejudiciais ao organismo, uma vez que aumentam os picos pós- prandiais de glicose e insulina, os níveis de triglicérides (TG) o que interfere no transporte reverso do colesterol, reduzindo os níveis da lipoproteína de alta densidade (HDL) (8). Altos níveis de CHO também são capazes de mobilizar gordura da periferia 14 para depósitos centrais e reduzir a atividade da adiponectina nos tecidos periféricos (8). No entanto, permanece como desafio a respeito dessa enfermidade, entender os mecanismos celulares que envolvem o desenvolvimento dessas comorbidades. Obesidade e função cardíaca A obesidade tem sido associada a diversas alterações cardiovasculares, que variam desde alterações hemodinâmicas até alterações estruturais (10). Algumas dessas alterações incluem hipertrofia ventricular esquerda, aumento do átrio esquerdo, prejuízo subclínico das funções sistólica e diastólica do ventrículo esquerdo, que se acredita serem precursoras de outras formas de disfunção e até insuficiência cardíaca (11). Diversos mecanismos são propostos para explicar a disfunção cardíaca na obesidade, dentre os quais sobrecarga hemodinâmica, hipertrofia cardíaca, aumento do acúmulo de lipídios e metabolismo de substrato alterado (12). Além disso, a obesidade está associada com outros fatores de risco envolvidos na disfunção diastólica do ventrículo esquerdo, tais como: hipertensão, dislipidemia, diabetes melitos, além de maior ativação neuroendócrina, retenção renal de sódio e estresse oxidativo sistêmico. Soma-se a isso, a expansão do tecido adiposo, uma fonte de citocinas pró- inflamatórias, que também pode contribuir para a patogênese da disfunção ventricular esquerda (10). Em condições de obesidade, a sobrecarga hemodinâmica ocorre devido à maior demanda metabólica exigida pela expansão do tecido adiposo e da massa livre de gordura, aumentando o volume sanguíneo (10). Além disso, os grandes depósitos de gordura desencadeiam uma resistência vascular periférica, que pode aumentar mais ainda o débito cardíaco. Também pode haver alterações na absorção renal de sódio e água. Todos esses fatores são propostos como causa de sobrecarga de volume e alto débito cardíaco, levando a um remodelamento ventricular e 15 atrial (11). Remodelamento concêntrico e excêntrico são os mais comuns em pessoas com sobrepeso/obesidade. A extensão do remodelamento cardíaco na obesidade aumenta com a severidade e duração, e é exacerbada na presença de hipertensão (10). Embora a oxidação de ácidos graxos seja predominante no coração adulto, o uso de glicose, lactato e cetonas podem acontecer em determinadas situações patológicas, uma flexibilidade no uso de substrato importante para a função cardíaca normal. Na condição de obesidade, RI e diabetes essa flexibilidade é afetada devido à alteração na disponibilidade do substrato ou prejuízo nos mecanismos transcricionais que regulam a oxidação. Os mecanismos relacionados a essas alterações seriam reduzida disponibilidade de glicose pelo prejuízo na sua captação, maior captação de ácidos graxos de cadeia longa pelo transportador CD36 e resistência à leptina (12). Embora uma associação entre EO elevado e as disfunção cardíaca na obesidade e comorbidades seja estabelecida, um papel causal para EO no desenvolvimento de disfunção miocárdica ainda não foi comprovada. No entanto, pode-se enfatizar que ROS mediam danos às proteínas, DNA e RNA o que pode exacerbar a disfunção cardíaca. Por exemplo, RI aumentou a geração de ROS cardíaca, independente de hiperglicemia, hiperlipidemia e hiperinsulinemia em camundongos (13). Além disso, EO pode ativar mecanismos de apoptose (JNK, p38, citocromo c), o que tem papel também no remodelamento e fibrose. Existe uma associação entre inflamação e obesidade (14–17). O grau e natureza da inflamação podem influenciar a progressão da doença via efeitos diretos no miocárdio e em outros componentes do sistema cardiovascular. Diversas citocinas pró- inflamatórias (IL-6, TNF-α) parecem ter participação no remodelamento miocárdico, influenciando mecanismos de hipertrofia, apoptose, fibrose e contratilidade (15). Estudos mostram que indivíduos obesos têm ativação do sistema 16 nervoso simpático (18–20). Ativação simpática parece contribuir para maior incidência do remodelamento concêntrico devido a fatores hemodinâmicos, como hipertensão e maior contratilidade cardíaca. Além disso, catecolaminas parecem exercer efeitos hipertróficos independente de fatores hemodinâmicos. Parece ocorrer também ativação do SRAA, que pode acontecer diretamente ou por estímulo proveniente do tecido adiposo, especialmente por maior secreção de angiotensinogênio pelos adipócitos da gordura visceral. A ativação concomitante desses dois sistemas acarreta em vasoconstrição e hipertensão, contribuindo para o remodelamento cardíaco (11). Assim, podemos observar que a obesidade influencia o remodelamento cardíaco de forma direta ou associada às suas comorbidades, como hipertensão, diabetes, disfunção endotelial e renal, inflamação. Dessa forma, com o aumento da obesidade, faz-se necessário cada vez mais intervenções que previnam ou minimizem os efeitos deletérios da obesidade e suas comorbidades. Tecido adiposo Sabe-se atualmente que o tecido adiposo não é somente um local de armazenamento de energia; é um órgão heterogêneo, composto pelos adipócitos e também de outros diferentes tipos celulares, compreendendo as células sanguíneas, células endoteliais, pericitos, células precursoras adiposas, células do sistema imunológico, entre outras (21). O tecido adiposo é responsável pela produção de diversas substâncias - as adipocinas: leptina, adiponectina, resistina e algumas citocinas, como interleucina- 6 (IL-6), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), e a proteína quimioatraente de monócito (MCP-1), dentre outras. Essas adipocinas participam de diversas funções biológicas no organismo, como, regulação do apetite, do gasto energético, da sensibilidade periférica à insulina e da 17 absorção de lipídeos em tecidos não adiposos, como coração, fígado, células beta pancreáticas e músculo-esquelético (21). Em condições de oferta calórica excessiva, há uma expansão da massa gordurosa, com maior acúmulo de triacilglicerol nos adipócitos (22). Esse processo de hipertrofia favorece essas células a liberarem uma quantidade maior de adipocitocinas, dentre elas a interleucina-6 (IL-6) e o fator de necrose tumoral- alfa (TNF-α) (23,24). Esse fato acarreta inicialmente um processo inflamatório local que se propaga sistemicamente, o que pode estar relacionado ao surgimento das complicações e comorbidades associadas à obesidade (25). Outro mecanismo também associado à inflamação no tecido adiposo, decorrente do aumento da massa adiposa, é a hipóxia. Dependendo do tamanho de sua extensão, reduz o suprimento sanguíneo, levando à hipóxia e necrose com consequente infiltração de macrófagos, neutrófilos e produção de citocinas (26–28). Além desses mecanismos mais clássicos, os receptores Toll-Like (TLR) também estão entre as causas da inflamação na obesidade. Os TLR são uma família de diversos receptores que desempenham papel na detecção e reconhecimento de bactérias pela afinidade com os lipopolissacarídeos (LPS) da parede celular desses microrganismos (29,30), sendo expressos em células de diferentes tecidos (14), inclusive no tecido adiposo (29,30,32). A relação entre os TLR-4 e a obesidade acontece devido aos altos níveis de ácidos graxos circulantes, os quais ao serem reconhecidos pelos TLR-4 ativam fatores transcricionais, como o fator nuclear κB (NFκB)(33–35) estimulando a produção de quimiocinas e citocinas pró-inflamatórias (36). Essas biomoléculas atraem monócitos da circulação, que ao infiltrarem no órgão alvo transformam-se em macrófagos, aumentando a produção de citocinas pró- inflamatórias, um ambiente inflamatório desencadeado por nutrientes (37). Existe ainda o estresse oxidativo (EO), outro fator envolvido com a 18 inflamação (38), decorrente do acúmulo excessivo de gordura no adipócito. Esse estoque em grande quantidade desencadeia uma sobrecarga de trabalho mitocondrial, gerando um estresse celular, onde espécies reativas são formadas. Essas espécies também são capazes de estimular o NFκB a produzir citocinas pró inflamatórias, agravando assim o processo inflamatório (39). Dessa forma, podemos inferir que a inflamação na obesidade é uma complicação preocupante e que pode ser desencadeada por diversos fatores. Obesidade e doença renal A fisiopatologia da doença renal pode ser desenvolvida por diversos fatores dentre eles, a obesidade (40). A agressão renal desenvolvida nessa enfermidade é similar à que ocorre no diabetes tipo II, ou seja, na fase inicial ocorre um aumento da taxa de filtração glomerular (TFG), hipertrofia glomerular e microalbuminuria, que posteriormente evolui para proteinuria, injuria tubulointersticial e redução da TFG (41,42). A doença renal também envolve múltiplos fatores metabólicos e hemodinâmicos que ativam mecanismos de sinalização intracelular que desencadeiam a produção de citocinas e fatores de crescimento, que podem desencadear a doença (41). Alguns fatores citados como responsáveis por causar alterações renais são: resistência à insulina (RI), inflamação, disfunção endotelial renal, estresse oxidativo, alterações hemodinâmicas renais, ativação do sistema renina- angiotensina- aldosterona (SRAA), ativação do sistema nervoso simpático (SNS) e fatores dietéticos (43). No rim, resistência à insulina e hiperinsulinemia parecem induzir inflamação local, fator importante para doença renal. A insulina seria capaz de induzir fibrose por estimular a produção de Transforming Growth Factor- beta (TGF-β) e Insulin Growth Factor- 1 (IGF-1) por células vasculares, tubulares e fibroblastos (43). Hiperinsulinemia pode induzir 19 também hiperfiltração glomerular, disfunção endotelial e aumento da permeabilidade vascular, levando à albuminuria (44). Além disso, RI promove reabsorção de sódio e ácido úrico, resultando em hipertensão sensível ao sal e hiperuricemia. O ácido úrico, frequentemente aumentado em situações de obesidade e síndrome metabólica, inibe a produção de óxido nítrico (NO), contribuindo também para disfunção endotelial (44). Outra agressão que ocorre diretamente no glomérulo proveniente da RI e das citocinas é a expansão mesangial e lesão de podócitos(43). A presença de estresse oxidativo nos rins é freqüente em