Teresa Cristina de Toledo Francisco 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Análise de hidrolisados proteicos de Pereskia aculeata Miller (Ora-Pro-Nóbis) 

 

 
 
 
 
 
 

 
 
 
 

Dissertação apresentada ao Pro-

grama de Pós-graduação em Bio-

tecnologia do Instituto de Química, 

UNESP, Araraquara/SP, como par-

te das exigências para obtenção 

do título de Mestre em Biotecnolo-

gia. 

 
 

Orientador: Prof. Dr. Eduardo Maffud Cilli 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Araraquara/SP 
2018 



 
 

Francisco, Teresa Cristina de Toledo 

F818a Análise de hidrolisados proteicos de Pereskia aculeata 

Miller (Ora-Pro-Nóbis) / Teresa Cristina de Toledo Francisco. 

– Araraquara : [s.n.],2018  

82 f. : il. 

 
Dissertação (mestrado) – Universidade Estadual Paulista, 

Instituto de Química 

Orientador: Eduardo Maffud Cilli 
 

1. Pereskia. 2. Peptídeos. 3. Hidrolisados de proteína. 

4. Antimicóticos. 5. Antibacterianos. I. Título. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

FICHA CATALOGRÁFICA 
 

Elaboração: Seção Técnica de Aquisição e Tratamento da Informação 
  Biblioteca do Instituto de Química, Unesp, câmpus de Araraquara 

 
 
 



 



DADOS CURRICULARES 

 
 

IDENTIFICAÇÃO 

Nome: Teresa Cristina de Toledo Francisco 

Nome em citações bibliográficas: FRANCISCO, T. C. T. 

 
 

 
ENDEREÇO PROFISSIONAL 

 
 

Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, UNESP. Rua Prof. 

Francisco Degni, 55. Quitandinha – Araraquara/SP – Brasil. 

 

Anglo. Avenida Queiroz Filho, 1599. Vila Harmonia – Araraquara/SP – Brasil. 

 

Etec Sylvio de Mattos Carvalho. Rua Cesário Mota, 644. Centro – Matão/SP – 

Brasil. 

 
 

FORMAÇÃO ACADÊMICA/TITULAÇÃO 

 
 

2016 – 2018 – Mestrado em Biotecnologia (Conceito CAPES 6). Universidade 

Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, UNESP, Brasil. Título “Análise de 

hidrolisados proteicos de Pereskia aculeata Miller (Ora-Pro-Nóbis)”. Orientador: 

Prof. Dr. Eduardo Maffud Cilli. 

 

2009 – 2010 – MBA em Gerenciamento Ambiental. Centro Universitário Central 

Paulista, UNICEP, Brasil. Título: “Agrotóxicos ou orgânicos? Uma questão de 

sustentabilidade”. Orientadora: Profa. Dra. Elisabete Gabriela Castellano. 

 

1989 – 1992 – Graduação em Ciências Biológicas. Universidade Federal de 

São Carlos, UFSCar, Brasil. 

 

 



FORMAÇÃO COMPLEMENTAR 

 

2018 - Capacitação: "Vulnerabilidades e Riscos Socioambientais: O aluno em Ação 

no Espaço" (Carga horária: 40). 

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2018 - Capacitação: "Laboratório Virtual de Educação em Biologia online" (Carga 

horária: 40h). 

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2017 - Capacitação: “Coach em grupo – autoconhecimento e sintonia de equipe” 

(Carga horária: 2h). 

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2016 - Curso de Atualização: "Introdução a LIBRAS – Online 2ª edição/2016". 

(Carga horária: 90h). 

Secretaria da Educação do Estado de São Paulo. Brasil. 
 

2016 - Capacitação: "Atividades experimentais em Biologia" (Carga horária: 20h). 

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2015 - Capacitação: "Portinari-Arte e Meio Ambiente" (Carga horária: 16h). 

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2015 - Capacitação: "Escola de Inverno" (Carga horária: 40h). 

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2015 – Capacitação: "Agenda Ambiental na Administração Pública - A3P" (Carga 

horária: 20h). 

