UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA  
“JÚLIO DE MESQUITA FILHO” 

FACULDADE DE MEDICINA 
 

 

 

 

Leticia Gomes de Pontes  
 

 

 

 

ANÁLISE PROTEÔMICA DO PLASMA SANGUÍNEO E 
CRIOPRECIPITADO DE BÚFALOS Bubalus Bubalis  

 

 

 

 

Dissertação apresentada ao programa de 
Pós-Graduação em Doenças Tropicais da 
faculdade de Medicina de Botucatu, 
Universidade Estadual Paulista “Júlio de 
Mesquita Filho”, para obtenção do titulo de 
Mestre.   

  

  

Orientadora: Profa. Dra. Lucilene Delazari dos Santos 

 

Co-orientador: Prof. Dr. Rui Seabra Ferreira Junior 

 

 
 

 
Botucatu 

2015 



Leticia Gomes de Pontes  
 

 

 

 

Análise proteômica do plasma sanguíneo e 
crioprecipitado de búfalos Bubalus Bubalis 

  

  

Dissertação apresentada ao programa de 
Pós-Graduação em Doenças Tropicais da 
faculdade de Medicina de Botucatu, 
Universidade Estadual Paulista “Júlio de 
Mesquita Filho”, para obtenção do titulo de 
Mestre.   

  

 

 

 

  

Orientadora: Profa. Dra. Lucilene Delazari dos Santos, CEVAP/FMB/UNESP 

 

Co-orientador: Prof. Dr. Rui Seabra Ferreira Junior, CEVAP/FMB/UNESP 

 

 

 

Botucatu 

2015 



 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



Comissão Examinadora 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

Leticia Gomes de Pontes 
 

 
 
 

Análise proteômica do plasma sanguíneo e 
crioprecipitado de búfalos Bubalus Bubalis 

 
Dissertação apresentada ao programa 
de Pós-Graduação em Doenças 
Tropicais da faculdade de Medicina de 
Botucatu, Universidade Estadual 
Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, para 
obtenção do titulo de Mestre 

 
 

Orientadora: Profa. Dra. Lucilene Delazari dos Santos 
 

Co-orientador: Prof. Dr. Rui Seabra Ferreira Junior 
 
 

Comissão examinadora 
 
 
 

__________________________ 
Profa. Dra. Lucilene Delazari dos Santos 

Faculdade de Medicina de Botucatu - UNESP 
Pós-graduação em Doenças Tropicais da Faculdade de Medicina - UNESP, 

Botucatu 
 
 
 

_________________________________ 
Prof. Dr. Mario Sérgio Palma 

Universidade Estadual Paulista Rio Claro - UNESP 
Centro de Estudos de Insetos Sociais (CEIS) - Departamento de 

Biologia 
 
 

______________________________ 
Profa. Dra. Marília Afonso Rabelo Buzalaf 

Faculdade de Odontologia de Bauru - USP 
Departamento de Ciências Biológicas 

 



Dados Curriculares 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

DADOS CURRICULARES 
 
 
 

Leticia Gomes de Pontes 
 
 
 

NASCIMENTO : 28/10/1986 
 
FILIAÇÃO: Nelson Mariano de Pontes Filho e Nilma Gomes de 
Pontes  
 
2011 – Graduação em Biologia pela Universidade Estadual 
Paulista (UNESP) 
 
2012 – Bolsista de aperfeiçoamento em Apoio Técnico 
Laboratorial. 
 
2013 – Realizou o projeto de extensão: “Elaboração de material 
didático para o ensino sobre animais peçonhentos e seus 
acidentes no serpentário do CEVAP” 
 
2014 – Estágio docência do curso de Biologia da Universidade 
Estadual Paulista na disciplina de Bioquímica da Profa. Dra. 
Luciana Francisco Fleuri 
 
 
 
 



Dedicatória 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 

DEDICATÓRIA



Dedicatória 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 
 
 

Dedico esta dissertação 

 

 

Аos meus pais, Nelson Mariano de 

Pontes Filho e Nilma Gomes de Pontes 

que nãо mediram esforços para qυе еυ 

chegasse аté esta etapa dе minha vida. 

 

 

Ao meu noivo Fabio Chaves Sgavioli, 

pessoa cоm quem аmо partilhar а vida. 

Obrigado pelo carinho, а paciência е pоr 

sua capacidade dе me trazer pаz mesmo 

nа correria. 

 

 

A minha orientadora Prof. Dra. Lucilene 

Delazari dos Santos, pela paciência, 

dedicação, incentivo e sabedoria que muito 

me auxiliou para conclusão deste trabalho.   

 
 



Agradecimentos 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

AGRADECIMENTOS



Agradecimentos 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

A Deus, cuja sabedoria guia nossos caminhos. 

 

À Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP pela infraestrutura e 

condições para o desenvolvimento deste trabalho 

 

Ao Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP) pela 

oportunidade de fazer parte dessa equipe e aos funcionários que sempre me 

auxiliaram.   

 

À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Ensino Superior 

(CAPES), pelo auxilio financeiro que viabilizou a realização desse trabalho 

de pesquisa.  

 

Aos pesquisadores qυе mе acompanharam, еm especial a Profa. Dra. 

Lucilene Delazari dos Santos porque sem ela nada disso seria possível, Prof. 

Dr. Benedito Barraviera е ao Prof. Dr. Rui Seabra Ferreira Junior, também 

responsáveis pеlа realização deste trabalho. 

 

Ao Prof. Dr. Pedro de Magalhães Padilha pelos ensinamentos científicos. 

 

Ao Prof. Dr. Mario Sérgio Palma por ser sempre solicito a ajudar.  

 

À Profa. Dra. Eliane Candiani Arantes pelo carinho. 

 



Agradecimentos 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

Ao Laboratório de Espectrometria de Massas do Laboratório Nacional de 

Biociências, CNPEM, Campinas, SP pelo suporte nas análises de 

espectrometria de massas e por me ajudaram na realização do presente 

trabalho. 

 

Аоs meus amigos, pеlаs alegrias, tristezas е dores compartilhadas. Em 

especial a Rafaela Nunes da Silva, Lidiane Nunes Barbosa e ao Franco 

Valentin Pereira. 

 

Aos meus amigos do CEVAP pela paciência. Em especial a Patrícia Rocha 

Mendes, Aline Ropelli Silva e Fausto Capuano Neto.  

 

A todos aqueles que, direta ou indiretamente, colaboraram para a realização 

deste trabalho, meu sincero obrigado.  

 

 
 



Epígrafe 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

EPIGRAFE 
 
 



Epígrafe 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 

“Quando a gente acha que tem todas as respostas, vem a vida 

e muda todas as perguntas...”  

 
Luís Fernando Veríssimo 



Resumo 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

RESUMO 



Resumo 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

Desde o advento da nova era da abordagem proteômica, a identificação de 

assinaturas moleculares individuais em vários sistemas biológicos pela 

pesquisa básica tem impulsionado a descoberta de biomarcadores diretamente 

relacionados a aplicações terapêuticas, promovendo desenvolvimento de 

testes diagnósticos clínicos mais específicos. Neste contexto, a necessidade da 

aplicação clínica estimula a pesquisa de bancada, sendo que novas 

tecnologias permitem novas descobertas e podem se transformar em 

prognósticos efetivos, medicamentos inéditos ou mais eficazes e/ou testes 

diagnósticos mais específicos. Os bubalinos tem sido alvo de muitas iniciativas 

econômicas e de pesquisas translacionais. Uma vez que, seu plasma 

sanguíneo é rico em fibrinogênio, búfalos da espécie Bubalus bubalis raça 

Murrah, se tornaram doadores primordiais de matéria-prima para o 

desenvolvimento de insumos biológicos, como por exemplo, o selante de fibrina 

derivado do veneno de serpentes e do sangue de bubalinos produzido pelo 

Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP). Para tal, se 

fez necessário melhor compreender a composição do plasma sanguíneo e do 

crioprecipitado destes bubalinos, a fim de dar suporte à pesquisas futuras que 

envolverão a identificação de marcadores moleculares de doenças infecciosas 

que podem acometer estes animais doadores. Este trabalho foi dividido em 

duas partes: a primeira destaca-se os achados prévios e significância da 

bubalinocultura, a utilização do sangue de animais para o desenvolvimento de 

bioinsumos na saúde animal e humana, a produção e aplicação de diversos 

selantes de fibrina, o uso da abordagem proteômica como estratégia 

investigativa para a prospecção de biomarcadores moleculares de doenças 

infecciosas e uma breve descrição das principais técnicas analíticas 

empregadas pela abordagem proteômica. A segunda parte deste trabalho, 

destaca-se a caracterização proteica do plasma sanguíneo e do crioprecipitado 

de búfalos B. bubalis clinicamente sadios, evidenciando 17 grupos de proteínas 

majoritárias envolvidas com a via de sinalização do sistema complemento e a 

cascasta de coagulação. 

Palavras-chave: Análise proteômica, bubalinos, selante de fibrina, 

marcadores moleculares. 



Abstract 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ABSTRACT



Abstract 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

Since the advent of the new era of proteomics approach, the identification of 

individual molecular signatures in various biological systems for basic research 

has driven the discovery of biomarkers directly related to therapeutic 

applications, promoting the development of more specific clinical diagnostic 

tests. In this context, the need for clinical application stimulates the bench 

study, which new technologies and new discoveries can become effective 

prognostic, or novel drugs more effective and/or more specific diagnostic tests. 

The bubaline have been targets of several economic initiatives and translational 

research. Since its plasma is rich in fibrinogen, Bubalus bubalis water buffalos 

(Murrah) have became main donors of raw material for the development of 

biological insumes, as example, the fibrin sealant from snake venoms and water 

buffalos blood produced by The Center for the Studies of Venoms and 

Venomous Animals (CEVAP) at UNESP. Then, it was necessary to better 

understand the composition of the blood plasma and cryoprecipitate these 

buffalo, in order to support future research will involve the identification of 

molecular markers of infectious diseases that can affect these donor animals. 

This study was divided into two parts: the first stands up the previous findings 

and significance of buffalo, the use of animal blood for developing bioinsumes in 

animal and human health, the production and application of several fibrin 

sealants, the use proteomics approach as a research strategy for the discovery 

of molecular biomarkers of infect diseases and a brief description of the 

analytical methods used by proteomics approach. The second part of this work 

brings the protein characterization of blood plasma and cryoprecipitate of B. 

bubalis healthy buffalo, where have evidenced 17 groups of major proteins 

involved in the signaling pathway of the complement system and the cascade 

coagulation. 

 

Keywords: Proteomic Analysis, water buffalo, fibrin sealant, molecular 

markers.  
 