condições de comorbidades normalmente desenvolvidas na obesidade como diabetes e resistência à insulina. Altos níveis de glicose e de ácidos graxos livres aumentam espécies reativas de oxigênio (ROS) mitocondrial nas células endoteliais renais, o que pode levar à disfunção tecidual por desbalanço no sistema redox, favorecendo o dano oxidativo a estruturas biológicas (DNA, proteínas, lipídios, etc). A maior fonte de ROS é a NADPH oxidase (NOX), uma família de enzimas, das quais NOX1, 2 e 4 são altamente expressas no rim. Up regulada por fatores metabólicos, NOX leva a uma superprodução de ROS nos podócitos afetando sua estrutura, originando o início da progressão da doença renal (44). Um fator dietético que vem recebendo destaque pela associação com o desenvolvimento de doença renal, obesidade, síndrome metabólica e inflamação é o consumo de frutose, um açúcar simples, componente do açúcar de mesa e no xarope de milho, utilizado mundialmente para adoçar. O consumo de frutose tem crescido nos últimos anos e trabalhos mostram uma associação entre frutose e inflamação sistêmica, aumentando a expressão de proteínas de adesão de leucócitos (ICAM-1) e quimiocinas (MCP-1) em diversas células (endoteliais, tubulares proximais). Um dos mecanismos parece estar relacionado ao aumento do ácido úrico, que é capaz de induzir estresse oxidativo, reduzir a geração de óxido nítrico (NO), estimular o sistema renina-angiotensina-aldosterona 20 (SRAA) local e induzir a expressão de citocinas pró- inflamatórias, resultando em aumento da injúria e inflamação renal (43). O papel da inflamação crônica nas alterações renais deriva de citocinas e adipocinas pró-inflamatórias. Na obesidade ocorre um aumento dos níveis plasmáticos de leptina, adipocina pró- inflamatória, que contribui para resistência à insulina e que também pode causar remodelamento vascular renal e prejuízo da função renal (43). Evidências mostram que a leptina aumenta a atividade simpática, aumentando a pressão arterial. O aumento dos níveis de TNF-α na obesidade promove a geração de espécies reativas de oxigênio, o que também contribui para injúria renal (43). Em contrapartida a adiponectina, uma adipocina produzida pelos adipócitos e que possui características antiaterogênica e anti-inflamatória, encontra-se diminuída, o que pode desencadear diversas complicações (4) dentre elas a proteinúria (45) por meio da lesão que ocorre nos podócitos (46,47). Os podócitos são células do epitélio visceral dos rins e que apresentam receptores para adiponectina, subdivididos em duas isoformas: Adipo- R1 e Adipo-R2.Em condições fisiológicas o Adipo-R1 ativa a proteína quinase ativada por adenosina monofosfato (AMPK), a qual tem a função de prevenir o estresse oxidativo (48). Porém, em situações de adiponectina reduzida, ocorre uma menor a ativação da AMPK, o que gera estresse oxidativo via NOX4 (uma isoforma da enzima NADPH oxidase), com conseqüente fusão dos podócitos, promovendo a excreção de albumina. O Adipo-R2 é relacionado à inibição da via inflamatória por meio da estimulação do PPAR-α (49), um receptor nuclear da família do peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs), mais expresso no córtex renal e responsável pela supressão da produção de citocinas inflamatórias pelos macrófagos (50). Dessa forma, podemos observar o envolvimento de diversas situações que normalmente estão envolvidas com a obesidade que podem 21 dar início e progressão da doença renal. Mudança de hábitos alimentares, estilo de vida e controle clínico são fundamentais para prevenir a doença renal. Arroz (Oriza sativa L.) Mudanças no hábito alimentar com aumento no consumo de frutas e vegetais ricos em polifenóis tem sido cada vez mais investigados na obesidade, e mostram efeitos positivos no combate do processo inflamatório e oxidativo, podendo ser promissores para prevenção ou tratamento de comorbidades (51). O arroz (Oriza sativa L.) representa um alimento de primeira necessidade e constitui-se no principal componente da dieta de metade da população mundial (52). O consumo de arroz teve um forte progresso a partir da década de 80. Como parte da cultura alimentar de diversas regiões do mundo, este grão tem uma história antiga de cultivo e seleção que gerou uma ampla variedade de espécies, escolhidas pelos consumidores principalmente devido aos aspectos culturais, sabor e valor nutricional (53). Os padrões de consumo podem ser divididos em três grandes modelos: modelo asiático, com países com consumo médio per capita superior a 100kg (por exemplo, a China), consumo subtropical, com consumo médio per capita médio que varia de 35 a 65kg ao ano (nesse grupo está o Brasil com consumo médio per capita de 45kg ao ano) e modelo ocidental, com consumo per capita médio baixo, cerca de 10kg ano (por exemplo, temos a França, com consumo médio per capita de 5kg ao ano) (54). O fato do arroz ser um alimento barato e muito consumido, e o crescente interesse nos alimentos funcionais, este cereal tem recebido foco dos pesquisadores como potencial fonte de micronutrientes bioativos (53). O farelo de arroz além de ser uma fonte natural de vitamina E (300 22 mg/kg), é também rico em γ-orizanol (~3.000 mg/kg) (55,56), uma mistura de esterilferulatos ou álcool triterpeno com o grupo carboxílico do ácido ferúlico. Com base na absorbância máxima de 330 nm, ao menos 25 componentes do γ-orizanol foram identificados até o momento. Entretanto, 5 destes componentes são responsáveis por cerca de 95% do conteúdo total do composto e, em ordem decrescente de concentração são: cicloarteniltrans-ferulato (34-44%), 24-metilenocicloartenil trans-ferulato (19-26%), campesteriltrans-ferulato (15-23%), β-sitoesteriltrans-ferulato (7- 17%) e estigmasteriltrans-ferulato (1-7%). Por apresentar característica antioxidante e anti-inflamatória, trabalhos mostram que o γ-orizanol tem ação positiva no tratamento da hiperlipidemia, diabetes tipo II, resistência à insulina, hipertensão arterial sistêmica, diminuição de peso e melhora dos níveis de adiponectina, complicações comuns nos indivíduos obesos (57–60). Son et al., (2010) (60), demonstraram o efeito hipocolesterolêmico do γ-orizanol em camundongos submetidos a uma dieta hiperlipídica. Os animais que receberam a dieta rica em gordura e suplementada com 0,5% de γ- orizanol apresentaram níveis menores de colesterol total plasmático e hepático e aumento de HDL colesterol, quando comparados com o grupo controle. O mesmo grupo de pesquisadores demonstrou que animais recebendo uma dieta rica em gordura e suplementada com γ-orizanol, apresentaram reduzidos níveis plasmáticos de glicose e melhora nos níveis de insulina e enzimas relacionadas com o efeito antidiabético. No entanto, pouco se sabe a respeito dos mecanismos envolvidos nesses efeitos, pois não encontramos trabalhos na literatura que abordam esses aspectos, bem como a ação desse composto na disfunção dos órgãos afetados na obesidade e na síndrome metabólica. Dessa forma, a investigação desse componente alimentar dentre outros existentes na natureza que podem agir nas comorbidades e complicações da obesidade é um campo importante de estudo que permite o desenvolvimento de 23 terapias baseadas na simples substituição de alguns alimentos. Referências bibliográficas 1. World OH. World Health Organisation Obesity and Overweight Fact Sheet. Who. 2016;1(1):2016. 2. Associação Brasileira para Estudo da Obesidade e Síndrome Metabólica. Mapa da obesidade [Internet]. ABESO. 2015. Available from: http://www.abeso.org.br/atitude-saudavel/mapa-obesidade 3. Declè A-E, Mathew A V, Cunard R, Sharma K. AMPK Mediates the Initiation of Kidney Disease Induced by a High-Fat Diet. J Am Soc Nephrol. 2011;22:1846–55. 4. Tesauro M, Canale MP, Rodia G, Di Daniele N, Lauro D, Scuteri A, et al. Metabolic syndrome, chronic kidney, and cardiovascular diseases: role of adipokines. Cardiol Res Pract. 2011;2011:653182. 5. Coutinho W. Etiologia da obesidade. Abeso [Internet]. 2011;7(30):14. Available from: http://www.abeso.org.br/pdf/Etiologia e Fisiopatologia - Walmir Coutinho.pdf 6. IBGE. Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística, Coordenação de Trabalho e Rendimento. Pesquisa de Orçamentos Familiares: 2008-2009. Análise do Consumo Alimentar Pessoal no Brasil [Internet]. Biblioteca do Ministerio do Planejamento, Orçamento e Gestão. 2011. 150 p. Available from: http://biblioteca.ibge.gov.br/visualizacao/livros/liv50063.pdf 7. Paniagua JA, Escandell-Morales JM, Gil-Contreras D, Berral de la Rosa FJ, Romero-Jimenez M, Gómez-Urbano A, et al. Central obesity and altered peripheral adipose tissue gene expression characterize the NAFLD patient with insulin resistance: Role of nutrition and insulin challenge. Nutrition. 2014;30(2):177–85. 8. Paniagua JA. Nutrition, insulin resistance and dysfunctional adipose 24 tissue determine the different components of metabolic syndrome. World J Diabetes. 2016;7(19):483–514. 9. Tappy L, Lê K-A. Metabolic Effects of Fructose and the Worldwide Increase in Obesity. Physiol Rev. 2010;90:23–46. 10. Vasan RS. Cardiac function and obesity. Heart. 2003;89(10):1127–9. 11. Abel ED, Litwin SE, Sweeney G. Cardiac Remodeling in Obesity. Physiol Rev. 2010;88(2):389–419. 12. Ilkun O, Boudina S. Cardiac dysfunction and oxidative stress in the metabolic syndrome: an update on antioxidant therapies. Curr Pharm Des [Internet]. 2013;19(27):4806–17. Available from: http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=3856187& tool=pmcentrez&rendertype=abstract 13. Boudina S, Bugger H, Sena S, O’Neill BT, Zaha VG, Ilkun O, et al. Contribution of impaired myocardial insulin signaling to mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the heart. Circulation. 2009;119(9):1272–83. 14. Ye J, Keller JN. Regulation of energy metabolism by inflammation: A feedback response in obesity and calorie restriction. Aging (Albany NY). 2010;2(6):361–8. 15. Nakayama T, Wang Z. Inflammation, a link between obesity and cardiovascular disease. Mediators Inflamm. 2010;2010. 16. Stienstra R, Duval C, Müller M, Kersten S. PPARs, obesity, and inflammation. PPAR Res. 2007;2007. 17. Lumeng CN. Innate Immune Activation in Obesity Carey. Mol Asp Med. 2013;34(1):12–29. 18. Kalil GZ, Haynes WG. Sympathetic nervous system in obesity- related hypertension: mechanisms and clinical implications. Hypertens Res [Internet]. 