RESSALVA Atendendo solicitação do(a) autor(a), o texto completo desta Dissertação será disponibilizado somente a partir de 10/05/23. UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JÚLIO DE MESQUITA FILHO” FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA E ZOOTECNIA CAMPUS - BOTUCATU/SP AVALIAÇÃO DA APLICAÇÃO INTRAOVARIANA DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS E DO MEIO CONDICIONADO EM BOVINOS LUCAS MONTEIRO DO CARMO BOTUCATU – SÃO PAULO Julho/2021 UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JÚLIO DE MESQUITA FILHO” FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA E ZOOTECNIA CAMPUS - BOTUCATU/SP AVALIAÇÃO DA APLICAÇÃO INTRAOVARIANA DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS E DO MEIO CONDICIONADO EM BOVINOS LUCAS MONTEIRO DO CARMO Dissertação apresentada à Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Campus de Botucatu, como parte dos requisitos para obtenção do título de Mestre no Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia Animal. Orientadora: Profa. Dra Eunice Oba BOTUCATU – SÃO PAULO Julho/2021 Palavras-chave: Insuficiência ovariana prematura; Terapia com células; Vacas. Carmo, Lucas Monteiro do. Avaliação da aplicação intraovariana de células-tronco mesenquimais e do meio condicionado em bovinos / Lucas Monteiro do Carmo. - Botucatu, 2021 Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Orientador: Eunice Oba Capes: 50504002 1. Bovino - Doenças. 2. Células-tronco mesenquimais. 3. Insuficiência ovariana primária. 4. Terapia com células. DIVISÃO TÉCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAÇÃO - CÂMPUS DE BOTUCATU - UNESP BIBLIOTECÁRIA RESPONSÁVEL: ROSEMEIRE APARECIDA VICENTE-CRB 8/5651 FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA SEÇÃO TÉC. AQUIS. TRATAMENTO DA INFORM. Lucas Monteiro do Carmo AVALIAÇÃO DA APLICAÇÃO INTRAOVARIANA DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS E DO MEIO CONDICIONADO EM BOVINOS Dissertação apresentada à Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Campus de Botucatu, para a defesa. Banca examinadora Presidente e orientadora Profa. Dra. Eunice Oba Departamento de Cirurgia Veterinária e Reprodução Animal, FMVZ- UNESP- Botucatu/SP. Profa. Dra. Júlia Gleyci Soares de Carvalho Departamento de Urologia/EPM/UNIFESP Prof. Dr. Fábio Morotti Departamento de Clínicas Veterinárias - UEL Agradecimentos A Deus por me conceder o dom da vida e a oportunidade de aprender um pouco todos os dias. Agradeço a minha família que nunca mediu esforços para me ajudar e me fazer chegar até aqui. Meu muito obrigado à minha companheira Karina Ellen Florentino, que salvou e ressignificou a minha vida, sem ela eu não estaria aqui. Agradeço imensamente a todos que de forma direta ou indireta me ajudaram a conduzir essa pesquisa. Mesmo com tantas dificuldades e incertezas devido à pandemia do covid-19, não faltaram profissionais dedicados e comprometidos com a ciência para que a pesquisa prosseguisse. Dentre todos os inúmeros professores que me ajudaram nessa caminhada, deixo meu agradecimento especial a minha orientadora Profa. Dra Eunice Oba, que me acolheu desde minha chegada a cidade de Botucatu, me aconselhando e me instruído sempre com muita sabedoria e zelo. A empresa Omics® biotecnologia, por ceder sua estrutura e equipe para produção das células-tronco, muito obrigado. A faculdade de ciências sociais e agrarias de Itapeva – FAIT que cedeu a estrutura e os animais para o desenvolvimento do projeto, um agradecimento especial aos professores Edjalma Rodrigues da Silva Junior e Juliana de Oliveira Bernardo da instituição que viabilizaram essa parceria. A Empresa Bovigênese® Biotecnologia animal, em especial ao M.V. MSc. Bernardo M. Bayeux pela participação e todo auxílio durante o experimento, muito obrigado. Agradeço ao apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - 132310/2019-8 e à Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) - 2019/01093-9 pelo financiamento da pesquisa e concessão das bolsas. javascript:mediumPopup('/SAGe_WEB/printProcess.do?abstractProcessId=288949&typeProcess=true&showInPopup=true&org.apache.struts.taglib.html.TOKEN=63f305e2b43c83dfb9e48bfd9b53ec2d&method=printProcess',%20'popup') LISTA DE ABREVIATURAS CTMs - Células-tronco mesenquimais MC - Meio condicionado PBS - Tampão fosfato-salino AMH - Hormônio anti-mulleriano IOP - Insuficiência ovariana prematura CTEs - Células-tronco embrionárias CTAs - Células-tronco adultas iPSCs - Induced pluripotent stem cells FSH - Hormônio folículo estimulante OPU - Ovun pick-up CONCEA - Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal CEUA - Comissão de Ética do Uso de Animais PPT - Proteína plasmática total CFA - Contagem de folículos antrais ECC - Escore de condição corporal SUMÁRIO CAPÍTULO 1 ...................................................................................................... 