Lista de Abreviaturas 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

LISTA DE ABREVIATURAS 



Lista de Abreviaturas 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

MAPA - Ministério da agricultura, pecuária e abastecimento 

IgG - Imunoglobulina G 

CEVAP - Centro de estudos de venenos e animais peçonhentos  

Decit - Ministério da ciência e tecnologia  

CNPq - Conselho nacional de desenvolvimento cientifico e 
tecnológico 

SUS - Sistema único de saúde  

PFA - Proteínas de fase aguda  

Hp - Haptoglobina 

HPLC - Cromatografia liquida de alta performance  

2D - Eletroforese bidimensional 

MALDI - Matrix-assisted laser desorption/ionization 

ESI - Electrospray 

SILAC - Stable isotope labelling by amino acids in cell culture 

iTRAQ - Isobaric tag for relative and absolute quantification 

 



Sumário 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

SUMÁRIO 



Sumário 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

RESUMO   

ABSTRACT  

  

CAPÍTULO 1  

Revisão Bibliográfica......................................................................................... 22 

1. Achados prévios e significância....................................................................... 23 

1.1.  O papel dos bubalinos na produção de bioinsumos.................................... 23 

1.2. Pesquisas biotecnológicas aplicadas à animais soroprodutores.................. 24 

1.3. Selantes de fibrina como adesivos cirúrgicos: descobertas e suas 
diversas aplicações.............................................................................................. 27 

1.4. Desenvolvimento de um novo selante de fibrina para o tratamento de 
ulceras crônicas venosas..................................................................................... 32 

1.5. Marcadores moleculares na avaliação da sanidade animal......................... 36 

1.6. Abordagem proteômica como estratégia de investigação............................ 38 

1.7. As ferramentas analíticas da proteômica em estudos translacionais........... 41 

2. Referências...................................................................................................... 45 

  

CAPÍTULO 2  

1. Análise proteômica do plasma sanguíneo e criopreciptado de búfalos 
Bubalus Bubalis................................................................................................. 57 

Resumo................................................................................................................ 58 

Abstract................................................................................................................ 59 

1. Introdução........................................................................................................ 60 

2. Objetivo geral................................................................................................... 64 

3. Material e métodos  65 

3.1 Aspectos Éticos e origem do material biológico em estudo........................... 65 

3.2 Coleta do sangue .......................................................................................... 66 

3.3 Obtenção do crioprecipitado.......................................................................... 66 



Sumário 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

3.4 Eletroforese bidimensional............................................................................. 66 

3.5 Aquisição e análises das imagens de géis.................................................... 67 

3.6 Digestão de proteínas in gel.......................................................................... 68 

3.7 Sequenciamento peptídico por espectrometria de massas (LC-MS/MS)...... 68 

3.8 Bioinformática proteômica.............................................................................. 69 

4. Resultados....................................................................................................... 70 

5. Discussão......................................................................................................... 79 

6. Conclusão........................................................................................................ 90 

7. Referências...................................................................................................... 91 

  

ANEXO ............................................................................................................... 101 

 
 
 
 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          22 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 

Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          23 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

1. ACHADOS PRÉVIOS E SIGNIFICÂNCIA  

1.1. O PAPEL DOS BUBALINOS NA PRODUÇÃO DE BIOINSUMOS 

Nos últimos anos, grandes avanços científicos ocorreram envolvendo 

pesquisas básicas de bancada e tiveram seus desdobramentos no setor 

biotecnológico, no que se refere ao desenvolvimento de novos compostos bioativos a 

partir de matérias-primas de origem animal 1. Neste contexto, os búfalos da espécie 

Bubalus bubalis ganharam espaço considerável na economia mundial por atuarem 

como doadores de matéria-prima.  

Os animais da espécie Bubalus bubalis é de origem asiática e podem ser 

encontrados em maior abundância nas regiões tropicais e temperadas da Ásia. A 

população de búfalos no mundo totaliza 168 milhões de animais, que estão 

distribuídos geograficamente nas seguintes proporções: 161 milhões [95,83%] na Ásia, 

3,717 milhões [2,24%] na África, 3,3 milhões [1,96%] na América do Sul, 500 mil 

[0,3%] na Europa e 40 mil [0,02%] na Austrália 2. Portanto, essa espécie tem ocupado 

um relevante papel na produção de alimentos por garantirem estabilidade econômica 

para áreas menos favorecidas 2. Além disso, estes animais têm sido mundialmente 

utilizados em atividades econômicas, dentre estas, o emprego de força para a tração 

de instrumentos agrícolas e a produção de leite e de carne 3.  

A criação de bubalinos vem crescendo em todo o mundo 4, haja vista, os dados 

brasileiros publicados pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento 

(MAPA) em 2010. Estes dados indicaram 1.207.461 cabeças de búfalos distribuídas 

pelas cinco regiões brasileiras, destacando-se as raças Murrah e Jafarabadi 5. 

Segundo o MAPA, o Brasil possui o segundo maior rebanho efetivo do mundo. 

Atualmente, a bubalinocultura cresce com maior intensidade nos países localizados 

em áreas tropicais, dada a maior capacidade adaptativa e produtividade dos búfalos 

frente aos bovinos.  



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          24 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

Dentre os fatores de maior relevância que sustentam o crescimento da 

população bubalina mundial, destacam-se, principalmente, as características químicas 

singulares do leite e da carne desses animais, sendo estes potenciais precursores de 

matéria-prima para as indústrias alimentícias 6. De acordo com pesquisas realizadas 

por Ricci, o leite de búfala apresenta um elevado valor nutricional em vista dos 

maiores níveis de gorduras, proteínas, calorias, vitamina A e cálcio quando comparado 

com o leite de vacas 7;8. Este elevado teor de cálcio no leite de búfalas é importante 

sob o ponto de vista nutricional e tecnológico, especialmente para elaboração de 

produtos lácteos 9,10,11, sendo recomendado para pessoas que apresentam 

osteoporose 12,13. De acordo com Silva, o leite de búfala é cerca de 40-50% mais 

produtivo na elaboração de derivados, em relação ao leite bovino 7,14.  

Associado ao maior rendimento do leite para produção de derivados, o búfalo 

produz carne de excelente qualidade. Estudos apontam que a carne bubalina 

apresenta maior proporção de ferro 15, uma maior porcentagem de carne magra, maior 

concentração de proteínas, melhor cor e menos umidade que a bovina 16. Pelas 

similaridades, e em alguns casos, superioridade em relação à composição nutricional 

das carnes convencionais (vermelha [bovina] e branca [frango]), a carne de bubalinos 

constitui uma fonte importante para a produção de derivados 17. Somado todos esses 

atributos entre o leite de búfala e a carne bubalina, este animal torna-se um recurso 

natural em potencial para o fornecimento de matéria-prima com qualidades 

excepcionais para a indústria alimentícia 18.  

 

1.2. PESQUISAS BIOTECNOLÓGICAS APLICADAS À ANIMAIS 

SOROPRODUTORES  

A matéria-prima de origem animal possui um mercado promissor por ser o 

início da linha de produção das indústrias alimentícias 19. Porém, uma nova frente de 

pesquisas biotecnológicas vêm se desenvolvendo no que se refere às fazendas 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          25 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

produtoras de animais de grande porte 14. Sabe-se que, o sangue é um líquido viscoso 

que tem por finalidade estabelecer a comunicação entre as diversas estruturas 

anatômicas que compõem o organismo dos vertebrados 20. É composto de glóbulos 

brancos ou leucócitos, glóbulos vermelhos ou hemácias, plaquetas ou trombócitos. Ao 

centrifugar o sangue total na presença de agentes coagulantes, se obtém o plasma 

como sobrenadante dessa preparação, o qual é composto por 90% de água, e os 

outros 10% são moléculas que desenvolvem um papel crucial na manutenção das 

funções de imunidade, conteúdo de oxigênio e outras funções do organismo 21.  

Apesar do plasma ser constituído por até 6% de proteínas totais, a utilização de 

animais de grande porte como doadores/soroprodutores desse material biológico tem 

se tornado importante na pesquisa científica e/ou na produção de medicamentos e 

imunobiológicos 22,23. O principal exemplo de imunobiológico é o soro antiofídico. Em 

sua etapa de produção, o veneno das serpentes é inoculado subcutaneamente em 

doses crescentes de concentração em equinos. Neste caso, o animal fornece um 

grande volume de sangue, rico em anticorpos, produzidos contra ao veneno inoculado. 

Doze litros de sangue, aproximadamente podem ser coletados de um cavalo que pese 

400 quilos, sendo um procedimento amplamente padronizado e seguro para a saúde 

do animal 24. Então, o plasma é concentrado, purificado e fracionado, as proteínas 

inativadas são eliminadas e as gamaglobulinas específicas, são mantidas para a 

produção do soro-antiofídico 25. 

Outro estudo biotecnológico promissor e inovador que envolve sangue de 

animal de grande porte, está a transfusão de plasma sanguíneo a potros que não 

receberam colostro até 24 horas pós-parto 26, neste caso, a transferência de 2 a 4 

litros de plasma contendo anticorpos específicos, auxiliam os produtores de animais 

de grande porte à adequarem os níveis séricos de IgG dos animais quando 

deficiências como essa são destacadas durante o manejo 27. A indicação dos baixos 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          26 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

níveis de IgG e a reposição dos mesmos nos animais, reduzem em 60% a 

probabilidade de morte desses animais, índices estes evidenciados nas pesquisas de 

Silva e colaboradores (2013) no manejo de equinos, recentemente 14.  

O Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos da UNESP (CEVAP) 

vem desenvolvendo um novo selante de fibrina há mais de 20 anos, para atuar como 

cola biológica em procedimentos cirúrgicos e no auxílio durante o tratamento de 

úlceras venosas crônicas. A equipe de pesquisadores do CEVAP propôs a prospecção 

de um novo selante a partir de uma serinoprotease extraída do veneno da serpente 

Crotalus durissus terrificus associada ao crioprecipitado rico em fibrinogênio extraído 

de bubalinos. Esta iniciativa de desenvolvimento um novo selante de fibrina a partir do 

sangue de búfalos ganhou mais expressão quando Thomazini-Santos e colaboradores 

(1998) avaliaram o tempo de coagulação da fração trombina de serpentes Crotalus 

durissus terrificus, empregando-se crioprecipitado (plasma concentrado) de diferentes 

espécies animais. Este estudo evidenciou que o plasma de búfalos da espécie 

Bubalus bubalis apresenta uma concentração de fibrinogênio superior aos demais 

animais analisados (homem, bovinos, equinos e ovinos) e tempo de coagulação 

próximos aos obtidos nas amostras de seres humanos 28. 

Uma vez que, para se produzir um dos componentes do novo selante de fibrina 

do CEVAP, o fibrinogênio presente no plasma desses bubalinos é o principal substrato 

da cascata de coagulação proposta, estes animais passaram a ser os animais 

doadores de matéria-prima (plasma) para o desenvolvimento do novo selante de 

fibrina.  



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          27 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

1.3. SELANTES DE FIBRINA COMO ADESIVOS CIRÚRGICOS: DESCOBERTAS E 

SUAS DIVERSAS APLICAÇÕES 

  Mas qual a origem dos selantes de fibrina? Por que estudar e pesquisar 

selantes de fibrina? 

Bennett e colaboradores (1988) descrevem que a tentativa de utilização de 

agentes selantes e hemostáticos tópicos em procedimentos cirúrgicos é data de 

muitos anos desde os anos 1800 A.C. por meio dos papiros egípcios, onde se 

encontram os primeiros relatos médicos que agentes com poder selante foram 

empregados 30. Entretanto a descrição da utilização da fibrina como principal composto 

biológico de ação adesiva para procedimentos cirúrgicos simples foi realizada apenas 

em 1909 pelo pesquisador Bergel, ao publicar o manuscrito intitulado On the functions 

of fibrins, onde foi relatado o efeito hemostático da fibrina em feridas cirúrgicas 31. 

Posteriormente, outros pesquisadores descreveram seus relatos de experiências com 

uma maior riqueza de detalhes, como por exemplo, Grey e pesquisadores (1915), 

após nove anos da primeira publicação, estes pesquisadores se impressionaram com 

o poder do selante da fibrina no combate de hemorragias hepáticas e cerebrais 32. Já 

em 1942, Seddon & Medswar relataram a utilização de fibrina na anastomose de 

nervos, obtendo resultados satisfatórios perante os tratamentos disponíveis na época 

33. No mesmo ano, os pesquisadores Tidrick & Warner realizaram uma nova 

formulação deste selante, tornando-o mais eficaz a estratégia como adesivo de fibrina 

na fixação de enxertos cutâneos 34.  