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2015 - Capacitação: “Prevenção de Acidentes do Trabalho”, para os componentes 

da CIPA (Carga horária:20h). 

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 



2015 – Capacitação em “Água em curso”. (Carga horária: 12h). 

 Agência Nacional de Água, ANA, Brasil. 

 

2015 - Capacitação em "Planejamento Interdisciplinar das Práticas de Ensino e 

Avaliação por Competência”. (Carga horária: 50h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 
2015 - Capacitação em "Avaliação e Reorientação de Aprendizagem".  

(Carga horária: 4h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2015 - Capacitação em “Planejamento, Manejo e Gestão de Bacias”. (Carga horária: 

40h).  

Agência Nacional de Águas, ANA, Brasil. 

 

2015 -Capacitação em "NSA- Sistema Acadêmico". (Carga horária: 4h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2014 - Capacitação em "Práticas Interdisciplinares para Professores de Ciências da 

Natureza". (Carga horária: 40h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2014 - Capacitação em “Prevenção de Acidentes para Componentes da CIPA”.  

(Carga horária: 20h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2014 - Capacitação em "Seminário Soberania Alimentar e Geração de Renda e da 

VII Feira de Troca de Sementes e Mudas Tradicionais dos Quilombos do Vale do 

Ribeira e da V Feira Estadual de Troca de Sementes Tradicionais e Crioulas do Es-

tado de São Paulo”. (Carga horária: 16h). 

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2014 - Capacitação em "Seminário Internacional de Boas Práticas de Sustentabili-

dade. (Carga horária: 16h).  



Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2014 - Treinamento "Atendimento de Urgência e Emergência em Situações de Ris-

cos". (Carga horária: 2h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2014 - Capacitação em “Agentes de Abandono de Área”. (Carga horária: 4h).  

Escola Superior de Bombeiros, ESB, Brasil. 

 

2013 - Capacitação em "Encontro com Docentes - Metodologia e Avaliação". (Carga 

horária: 4h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2013 - Capacitação em "Trabalhando os roteiros de aprendizagem". (Carga horária: 

20h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2013 – Capacitação em “Segurança e Meio Ambiente”. (Carga horária: 40h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2013 - Capacitação em "Processo de Avaliação na Educação Profissional". (Carga 

horária: 40h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2013 - Capacitação em "O professor e o aluno em sala de aula: procedimentos didá-

ticos”. (Carga horária: 4h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2013 - Capacitação em “Análise de impacto ambiental e indicadores da qualidade de 

água”. (Carga horária: 32h).  

Embrapa, EMBRAPA, Brasil. 

 

2013 - Capacitação em "Desenvolvimento de Material Didático para Gestão de 

Energia. (Carga horária: 8h).  



Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2013 - Capacitação em "Sistema de Tratamento de água e resíduos". (Carga horá-

ria: 40h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2013 - Capacitação em "Biogeografia: Conservação de Ecossistemas Naturais". 

(Carga horária: 40h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2012 - Capacitação em "Desafios e aprendizagens para a formação de uma cultura 

sus. (Carga horária: 8h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2011 - Aperfeiçoamento "História da África e das Culturas Afro-Brasileiras". (Carga 

horária: 195h).  

UNIAFRO, UFMG, Brasil. 

 

2011 - Capacitação em "Colóquio Interestadual - Histórias e Culturas Africanas e 

Afro-brasileiras na Escola". (Carga horária: 16h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2011 - Capacitação em “Blogs - Portal Clickideia”. (Carga horária: 4h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2011 - Capacitação em "Congresso Técnico InterEtecs". (Carga horária: 7h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2010 - Capacitação em "Videoconferência: Critérios, Instrumentos e Registros de 

Avialição”. (Carga horária: 3h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2010 - Capacitação Inicial - Nível 01 do Portal Clickideia. (Carga horária: 4h).  

Clickideia Tecnologia Educacional, CLICKIDEIA, Brasil. 



2010 - Curso de Treinamento para Cipeiros. (Carga horária: 20h).  