2012;35(1):4–16. Available from: http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=3902842& tool=pmcentrez&rendertype=abstract 25 19. Lambert E, Sari CI, Dawood T, Nguyen J, McGrane M, Eikelis N, et al. Sympathetic nervous system activity is associated with obesity- induced subclinical organ damage in young adults. Hypertension. 2010;56(3):351–8. 20. Lohmeier TE, Iliescu R. The Sympathetic Nervous System in Obesity Hypertension. Curr Hypertens Rep. 2013;15(4):409–16. 21. Francisqueti, Fabiane Valentini; Nascimento, André Ferreira do; Corrêa CR. Obesidade, inflamação e complicações metabólicas. Nutrire. 2015;40(1):81–9. 22. Halberg N, Wernstedt-Asterholm I, Scherer PE. The Adipocyte as an Endocrine Cell. Endocrinol Metab Clin North Am. 2008;37(3):753– 68. 23. Divella R, De Luca R, Abbate I, Naglieri E, Daniele A. Obesity and cancer: the role of adipose tissue and adipo-cytokines-induced chronic inflammation. J Cancer [Internet]. 2016;7(715):2346–59. Available from: http://www.jcancer.org 24. Mancuso P. The role of adipokines in chronic inflammation. ImmunoTargets Ther [Internet]. 2016;5:47–56. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27529061%5Cnhttp://www.pub medcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=PMC4970637 25. Trayhurn P, Wood IS. Adipokines: inflammation and the pleiotropic role of white adipose tissue. Br J Nutr. UNESP-Universidade Estadual Paulista; 2004;92(3):347–55. 26. Lawler HM, Underkofler CM, Kern PA, Erickson C, Bredbeck B, Rasouli N. Adipose Tissue Hypoxia, Inflammation and Fibrosis in Obese Insulin Sensitive and Obese Insulin Resistant Subjects. J Clin Endocrinol Metab [Internet]. 2016;101(February):jc20154125. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26871994 27. O’Rourke RW, White AE, Metcalf MD, Olivas AS, Mitra P, Larison WG, et al. Hypoxia-induced inflammatory cytokine secretion in 26 human adipose tissue stromovascular cells. Diabetologia. 2011;54(6):1480–90. 28. Ye J, Gao Z, Yin J, He Q. Hypoxia is a potential risk factor for chronic inflammation and adiponectin reduction in adipose tissue of ob/ob and dietary obese mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2007;293(4):E1118–28. 29. Ferraz EG, Silveira BB de B da, Sarmento VA, Santos JN dos. Receptores Toll-Like : ativação e regulação da resposta imune Toll- Like Receptors : regulation of the immune responses. Rev Gaúcha Odontol. 2011;59(3):483–90. 30. Yuan X, Deng Y, Guo X, Shang J, Zhu D, Liu H. Atorvastatin attenuates myocardial remodeling induced by chronic intermittent hypoxia in rats: Partly involvement of TLR-4/MYD88 pathway. Biochem Biophys Res Commun. Elsevier Inc.; 2014;446(1):292–7. 31. Francisqueti F V. Papel do TLR-4 na resposta inflamatória e resistência à insulina no tecido adiposo em condição de sobrecarga nutricional crônica. 2014;1–55. 32. Matsuda S, Umemoto S, Yoshimura K, Itoh S, Murata T, Fukai T, et al. Angiotensin Ⅱ Activates MCP-1 and Induces Cardiac Hypertrophy and Dysfunction via Toll-like Receptor 4. J Atheroscler Thromb. 2015;22(8):833–44. 33. Vega MTM, Martín ADA. Toll-like receptors : a family of innate sensors of danger that alert and drive immunity. Allergol Immunopathol (Madr). 2008;36(6). 34. Kim JJ, Sears DD. TLR4 and Insulin Resistance. 2010;2010. 35. Zeyda M, Stulnig TM. Obesity , Inflammation , and Insulin Resistance – A Mini-Review. 2009;379–86. 36. Cai D, Yuan M, Frantz DF, Melendez PA, Hansen L, Lee J, et al. NIH Public Access. 2006;11(2):183–90. 37. Huang S, Rutkowsky JM, Snodgrass RG, Ono-Moore KD, Schneider 27 D a, Newman JW, et al. Saturated fatty acids activate TLR-mediated proinflammatory signaling pathways. J Lipid Res [Internet]. 2012;53(9):2002–13. Available from: http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=3413240& tool=pmcentrez&rendertype=abstract 38. Espiritu DJ, Mazzone T. Oxidative stress regulates adipocyte apolipoprotein e and suppresses Its expression in obesity. Diabetes. 2008;57(11):2992–8. 39. Wellen KE, Thompson CB. Nutrient Excess. 2011;40(2):323–32. 40. Wickman C, Kramer H. Obesity and Kidney Disease: Potential Mechanisms. Semin Nephrol [Internet]. Elsevier Inc.; 2013;33(1):14– 22. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.semnephrol.2012.12.006 41. Maric-Bilkan C. Obesity and diabetic kidney disease. Med Clin North Am [Internet]. 2013;97(1):59–74. Available from: http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=3539140& tool=pmcentrez&rendertype=abstract 42. Thomson SC, Vallon V, Blantz RC. Kidney function in early diabetes: the tubular hypothesis of glomerular filtration. Am J Physiol Renal Physiol. 2004;286:F8–15. 43. Raimundo M, Lopes JA. Metabolic Syndrome , Chronic Kidney Disease , and Cardiovascular Disease : A Dynamic and Life- Threatening Triad. Cardiol Res Pract. 2011;2011. 44. Zhang X, Lerman LO. The metabolic syndrome and chronic kidney disease. Translacional Res [Internet]. Elsevier Inc.; 2016;1–12. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=Pu bMed&dopt=Citation&list_uids=16775449 45. Lo MM, Mitsnefes M. Adiponectin, cardiovascular disease, chronic kidney disease: Emerging data on complex interactions. Pediatr 28 Nephrol. 2012;27(4):521–7. 46. Shevalye H, Lupachyk S, Watcho P, Stavniichuk R, Khazim K, Abboud HE, et al. Prediabetic nephropathy as an early consequence of the high-calorie/high- fat diet: Relation to oxidative stress. Endocrinology. 2012;153(3):1152–61. 47. Whaley-Connell A, Demarco VG, Lastra G, Manrique C, Nistala R, Cooper SA, et al. Insulin resistance, oxidative stress, and podocyte injury: Role of rosuvastatin modulation of filtration barrier injury. Am J Nephrol. 2007;28(1):67–75. 48. Cammisotto PG, Bendayan M. Adiponectin stimulates phosphorylation of AMP-activated protein kinase α in renal glomeruli. J Mol Histol. 2008;39(6):579–84. 49. Kadowaki T, Yamauchi T, Kubota N. The physiological and pathophysiological role of adiponectin and adiponectin receptors in the peripheral tissues and CNS. FEBS Lett. 2008;582(1):74–80. 50. Ruan X, Zheng F, Guan Y. PPARs and the kidney in metabolic syndrome. Am J Physiol Renal Physiol. 2008;294(5):F1032–47. 51. Siriwardhana N, Kalupahana NS, Cekanova M, LeMieux M, Greer B, Moustaid-Moussa N. Modulation of adipose tissue inflammation by bioactive food compounds. J Nutr Biochem [Internet]. Elsevier Inc.; 2013;24(4):613–23. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.jnutbio.2012.12.013 52. Minatel IO, Han S, Aldini G, Colzani M, Matthan NR, Correa CR, et al. Fat-Soluble Bioactive Components in Colored Rice Varieties 1,2 1. J Med Food. 2014;17(10):1134–41. 53. Anwar F, Zubair M, Ashraf M, Uddin MK. Characterization of high- value bioactives in some selected varieties of Pakistani rice (Oryza sativa L.). Int J Mol Sci. 2012;13(4):4608–22. 54. Ferreira CM, Wander AE, Silva OF. Arroz- Mercado, comercialização e consumo [Internet]. Agência EMBRAPA de 29 informação tecnológica. 2017. p. 1–5. Available from: http://www.agencia.cnptia.embrapa.br/gestor/arroz/arvore/CONT000 fok5vmke02wyiv80bhgp5prthhjx4.html# 55. Minatel IO, Han S, Aldini G, Colzani M, Matthan NR, Correa CR, et al. Fat-Soluble Bioactive Components in Colored Rice Varieties. J Med Food [Internet]. 2014;17(10):1134–41. Available from: http://online.liebertpub.com/doi/abs/10.1089/jmf.2014.3146 56. Xu Z, Hua N, Godber JS. Antioxidant Activity of Tocopherols , Tocotrienols , and γ -Oryzanol Components from Rice Bran against Cholesterol Oxidation Accelerated by 2 , 2 ′ -Azobis ( 2- methylpropionamidine ). J Agric Food Chem. 2001;49:2077–81. 57. Justo ML, Rodriguez R, Claro CM, Alvarez M, Parrado J, Herrera MD. Water-soluble rice bran enzymatic extract attenuates dyslipidemia , hypertension and insulin resistance in obese Zucker rats. Eur J Nutr. 2013;52(2013):789–97. 58. Wang O, Liu J, Cheng Q, Guo X, Wang Y, Zhao L, et al. Effects of ferulic acid and ??-Oryzanol on high-fat and high-fructose diet- induced metabolic syndrome in rats. PLoS One. 2015;10(2):1–14. 59. Wilson TA, Nicolosi RJ, Woolfrey B, Kritchevsky D. Rice bran oil and oryzanol reduce plasma lipid and lipoprotein cholesterol concentrations and aortic cholesterol ester accumulation to a greater extent than ferulic acid in hypercholesterolemic hamsters B. J Nutr Biochem. 2007;18:105–12. 60. Nutr JCB, Son MJ, Rico CW, Nam SH, Kang MY. Influence of oryzanol and ferulic acid on the lipid metabolism and antioxidative status in high fat-fed mice. J Clin Biochem Nutr. 2010;46(March):150–6. 30 Justificativa Em decorrência ao aumento global da obesidade, é importante buscar alternativas que ajudem a minimizar as conseqüências da obesidade. A introdução de compostos bioativos como o γ -orizanol na dieta destes indivíduos pode representar menores custos em relação aos medicamentos e efeitos colaterais. A simples substituição de alimentos pobres em compostos bioativos, por alimentos mais ricos nestes componentes têm recebido grande destaque nos estudos recentes. O surgimento das comorbidades associadas à obesidade e SM tem relação direta com o estresse oxidativo e inflamação decorrentes do consumo de uma dieta rica em gordura e frutose. O aumento da gordura corporal acarreta um quadro de inflamação e estresse oxidativo, que acarretam a RI, elevação dos triglicérides e da pressão arterial, complicações que culminam em SM, além da redução da adiponectina. Todas essas alterações comprometem o organismo como um todo, sendo que a redução da adiponectina tem envolvimento direto na disfunção renal, devido à menor ativação dos receptores renais, aumento do EO e inflamação renal que podem lesar os podócitos. Para nosso conhecimento, esse foi o primeiro trabalho que abordou essa associação entre níveis de adiponectina e doença renal. Dessa forma, investigar o potencial efeito do γ-orizanol na prevenção ou tratamento da disfunção renal associada à redução dos níveis e adiponectina renal é de extrema importância, visto que os rins são órgãos extremamente afetados pela obesidade e complicações, e a insuficiência renal é causa de piora na qualidade de vida e de morte mundial (figura 1). 