No entanto, Staindl em 1979 conduziu novas pesquisas na tentativa de 

aprimorar a ação adesiva do selante de fibrina descrito por Tidrick & Warner 35. O 

pesquisador Staindl relatou a necessidade de se obter maiores concentrações de 

fibrinogênio, e, posteriormente, combiná-las à trombina não humana para a realização 

de testes de eficiência adesiva. Para tanto, ele produziu o adesivo de fibrina a partir de 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          28 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

um pool de plasma humano 35. Este selante tinha como composição fibrinogênio 

extraído de vários plasmas humanos, o qual foi posteriormente adicionado à trombina 

extraída do sangue bovino. Este novo selante de 1979 foi utilizado em quase todas as 

especialidades cirúrgicas a partir desta data, não havendo qualquer relato de 

transmissão de doenças na época. Entretanto, infelizmente, a organização Food and 

Drug Administration (órgão regulatório que afere sobre o desenvolvimento de 

medicamentos no mundo) não aprovou sua extensa produção e aplicação devido à 

possibilidade de transmissão de doenças virais como as diversas e severas hepatites, 

uma vez que, este selante não apresentava segurança no que se refere à transmissão 

de doenças infecciosas.  

Muitos estudos utilizando selantes de fibrina com origem humana e animal 

foram retomados a partir dos anos 90, como por exemplo, os achados de Scardino e 

colaboradores (1999) quando avaliaram histologicamente a cicatrização epitelial após 

procedimentos cirúrgicos em cadelas utilizando selantes derivados de plasma humano 

e de plasma bovino. Neste estudo, os autores mostraram que ambos os selantes 

atuaram positivamente e diminuíram o tempo de fechamento da sutura em relação aos 

procedimentos convencionais, porém, o grupo tratado com o produto derivado de 

plasma humano, observou-se a presença de um infiltrado inflamatório crônico 36, 

enfatizando ainda a problemática em se usar um produto de origem humano devido à 

possibilidade de transmissão de doenças infecciosas. 

Do ponto de vista experimental e clínico, a década de 90 foi marcada pela 

presença de vastas pesquisas nas áreas de medicina veterinária, odontologia e 

dermatologia no que se refere ao aprimoramento do composto adesivo cirúrgico 

realizado a partir da combinação das proteínas fibrinogênio e trombina heterólogos. 

Conforme citado anteriormente, Thomazini-Santos e colaboradores em 1998 

revelaram a viabilidade de um novo selante de fibrina a partir de matérias-primas de 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          29 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

serpentes e plasma animal 28. Este estudo que destacaram a existência e 

aplicabilidade clínica deste novo selante de fibrina produzido então pelos 

pesquisadores do CEVAP, o qual atuaria como um adesivo cirúrgico, foi evidenciado 

em 1999 por Stolf e colaboradores, os quais observaram que, este adesivo de fibrina 

derivado de veneno de serpente e do sangue de búfalos, mimetiza as reações finais 

do processo da coagulação sanguínea e que, o fibrinogênio de búfalos ao interagir 

com a fração "trombina-like" extraída do veneno de serpente, liberaria uma fibrina 

monomérica, a qual na presença do fator XIII e de cálcio, esta malha se tornaria 

polimérica, agindo como uma cola biológica 29;37. Neste estudo, Stolf e colaboradores 

(1999) observaram vinte e um pacientes portadores de tumor cutâneo na região nasal, 

com idade média de 64 anos de ambos os sexos, foram tratados com esta cola 

biológica desenvolvida pelo CEVAP. Os resultados revelaram que, este adesivo de 

fibrina teve a capacidade adesiva total (alta aderência) em 66,7% e parcial (media 

aderência) em 33,3% dos pacientes que foram submetidos a processos de cirurgia 

cutânea, constituindo-se, desta forma, um método alternativo valioso nestes tipos de 

cirurgia. Nesse sentido, este estudo revelou pela primeira vez, a importância do papel 

da fibrina exógena, a qual mimetiza e amplifica os últimos passos fisiológicos da fase 

da coagulação 37. 

A partir de então, outros estudos envolvendo o selante heterólogo do CEVAP 

foram desenvolvidos. Sartori-Filho e colaboradores (1998) observaram o poder 

adesivo do novo selante de fibrina do CEVAP em nervos ciáticos, no cólon de ratos e 

na pele de coelhos. Após a análise dos ferimentos ocorridos cirúrgicamente nestes 

animais saudáveis, os autores observaram que o uso deste selante, desencadeou um 

processo de cura mais rápido e uniforme destes ferimentos em relação aos 

procedimentos de suturas convencionais 38. Em contrapartida Chalhoub e 

colaboradores (2000), submeteram ovelhas prenhas à dois diferentes processos 

cirúrgicos cesarianos: à cesariana com adesão tecidual realizada através da aplicação 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          30 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

do novo selante de fibrina do CEVAP e, à cesariana convencional com adesão tecidual 

realizada através de suturas convencionais 39, e neste caso, a adesão tecidual por 

meio das suturas convencionais apresentou um melhor processo de cicatrização. No 

mesmo ano, Leite e colaboradores (2000), demonstraram que o novo selante de 

fibrina do CEVAP pode tornar-se uma ferramenta valiosa em anastomoses de cólon de 

roedores, pois agiu como um agente impermeável, principalmente, quando associado 

à fatores de risco que causam deiscências, como infecção, hipóxia, hematoma, 

diabetes e desnutrição 40.   

Entre 2005 e 2007, outros dois estudos apontaram o novo selante de fibrina do 

CEVAP como uma ferramenta próspera em procedimentos cirúrgicos na área da 

medicina veterinária e na área da odontologia humana. Ferraro e colaboradores (2005) 

apontaram a recuperação de uma taxa de 62,5% de tendões rompidos de cães, onde 

uma ligeira retração do dentão de cerca de 2 mm, permitiu um aumento progressivo na 

resistência para a força máxima de tração e a reparação permanente desses tendões 

tratados com o selante 41. Paralelamente, Chiquito (2007) avaliou pacientes com 

defeitos gengivais conhecidos como recessão do tecido marginal sob a ação do novo 

selante de fibrina do CEVAP. Neste estudo, o enxerto foi fixado utilizando selante de 

fibrina derivado de veneno de serpente, sendo comparado à pacientes submetidos aos 

procedimentos de suturas convencionais. O selante derivado de veneno de serpente 

demonstrou características favoráveis como estancamento e regeneração rápida 

quando aplicado em cirurgia periodontal, no que se refere ao recobrimento radicular 

em recessões teciduais marginais em relação à aplicação de sutura convencional 42. 

O uso do novo selante de fibrina derivada do veneno de serpente e do sangue 

de grandes animais mostrou-se de fácil aplicação, viável com modelos animais e de 

baixo custo, evitando o progresso da lesão, permitindo assim, a cicatrização 37;42. 

Neste contexto, Sampaio e colaboradores (2007) utilizaram o novo selante de fibrina 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          31 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

para reparar ferimentos da ceratectomia em cães. Os resultados indicaram que a cola 

de fibrina foi eficiente no reparo dos ferimentos oculares e apesar do pequeno tempo 

de permanência, o novo selante mostrou-se eficiente, pois contribuiu para os 

mecanismos reparadores, acelerando o processo de cicatrização, evitando a formação 

de edema na ferida, o que contribui para a manutenção da limpidez da córnea 43.  

Estudos realizados por Barbosa e colaboradores (2008) na área odontológica, 

evidenciou novamente que o uso do selante de fibrina do CEVAP é tão eficaz na 

imobilização de enxertos gengivais em relação aos enxertos suturados. Neste estudo, 

os enxertos foram realizados nos dentes pré-molares mandibulares contralaterais de 

15 pacientes. Os grupos que tiveram o enxerto suturado apresentaram uma maior 

densidade de células inflamatórias em sete dias e uma tendência para uma menor 

densidade de colágeno, enquanto que o grupo suturado com o bioproduto apresentou 

uma aparência de cura mais avançada 44. Portanto, os autores indicaram que este 

bioproduto pode promover a maturação do enxerto gengival já na primeira semana 

após a cirurgia, em comparação com a utilização de suturas convencionais, podendo 

assim, o selante de fibrina vir a ser o material substituto candidato nos procedimentos 

de cirúrgicos de suturas convencionais.  

No entanto, este novo selante de fibrina do CEVAP tem despertado grande 

interesse também na área da biotecnologia. Além de cola biológica, Gasparoto e 

colaboradores (2014), avaliaram a viabilidade in vitro do selante de fibrina do CEVAP 

como ótimo modelo de arcabouço para células-tronco mesenquimais. Os autores 

observaram que, este selante heterólogo pode ser eficiente como arcabouço biológico, 

pois ao interagir com as células tronco mesenquimais, manteve-as viáveis, ou seja, o 

selante não afetou a adesão, proliferação e diferenciação celular e permitiu a 

aderência e o crescimento das células-tronco em sua superfície 45, demonstrando 

assim, que este selante também pode ser uma ferramenta útil em vários processos 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          32 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

clínico-cirúrgicos regenerativos, onde a implantação de células-tronco em órgãos 

condenados ou debilitados se faz necessário. 

1.4. DESENVOLVIMENTO DE UM NOVO SELANTE DE FIBRINA PARA O 

TRATAMENTO DE ULCERAS CRÔNICAS VENOSAS 

Os termos “ferida ou úlcera” podem ser definidos como sendo qualquer lesão 

presente no tecido epitelial, nas mucosas ou em determinados órgãos acarretando 

prejuízo de suas funções básicas. Caracterizam-se por apresentar perda de tecido 

atingindo a epiderme, às vezes a derme chegando muitas vezes ao tecido celular 

subcutâneo e mais raramente aos músculos 43. 

A úlcera cutânea é de ocorrência comum, mas quando complicada por uma 

infecção ou dependendo da sua cronicidade, representa um grave problema de saúde 

pública 46. A prevalência de úlcera venosa ativa (não cicatrizada) entre os adultos é de 

aproximadamente 0,3% na população mundial, ou seja, um em cada 350 adultos são 

acometidos por essa enfermidade 47. Nos Estados Unidos, estima-se que o custo 

anual para o tratamento da úlcera venosa esteja entre 1,9 e 2,5 bilhões de dólares, 

sendo que 1,3% da verba destinada à saúde são investidos no tratamento de úlceras 

venosas (UVs) 48,49. No Brasil, particularmente no município de Botucatu, Estado de 

São Paulo, a prevalência das UVs é de 1,5% 47. De acordo com estes autores, houve 

um aumento de 4% na prevalência desta enfermidade em indivíduos com idade acima 

de 65 anos 47. Esse dado tem preocupado as autoridades de saúde, haja vista que, 

atualmente, a população idosa brasileira, ou seja, com idade superior a 60 anos, 

representa cerca de 19 milhões de indivíduos. De acordo com o Instituto Brasileiro de 

Geografia e Estatística 50, 10% da população do nosso país se encontram neste grupo 

de risco. Além disso, estimativas deste Instituto indicam que esse contingente atingirá 

32 milhões de pessoas em 2025, tornando o Brasil o sexto colocado no mundo em 

número de idosos 50.  



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          33 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

As principais complicações que ocorrem nos pacientes com úlceras venosas 

crônicas são: infecções de partes moles, colonização crítica, dermatite de contato, 

osteomielites e, mais raramente, transformação neoplásica 51. Os portadores das 

úlceras venosas crônicas necessitam de cuidados especiais, como um atendimento 

multidisciplinar composto por cirurgiões vasculares, dermatologistas, fisioterapeutas, 

nutricionistas, entre outros. Além disso, a principal e maior consequência dessa 

enfermidade é o comprometimento da qualidade de vida e da autoestima desses 

pacientes, que além de dores e da dificuldade de locomoção, a lesão pode apresentar 

exsudato com forte odor 52, o que consequentemente, pode restringir suas atividades 

da vida diária e o lazer, levando-os à quadros de frustração e depressão 53.  

Mas não se pode descartar que, várias doenças sistêmicas comuns exacerbam 

ainda mais o processo de cicatrização das úlceras venosas, como por exemplo, a 

presença de diabetes mellitus e/ou fragilidade da pele 54. Neste contexto, Broadbent e 

colaboradores (2010), se esforçam para investigar vários fatores no ambiente da ferida 

que auxiliam na compreensão do complexo processo de cicatrização das úlceras 55. O 

processo de cicatrização ocorre fundamentalmente em três fases: inflamação, 

formação de tecido de granulação e deposição de matriz extracelular e remodelação 

pela presença de mediadores derivados da circulação (as frações livres do 

complemento, fatores de coagulação, moléculas do sistema fibrinolítico e hormônios 

como os esteroidais, tireoideanos e a insulina), cininas (histamina,bradicinina e 

serotonina), mediadores peptídicos (citocinas, fatores de crescimento, neuropeptídeos 

e estruturas da matriz extracelular) e mediadores lipídicos (eicosanóides) 56.  