Treinamentos e Assessoria e Segurança no Trabalho, DBA, Brasil. 

 

2010 - Curso da CIPA- Comissão Interna de Prevenção de Acidentes. (Carga horá-

ria: 20h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2009- Capacitação em "Videoconferência: A Arte de Nicolas Poussin”. (Carga horá-

ria: 2h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2009 - Programa de Capacitação do Projeto de Qualificação do Trabalhador. (Carga 

horária: 24h).  

Governo do Estado de São Paulo, GOVERNO/SP, Brasil. 

 

2009 - Capacitação em "Aprendizagem baseada em Projetos ´uma nova estratégia 

de ensino”. (Carga horária: 48h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2009 - Capacitação em “DNA Forense”. (Carga horária: 80h).  

Portal Educação de Campo Grande, PE, Brasil. 

 

2009 - Capacitação em “Práticas de Sustentabilidade”. (Carga horária: 4h).  

Portal Educação de Campo Grande, PE, Brasil. 

 

2009 - Capacitação em "Videoconferência: Arte e cultura na sala de aula". (Carga 

horária: 3h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2008 - Capacitação em “Direito Ambiental”. (Carga horária: 60h).  

Portal Educação de Campo Grande, PE, Brasil. 

 

2008 - Minicurso "Photoshop". (Carga horária: 2h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 



2008 - Minicurso "Formatação Word 2007". (Carga horária: 2h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2008 - Capacitação em "Videoconferência - TCC: Uma metodologia para educação e 

trabalho”. (Carga horária: 3h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2007 - Capacitação em "Videoconferência: Planejamento do Ensino". (Carga horária: 

3h).  

Centro Estadual de Educação Tecnológica Paula Souza, CEETEPS, Brasil. 

 

2003 - Capacitação em “Técnicas de Engenharia Genética e Biologia num Enfoque 

Físico-Químico”. (Carga horária: 8h).  

Master Anglo Araraquara, ANGLO, Brasil. 

 
 
PRODUÇÃO BIBLIOGRÁFICA 

 
 

Resumo publicado em periódicos 

 

FRANCISCO, T. C. T. CILLI, E. M.  Extração de peptídeos e quantificação de ami-

noácidos de Pereskia aculeata Miller (Ora-Pro-Nóbis) para ensaios antimicrobianos. 

Revista de Ciências Farmacêuticas Básica e Aplicada, v. 39, suple.1, 2018. 

 

Divulgação científica 

 

FRANCISCO, T. C. T. Urbanização e Sustentabilidade. A Tribuna, Araraquara, 28 

out. 2009. 

 

 

Trabalhos completos publicados em anais de congressos 
 

 CAMARGO, A. A.; FRANCISCO, T. C. T. Sistema de Avaliação versus Dificuldades 

de Aprendizagem. In: II Simpósio Ensino Médio Técnico, 2013, São Paulo. Proces-

sos de Avaliação, 2013. p. 57-61. 

http://lattes.cnpq.br/7507913853411589
http://lattes.cnpq.br/7507913853411589
http://lattes.cnpq.br/7507913853411589


 

 MATOS, E. P.; FRANCISCO, T. C. T. Análise Bioliterária de Coletânea de Mia Cou-

to. In: Os fios que nos unem - Centro Paula Souza, 2011, São Paulo. I Colóquio Inte-

restadual "História e Culturas Africanas e Afro-Brasileiras na Escola", 2011. p. 63-66. 

 

Apresentações de Trabalho 

 

FRANCISCO, T. C. T; CILLI, E. M.  Extração de peptídeos e quantificação de ami-

noácidos de Pereskia aculeata Miller (Ora-Pro-Nóbis) para ensaios antimicrobianos. 

2018. (Apresentação de Trabalho/Congresso). 

 

FRANCISCO, T. C. T. Ecoempreendedorismo e Sustentabilidade. 2016. (Apresenta-

ção de Trabalho/Conferência ou palestra). 

 

FRANCISCO, T. C. T. Sistema de avaliação versus dificuldades de aprendizagem. 