31 Hipótese Figura 1. Representação da hipótese A redução de adiponectina causada pela obesidade está associada à menor sensibilidade à insulina, inflamação no tecido adiposo e maior estresse oxidativo. Com menores níveis circulantes de adiponectina, menos receptores para Adipo-R1 presentes nos podócitos renais são ativados, o que leva à diminuição da fosforilação da AMPK e aumenta os níveis de NOX4, via NADPH. São ativados também menos receptores Adipo- R2, reduzindo os níveis de PPAR-α, um mecanismo responsável por desencadear inflamação renal. Esse maior estresse oxidativo e inflamação são responsáveis por causar prejuízo na função renal, levando à lesão nos podócitos e albuminúria Como o γ- orizanol tem propriedades antiinflamatórias e antioxidantes, hipotetizamos que seria capaz de reduzir a inflamação no tecido adiposo, aumentando os níveis de adiponectina, o que consequentemente, reduziria o estresse oxidativo e a inflamação evitando ou amenizando os danos renais. 32 Objetivo geral Em animais com obesidade induzida por dieta rica em carboidratos, o objetivo foi avaliar o efeito do γ-orizanol sobre a ativação dos receptores Adipo- R1 e Adipo- R2 e a melhora da função renal. - Objetivos específicos - Avaliar o efeito do γ- orizanol na prevenção da síndrome metabólica cardiorenal - Avaliar o efeito do γ- orizanol na prevenção da inflamação no tecido adiposo. - Avaliar o efeito do γ- orizanol no tratamento da inflamação e estresse oxidativo renais. 33 Considerações gerais sobre os resultados - γ- orizanol foi efetivo em prevenir a Síndrome Metabólica Cardiorenal após 20 semanas de suplementação. - γ- orizanol foi efetivo em prevenir o ganho de peso e a disfunção do tecido adiposo após 30 semanas de suplementação. - γ- orizanol foi eficaz em tratar a disfunção renal associada à obesidade após 10 semanas de suplementação. 34 Capítulo 2- Artigos científicos 35 Artigo científico 1 Publicado na Nutrients (Fator de Impacto 3,55) em 29 de novembro de 2017 36 Nutrients 2017, 9(12), 1299; doi:10.3390/nu9121299 Article Effect of Gamma-Oryzanol as Therapeutic Agent to Prevent Cardiorenal Metabolic Syndrome in Animals Submitted to High Sugar-Fat Diet Fabiane Valentini Francisqueti 1, Igor Otávio Minatel 2, Artur Junio Togneri Ferron 1, Silméia Garcia Zanati Bazan 1, Vanessa dos Santos Silva 1, Jéssica Leite Garcia 1, Dijon Henrique Salomé de Campos 1, Ana Lúcia Ferreira 1, Fernando Moreto 1, Antonio Carlos Cicogna 1 and Camila Renata Corrêa 1,* 1São Paulo State University (Unesp), Medical School, Botucatu 18618-687, Brazil 2São Paulo State University (Unesp), Institute of Biosciences, Botucatu 18618- 689, Brazil *Correspondence: Tel.: +55-14-38801722 Received: 25 September 2017 / Accepted: 22 November 2017 / Published: 29 November 2017 Abstract: Background: The high consumption of fat and sugar contributes to the development of obesity and co-morbidities, such as diabetes, and cardiovascular and kidney diseases. Different strategies have been used to prevent these diseases associated with obesity, such as changes in eating habits and/or the addition of dietary components with anti-inflammatory and anti- oxidant properties, such as gamma-oryzanol (γOz) present mainly in bran layers and rice germ. Methods: Animals were randomly divided into four experimental groups and fed ad libitum for 20 weeks with control diet (C, n = 8), control diet + γOz (C + γOz, n = 8), high-sugar and high-fat diet (HSF, n = 8), and high-sugar and high-fat diet + γOz (HSF + γOz, n = 8). HSF groups also received water + sucrose (25%). The dose of γOz was added to diets to reach 0.5% of final concentration (w/w). Evaluation in animals included food and caloric intake, body weight, plasma glucose, insulin, triglycerides, uric acid, HOMA-IR, glomerular filtration rate, protein/creatinine ratio, systolic blood pressure, and Doppler echocardiographic. Results: Animals that consumed the HSF diet had weight gain compared to group C, increased insulin, HOMA, glucose and triglycerides, there were also atrial and ventricular structural alterations, deterioration of systolic and diastolic function, decreased glomerular filtration rate, and proteinuria. Gamma-oryzanol is significantly http://dx.doi.org/10.3390/nu9121299 37 protective against effects on body weight, hypertriglyceridemia, renal damage, and against structural and functional alteration of the heart. Conclusion: Gamma-oryzanol shows potential as a therapeutic to prevent Cardiorenal Metabolic Syndrome. Keywords: high sugar-fat diet; obesity; cardiac dysfunction; renal disease; gamma- oryzanol; Cardiorenal Metabolic Syndrome 1. Introduction Obesity is considered a public-health problem, with both direct and indirect costs [1,2,3], such as diabetes, cardiovascular disease and hypertension, workdays lost, physician visits, disability pensions, and premature mortality [4]. In recent decades, there has been a change in eating behavior where the preference for palatable food has prevailed. The intake of sugar-sweetened beverages and fat, especially from industrialized foods, has clearly increased around the world [5]. However, the consumption of these dietary components has exceeded recommended daily levels, contributing to the development of obesity and its comorbidities, such as diabetes, cardiovascular and kidney diseases, and negative health consequences linked to modern dietary habits [6,7,8]. All these factors contribute to the strict relationship between obesity and the early development of a constellation of diseases named Cardiorenal Metabolic Syndrome (CRS), a terminology that explains co-existing heart and kidney disease, characterized clinically by: impaired coronary blood flow, impaired diastolic relaxation, impaired ischemic reconditioning, renal hyper- filtration, proteinuria, glomerular sclerosis, tubule-interstitial fibrosis, and decreased GFR (glomerular filtration rate) [9]. The pathophysiology of CRS can be elucidated by four connectors: the renin- angiotensin-aldosteron system (RAAS), the sympathetic nervous system (SNS), inflammation, and nitric oxide/reactive oxygen species (ROS) balance [10,11,12]. The literature reports some experimental models to study the cardio-renal syndrome. However, these models use invasive methods, such as: ligation of the left coronary artery, unilateral nephrectomy and sub- nephrectomy [13,14,15]. An alternative model, which does not require surgical intervention, is the model of adriamycin-induced renal damage [16]. Thus, it is necessary to develop a non-invasive model which mimics the habits of the population and reproduces the clinical situation observed. Considering this situation, it is important to seek effective alternatives to treat or to prevent this disease. A wide range of medicines is currently used to treat obesity and related disorders; however, many adverse effects and high rates of secondary failures have been associated with these [17]. Thus, finding http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B1-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B2-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B3-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B4-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B5-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B6-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B7-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B8-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B9-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B10-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B11-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B12-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B13-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B14-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B15-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B16-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B17-nutrients-09-01299 38 natural drugs has now become the focus of scientists and researchers. Gamma- oryzanol (γOz) is a compound present mainly in the bran and germ of rice [18,19,20], a widely available and inexpensive food source that has been investigated due to its many biological activities, including anti-oxidative and anti-inflammatory effects [21,22,23], which led us to hypothesize that the compound is able to prevent CRS. Therefore, the aim of this study was to test the therapeutic potential of gamma-oryzanol to prevent Cardiorenal Metabolic Syndrome in animals with a high sugar-fat diet. 2. Materials and Methods 2.1. Animals and Experimental Protocol All of the experiments and procedures were approved by the Animal Ethics Committee of Botucatu Medical School (1150/2015) and were performed in accordance with the National Institute of Health’s Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Male Wistar rats (±187 g) were kept in an environmental controlled room (22 °C ± 3 °C; 12 h light-dark cycle and relative humidity of 60 ± 5%) and randomly divided into 4 experimental groups. Over 20 weeks the animals received: control diet (C, n = 8), control diet + gamma- oryzanol (C + γOz, n = 8), high sugar-fat diet (HSF, n = 8), and high sugar-fat diet + gamma-oryzanol (HSF + γOz, n = 8). HSF groups also received water + sucrose (25%). The diets and water were ad libitum. 2.2. Gamma-Oryzanol γOz is the major bioactive compound of rice bran [18,19,20], and has been investigated due to its antioxidant and anti-inflammatory activities [21,22,23]. The compound was purchased from Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. (Toshima, Kita-ku, Tokyo) (lot.5ZZYLPJ). To simulate its regular way of consumption and due to its nonpolar characteristics, the compound was added to diets to reach 0.5% of final concentration (w/w). Diets and the period of treatment were based on the work of Son et al. [17] and on the daily consumption of rice of an adult individual in Brazil, according to data from the Family Budget Survey (POF) 2008–2009 [24]. 