Os principais métodos destinados à cicatrização da úlcera são o tratamento 

local e a terapia compressiva. Algumas medidas devem ser tomadas para diminuir a 

hipertensão venosa crônica e sua repercussão na macro e microcirculação. A terapia 

compressiva age na macrocirculação, aumentando o retorno venoso profundo, 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          34 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

diminuindo o refluxo patológico durante a deambulação e, aumentando o volume de 

ejeção durante a ativação dos músculos da panturrilha 57. A compressão do membro 

aumenta a pressão tissular favorecendo a reabsorção do edema e melhorando a 

drenagem linfática 58. Além disso, age na microcirculação diminuindo a saída de 

líquidos e macromoléculas dos capilares e vênulas para o interstício, podendo 

estimular também a atividade fibrinolítica 59. A pressão externa que a compressão 

deve realizar no tornozelo dos pacientes com úlcera venosa é em torno de 35 a 

40mmHg e gradualmente menor na região abaixo do joelho. Para atingir os benefícios 

da compressão o paciente deve ser estimulado a deambular. Todos os métodos 

compressivos são contra-indicados se o paciente apresentar doença arterial periférica 

grave, ou seja, pulsos distais não palpáveis 57. No tratamento local da ferida é 

importante o preparo do seu leito. Este é um conceito clínico que se refere ao manejo 

para acelerar a cicatrização endógena e auxiliar na eficácia das medidas terapêuticas. 

É um conceito relativamente recente, que proporciona uma abordagem estruturada no 

tratamento das feridas crônicas. Foi desenvolvido devido ao aumento da compreensão 

das diferenças entre exsudato de feridas agudas e crônicas e pelo potencial de 

prejuízo que o fluído de tal ferida causa no leito da lesão 60. No entanto, até o 

momento, não existe nenhuma terapia comprovadamente eficaz 61 para a cura de 

úlceras venosas crônicas. 

Contudo, infelizmente não existe um tratamento 100% eficaz para as úlceras 

crônicas venosas atualmente. Neste contexto, os pesquisadores do Centro de Estudos 

de Venenos e Animais Peçonhentos da UNESP (CEVAP) vêm desenvolvendo um 

novo selante de fibrina há mais de 20 anos, para auxiliar no tratamento de úlceras 

venosas crônicas. A equipe de pesquisadores do CEVAP propôs a prospecção de um 

novo selante a partir de uma serinoprotease extraída do veneno da serpente Crotalus 

durissus terrificus associada ao crioprecipitado rico em fibrinogênio extraído de 

bubalinos. Muitos estudos pré-clínicos foram realizados até que Gatti e colaboradores 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          35 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

entre 2007 e 2010, desenvolveram um ensaio clínico pioneiro fase I, utilizando o novo 

selante de fibrina do CEVAP em 24 pacientes adultos com úlceras de membros 

inferiores de origem venosa; neste estudo, evidenciou-se que este selante auxiliou na 

cicatrização total e/ou parcial das úlceras, proporcionando alta dos pacientes na oitava 

semana de tratamento. Neste mesmo contexto, o CEVAP, juntamente com a 

Faculdade de Medicina da UNESP de Botucatu, deram continuidade em 2011 ao 

ensaio clínico multicêntrico de fase II, no qual 260 pacientes com úlceras venosas de 

membros inferiores serão estudados, tendo o apoio do Ministério da Ciência e 

Tecnologia (Decit) e do Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e 

Tecnológico (CNPq) através do processo no. 563582/2010-3 – (Projeto de Pesquisa 

Clínica intitulado “Tratamento de úlceras venosas com o selante de fibrina derivado de 

veneno de serpente” - Edital MCT/CNPq/CT - Saúde/MS/SCTIE/DECIT Nº 67/2010 - 

Pesquisa Clínica - Produtos Estratégicos para o Sistema Único de Saúde (SUS). 

Como aplicação biotecnológica, este novo selante está sendo aplicado em pacientes 

que apresentam ulceras venosas crônicas, a fim de auxiliar na cicatrização das 

mesmas como tratamento adjuvante. O diferencial deste novo selante é o fato de não 

apresentar risco de transmissão de doenças infecciosas humanas por ser constituído 

de fluidos animais (sangue de bubalinos e veneno de serpentes), e por ser um produto 

genuinamente brasileiro, seu custo é reduzido e, atualmente, se encontra padronizado 

para utilização clínica em pacientes com úlceras crônicas de membros inferiores. A 

principal meta deste projeto de pesquisa clínica é disponibilizar este novo selante para 

distribuição junto ao SUS. Porém, até o presente momento, não se tem a 

compreensão se, este bioinsumo atua como um agente cicatrizante no tratamento das 

úlceras venosas ou somente atua no preparo do leito, conforme os questionamentos 

deixados por Gatti e colaboradores (2011) 62.   



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          36 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

1.5. MARCADORES MOLECULARES PARA AVALIAÇÃO DA SANIDADE ANIMAL 

Atualmente, a utilização de biomarcadores é considerada de extrema importância 

nas pesquisas experimentais por aumentar a confiabilidade dos estudos clínicos. Além 

disso, a identificação de biomarcadores chaves em determinados indivíduos podem 

contribuir para a prevenção de alterações, o que poderia ser feito mediante a 

elaboração de programas de intervenção 63. Outro importante papel dos 

biomarcadores é a sua utilização para o aprimoramento de tratamentos pré-existentes. 

Os biomarcadores podem ser usados para vários propósitos, dependendo da 

finalidade do estudo. A utilização dos biomarcadores pode ter como finalidade elucidar 

a relação causa-efeito e para fins de monitoramento biológico, realizado de maneira 

sistemática e/ou periódica 64,65. Contudo, existe a necessidade de identificar e validar, 

para cada sistema biológico, os biomarcadores que poderão ser utilizados como 

indicadores durante uma atividade de monitoramento. Os biomarcadores podem ser 

utilizados ainda no diagnóstico clínico com o objetivo de confirmar o diagnóstico de 

uma intoxicação aguda ou crônica, de avaliar a efetividade de um tratamento ou 

mesmo de avaliar o prognóstico de casos individuais 66. 

Sabe-se que a uma das primeiras resposta do organismo para estresse 

imunológico é a síntese e a secreção de proteínas a partir das células hepáticas 

67;68;69;70;73;74. A resposta imunológica ocorre logo após uma lesão, declinando dentro de 

um ou dois dias 75. Proteínas cuja concentração se eleva rapidamente nesses casos 

são denominadas de proteínas de fase aguda (PFA). O fígado é estimulado a produzir 

um número de proteínas que podem ser detectadas em níveis mais elevados em 

animais com processos inflamatórios instalados 71;72;76. As proteínas de fase aguda 

podem ser divididas em dois grupos: negativas e positivas. As negativas são as que 

diminuem a concentração quando ocorre a resposta de fase aguda, que incluem 

albumina e transferrina; enquanto as positivas têm seu nível elevado quando há 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          37 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

resposta de fase aguda, tais como proteína C-reativa, glicoproteína ácida-1, 

antitripsina-1, antiquimotripsina-1, amiloide A sérica, ceruloplasmina, haptoglobina 

(Hp), macroglobina-2, fibrinogênio e componente do complemento 77,73. Relata-se que 

estas proteínas podem ser consideradas indicadoras potenciais de doença inflamatória 

ou do bem-estar em animais, individualmente ou em rebanho 73. 

 Kaneko e colaboradores (1997) evidenciaram que a haptoglobina (Hp) é a 

proteína de fase aguda mais importante em ruminantes 78. De acordo com Jain (1993), 

Hp é uma glicoproteína sintetizada no fígado, com quatro cadeias de polipeptídios e 

com meia vida no plasma de dois a quatro dias 79. Estruturalmente, a Hp é formada 

por duas subunidades alfa combinadas com duas subunidades betas que se estabiliza 

ao se juntar com a hemoglobina 73.  

Com base na necessidade de se controlar a qualidade a matéria-prima doada 

por esses animais considerados produtores de insumos biológicos para a indústria 

biotecnológica, várias técnicas qualitativas são empregadas no intuito de se obter o 

perfil de proteínas expressas em condições normais de saúde, para que bioprodutos 

possam ser produzidos com fidelidade em larga escala pela indústria farmacêutica, 

facilitando seus acessos à comunidade 80.  

Pomorska-Mól et al (2014) investigaram a cinética das proteínas de fase aguda 

em quadros subclínicos e clínicos de gripe em suínos. A gripe suína é uma doença 

respiratória contagiosa importante na saúde pública humana. O diagnóstico da gripe 

suína foi baseado em sinais clínicos e confirmado pela detecção do vírus ou 

anticorpos específicos no sangue. No entanto, a infecção é muito mais frequente do 

que a doença propriamente dita e neste caso, as proteína C-reativa, haptoglobina e 

amilóide sérica, denomiadas de fase aguda, foram evidenciadas como marcadores 

superexpressos após a infecção provocada em 28 leitões. Neste estudo, foi evidente a 

relação entre a magnitude da resposta sérica das proteínas de fase aguda com a 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          38 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

gravidade da doença, proporcionando assim, uma ferramenta bioquímica viável em 

uma rotina diagnóstica em relação ao grau da infecção por gripe suína 81.  

A importância de proteínas de fase aguda (PFA) como biomarcadores de 

enfermidades em ruminantes. Para tal, se determinou o proteinograma sérico e 

leucograma para bovinos, ovinos e caprinos sadios e doentes. Em bovinos, a proteína 

haptoglobina teve destaque como um biomarcador molecular precoce e confiável de 

foco inflamatório/infeccioso. Em ovinos, as proteínas ceruloplasmina, haptoglobina, 

glicoproteína-1 ácida mostraram moderada expressão frente às enfermidades 

avaliadas. Já a proteína transferrina, embora tenha se mostrado biologicamente como 

uma PFA negativa em todos os grupos estudados, apenas apresentou comportamento 

estatisticamente diferenciado em bovinos acometidos por mastite 82. 

Ao mesmo tempo em que as proteínas de fase aguda podem responder por 

quadros clínicos de inflamação em animais, estas podem não necessariamente ser os 

marcadores moleculares para doenças infecciosas como tuberculose, brucelose, 

papilomatose, febre aftosa e anaplasmose. A crescente preocupação com a rapidez 

na identificação e resolução de problemas sanitários em rebanhos incentivou e 

propiciou os avanços tecnológicos na área de identificação de biomarcadores 

moleculares. Desta forma, a utilização de técnicas analíticas da abordagem 

proteômica pode atuar como uma ferramenta molecular inovadora para identificar 

marcadores específicos para sanidade animal.  

 

1.6. ABORDAGEM PROTEÔMICA COMO ESTRATÉGIA DE INVESTIGAÇÃO 

Atualmente, a busca por novas moléculas a partir de extratos de vegetais, de 

venenos e de insumos animais, como o plasma/soro/sangue, têm contribuído para a 

descoberta de novos medicamentos 83. Estima-se que cerca de 60% dos fármacos 

antitumorais e anti-infecciosas que se encontram disponíveis no mercado são de 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          39 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

origem natural 84,85, e foram descobertas por técnicas analíticas que compõe a 

estratégica de análise proteômica. 