1 1. INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA ................................................................. 2 2. REVISÃO DE LITERATURA .......................................................................... 4 2.1 Definição e histórico .................................................................................. 4 2.2 Classificações ........................................................................................... 4 2.3 Células-tronco embrionárias versus células-tronco de origem adulta ....... 5 2.4 Utilização e perspectivas para o uso em condições ovarianas ................. 5 2.5 Mecanismos de ação das células-tronco sobre os ovários ....................... 6 2.5.1 Células-tronco e sua capacidade de diferenciação em células ovarianas. .................................................................................................... 6 2.5.2 Ação parácrina das células-tronco na recuperação de ovários lesionados quimicamente. ........................................................................... 7 2.5.3 Neofoliculogênesee reestabelecimento da função ovariana ............... 9 2.6 CTMS e seus efeitos imunomodulatórios. ................................................ 9 2.7 Segurança em relação ao uso clínico das células-tronco ....................... 10 2.8 Terapia com meio condicionado ............................................................. 11 2.8.1 Segurança do meio condicionado .................................................... 12 2.9 Aplicação intraovariana de células-tronco e meio condicionado em bovinos. ........................................................................................................ 12 3 Considerações gerais ................................................................................ 12 REFERÊNCIAS ................................................................................................ 13 CAPÍTULO 2 .................................................................................................... 19 Células-tronco mesenquimais e meio condicionado intraovariano em bovinos: Uma terapia segura e promissora .................................................................... 20 INTRODUÇÃO ................................................................................................. 22 MATERIAL E MÉTODOS ................................................................................. 23 Comitê de ética .......................................................................................... 23 Isolamento, expansão e criopreservação de CTMs oriundas de tecido adiposo de bovinos .................................................................................... 24 Obtenção do MC ....................................................................................... 25 Animais ...................................................................................................... 25 Delineamento experimental ....................................................................... 25 Protocolo para sincronização da onda folicular ......................................... 26 Aplicação intraovariana de meio PBS, MC e CTMs .................................. 26 Exame ultrassonográfico ........................................................................... 27 Temperatura corporal ................................................................................ 27 Colheita de sangue .................................................................................... 27 Análises hematológicas ............................................................................. 28 Concentração de AMH .............................................................................. 28 Análise estatística ...................................................................................... 28 RESULTADOS ................................................................................................. 29 DISCUSSÃO .................................................................................................... 31 CONCLUSÃO .................................................................................................. 34 AGRADECIMENTOS ....................................................................................... 34 REFERÊNCIAS ................................................................................................ 35 35 REFERÊNCIAS 462 [1] Panay N, Fenton A. 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