2.3. Diets The diets used in this study were designed in our laboratory. The HSF diet contained soybean meal, sorghum, soybean peel, dextrin, sucrose, fructose, lard, vitamins, and minerals, plus 25% sucrose in drinking water. Control diet contained soybean meal, sorghum, soybean peel, dextrin, soy oil, vitamins, and minerals. The nutrients and nutritional composition of each diet are presented in Table 1. http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B18-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B19-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B20-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B21-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B22-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B23-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B18-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B19-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B20-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B21-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B22-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B23-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B17-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B24-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#table_body_display_nutrients-09-01299-t001 39 Table 1. Diet composition and nutritional values. Components Control HSF Soybean meal (g/kg) 335 340 Sorghum (g/kg) 278 80 Soy hulls (g/kg) 188 116 Dextrin (g/kg) 146 20 Sucrose (g/kg) - 80 Fructose (g/kg) - 180 Soybean oil (g/kg) 14 - Lard (g/kg) - 154 Minerals (g/kg) 25 25 Salt (g/kg) 4 8 Nutritional values Protein (% of ingredients) 20.0 18.0 Carbohydrate (% of ingredients) 60.0 53.5 Fat (% of ingredients) 4.00 16.5 % of unsaturated 69.0 47.0 % of saturated 31.0 53.0 % Energy from protein 22.9 16.6 % Energy from carbohydrate 66.8 49.2 % Energy from fat 10.4 34.2 Energy (kcal/g) 3.59 4.35 HSF: high sugar-fat diet. 2.4. Nutritional Analysis The nutritional profile was evaluated according to the following parameters: food and caloric intake, and body weight. Food consumption was measured daily and body weight weekly. Caloric intake was determined by multiplying the energy value of each diet (g × Kcal) by the daily food consumption. For the HSF group, caloric intake also included calories from water (0.25 × 4 × mL consumed). 2.5. Metabolic and Hormonal Analysis After 12-h fasting, blood was collected from the tail and the plasma was used to measure insulin and biochemical parameters. Glucose concentration was determined by using a glucometer (Accu-Chek Performa; Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, USA); triglycerides and uric acid were measured with an automatic enzymatic analyzer system (Chemistry Analyzer BS-200, Mindray Medical International Limited, Shenzhen, China). The insulin level was measured using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method using commercial kits (EMD Millipore Corporation, Billerica, MA, USA). The homeostatic model of insulin resistance (HOMA-IR) was used as an insulin resistance index, calculated according to the formula: HOMA-IR = (fasting glucose (mmol/L) × fasting insulin (µU/mL))/22.5 [25]. http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B25-nutrients-09-01299 40 2.6. Renal Function Renal function was evaluated by measurements of plasma and urine. At 24 h urine was collected from the metabolic cages to measure the excretion of creatinine and the total protein. The urea and creatinine content of the plasma were measured. All analyses were performed with an automatic enzymatic analyzer system (Chemistry Analyzer BS-200, Mindray Medical International Limited, Shenzhen, China)). The glomerular filtration rate (GFR) = ((urine creatinine × flux)/plasma creatinine) was also calculated and the protein/creatinine ratio that reflects proteinuria was considered as a marker of kidney function [26]. 2.7. Systolic Blood Pressure Systolic blood pressure (SBP) evaluation was assessed in conscious rats by the non-invasive tail-cuff method with a NarcoBioSystems® Electro- Sphygmomanometer (International Biomedical, Austin, TX, USA). The animals were kept in a wooden box (50 × 40 cm) between 38–40 °C for 4–5 min to stimulate arterial vasodilation [27]. After this procedure, a cuff with a pneumatic pulse sensor was attached to the tail of each animal. The cuff was inflated to 200 mmHg pressure and subsequently deflated. The blood pressure values were recorded on a Gould RS 3200 polygraph (Gould Instrumental, Valley View, OH, USA). The average of three pressure readings was recorded for each animal. 2.8. Structural and Functional Cardiac Function by Echocardiogram Doppler echocardiographic evaluation was performed by a single examiner at the 20th week. Animals were anesthetized with ketamine (50 mg/kg, i.p.) and xylazine hydrochloride (1 mg/kg, i.p.). After trichotomy of the anterior chest region, the animals were placed in slight left lateral decubitus for the exam. The equipment used was model Vivid S6 (General Electric Medical Systems, Tirat Carmel, Israel) with a multifrequency ultrasonic transducer 5.0 to 11.5 MHz. To implement structural measurements of the heart, the images were obtained in one-dimensional mode (M-mode) guided by the images in two-dimensional mode with the transducer in the parasternal position, minor axis. Left ventricular (LV) evaluation was performed by positioning the cursor M-mode just below the mitral valve plane at the level of the papillary muscles. The images of the aorta and left atrium were obtained by positioning the M- mode course to plan the level of the aortic valve. The following cardiac structures were used to analyze cardiac morphology: left ventricular diastolic diameter (LVDD); left ventricular systolic diameter (LVSD); left atrium (LA); LA/AO; relative wall thickness (RWT). The LV systolic function was assessed by the following parameters; endocardial fractional shortening (FS%) ((LVDD − LVSD)/LVDD) × 100; posterior wall shortening velocity (PWSV). The LV http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B26-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B27-nutrients-09-01299 41 diastolic function was evaluated using the following indices: peak velocity of early diastolic filling (E wave). The study was supplemented by evaluation by tissue Doppler systolic displacement (S′), early diastolic (E′) and late (A′) of the mitral annulus (arithmetic average travel speeds of lateral and septal walls), and E/A and E/E′ wave ratios. 2.9. Statistical Analysis Data are presented as means ± standard deviation (SD) or medians (interquartile range). Differences among the groups were determined by two- way analysis of variance. Statistically significant variables were subjected to the Tukey post-hoc test to compare all the groups. Statistical analyses were performed using Sigma Stat for Windows Version 3.5. (Systat Software, Inc., San Jose, CA, USA). A p value of 0.05 was considered as statistically significant. Power calculations for the outcome variables were above 80%. 3. Results 3.1. Nutritional, Metabolic, and Hormonal Analysis Nutritional, metabolic, and hormonal analyses are showed in Table 2. The HSF group exhibited a higher body weight value than control group. Additionally, γOz prevented weight gain in HSF + γOz group. Glucose, insulin, and HOMA-IR were higher in HSF and HSF + γOz, when compared to control groups. The triglycerides level was higher in the HSF group and lower in the HSF + γOz group. Table 2. Nutritional, metabolic, and hormonal analysis. Groups Effects Control Control + yOz HSF HSF + yOz Diet yOz Interaction Final body weight 461 ± 54 475 ± 57 540 ± 48 * 447 ± 66 † 0.212 0.061 0.013 Chow fed (g/day) 24.2 ± 2.4 25.4 ± 2.4 12.2 ± 2.4 * 10.1 ± 1.5 # <0.001 0.030 0.018 Water intake (mL/day) 35.0 ± 5.1 35.2 ± 6.3 43.8 ± 3.8 * 43.3 ± 6.5 # <0.001 0.280 0.236 Caloric intake (kcal/day) 86.9 ± 8.7 91.0 ± 8.6 96.8 ± 8.7 87.4 ± 9.6 0.342 0.846 0.147 Glucose (mg/dL) 1 85.2 (11.7) 89.7 (5.2) 115.0 (15.5) * 132.1 ± 30.9 # <0.001 0.294 0.522 Triglycerides (mg/dL) 79.9 ± 14.3 63.2 ± 14.3 113.0 ± 24.1 * 89.7 ± 24.1 †,# <0.001 0.008 0.638 Insulin (ng/mL) 2.66 ± 1.27 3.42 ± 1.62 5.85 ± 1.25 * 5.32 ± 1.93 # <0.001 0.84 0.249 HOMA-IR 23.0 ± 11.6 27.3 ± 15.2 68.7 ± 11.6 * 69.1 ± 26.7 # <0.001 0.744 0.786 Uric acid 1.08 ± 0.11 1.14 ± 0.41 1.23 ± 0.18 1.32 ± 0.19 0.198 0.311 0.619 Data expressed as means ± standard deviation. 1—median (interquartile range). Comparison by two-way ANOVA with Tukey post-hoc. p < 0.05. HSF—high sugar fat diet. γOz—Gama-oryzanol. * vs. Control; † vs. HSF; # vs. Control + γOz. http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#table_body_display_nutrients-09-01299-t002 42 3.2. Renal Function Plasma urea was lower in the HSF and HSF + γOz groups, with no influence of γOz (Figure 1A). No significant difference among the four groups was observed for plasma creatinine (Figure 1B). Considering the renal function parameters, we can note that HSF diet worsened the GFR in HSF groups (Figure 1C). However, in HSF + γOz this ratio was slightly less impaired. The HSF group presented higher proteinuria when compared to C group, therefore γOz was clearly efficient in the prevention of this condition (Figure 1D). Figure 1. Renal function of animals. (A) plasma urea (mg/dL); (B) plasma creatinin (mg/dL); (C) glomerular filtration rate—GFR (mL/min); and (D) protein/creatinin ratio (proteinuria). Data are expressed as means ± standard deviation. Comparison by two-way ANOVA with Tukey post- hoc. HSF—high sugar fat diet. γOz—Gamma-oryzanol. * statistically different. 3.3. Cardiac Parameters and Systolic Blood Pressure The values of cardiac function and systolic blood pressure are presented in Table 3. The diet promoted an increase in systolic blood pressure, left atrium, relative left ventricular thickness and deterioration of systolic function, visualized by the decrease in the ejection fraction, of S′ and PWSV. Regarding diastolic function, although the diet did not alter the E wave and E/A wave, it promoted E/E′ increase. Although the γOz did not change any variables in the control group, it led to a decrease in LA, and in the relative thickness of the wall, and prevented the deterioration of systolic and diastolic function. http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#fig_body_display_nutrients-09-01299-f001 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#fig_body_display_nutrients-09-01299-f001 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#fig_body_display_nutrients-09-01299-f001 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#fig_body_display_nutrients-09-01299-f001 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#table_body_display_nutrients-09-01299-t003 43 Table 3. Cardiac function and systolic blood pressure. Groups Effect Control Control + yOz HSF HSF + yOz Diet yOz Interaction HR 239 ± 44 230 ± 40 280 ± 61 271 ± 50 0.008 0.737 0.884 SBP 129 ± 4 129 ± 5 137 ± 7 * 139 ± 5 # <0.001 0.915 0.815 LVDD (mm) 7.05 ± 0.30 6.74 ± 0.30 6.42 ± 0.35 7.05 ± 0.35 0.777 0.789 0.0037 LA (mm) 4.69 ± 0.23 4.63 ± 0.52 5.67 ± 0.21 * 4.76 ± 0.19 † <0.001 <0.001 <0.001 LA/AO 1.24 ± 0.09 1.18 ± 0.20 1.49 ± 0.11 * 1.24 ± 0.08 † 0.696 0.950 0.024 RWT 0.44 ± 0.02 0.44 ± 0.02 