A abordagem proteômica é o estudo em larga escala de peptídeos/proteínas, 

usualmente, por métodos bioquímicos 86,87,88,89. A proteômica está relacionada com o 

conjunto de tecnologias analíticas que têm por objetivo separar e identificar proteínas 

em amostras biológicas complexas 90. Essas moléculas controlam a maioria dos 

processos celulares, podendo agir como enzimas, anticorpos, hormônios, 

componentes estruturais e receptores celulares 91,92. Tais fatos impulsionaram o 

desenvolvimento de novas tecnologias para o estudo deste conjunto de proteínas 

diferencialmente expressas. Desta forma, as ferramentas analíticas passaram, então, 

a serem instrumentos essenciais na abordagem proteômica 93.  

Neste contexto, avanços tecnológicos vêm beneficiando diferentes áreas da 

biomedicina nos últimos anos. Estes avanços deram ênfase nos estudos que 

promoveram o aumento de escala de análises e a agilidade na obtenção de métodos 

mais eficientes para a descoberta de proteínas candidatas à biomarcadores 94. 

Estudos proteômicos têm auxiliado na obtenção de diagnósticos clínicos mais 

específicos na área de medicina. Em humanos há o desenvolvimento de uma 

plataforma proteômica para detecção de marcadores prognósticos e diagnósticos 

através da análise do fluído de feridas crônicas 95. Auxiliou no isolamento das 

proteínas presentes em baixas concentrações no fluido de feridas crônicas. Tal estudo 

resulta na identificação de biomarcadores moleculares para auxiliar a segregar os 

pacientes quando submetidos às diferentes terapias na área de dermatologia95.  

De forma semelhante, Zhang e colaboradores (2012) evidenciaram em seus 

estudos, biomarcadores em potenciais para a doença de Parkinson 96. Ele observou 

marcações com isótopos estáveis nos ensaios de espectrometria de massas 

quantificaram as proteínas diferencialmente expressas nas amostras oriundas de 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          40 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

pacientes com doença de Parkison, a fim de se classificar os diferentes estágios dessa 

doença. Desta forma, os pesquisadores determinaram que a proteína apolipoproteína 

AI, na fase inicial dos pacientes acometidos pela doença de Parkinson, se mostrou 

reduzida, ou seja, sua expressão foi suprimida nesta fase da doença. Apolipoproteína 

AI é uma proteína que atua, não só no metabolismo de lipídios do sistema nervoso 

central, mas também, participa do processo de deposição de proteínas que estão 

envolvidas nas doenças degenerativas neurais 96. 

Recentemente, Phillips e colaboradores (2014) avaliaram o perfil de proteínas 

no soro de pacientes acometidos por úlceras de Buruli. A úlcera de Buruli é uma 

doença causada por Mycobacterium ulcerans e, tem se espalhado pelos países 

tropicais rapidamente, com implicações expressivas na saúde pública e econômica na 

África Ocidental, principalmente. Neste estudo, os pacientes acometidos por esse tipo 

de úlcera tiveram os níveis de proteínas totais e uréia reduzidos no sangue, mesmo na 

ausência de sinais de desnutrição ou insuficiência funcional do fígado. Este estudo 

evidenciou uma assinatura proteômica exclusiva para esta doença, uma vez que, as 

proteínas albumina e globulina que estão envolvidas com o metabolismo lipídico, com 

a coagulação e a remodelação de tecido, se encontraram diferencialmente expressas 

97. 

Na medicina veterinária, muitos estudos prospectivos e biotecnológicos 

utilizaram da abordagem proteômica para evidenciar marcadores moleculares do 

plasma seminal, visando o conhecimento das vias celulares e processos biológicos 

98,99,100. Além da identificação de agentes infecciosos e seus processos fisiológicos no 

hospedeiro 101, identificação de fraudes em produtos de origem animal 102,103,104 , 

estudo da fertilidade/infertilidade e processos envolvidos 105 e a busca por marcadores 

moleculares para produção de medicamentos 106,107.  



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          41 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

No que se refere aos estudos envolvendo o plasma sanguíneo de animais, 

destaca-se os efeitos do estresse promovido pelos exercícios físicos em cavalos de 

competição por meio do uso de estratégias proteômicas. Geralmente, os quadros de 

estresse associados com doenças mal compreendidas, tais como, a síndrome do fraco 

desempenho, a síndrome do excesso de treinamento, rabdomiólise por esforço 

induzida por exercício e hemorragia pulmonar 108,109, comprometem o rendimento 

desses animais e seus retornos aos eventos de competição. Scoppetta e 

colaboradores (2012) estudaram o plasma sanguíneo de equinos envolvidos em 

corridas de resistência na tentativa de se estabelecer a ocorrência de assinaturas 

moleculares após o exercício físico prolongado. A análise da expressão de proteínas 

demonstrou que, as proteinas α-1-antitripsina, ceruloplasmina, α-2-macroglobulina e 

fator de complemento-C4 se encontravam superexpressas após a competição, 

enquanto as proteínas β-haptoglobina, apolipoproteína, fibrinogênio, fator de 

complemento B e albumina se encontraram subexpressas neste mesmo perfil 

proteômico sanguíneo 110. Estes resultados indicaram que o exercício físico 

prolongado afetam as vias de sinalizações relacionadas com os processos de 

inflamação, coagulação, danos celulares e vasculares, permitindo assim que, estas 

proteínas respondam um diagnóstico precoce na medicina veterinária, no que se 

refere ao retorno desses animais nas competições esportivas ou na rotina de trabalho 

que os mesmos exercem. 

 

1.7. AS FERRAMENTAS ANALITICAS DA PROTEOMICA EM ESTUDOS 

TRANSLACIONAIS 

Uma vez que a abordagem proteômica tem sido admitida como uma 

estratégica investigativa e eficaz na medicina translacional, a prioridade está no fato 

de reduzir a complexidade das amostras antes da caracterização de suas proteínas 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          42 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

111. Muitos estudos translacionais evidenciaram biomarcadores moleculares 

importantes na detecção de várias enfermidades no plasma sanguíneo de pacientes 

pela abordagem proteômica 112. A obtenção do plasma sanguíneo de pacientes é um 

processo menos agressivo que outras técnicas de coleta de amostras biológicas, 

como por exemplo, uma punção lombar. Além disso, o plasma é um fluído 

amplamente aceitável para uso em testes clínicos, que reflete a complexidade de 

proteínas corpóreas em quadros clínicos saudáveis e doentes, contendo 

biomarcadores relevantes para predição, diagnóstico ou uma investigação mais 

aprofundada sobre as causas e os efeitos das doenças 113.  

Associado com a elevada abundância de proteínas como soroalbumina e 

imunoglobulinas114, as quais juntas constituem mais de 85% das proteínas totais 

constituintes, estas podem mascar as proteínas menos abundantes neste tipo de 

amostra biológica, as quais podem ser biomarcadores em potenciais. Para resolver 

este problema, as proteínas mais abundantes podem ser removidas com o uso de 

colunas de depleção por afinidade ou protocolos de precipitação de proteínas 113,115,116. 

Zangarini e colaboradores (2014) evidenciaram que em adição aos 

procedimentos de depleção das proteínas mais abundantes, outra maneira de reduzir 

a complexidade das amostras é utilizando métodos de separação, como a eletroforese 

uni e bidimensional e, a cromatografia líquida de alta performance (HPLC) 117. A 

eletroforese bidimensional (2D) é uma das ferramentas mais utilizadas na proteômica 

responsável por isolar proteínas por meio das suas massas moleculares e pontos 

isoelétricos num gel de poliacrilamida 118. Além disso, é um método analítico que 

apresenta características singulares, tais como o elevado poder de resolução e ótima 

reprodutibilidade quando se quer separar componentes presentes em uma amostra 

proteica complexa 114,119. Além disso, outra vantagem em relação a outras tecnologias 

de separação de macromoléculas é a capacidade de separar um grande número de 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          43 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

proteínas de uma amostra complexa e a possibilidade de se realizar análises da 

expressão gênica por meio de comparação dos padrões proteicos 120,121. 

Paralelamente, o método analítico mais utilizado para se caracterizar/identificar 

proteínas é a espectrometria de massas devido a sua alta sensibilidade e capacidade 

de produzir informações com base na estrutura de proteínas e peptídeos. Os avanços 

na instrumentação de espectrometria de massas, combinados com a recente 

disponibilidade de genomas sequenciados e a descoberta de técnicas de ionização 

suaves, tais como Matrix-assisted laser desorption/ionization [MALDI] 122,123 e 

Electrospray [ESI] 124, culminaram em uma nova geração das pesquisas proteômicas. 

Utilizando a espectrometria de massas, é possível identificar e quantificar milhares de 

proteínas ao mesmo tempo dentro de um único experimento, fazendo com que a 

eletroforese bidimensional, muitas vezes seja substituída, uma vez que, identificar 

spots em géis de poliacrilamida e quantificá-los é uma atividade laboriosa, 

dependendo do número amostral em uma pesquisa translacional.  

 Neste campo de análises de espectrometria de massas, duas abordagens 

metodológicas tem sido extensivamente utilizadas a estratégia shotgun e a de 

quantificação de proteínas. A estratégia shotgun compreende uma análise de uma 

mistura proteica complexa 125. As proteínas totais presentes em uma amostra 

complexa são submetidas à hidrólise na presença de uma enzima proteolítica, 

formando uma mistura complexa de peptídeos 126. Assim as proteínas são 

identificadas por correlação entre os fragmentos peptídicos adquiridos 

experimentalmente com as sequências depositadas em banco de dados de proteínas 

127. Paralelamente, a estratégia de espectrometria de massas quantitativa tem seu 

caráter inovador pelo fato que as proteínas presentes em uma amostra complexa são 

identificadas e quantificadas relativamente, ou seja, estudos de expressão diferencial 

de proteínas podem ser realizados quando essas amostras digeridas são submetidas 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          44 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

à espectrometria de massas diretamente, e neste caso, a diferença entre a intensidade 

dos mesmos íons presentes nas diferentes amostras, podem ser observados e 

quantificados 126. 

 A espectrometria de massas oferece uma grande variedade de técnicas de 

quantificação de proteínas, sendo quase todas aplicáveis com base na quantificação 

de peptídeos provenientes de digestão das proteínas com a enzima tripsina 128. Dentre 

elas, estão a estratégia de quantificação Stable isotope labelling by amino acids in cell 

culture (SILAC) e Isobaric tag for relative and absolute quantification (iTRAQ). Esta 

técnica se apoia na marcação dos peptídeos com diferentes isótopos estáveis. Nestas 

estratégias, duas ou mais amostras podem ser submetidas ao mesmo tempo em um 

equipamento de espectrometria de massas. Neste caso, fragmentos peptídicos 

homólogos são comparados dentro de um mesmo espectro de massas e a diferença 

entre a intensidade normalizada dos íons, indica quantidade relativa ou absoluta das 

proteínas alvos do estudo 126;128. 

 Outra abordagem de espectrometria de massas quantitativa é a estratégia 

label-free, a qual vem ocupando um papel importante nos estudos de quantificação de 

proteínas devido a relação custo-benefício e a flexibilidade do experimento. Ele é um 

método utilizado para se determinar a concentração de proteínas sem a utilização de 

marcadores com isótopos estáveis, por meio da combinação de digestão proteica e 

cromatografia liquida acoplada ao um equipamento de espectrometria de massas 

(LC/MS). A quantificação da proteína pode ser realizada pela medida da intensidade 

de sinal dos íons dos peptídeos correspondentes à proteína alvo do estudo em um 

espectro de massas, ou pela contagem e comparação do número de espectros de 

massas de fragmentação dos peptídeos que identificam esta proteína 114.  

Apesar de toda especificidade e inovação que as ferramentas analíticas podem 

contribuir para uma rotina ambulatorial, muitas dificuldades são enfrentadas para 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          45 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

inserir essas ferramentas e metodologias analíticas, sendo os principais motivos são: 

1) carência de mão de obra especializada requerida na área da proteômica analítica, 

uma vez que, os cursos da área da saúde não apresentam disciplinas ou 

treinamentos, que envolvam a capacitação em recursos humanos na área de química 

analítica 129, 2) elevado custo em relação aos ensaios prognósticos e diagnósticos 

vigentes e, 3) recursos financeiros para aquisição de equipamentos de elevada 

resolução e infraestrutura física de alojamento destes equipamentos, e seus 

respectivos custos com manutenções preventivas. 

 

2. REFERENCIAS 
 
[1] Bonduelle Y, Pisani J. The future of pharma: back to basics. Bus Develop Licens J. 

2003;2:32-5. 

 

[2] Borghese A, Mazzi M. Buffalo population and strategies in the world. In: Buffalo 

Production and Research, 12, 2014, Roma, Italy. Roma: BPR, 2014;5:12-35. 

 

[3] Ranjhan SK. Buffalo as a social animal for humanity. In: Proceedings of the 8th 

World Buffalo Congress; 19-22 oct, 2007; Caserta, Italy. Caserta: WBC; 2007. p. 30-

38. 

[4] Food and Agriculture Organization (FAO). FAOSTAT: Agriculture database 

[Internet]. Rome: FAO; 2007. [Acesso: 23 out 2013]. Disponível em: http://faostat. 

fao.org/default.aspx. 

[5] Ministério da Agricultura. Pecuária e Abastecimento. RIISPOA. Regulamento da 

Inspeção Industrial e Sanitária de Produtos de Origem Animal. Aprovado pelo Decreto 

nº 30.691, de 29-03-52, alterado pelos Decretos nºs 1.255 de 25-06-62, 1.236 de 02-

09-94, nº 1.812 de 08-2-96 e nº 2.244 de 04-06-97. Brasília, DF: MARA, 1997. 

 
[6] Kamal T, Shebaita M, Ibrahim I. Physiological responses of lactating buffaloes to 

shed type. In: Proceedings of the 9th Prospects of buffalo production in the 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          46 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

Mediterranean and the Middle East; 9-12 nov 1993; Cairo, Egito. Cairo: PBMM, 1993. 

p. 123-25. 

 
[7] Ricci GD, Domingues PF. O leite de búfala. Rev Educ Cont Vet Med Zootec. 

2012;10:14-9. 

[8] Verruma MR, Salgado JM. Análise química do leite de búfala em comparação ao 

leite de vaca. Agric Ciênc. 1994;51:56-8. 

[9] Ling ER, Ron SK, Porter JWG. The composition of the milk and nutritive value of its 

components. In: The Mamary Gland and Its Secretion. New York: Academic 

Press;1961. v. 2, p. 195-263. 

[10] Furtado MM. Leite de búfala: estudo da fabricação do queijo azul. Rev do Inst 

Latic Cândido Tostes. 1980;35(207):23-8.  

[11] Neves NLB. Contribuição da bubalinocultura para a produção leiteira. In: 

Caracterização e implementação de uma política para o leite. Piracicaba: CIUPPL; 

1985. p.37-45. 

[12] Dubey PC. Factors affecting composition of milk of buffaloes. Indian J Anim Sci. 

1997;67:802-4. 

[13] Macedo MP. Composição físico-química e produção do leite de búfalas da raça 

Mediterrâneo no Oeste do Estado de São Paulo. Rev Bras Zootec. 2001;30:1084-8. 

[14] Silva MST. Programa de incentivo a criação de búfalos por pequenos produtores – 

PROnAF [internet]. Pará; 2003 [acesso 20 fev 2014]. Disponível em: 

<www.cpatu.br/bufalo>.  

[15] Rey JF, Martínez CL, Urrea A. Evaluation of sensory characteristics and texture of 

an economic Buffalo meat (Bubalus bubalis) sausage and an economic beef (Bos 

indicus) sausage with addition of bovine hemoglobin powder. Procedia Food Sci. 

2011;1:545-8. 

[16] Cedres J. Chemical composition and physical characteristics of buffalo meat 

extensively bred in the province of Formosa [tese]. Corrientes: Faculty of veterinary 

science;2002. 

[17] Corte OO, Felicio PE, Cia G. Sistematização da avaliação final de bovinos e 

bubalinos. Bol Téc CTC. 1979;3:67-88.   



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          47 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

[18] Wang B, Zhan S, Gong T, Lee L. Iron therapy for improving psychomotor 

development andcognitive function in children under the age of three with 

irondeficiency anaemia (Review). Cochrane Database Syst Rev. 2013;6:6. 

[19] Rural Industries.  RIRDC - Research and Development Corporation: Maximising 

marketing opportunities for buffalo products [intenet]. Barton: Rural Industries RED 

corporation;2013 [acesso 20 out 2013]. Disponível em: 

http://www.ruralindustriesresearch.org/report_development_corporation.php/. 

[20] Bailey FR. Histologia. 2ª ed. São Paulo: E. Blucher; 1973. 

[21] Brouet JC, Clauvel JP, Danon F. Biologic and clinical significance of cryoglobulins: 

A report of 86 cases. Am J Med. 1984;57:775-8. 

[22] Loose HW, Haslam PJ. The management of peripheral arterial aneurysms using 

percutaneous injection of fibrin adhesive. Br J  Radiol. 1998;71(852):1255-9. 

[23] Pizzol MMD, Roggia MF, Kwitko S, Marinho DR, Rymer S. Utilização de adesivo 

de fibrina em cirurgias oftalmológicas. Arq Bras Oftalmol. 2009;72:308-12.  

[24] Stone, JH. Mixed Cryoglobulinemia. In: Imboden,J Hellmann, DB Stone. Current 

heumatology. diagnosis & treatment. New York: Mcgraw-Hill; 2004 chap 35, p. 273-7. 

[25] Mendoza JC, Lazo F, Yarlequé L, Ruiz NC, Yarlequé A, Pessah S, et al.  Efecto 

del antiveneno botrópico sobre las actividades de fosfolipasa a2, l-aminoácido oxidasa 

y hialuronidasa de los venenos de serpientes peruanas. Rev Peru Med Exp Salud 

Publica. 2008;25:174-8. 

[26] Anderson KP. Feeding and care of orphaned foals. Equinews. 2008;2:3.   

[27] Mcauliffe SB, Slovis NM. Color atlas of diseases and disorders of the foal. Oxford: 

Elsevier; 2008,1:127-9. 

[28] Thomazini-Santos IA, Giannini MJSM, Toscano E, Machado PEA, Lima CRG, 

Barraviera B. The evaluation of clotting time in bovine thrombin, Reptilase®, and 

thrombin-like fraction of Crotalus durissus terrificus venom using bovine, equine, ovine, 

bubaline and human cryoprecipitades. J Venom Anim Toxins. 1998;4:120-36. 

[29] Puente PDL, Ludeña D. Cell cultureinautologous fibrin scaffoldsfor applications 

intissueengineering. Exp Cell Res. 2014;322:1-11.  

 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          48 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

[30] Bennett ME, Michaels C, O’Brien K, Weyant R, Phillips C, Dryland V. Measuring 

beliefs about orthodontic treatment: a questionnaire approach. J Public Health Dent. 

1997;57:215-23.  

[31] Bergel S. On the functions of fibrins. Dtsch Med Wochenschr. 1909;35:633-65. 

[32] Grey EG. Fibrin as a hemostatic in cerebral surgery. Surg Gynecol Obsteit. 

1915;21:452. 
 
[33] Seddon HJ, Medawar PB. Fibrin suture of human nerves. Lancet. 1942;2:87-92. 

 

[34] Tidrick RT, Warner ED. Fibrin fixation of skin transplants. Surgery. 1944;15:90-5. 

 

[35] Staindl O. The healing of wounds and scar formation under the influence of a 

tissue adhesion system with fibrinogen, thrombin and coagulation factor XIII. Arch 

OtorhinolaryngoL. 1979;222:241-5. 

[36] Scardino MS, Swaim SF, Morse BS, Sartin EA, Wright JC, Hoffman CE. 

Evaluation of fibrin sealants in cutaneous wound closure. J Biomed Mater Res. 

1999;48:315-21. 

 

 [37] Stolf HO. The use of fibrin adhesive derived from snake venom and the evaluation 

of skin grafting using skin from the patient’s naso labial fold. J Venom Anim Toxins. 

1999;5:227.  

[38] Sartori-Filho R, Prestes NC, Thomazini-Santos IA,  Giannini MJSM, Toscano E, 

Canavessi AMO, et al. Use of fibrin glue derived from snake venom in testicular biopsy 

of rams.  J Venom Anim Toxins. 1998;4:23-35. 

 

[39] Chalhoub M, Prestes NC, Lopes MD, Rocha NS, Thomazini-Santos IA, Giannini 

MJSM. The use of snake venom derived fibrin glue in hysterorrhaphy of ovine 

caesarean surgery. J Venom Anim Toxins. 2000;6:220-37. 

 

[40] Leite CV, Naresse LE, Arantes HL, Lopes AF,  Thomazini-Santos IA, Giannini 

MJSM, et al. An evaluation by rat colon anastomosis of the efficacy of fibrin glue 

derived from snake venom. J Venom Anim Toxins. 2000;6:180-93. 

 

http://lattes.cnpq.br/8972540207861201
http://lattes.cnpq.br/8972540207861201
http://lattes.cnpq.br/8972540207861201
http://lattes.cnpq.br/8972540207861201
http://lattes.cnpq.br/8972540207861201


Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          49 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

[41] Ferraro GC, Moraes JRE, Shimano AC, Pereira GT, Moraes FR, Bueno De 

Camargo MH. Effect of snake venom derived fibrin glue on the tendon healing in dogs. 

J Venom Anim Toxins Incl Trop Dis. 2005;11:261-74. 

[42] Chiquito GCM. Comparison between suture and fibrin adhesive derived from 

snake venom for fixation of connective tissue graft in correction of marginal tissue 

recession. J. Venom Anim. Toxins Trop Dis. 2007;13:559. 

[43] Sampaio RL, Thomazini-Santos IA, Ranzani JJT,  Brandão CVS, Barraviera B, 

Barraviera SRC S, et al. Use of fibrin glue derived from snake venom in the repair of 

deep corneal ulcers: experimental study in dogs (Canis familiaris, Linnaeus, 1758). J 

Venom Anim Toxinas Incl Trop Dis. 2007;13:857-73. 

 

[44] Barbosa MDS, Stipp AC, Passanezi E, Greghi SL. Fibrin adhesive derived from 

snake venom in periodontal surgery. histological analysis. J Appl Oral Sci. 

2008;16:310-5. 

 

[45] Gasparotto VP, Landim-Alvarenga FC, Oliveira AL, Simões GF, Lima-Neto 

JF, Barraviera B, et al. A new fibrin sealant as a three-dimensional scaffold candidate 

for mesenchymal stem cells. Stem Cell Res Ther. 2014;10:5:78.  

 

[46] Jaul E. Non-healing wounds: the geriatric approach. Arch Gerontol Geriatr. 

2009;49:224-6. 

[47] Maffei FH, Magaldi C, Pinho SZ, Lastoria S, Pinho W, Yoshida WB, et al. Varicose 

veins and chronic venous insufficiency in Brazil: prevalence among 1755 inhabitants of 

a country town. Int J Epidemiol. 1986;15:210-7. 

 

[48] Callam MJ. Epidemiology of varicose veins. Br J Surg. 1994;81:167-73. 

 

[49] Valencia IC, Falabella A, Kirsner RS, Eaglstein WH. Chronic venous insufficiency 

and venous leg ulceration. J Am Acad Dermatol. 2001;44:401-21. 

 

[50] Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística (IBGE). Resultados do Censo 2010 

[internet]. 

Brasilia: IBGE; 2010 [acesso 10 jun 2013]. Disponível em: 

http://www.censo2010.ibge.gov.br/resultados_do_censo2010.php/.  

http://lattes.cnpq.br/1087615389013655
http://lattes.cnpq.br/6840524602748457


Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          50 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 

[51] Phillips TJ, Dover JS. Leg ulcers. J Am Acad Dermatol. 1991;25:965-87. 

 

[52] Bongiovanni CM, Hughes MD, Bomengen RW. Accelerated wound healing: 

multidisciplinary advances in the care of venous leg ulcers. Angiology. 2006;57:139-44. 