0.59 ± 0.09 * 0.43 ± 0.01 † <0.001 <0.001 <0.001 FS (%) 59.8 ± 4.0 58.9 ± 4.2 53.8 ± 5.6 * 56.6 ± 4.0 # <0.001 0.197 0.439 S′m (cm/s) 5.61 ± 0.28 5.67 ± 0.27 4.92 ± 0.55 * 5.66 ± 0.33 † <0.001 <0.001 0.003 PWSV (cm/s) 60.8 ± 4.3 60.6 ± 2.4 52.8 ± 5.9 * 61.9 ± 3.6 † 0.005 <0.001 0.003 E wave (cm/s) 74.3 ± 3.8 73.8 ± 4.9 76.7 ± 7.6 76.8 ± 6.1 0.102 0.748 0.484 E/A 1.72 ± 0.24 1.95 ± 0.30 1.84 ± 0.57 1.77 ± 0.19 0.339 0.262 0.239 E/E′ 13.8 ± 0.8 13.8 ± 1.5 17.6 ± 3.5 * 14.2 ± 1.2 † 0.002 0.008 0.041 HR—heart rate; SPB—systolic blood pressure; LVDD—left ventricular diastolic diameter; LA—left atrium; LA/AO—left atrium/aortic diameter; RWT—relative wall thickness; FS—endocardial fractional shortening; PWSV—posterior wall shortening velocity. Data expressed in mean ± standard deviation. Comparison by two-way ANOVA with Tukey post-hoc. p < 0.05. HSF— high sugar fat diet. γOz—Gama-oryzanol. * vs. Control; † vs. HSF; # vs. Control + γOz. 4. Discussion All analyzes performed in this experiment were made with animals in vivo, because it was an intermediate evaluation in the experimental protocol. The aim of this study was to present therapeutic effects of γOz on diseases related to the consumption of a high sugar-fat diet, with special focus on cardiac remodeling and renal disease. According to the literature, the simple carbohydrate is part of modern eating habits and is one of the main causes of the development of obesity, comorbidities, cardiac dysfunction, and renal disease [28,29,30] due to its lower molecular structure, high glycemic index, and fast absorption, leading to a higher fat deposition [31,32]. Saturated fatty acid is also largely consumed by the population and its role in inducing fat accumulation, metabolic disorders, and renal and cardiac dysfunction is already described [30]. Corroborating these data, HSF diet promoted metabolic, hormonal, cardiovascular, and renal changes, and increased body weight. The set of complications and comorbidities presented in this study are relevant because they are usually found in studies involving experimental models genetically modified for obesity [33,34,35]. Therefore, we can infer that the diet created for this study was able to mimic modern eating habits, as well as the development of associated diseases. Although this paper presents preliminary results, it is possible to note the http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B28-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B29-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B30-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B31-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B32-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B30-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B33-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B34-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B35-nutrients-09-01299 44 efficiency of γOz to prevent some disorders related to high sugar-fat diet consumption. The levels of γOz in brown rice range on average from 10–150 mg/100 g and the consumption of γOz by rats in this study was approximately 127 mg/day in Control + γOz, and 50 mg/day in HSF + γOz. Taking into account that in Brazil and others countries, where rice is a popular foodstuff and that people consume at least 100 g/day of this grain, the health benefits observed in this study can plausibly be attained in humans. Literature reports that γOz increases the elimination of fecal fat by inhibiting intestinal lipase, which impairs the degradation of ingested triglycerides to fatty acid and consequently reduces intestinal absorption, levels of serum triglycerides, and also storage in adipose tissue [22,36,37]. Our findings support this concept since the triglycerides levels were lowest in the HSF + γOz group, and inhibited weight gain, since the body weight in HSF + γOz was similar to the control group. However, some deeper pathways may also be responsible for this outcome. Immature adipocytes require lipid uptake and γOz reduce the activities of glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH), fatty acid synthase (FAS), fatty acid binding protein 4 (Fabp4), and sterol regulatory element-binding protein-1c (SREBP-1c), important lipogenic enzymes. In addition, the γOz is also able to inhibit PPARγ (proliferator- activated receptor γ) and C/EBPs (CCAAT-enhancer-binding proteins)—key factors involved in adipocytes differentiation and adipogenesis [38]. In relation to glucose metabolism parameters, the compound was not effective in preventing the changes, because the values of glucose, insulin and HOMA-IR index were higher in both groups that received HSF diet. Due the scarcity of literature addressing γOz and prevention of comorbidities in obese rats, we found only two studies by Wang et al. and Justo et al. [23,37], which showed reduced glycemia, insulin, and HOMA-IR with γOz treatment. The reason for the difference between this response and our data may be that these studies used genetically obese animals, and also a lower concentration of simple carbohydrates in their diet compared to ours. Regarding systolic blood pressure, γOz did not show efficacy in reducing values in either HSF group. Contrary to our results other researchers reported a reduction in blood pressure, but in these studies obese animals were supplemented with rice bran, which contains γOz, and also ferulic acid, the main component responsible for the reduction in this parameter [37,39]. According to Sowers [9] there is a cluster of interactive cardiac and renal risk factors, including overweight/obesity, hypertension, insulin resistance/hyperinsulinemia and dyslipidemia, microalbuminuria and/or reduced renal function, all of which constitute Cardiorenal Metabolic Syndrome (CRS). All these changes were present in HSF group. The protection afforded by γOz in both organs occurred even with the maintenance of high blood pressure, blood glucose, and insulin levels, as showed by the http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B22-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B36-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B37-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B38-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B23-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B37-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B37-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B39-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B9-nutrients-09-01299 45 maintenance in proteinuria and cardiac function in the HSF + γOz group. However, the cardiac and renal function impairment in the untreated HSF group may be due to the intrinsic mechanisms of obesity, and the probability of lipotoxicity, which is characterized by the increased flow of lipids to non- adipose organs when the adipose tissue capacity store is exceeded, resulting in ectopic fat deposits [40,41]. The inference that lipotoxicity was the main cause of comorbidities was due to the fact that the animals treated with γOz did not show hypertriglyceridemia or obesity, but maintained alterations in three risk factors: high glucose, insulin, and blood pressure. In this condition, fatty acids are more oxidized, stimulating an increased release of reactive species. Moreover, when this oxidation capacity is exceeded, there is an increase in non-oxidative intracellular pathways, generating cytotoxic derivatives, such as ceramide and diacylglycerol. These situations are responsible for the development of inflammation [42] and oxidative stress [43,44], also related to organ dysfunction. Our most important finding was to evidence the effect of the isolated compound which prevents the development of CRS. Therefore, as previously described [22,45,46], we can suggest that γOz acts as an anti- inflammatory and an anti-oxidant, preventing lipid peroxidation and avoiding lipotoxicity, which is associated with mitochondrial dysfunction and the formation of cellular ROS. In addition, the compound may be useful in preventing the development of the inflammatory process, reducing the amount of pro-inflammatory cytokines, such as TNF-α (tumor necrosis factor α), IL-6 (interleukin 6), and IL-1β [38,47]. 5. Conclusions In summary, γOz prevented weight gain, hypertriglyceridemia, systolic and diastolic dysfunction, and renal damage. These findings provide important information about the use of bioactive compounds as alternative therapeutics for obesity, related disorders, and CRS; however, more studies to investigate the causal mechanisms are necessary, although the effect of γOz in preventing the clinical condition of Cardiorenal Metabolic Syndrome was remarkable. Acknowledgments This work was funded by Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo—FAPESP (2015/10626-0). Author Contributions F.V.F., A.J.T.F., J.L.G. and F.M. conducted the experiment; F.V.F., A.J.T.F., I.O.M., S.G.Z.B., V.d.S.S., A.L.F., F.M., D.H.S.d.C., A.C.C. and C.R.C. analyzed the data; and F.V.F., A.J.T.F., I.O.M., A.C.C. and C.R.C. wrote the paper. Conflicts of Interest The authors declare no conflict of interest. http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B40-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B41-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B42-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B43-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B44-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B22-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B45-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B46-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B38-nutrients-09-01299 http://www.mdpi.com/2072-6643/9/12/1299/htm#B47-nutrients-09-01299 46 References 1. Canella, D.S.; Novaes, H.M.D.; Levy, R.B. The influence of excess weight and obesity on health spending in Brazilian households. Cad. Saúde Pública 2015, 31, 2331–2341. (In Portugues) [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 2. Hayes, A.; Chevalier, A.; D’Souza, M.; Baur, L.; Wen, L.M.; Simpson, J. Early childhood obesity: Association with healthcare expenditure in Australia. Obesity 2016, 24, 1752–1758. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 3. Perry, C.L.; Hoelscher, D.M.; Kohl, H.W., III. Research contributions on childhood obesity from a public-private partnership. Int. J. Behav. Nutr. Phys. Act. 2015, 12. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 4. Swinburn, B.A.; Caterson, I.; Seidell, J.C.; James, W.P.T. Diet, nutrition and the prevention of excess weight gain and obesity. Public Health Nutr. 2004, 7, 123–146. [Google Scholar] [PubMed] 5. La Fleur, S.E.; Luijendijk, M.C.M.; van Rozen, A.J.; Kalsbeek, A.; Adan, R.A.H. A free-choice high-fat high-sugar diet induces glucose intolerance and insulin unresponsiveness to a glucose load not explained by obesity. Int. J. Obes.2011, 35, 595–604. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 6. Bluher, M. Adipose tissue inflammation: A cause or consequence of obesity-related insulin resistance? Clin. Sci. 2016, 130, 1603–1614. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 7. Lechi, A. The obesity paradox: Is it really a paradox? Hypertension. Eat. Weight Disord.–Stud. Anorex. Bulim. Obes.2017, 22, 43–48. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 8. Rodríguez-Monforte, M.; Sánchez, E.; Barrio, F.; Costa, B.; Flores-Mateo, G. Metabolic syndrome and dietary patterns: A systematic review and meta-analysis of observational studies. Eur. J. Nutr. 2017, 56, 925–947. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 9. Sowers, J.R.; Whaley-Connell, A.; Hayden, M.R. The role of overweight and obesity in the cardiorenal syndrome. Cardiorenal Med. 2011, 1, 5–12. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 10. Szymanski, M.K.; De Boer, R.A.; Navis, G.J.; Van Gilst, W.H.; Hillege, H.L. Animal models of cardiorenal syndrome: A review. Heart Fail. Rev. 2012, 17, 411–420. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 11. Cabandugama, P.K.; Gardner, M.J.; Sowers, J.R. The renin angiotensin aldosterone system in obesity and hypertension. Med. Clin. 2017, 101, 129–137. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 12. Di Lullo, L.; Bellasi, A.; Russo, D.; Cozzolino, M.; Ronco, C. Cardiorenal acute kidney injury: Epidemiology, presentation, causes, pathophysiology and treatment. Int. J. Cardiol. 2017, 227, 143–150. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 13. Van Dokkum, R.P.E.; Eijkelkamp, W.B.A.; Kluppel, A.C.A.; Henning, R.H.; van Goor, H.; Citgez, M.; Windt, W.A.K.M.; van Veldhuisen, D.J.; de Graeff, P.A.; de Zeeuw, D.; et al. Myocardial infarction enhances progressive renal damage in an experimental model for cardio-renal interaction. J. Am. Soc. Nephrol. 2004, 15, 3103– 3110. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 14. Dikow, R.; Schmidt, U.; Kihm, L.P.; Schaier, M.; Schwenger, V.; Gross, M.-L.; Katus, H.A.; Zeier, M.; Hardt, S.E. Uremia aggravates left ventricular remodeling after myocardial infarction. Am. J. Nephrol. 2010, 32, 13–22. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=The%20influence%20of%20excess%20weight%20and%20obesity%20on%20health%20spending%20in%20Brazilian%20households&author=Canella,+D.S.&author=Novaes,+H.M.D.&author=Levy,+R.B.&publication_year=2015&journal=Cad.+Sa%C3%BAde+P%C3%BAblica&volume=31&pages=2331%E2%80%932341&doi=10.1590/0102-311X00184214&pmid=26840813 http://dx.doi.org/10.1590/0102-311X00184214 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26840813 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Early%20childhood%20obesity:%20Association%20with%20healthcare%20expenditure%20in%20Australia&author=Hayes,+A.&author=Chevalier,+A.&author=D%E2%80%99Souza,+M.&author=Baur,+L.&author=Wen,+L.M.&author=Simpson,+J.&publication_year=2016&journal=Obesity&volume=24&pages=1752%E2%80%931758&doi=10.1002/oby.21544&pmid=27380909 http://dx.doi.org/10.1002/oby.21544 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27380909 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Research%20contributions%20on%20childhood%20obesity%20from%20a%20public-private%20partnership&author=Perry,+C.L.&author=Hoelscher,+D.M.&author=Kohl,+H.W.,+III&publication_year=2015&journal=Int.+J.+Behav.+Nutr.+Phys.+Act.&volume=12&doi=10.1186/1479-5868-12-S1-S1&pmid=26222489 http://dx.doi.org/10.1186/1479-5868-12-S1-S1 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26222489 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Diet,%20nutrition%20and%20the%20prevention%20of%20excess%20weight%20gain%20and%20obesity&author=Swinburn,+B.A.&author=Caterson,+I.&author=Seidell,+J.C.&author=James,+W.P.T.&publication_year=2004&journal=Public+Health+Nutr.&volume=7&pages=123%E2%80%93146&pmid=14972057 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14972057 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=A%20free-choice%20high-fat%20high-sugar%20diet%20induces%20glucose%20intolerance%20and%20insulin%20unresponsiveness%20to%20a%20glucose%20load%20not%20explained%20by%20obesity&author=La+Fleur,+S.E.&author=Luijendijk,+M.C.M.&author=van+Rozen,+A.J.&author=Kalsbeek,+A.&author=Adan,+R.A.H.&publication_year=2011&journal=Int.+J.+Obes.&volume=35&pages=595%E2%80%93604&doi=10.1038/ijo.2010.164&pmid=20714332 http://dx.doi.org/10.1038/ijo.2010.164 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20714332 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Adipose%20tissue%20inflammation:%20A%20cause%20or%20consequence%20of%20obesity-related%20insulin%20resistance?&author=Bluher,+M.&publication_year=2016&journal=Clin.+Sci.&volume=130&pages=1603%E2%80%931614&doi=10.1042/CS20160005&pmid=27503945 http://dx.doi.org/10.1042/CS20160005 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27503945 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=The%20obesity%20paradox:%20Is%20it%20really%20a%20paradox?%20Hypertension&author=Lechi,+A.&publication_year=2017&journal=Eat.+Weight+Disord.%E2%80%93Stud.+Anorex.+Bulim.+Obes.&volume=22&pages=43%E2%80%9348&doi=10.1007/s40519-016-0330-4&pmid=27812911 http://dx.doi.org/10.1007/s40519-016-0330-4 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27812911 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Metabolic%20syndrome%20and%20dietary%20patterns:%20A%20systematic%20review%20and%20meta-analysis%20of%20observational%20studies&author=Rodr%C3%ADguez-Monforte,+M.&author=S%C3%A1nchez,+E.&author=Barrio,+F.&author=Costa,+B.&author=Flores-Mateo,+G.&publication_year=2017&journal=Eur.+J.+Nutr.&volume=56&pages=925%E2%80%93947&doi=10.1007/s00394-016-1305-y&pmid=27605002 http://dx.doi.org/10.1007/s00394-016-1305-y http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27605002 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=The%20role%20of%20overweight%20and%20obesity%20in%20the%20cardiorenal%20syndrome&author=Sowers,+J.R.&author=Whaley-Connell,+A.&author=Hayden,+M.R.&publication_year=2011&journal=Cardiorenal+Med.&volume=1&pages=5%E2%80%9312&doi=10.1159/000322822&pmid=22258461 http://dx.doi.org/10.1159/000322822 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22258461 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Animal%20models%20of%20cardiorenal%20syndrome:%20A%20review&author=Szymanski,+M.K.&author=De+Boer,+R.A.&author=Navis,+G.J.&author=Van+Gilst,+W.H.&author=Hillege,+H.L.&publication_year=2012&journal=Heart+Fail.+Rev.&volume=17&pages=411%E2%80%93420&doi=10.1007/s10741-011-9279-6&pmid=21909828 http://dx.doi.org/10.1007/s10741-011-9279-6 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21909828 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=The%20renin%20angiotensin%20aldosterone%20system%20in%20obesity%20and%20hypertension&author=Cabandugama,+P.K.&author=Gardner,+M.J.&author=Sowers,+J.R.&publication_year=2017&journal=Med.+Clin.&volume=101&pages=129%E2%80%93137&doi=10.1016/j.mcna.2016.08.009&pmid=27884224 http://dx.doi.org/10.1016/j.mcna.2016.08.009 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27884224 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Cardiorenal%20acute%20kidney%20injury:%20Epidemiology,%20presentation,%20causes,%20pathophysiology%20and%20treatment&author=Di+Lullo,+L.&author=Bellasi,+A.&author=Russo,+D.&author=Cozzolino,+M.&author=Ronco,+C.&publication_year=2017&journal=Int.+J.+Cardiol.&volume=227&pages=143%E2%80%93150&doi=10.1016/j.ijcard.2016.11.156&pmid=27863290 http://dx.doi.org/10.1016/j.ijcard.2016.11.156 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27863290 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Myocardial%20infarction%20enhances%20progressive%20renal%20damage%20in%20an%20experimental%20model%20for%20cardio-renal%20interaction&author=Van+Dokkum,+R.P.E.&author=Eijkelkamp,+W.B.A.&author=Kluppel,+A.C.A.&author=Henning,+R.H.&author=van+Goor,+H.&author=Citgez,+M.&author=Windt,+W.A.K.M.&author=van+Veldhuisen,+D.J.&author=de+Graeff,+P.A.&author=de+Zeeuw,+D.&publication_year=2004&journal=J.+Am.+Soc.+Nephrol.&volume=15&pages=3103%E2%80%933110&doi=10.1097/01.ASN.0000145895.62896.98&pmid=15579513 http://dx.doi.org/10.1097/01.ASN.0000145895.62896.98 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15579513 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Uremia%20aggravates%20left%20ventricular%20remodeling%20after%20myocardial%20infarction&author=Dikow,+R.&author=Schmidt,+U.&author=Kihm,+L.P.&author=Schaier,+M.&author=Schwenger,+V.&author=Gross,+M.-L.&author=Katus,+H.A.&author=Zeier,+M.&author=Hardt,+S.E.&publication_year=2010&journal=Am.+J.+Nephrol.&volume=32&pages=13%E2%80%9322&doi=10.1159/000313846&pmid=20484895 http://dx.doi.org/10.1159/000313846 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20484895 47 15. Windt, W.A.K.M.; Henning, R.H.; Kluppel, A.C.A.; Xu, Y.; de Zeeuw, D.; van Dokkum, R.P.E. Myocardial infarction does not further impair renal damage in 5/6 nephrectomized rats. Nephrol. Dial. Transp. 2008, 23, 3103–3110. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 16. Noiri, E.; Nagano, N.; Negishi, K.; Doi, K.; Miyata, S.; Abe, M.; Tanaka, T.; Okamoto, K.; Hanafusa, N.; Kondo, Y.; et al. Efficacy of darbepoetin in doxorubicin-induced cardiorenal injury in rats. Nephron Exp. Nephrol. 2006, 104, e6–e14. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 17. Son, M.J.; Rico, C.W.; Nam, S.H.; Kang, M.Y. Effect of oryzanol and ferulic acid on the glucose metabolism of mice fed with a high-fat diet. J. Food Sci. 2011, 76, 4–7. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 18. Xu, Z.; Hua, N.; Godber, J.S. Antioxidant activity of tocopherols, tocotrienols, and γ- oryzanol components from rice bran against cholesterol oxidation accelerated by 2,2′- azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride. J. Agric. Food Chem. 2001, 49, 2077–2081. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 19. Xu, Z.; Godber, J.S. Purification and identification of components of γ-oryzanol in rice bran oil. J. Agric. Food Chem.1999, 47, 2724–2728. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 20. Minatel, I.O.; Han, S.; Aldini, G.; Colzani, M.; Matthan, N.R.; Correa, C.R.; Fecchio, D.; Yeum, K. Fat-soluble bioactive components in colored rice varieties. J. Med. Food 2014, 17, 1134–1141. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 21. Zolali, E.; Asgharian, P.; Hamishehkar, H.; Kouhsoltani, M.; Khodaii, H.; Hamishehkar, H. Effects of gamma oryzanol on factors of oxidative stress and sepsis- induced lung injury in experimental animal model. Iran. J. Basic Med. Sci.2015, 18, 1257–1263. [Google Scholar] [PubMed] 22. Candiracci, M.; Justo, M.L.; Castaño, A.; Rodriguez-Rodriguez, R.; Herrera, M.D. Rice bran enzymatic extract—Supplemented diets modulate adipose tissue inflammation markers in Zucker rats. Nutrition 2014, 30, 466–472. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 23. Wang, O.; Liu, J.; Cheng, Q.; Guo, X.; Wang, Y.; Zhao, L.; Zhou, F.; Ji, B. Effects of ferulic acid and γ-oryzanol on high-fat and high-fructose diet-induced metabolic syndrome in rats. PLoS ONE 2015, 10, e0118135. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 24. IBGE—Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística Pesquisa de Orçamentos Familiares (POF) 2008–2009: Análise do Consumo Alimentar Pessoal No Brasil. Available online: https://biblioteca.ibge.gov.br/visualizacao/livros/liv50063.pdf/ (accessed on 26 September 2017). 25. Matthews, D.R.; Hosker, J.P.; Rudenski, A.S.; Naylor, B.A.; Treacher, D.F.; Turner, R.C. Homeostasis model assessment: Insulin resistance and beta-cell function from fasting plasma glucose and insulin concentrations in man. Diabetologia 1985, 28, 412– 419. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 26. Anna, V.O.; Mátyus, J.; Sárkány, E.; Horváth, A.; Fodor, B. New trends in the laboratory diagnostics of proteinuria and albuminuria. Orv. Hetil. 2010, 151, 864–869. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 27. Dos Santos, P.P.; Rafacho, B.P.M.; de Freitas Gonçalves, A.; Jaldin, R.G.; do Nascimento, T.B.; Silva, M.A.B.; Cau, S.B.A.; Roscani, M.G.; Azevedo, P.S.; Minicucci, M.F.; et al. Vitamin D induces increased systolic arterial pressure via http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Myocardial%20infarction%20does%20not%20further%20impair%20renal%20damage%20in%205/6%20nephrectomized%20rats&author=Windt,+W.A.K.M.&author=Henning,+R.H.&author=Kluppel,+A.C.A.&author=Xu,+Y.&author=de+Zeeuw,+D.&author=van+Dokkum,+R.P.E.&publication_year=2008&journal=Nephrol.+Dial.+Transp.&volume=23&pages=3103%E2%80%933110&doi=10.1093/ndt/gfn233&pmid=18503101 http://dx.doi.org/10.1093/ndt/gfn233 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18503101 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Efficacy%20of%20darbepoetin%20in%20doxorubicin-induced%20cardiorenal%20injury%20in%20rats&author=Noiri,+E.&author=Nagano,+N.&author=Negishi,+K.&author=Doi,+K.&author=Miyata,+S.&author=Abe,+M.&author=Tanaka,+T.&author=Okamoto,+K.&author=Hanafusa,+N.&author=Kondo,+Y.&publication_year=2006&journal=Nephron+Exp.+Nephrol.&volume=104&pages=e6%E2%80%93e14&doi=10.1159/000093258&pmid=16707910 http://dx.doi.org/10.1159/000093258 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16707910 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Effect%20of%20oryzanol%20and%20ferulic%20acid%20on%20the%20glucose%20metabolism%20of%20mice%20fed%20with%20a%20high-fat%20diet&author=Son,+M.J.&author=Rico,+C.W.&author=Nam,+S.H.&author=Kang,+M.Y.&publication_year=2011&journal=J.+Food+Sci.&volume=76&pages=4%E2%80%937&doi=10.1111/j.1750-3841.2010.01907.x&pmid=21535685 http://dx.doi.org/10.1111/j.1750-3841.2010.01907.x http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21535685 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Antioxidant%20activity%20of%20tocopherols,%20tocotrienols,%20and%20%CE%B3-oryzanol%20components%20from%20rice%20bran%20against%20cholesterol%20oxidation%20accelerated%20by%202,2%E2%80%B2-azobis(2-methylpropionamidine)%20dihydrochloride&author=Xu,+Z.&author=Hua,+N.&author=Godber,+J.S.&publication_year=2001&journal=J.+Agric.+Food+Chem.&volume=49&pages=2077%E2%80%932081&doi=10.1021/jf0012852&pmid=11308370 http://dx.doi.org/10.1021/jf0012852 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11308370 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Purification%20and%20identification%20of%20components%20of%20%CE%B3-oryzanol%20in%20rice%20bran%20oil&author=Xu,+Z.&author=Godber,+J.S.&publication_year=1999&journal=J.+Agric.+Food+Chem.&volume=47&pages=2724%E2%80%932728&doi=10.1021/jf981175j&pmid=10552553 http://dx.doi.org/10.1021/jf981175j http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10552553 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Fat-soluble%20bioactive%20components%20in%20colored%20rice%20varieties&author=Minatel,+I.O.&author=Han,+S.&author=Aldini,+G.&author=Colzani,+M.&author=Matthan,+N.R.&author=Correa,+C.R.&author=Fecchio,+D.&author=Yeum,+K.&publication_year=2014&journal=J.+Med.+Food&volume=17&pages=1134%E2%80%931141&doi=10.1089/jmf.2014.3146&pmid=25162990 http://dx.doi.org/10.1089/jmf.2014.3146 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25162990 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Effects%20of%20gamma%20oryzanol%20on%20factors%20of%20oxidative%20stress%20and%20sepsis-induced%20lung%20injury%20in%20experimental%20animal%20model&author=Zolali,+E.&author=Asgharian,+P.&author=Hamishehkar,+H.&author=Kouhsoltani,+M.&author=Khodaii,+H.&author=Hamishehkar,+H.&publication_year=2015&journal=Iran.+J.+Basic+Med.+Sci.&volume=18&pages=1257%E2%80%931263&pmid=26877858 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26877858 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Rice%20bran%20enzymatic%20extract%E2%80%94Supplemented%20diets%20modulate%20adipose%20tissue%20inflammation%20markers%20in%20Zucker%20rats&author=Candiracci,+M.&author=Justo,+M.L.&author=Casta%C3%B1o,+A.&author=Rodriguez-Rodriguez,+R.&author=Herrera,+M.D.&publication_year=2014&journal=Nutrition&volume=30&pages=466%E2%80%93472&doi=10.1016/j.nut.2013.09.016&pmid=24607304 http://dx.doi.org/10.1016/j.nut.2013.09.016 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24607304 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Effects%20of%20ferulic%20acid%20and%20%CE%B3-oryzanol%20on%20high-fat%20and%20high-fructose%20diet-induced%20metabolic%20syndrome%20in%20rats&author=Wang,+O.&author=Liu,+J.&author=Cheng,+Q.&author=Guo,+X.&author=Wang,+Y.&author=Zhao,+L.&author=Zhou,+F.&author=Ji,+B.&publication_year=2015&journal=PLoS+ONE&volume=10&pages=e0118135&doi=10.1371/journal.pone.0118135&pmid=25646799 http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0118135 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25646799 https://biblioteca.ibge.gov.br/visualizacao/livros/liv50063.pdf/ http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Homeostasis%20model%20assessment:%20Insulin%20resistance%20and%20beta-cell%20function%20from%20fasting%20plasma%20glucose%20and%20insulin%20concentrations%20in%20man&author=Matthews,+D.R.&author=Hosker,+J.P.&author=Rudenski,+A.S.&author=Naylor,+B.A.&author=Treacher,+D.F.&author=Turner,+R.C.&publication_year=1985&journal=Diabetologia&volume=28&pages=412%E2%80%93419&doi=10.1007/BF00280883&pmid=3899825 http://dx.doi.org/10.1007/BF00280883 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3899825 http://scholar.google.com/scholar_lookup?title=New%20trends%20in%20the%20laboratory%20diagnostics%20of%20proteinuria%20and%20albuminuria&author=Anna,+V.O.&author=M%C3%A1tyus,+J.&author=S%C3%A1rk%C3%A1ny,+E.&author=Horv%C3%A1th,+A.&author=Fodor,+B.&publication_year=2010&journal=Orv.+Hetil.&volume=151&pages=864%E2%80%93869&doi=10.1556/OH.2010.28891&pmid=20462846 http://dx.doi.org/10.1556/OH.2010.28891 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20462846 48 vascular reactivity and mechanical properties. PLoS ONE 2014, 9, e98895. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 28. Panchal, S.K.; Poudyal, H.; Iyer, A.; Nazer, R.; Alam, M.A.; Diwan, V.; Kauter, K.; Sernia, C.; Campbell, F.; Ward, L.; et al. High-carbohydrate, high-fat diet-induced metabolic syndrome and cardiovascular remodeling in rats. J. Cardiovasc. Pharmacol. 2011, 57, 611–624. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 29. Bolton-Smith, C.; Woodward, M. Dietary composition and fat to sugar ratios in relation to obesity. Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord. 1994, 18, 820–828. [Google Scholar] [PubMed] 30. Oliveira Junior, S.A.; Padovani, C.R.; Rodrigues, S.A.; Silva, N.R.; Martinez, P.F.; Campos, D.H.; Okoshi, M.P.; Okoshi, K.; Dal-Pai, M.; Cicogna, A.C. Extensive impact of saturated fatty acids on metabolic and cardiovascular profile in rats with diet-induced obesity: A canonical analysis. Cardiovasc. Diabetol. 2013, 12, 65. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 31. Levin, R.J. Digestion and absorption of carbohydrates—From molecules and membranes to humans. Am. J. Clin. Nutr. 1994, 59, 690S–698S. [Google Scholar] [PubMed] 32. Stanhope, K.L.; Havel, P.J. Fructose consumption: Potential mechanisms for its effects to increase visceral adiposity and induce dyslipidemia and insulin resistance. Curr. Opin. Lipidol. 2008, 19, 16–24. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 33. Marsh, S.A.; Powell, P.C.; Agarwal, A.; Dell’Italia, L.J.; Chatham, J.C. Cardiovascular dysfunction in Zucker obese and Zucker diabetic fatty rats: Role of hydronephrosis. Am. J. Physiol.–Heart Circ. Physiol. 2007, 293, H292–H298. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 34. Linz, D.; Hohl, M.; Schutze, J.; Mahfoud, F.; Speer, T.; Linz, B.; Hubschle, T.; Juretschke, H.-P.; Dechend, R.; Geisel, J.; et al. Progression of kidney injury and cardiac remodeling in obese spontaneously hypertensive rats: The role of renal sympathetic innervation. Am. J. Hypertens. 2015, 28, 256–265. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 35. Khan, M.A.H.; Neckář, J.; Cummens, B.; Wahl, G.M.; Imig, J.D. Azilsartan decreases renal and cardiovascular injury in the spontaneously hypertensive obese rat. Cardiovasc. Drugs Ther. 2014, 28, 313–322. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed] 36. Minatel, I.O.; Lee, Y.-M.