[53] Salomé GM, Pellegrino DMS, Blanes L, Ferreira LM. Self-esteem in patients with 

diabetes mellitus and foot ulcers. J Tissue Viability. 2011;20:100-6. 

 

[54] Chen WY, Rogers AA. Recent insights into the causes of chronic leg ulceration in 

venous diseases and implications on other types of chronic wounds. Wound Repair 

Regen. 2007;15:434-49. 

[55] Broadbent J, Walsh T, Upton Z. Proteomics in chronic wound research: potentials 

in healing and health Proteomics. Clin Appl. 2010;4:1-11. 

[56] Balbino CA, Pereira LM, Curi R. Mecanismos envolvidos na cicatrização: uma 

revisão. Rev Bras Cienc Farm. 2005;41:43-8.   

[57] Zimmet SE. Venous leg ulcers: modern evaluation and management. Dermatol 

Surg. 1999;25:236-41. 

 

[58] Partsch H. Compression therapy of the legs: A review. J Dermatol Surg Oncol. 

1991;17(10):799-805. 

 

[59] Smith PC, Sarin S, Hasty J, Scurr JH. Sequential gradient pneumatic compression 

enhances venous ulcer healing: a randomized trial. Surgery.1990;108:871-5. 

 

[60] Dealey C. Cuidando de feridas: um guia para as enfermeiras. 3ª ed. São Paulo: 

Atheneu; 2008. 

 

 [61] Fonder MA, Lazarus GS, Cowan DA, Aronson-Cook B, Kohli AR, Mamelak AJ. 

Treating the chronic wound: A practical approach to the care of nonhealing wounds 

and wound care dressings. J Am Acad Dermatol. 2008;58:185-206. 

[62] Gatti M, Vieira LM, Barraviera B, Barraviera SRCS. Treatment of venous ulcers 

with fibrin sealant derived from snake venom. J Venom Anim Toxins Incl Trop. 

2011;17:226-9. 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          51 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

[63] Beauchaine TP, Neuhaus E, Brenner SL, Gatzke-Kopp L. Ten good reasons to 

consider biological processes in prevention and intervention research.Dev 

Psychopathol. 2008;20:745-74. 

[64] World Health Organization. International Program on Chemical Safety (IPCS). 

Environmental health criteria 210: principles for the assessment of risks to human 

health from exposure to chemicals. Geneva: WHO;1999. 

[65] Amorim LCA. Biomarkers for evaluating exposure to chemical agents present in 

the environment. Rev Bras Epidemiol.2003;6:15. 

[66] Eckersall PD. Recent advances and future prospects for the use of acute phase 

proteins as markers of disease in animals. Rev Med Vet. 2000;151:577-84. 

[67] Gonzalez MA, Alvarez ML, Pisani GB, Bernal CA, Roma MG, Carrillo MC. 

Involvement of oxidative stress in the impairment in biliary secretory function induced 

by intraperitoneal administration of aluminum to rats. Biol Trace Elem. 2007;116:329-

48. 

[68] Gonzalez MA, Bernal CA, Mahieu S, Carrillo MC. The interactions between the 

chronic exposure to Aluminum and liver regeneration on bile flow and organic anion 

transport in rats. Biol Trace Elem. 2009;127:164-76. 

[69] Hirvonen J, Eklund K, Teppo AM, Huszenica G, Kulcsar M, Saloniemi H, et al. 

Acute phase response in dairy cows with experimentally induced Escherichia coli 

mastitis. Acta Vet Scand. 1999;40:35-46. 

 

[70] Skinner JG, Brown RAL, Roberts L. Bovine haptoglobin response in clinically 

defined field conditions. Vet Rec. 2001;128:147–9. 

[71] Murata H, Shimada N, Yoshioka M. Current research on acute phase proteinsin 

veterinary diagnosis: an overview. Vet J. 2004;168:28-40. 

[72] Petersen HH, Nielsen JP, Heegaard PMH. Application of acute phase protein 

measurement in veterinary clinical chemistry. Vet Res. 2004;35:163-87. 

[73] Subiela SM, Tecles F, Parra MD, Cerón JJ. Proteínas de fase aguda: conceptos 

básicos y principales aplicaciones clínicas em medicina. An Vet. 2001;17:97-114.  

[74] Tizard IR. Imunologia veterinária: uma introdução. 5ª ed. São Paulo: Guanabara; 

1998. 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          52 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

[75] Gruys E, Toussaint MJM, Niewold TA, Koopmans SJ. Acute phase reaction and 

acute phase proteins. J Zhejiang Univ Sci. 2005;6:1045-56. 

[76] Ringler DJ. Inflammation and repair. Vet Pathol. 1997;6:113-57. 

[77] Schaffer CJ, Nanney LB. Cell biology of wound healing. Int Rev Cytol. 

1996;169:151-77. 

[78] Kaneko JJ. Serum proteins and the dysproteinemias. In Kaneko J, Harvey JW, 

Bras ML editor.Clin biochem domestic animals. 5 ed. San Diego: Academic 

Press;1997. p.117-37. 

[79] Jain NC. Essentials of Veterinary hematology. Philadelphia: Lea and Febiger; 

1993. p.12-5. 

 

[80] Schneider C, Malisius R, Küchler R. A prospective study  on ultrasound-guided 

percutaneous thrombin injection  for treatment of iatrogenic post-catheterisation 

femoral pseudoaneurysms. Int J Cardiol. 2009;131:356-61. 

[81] Pomorska-Mol M, Kwit K, Pejsak Z, Markowska D. The analysis of the acute phase 

protein response in pigs with subclinical infection with swine H3N2 flu virus. Influenza 

Other Respir Viruses. 2014; 8(2):228-34. 

[82] Simplício KMMG, Sousa FC, Fagliari JJ, Silva PC. Proteinograma sérico, com 

ênfase em proteínas de fase aguda, de bovinos sadios e bovinos portadores de 

enfermidade aguda de ocorrência natural. Arq Bras Med Vet Zootec. 2013;65(5):1339-

47.  

[83] Galdos ACR. Análise proteômica do saco vitelino de bovinos [dissertação]. São 

Paulo: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia; Universidade de São Paulo; 

2009. 

[84] Cai Y, Luo Q, Sun M, Corke H. Antioxidant activity and phenolic compounds of 112 

traditional Chinese medicinal plants associated with  anticancer. Life Sci. 

2004;74:2157-84. 

[85] Liby KT, Yore MM, Sporn MB. Triterpenoides and rexinoids as multifunctional 

agents for the prevention and treatment of cancer. Nat Rev Cancer. 2007;7:357-69.  

[86] Anderson NG, Anderson NL. Twenty years of Two-dimensional electrophoresis: 

past, present and future. Electrophoresis. 1996;17:443-53. 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          53 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

[87] Celis JE, Gromov P, Ostergaard M, Madsen P, Honoré B, Dejgaard K, et al. 

Human 2-D PAGE databases for proteome analysis in health and disease. Nat 

Biotechnol. 1996;398:129-34. 

 [88] Wilkins MR, Pasquali C, Appel RD, Ou K, Golaz O, Sanchez JC, et al. From 

proteins to proteomes: large scale protein identification by two-dimensional 

electrophoresis and amino acid analysis. Nat Biotechnol. 1996;14:61-5. 

[89] Wilkins MR, Willians KL, Appel RD, Hochstrasser DF. Proteome research: new 

frontiers in functional genomics. J Clin Oncol Res. 1997;243:22-4. 

[90] O’Farrel PH. High resolution two-dimensional electrophoresis of protein. J Biol 

Chem. 1975;250:4007-21. 

[91] Isfor RJ. Proteomics analysis of striated muscle. J Chrom B. 2002;771:155-65. 

[92] Aebersold R, Mann M. Mass spectrometry-based proteomics. Nature. 

2003;402:198-207. 

[93] De Souza MV, Fontes W, Ricart CA.  Análise de proteomas: o despertar da era 

pós-genômica. Biotecnol Ciênc Desenvol. 2003:12-4. 

[94] Santos LD, Menegasso ARS, Pinto JRAS, Santos KS, Castro FM, Kalil JE, et al. 

Proteomic characterization of the multiple forms of the PLAs from the venom of the 

social wasp Polybia paulista. Proteomics. 2011;11:1403-12.  

[95] Fernandez ML, Broadbent JA, Shooter GK, Malda J, Upton Z. Development of an 

enhanced proteomic method to detect prognostic and diagnostic markers of healing in 

chronic wound fluid. Br J Dermatol. 2008;158:281-90. 

[96] Zhang X, Yin X, Yu H, Liu X, Yang F, Yao J, et al. Quantitative proteomic analysis 

of serum proteins in patients with Parkinson’s disease using an isobaric tag for relative 

and absolute quantification labeling, two-dimensional liquid chromatography, and 

tandem mass spectrometry. Analyst. 2012;137:490. 

[97] Phillips RO, Sarfo FS, Landier J, Oldenburg R, Frimpong M, Wansbrough-Jones 

M, et al. Combined inflammatory and metabolic defects reflected by reduced serum 

protein levels in patients with buruli ulcer disease. PLoS Negl Trop Dis. 2014,8:e2786.  

[98] Sales D, Brito I, Lima LF, Lobo CH, Duarte AB, Souza CEA, et al. Expression and 

localization of Aquaporin 3 (AQP3) in folliculogenesis of ewes. Acta Histochem. 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          54 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

2014;1:1-7. 

 

[99] Rego JPA, Crisp JM, Nouwens A, Li Y, Moura AA, Venus B, et al. Seminal plasma 

proteome of electroejaculated Bos indicus bulls. Anim Reprod Sci.  2014;1:1-15. 

  

[100] Cadavid VG, Martins JAM, Moreno FB, Andrade TS, Santos AC, Monteiro-

Moreira ACO, et al. Proteins of the boar seminal plasma are associated with sperm 

parameters. Theriogenology. 2014;1:1-10. 

 

[101] Maxwell KL, Frappier L. Viral proteomics. Microbiol Mol Biol Rev. 2007;71:398-

411. 

 

[102] Gaso-Sokac D, Kovac S, Josic D. Use of proteomic methodology in optimization 

of processing and quality control of food of animal origin. Food Technol Biotech. 

2011;49:397-412. 

 

[103] Paredi G, Sentandreu M, Mozzarelli A, Fadda S, Hollung K, Almeida AM. Muscle 

and meat: New horizons and applications for proteomics on a farm to fork perspective. 

J Proteomics. 2013;88:58-82. 

 

[104] Jayasri K, Padmaja K, Prasad PE. Proteomics in Animal Health and Production. 

IOSR J Agricult Vet Sci.  2014;7:50-6. 

 

[105] Park Y, Kim J, You Y, Pang M. Proteomic revolution to improve tools for 

evaluating male fertility in animals. J Proteome Res. 2013;12:4738-47. 

 

[106] Peddinti D, Nanduri B, Kaya A, Feugang JM, Burgess SC, Memili E. 

Comprehensive proteomic analysis of bovine spermatozoa of varying fertility rates and 

identification of biomarkers associated with fertility. BMC Syst Biol. 2008;2(19):1-13. 

 

[107] Rahman MS, Lee J, Kwon W, Pang M. Sperm Proteomics: road to male fertility 

and contraception. Int J Endocrinol. 2013;20:1-11. 

 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          55 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

[108] Fraipont C, Alexeeva S, Wolf B, Schloesser M, Den Blaauwen T, Nguyen-

distèche M. The integral membrane FtsW protein and peptidoglycan synthase PBP3 

form a sub-complex in Escherichia coli. J Clin Microbiol. 2011;157:251-9.  

[109] Amorim LCA. Biomarkers for evaluating exposure to chemical agents present in 

the environment. Rev Bras Epidemiol. 2003;6:15. 

[110] Scoppetta F, Tartaglia M, Renzone G, Avellini L, Gaiti A, Scaloni A, et al. Plasma 

protein changes in horse after prolonged physical exercise: a proteomic study. J 

Proteomics. 2012; 75:4494-504. 

 

[111] Chiou SH, Wu CY. Clinical proteomics: current status, challenges, and future 

perspectives. Kaohsiung J Med Sci. 2011;27:1-14. 

[112] Ekegren T, Hanrieder J, Bergquist J. Clinical perspectives of high-resolution 

mass spectrometry-based proteomics in neuroscience: exemplified in amyotrophic 

lateral sclerosis biomarker discovery research. J Mass Spectrom. 2008;43:559-71. 

[113] Pendyala G, Trauger SA, Siuzdak G, Fox HS. Quantitative plasma proteomic 

profiling identifies the vitamin E binding protein afamin as a potential pathogenic factor 

in SIV  induced CNS disease. J Proteome Res. 2010;9:352-8. 

[114] Santos HM, Lodeiro C, Capelo JL. Analytical proteomics: an emerging field?. J 

Proteomics.  2010;73:1411-4. 

[115] Kolla V, Jeno P, Moes S, Tercanli S, Lapaire O, Choolani M, et al. Quantitative 

proteomics analysis of maternal plasma in Down syndrome pregnancies using isobaric 

tagging reagent (iTRAQ). J Biomed Biotechnol. 2010;10:952047. 

[116] Song F, Poljak A, Kochan NA, Raftery M, Brodaty H, Smythe GA, et al. Plasma 

protein profiling of Mild Cognitive Impairment and Alzheimer's disease using iTRAQ 

quantitative proteomics. Proteome Sci. 2014;12:5. 

[117] Zangarini M, Ceriani L, Sala F, Marangon E, Bagnati R, D'Incalci M, et al. 

Quantification of trabectedin in human plasma: Validation of a high-performance liquid 

chromatography-mass spectrometry method and its application in a clinical 

pharmacokinetic study. J Pharm Biomed Anal. 2014;2:107-12. 

[118] Weiland F1, Zammit CM, Reith F, Hoffmann P. High resolution two-dimensional 

electrophoresis of native proteins. Electrophoresis J. 2014;35:1893-902. 



Capitulo 1 – Revisão Bibliográfica          56 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

[119] Pandey A, Mann M. Proteomics to study genes and genomes. Nature. 

2000;405(6788):837-46. 

[120] Klose J. Protein mapping by combined isoelectric focusing and electrophoresis of 

mouse tissues. Rev Méd Chile. 1975;26:231-43. 

[121] Qualtieri A, Pera ML, Urso E, Bono F, Valentino P, Scornaienchi MC, Quattrone 

A. Two-dimensional electrophoresis of peripheral nerve proteins: optimized sample 

preparation. J Neurosci Met. 2007;159:125-33. 

[122] Karas M, Hillenkamp F. Laser desorption ionization of proteins with molecular 

masses exceeding 10,000 daltons. Anal Chem. 1988;60:2299-301. 

[123] Tanaka K, Waki H, Ido Y, Akita S, Yoshida T. Protein and polymer analyses up to 

m/z 100 000 by lazer ionization time-of-flight mass spectrometry. Rapid Commun 

Mass. 1998;2:151-3. 

[124] Fenn JB, Mann M, Meng CK, Wong SF, Whitehouse CM. Electrospray ionization 

for mass spectrometry of  large biomolecules. Science. 1989;246(4926):64-71. 

[125] Olsen JV, Blagoev B, Gnad F, Macek B, Kumar C, Mortensen P. Global, in vivo, 

and site-specific phosphorylation dynamics in signaling networks. Cell. 2006;127:635-

48. 

[126] Fournier ML, Gilmore JM. Multidimensional separations-based shotgun 

proteomics. Chem Rev. 2007;107:3654-86. 

[127] Graves PR, Haystead TAJ. Molecular biologist’s guide to poteomics. Microbiol 

Mol Biol Rev. 2002;66:39-63. 

[128] Bantscheff M, Lemeer S, Savitski MM, Kuster B. Quantitative mass spectrometry 

in proteomics: critical review update from 2007 to the presente. Anal Bioanal Chem. 

2012;404:939-65. 

[129] Pernemalm M, Lehtiö J. Mass spectrometry-based plasma proteomics: state of 

the art and future outlook. Expert Rev Proteomics. J Proteome Res. 2008;7:2712-22. 



Capitulo 2 – Artigo          57 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Capitulo 2 – Análise proteômica do plasma sanguíneo e 
crioprecipitado de búfalos BubalusBubalis



Capitulo 2 – Artigo          58 

PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

RESUMO 

O Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos da UNESP (CEVAP) 

propuseram há cerca de 20 anos, a bioprospecção de um novo selante de fibrina a 

partir de uma serinoprotease extraída do veneno da serpente Crotalus durissus 

terrificus associada ao crioprecipitado rico em fibrinogênio extraído do sangue de 

búfalos. Atualmente, pouco se sabe sobre a constituição sérica de búfalos da espécie 

Bubalus bubalis, raça Murrah. Neste sentido, este trabalho teve por objetivo 

caracterizar as proteínas majoritárias presentes no plasma sanguíneo e do 

crioprecipitado de B. bubalis por meio das técnicas analíticas de eletroforese 

bidimensional e espectrometria de massas. Como resultados, evidenciou-se a 

presença de 129 e 100 proteínas no plasma sanguíneo e no crioprecipitado de 

bubalinos, respectivamente, sendo estas com massas moleculares entre 110 e 20 kDa 

e ponto isoelétrico 4-7. Destas 129 proteínas do plasma sanguíneo, 112 foram 

identificadas, dentre elas albumina, fibrinogênio-α, fibrinogênio-β, fibrinogênio-γ, 

imunoglobulinas em geral, α-1-antiproteinase, α-1B-glicoproteína, α-2-HS-

glicoproteína, α-2-macroglobulina, apoliproteina A-1, antitrombina-III, endopina 2B, 

fetuína-B, proteína ligante de retinol, serotransferina, transtiretinae proteína ligante de 

vitamina-D. A maioria destas proteínas estão relacionados com a via de sinalização do 

sistema complemento e cascata de coagulação. A finalidade deste estudo foi melhor 

compreender a composição proteica das proteínas majoritárias presentes no plasma e 

no crioprecipitado de bubalinos, a fim de dar suporte cientifico em estudos futuros para 

o desenvolvimento de uma plataforma diagnóstica mais específica de sanidade de 

bubalinos doadores de matéria-prima do selante de fibrina do CEVAP. 

 

Palavras-chave: Análise proteômica, plasma sanguíneo, crioprecipitado, Bubalus 

bubalis, selante de fibrina, eletroforese bidimensional, espectrometria de massas. 



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PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

ABSTRACT 

The Center for the Studies of Venoms and Venomous Animals (CEVAP) at UNESP 

proposed to twenty years ago, the prospection of one fibrin sealant from a 

serineprotease from Crotalus durissis terrificus snake venom associated to 

cryoprecipitate rich in fibrinogen extract from bubaline blood. Nowadays, few is know 

about the composition of Bubalus bubalis buffalo serum (Murrah). So, the objective this 

word was characterizing the majority proteins presents in the plasma and 

cryoprecipitate of B. bubalis by using two main analytical techniques bidimensional 

electrophoresis and mass spectrometry. As results, it was evidenced the presence of 

129 e 100 proteins in the plasma and cryoprecipitate, respectively, with molecular 

mass between 100 and 20 kDa and isoelectric point 4-7. Of theses 129 proteins from 

plasma, 112 ones were identified, among them albumin, fibrinogen-α, fibrinogen-β, 

fibrinogen-γ, immunoglobulins em general, α-1-antiproteinase, α-1B-glycoprotein, α-2-

HS-glycoprotein, α-2-macroglobulin, apoliprotein A-1, antitrombin-III, endopin 2B, 

fetuin-B, retinol binding protein, transferrin, transthtiretin e vitamin D binding protein. 

Most of these proteins are related with the signaling via of complement system and 

coagulation cascade. The finality this study was better understanding the composition 

of the most abundance proteins from plasma and cryoprecipitate of healthy buballos to 

give cientific support in future studies for the development of a specific diagnostic 

plataform of sanity for buballos donors of raw material of the fibrina sealant at CEVAP.   

Keywords: Proteomic analysis, plasma, cryoprecipitate, Bubalus bubalis, fibrin 

sealant, bidimensional electrophoresis, mass spectrometry. 



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PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

1. INTRODUÇÃO 
 

A utilização de produtos naturais com propriedades terapêuticas é tão antiga 

quanto à própria civilização humana. Atualmente, a busca de novas moléculas a partir 

de extratos de vegetais, de venenos e de insumos animais, como plasma sanguíneo 

ou soro, tem contribuindo para a descoberta de novos medicamentos1. Estima-se que 

60% dos fármacos antitumorais e anti-infecciosos que se encontram disponíveis 

comercialmente são de origem natural 2,3. 

Os búfalos da espécie Bubalus bubalis ganharam um espaço considerável na 

economia mundial por atuarem como bons doadores de matéria-prima. Estes, por sua 

vez, são de origem asiática e podem ser encontrados em maior abundância nas 

regiões tropicais e temperados da Ásia. Segundo Borghese e Mazzi, a população de 

búfalos no mundo totaliza cerca de 168 milhões de animais, os quais estão 

distribuídos geograficamente pelo mundo nas seguintes proporções: 161 milhões 

[95,83%] na Ásia, 3,717 milhões [2,24%] na África, 3,3 milhões [1,96%] na América do 

Sul, 500 mil [0,3%] na Europa e 40 mil [0,02%] na Austrália. Essa espécie tem 

ocupado um papel relevante na produção de alimentos por garantir estabilidade 

econômica para áreas menos favorecidas4. Por sua vez, estes animais têm sido 

mundialmente utilizados em atividades econômicas, dentre estas, o emprego de força 

para a tração de instrumentos agrícolas e a produção de leite e de carne5. 

Uma nova frente de pesquisas biotecnológicas vem se desenvolvendo no que 

se refere às fazendas produtoras de animais de grande porte6. A utilização de animais 

de grande porte como doadores/soroprodutores desse material biológico tem se 

mostrado de grande importância na pesquisa científica e/ou na produção de 

medicamentos e imunobiológicos7,8. 

Neste contexto, o Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos da 

UNESP (CEVAP) vem desenvolvendo um novo selante de fibrina há mais de 20 anos, 



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PONTES, L.G.                                                                                                      Dissertação de Mestrado 

para atuar como cola biológica em procedimentos cirúrgicos e no auxílio durante o 

tratamento de úlceras venosas crônicas. A equipe de pesquisadores do CEVAP 

propôs a prospecção de um novo selante a partir de uma serinoprotease extraída do 

veneno da serpente Crotalus durissus terrificus associada ao crioprecipitado (plasma 

sanguíneo concentrado) rico em fibrinogênio extraído de bubalinos.  

Esta iniciativa de desenvolvimento de um novo selante de fibrina a partir do 

sangue de búfalos ganhou mais expressão quando Thomazini-Santos e colaboradores 

(1998) avaliaram o tempo de coagulação da fração trombina de serpentes Crotalus 

durissus terrificus, empregando-se crioprecipitado (plasma sanguíneo concentrado) de 

diferentes espécies animais. Este estudo evidenciou que o plasma sanguíneo de 

búfalos da espécie Bubalus bubalis apresenta uma concentração de fibrinogênio 

superior dos demais animais analisados (homem, bovinos, equinos e ovinos) e tempo 

de coagulação próximos aos obtidos nas amostras de seres humanos9. 

Por sua vez, o crioprecipitado consiste na porção acelular do sangue obtida por 

precipitação/centrifugação do sangue total, sendo constituído basicamente de água, 

proteínas, tais como soro albumina e globulinas, fatores de coagulação, fibrinogênio, 

carboidratos e lipídios10. Originalmente, o crioprecipitado foi desenvolvido como um 

agente terapêutico para o tratame