2013. (Apresentação de Trabalho/Simpósio). 

 

FRANCISCO, T. C. T. Preservação e Conservação Ambiental. 2012. (Apresentação 

de Trabalho/Conferência ou palestra). 

 

FRANCISCO, T. C. T. Conscientização e Orientação Sexual. 2012. (Apresentação 

de Trabalho/Conferência ou palestra). 

 

FRANCISCO, T. C. T. Floresta Amazônica. 2012. (Apresentação de Traba-

lho/Conferência ou palestra). 

 

 FRANCISCO, T. C. T. Análise bioliterária de coletânea de Mia Couto. 2011. (Apre-

sentação de Trabalho/Simpósio). 

 

DEMAIS TIPOS DE PRODUÇÃO TÉCNICA 

 

FRANCISCO, T. C. T. Probabilidade Simples, Condicional e Leis. 2016. (Curso de 

curta duração ministrado/Outra). 

 
 

http://lattes.cnpq.br/7507913853411589
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http://lattes.cnpq.br/7507913853411589
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PARTICIPAÇÃO EM EVENTOS, CONGRESSOS, EXPOSIÇÕES E FEIRAS 

 
IVV Congresso Farmacêutico da UNESP e IV Jornada de Engenharia de Bioproces-
so e Biotecnologia. 2018. (Congresso) 
 
Excelência em Liderança - Gestão de Pessoas. 2013. (Seminário). 
 
II Simpósio do Ensino Médio e Técnico.Sistema de avaliação versus dificuldades de 
aprendizagem. 2013. (Simpósio). 
 
World Café Pedagógico. 2013. (Encontro). 
 
Etec "Sylvio de Mattos Carvalho".Floresta Amazônica. 2012. (Seminário). 
 
Etec "Sylvio de Mattos Carvalho".Conscientização e Orientação Sexual. 2012. (Se-
minário). 
 
Etec "Sylvio de Mattos Carvalho".Preservação e Conservação Ambiental. 2012. 
(Seminário). 
 
I Colóquio Interestadual.Análise bioliterária de coletânea de Mia Couto. 2011. (Semi-
nário). 
 
XII Olimpíada Brasileira de Astronomia e Astronáutica. 2009. (Olimpíada). 
 
XVI Feira Tecnológica - Palestra "Green Box". 2008. (Seminário). 
 
XVI Feira Tecnológica - Palestra "MS- Power Point". 2008. (Seminário). 
 
XVI Feira Tecnológica - Palestra "Talento só, não basta". 2008. (Seminário). 
 
Encontro Pedagógico - Colégio Obejtivo. 2005. (Encontro). 
 
PRIONS: Novo limite entre o vivo e o não-vivo/ A classificação dos seres vivos: atua-
lização/ Experimentos de química em sala de aula. 2004. (Exposição). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 



Agradecimentos 

 
 

Ao Ser Supremo por me conceder a dádiva da vida, num aprendizado diário e 

constante de fé, amor e persistência. 

 

À minha família que, mesmo “distante”, me proporcionou a calmaria da correria 

do dia a dia. 

 

Ao meu Amor pelo carinho, amizade, companheirismo e pela incansável dedi-

cação, incentivo, estímulo, preocupação e paciência. Obrigada. Amo você. 

 

Ao pequeno agricultor, Ulisses Serafim, pela doação do material para desen-

volvimento deste trabalho.  Obrigada. 

 

Ao prof. Dr. Eduardo Maffud Cilli, pela oportunidade, confiança depositada, pe-

los ensinamentos e orientações. Muito obrigada. 

 

Aos companheiros do Laboratório: Paulo, Julia, Natália, Matheus, Mariana, Ca-

rol, Norival e, em especial, Jaff por auxiliarem no desenvolvimento do trabalho. 

Muito obrigada! 

 

 
Aos funcionários do Instituto de Química de Araraquara, UNESP, por esta-

rem sempre à disposição quando foi necessário, em especial às secretá-

rias da Pós-Graduação em Biotecnologia. 

 
 

A CAPES e FAPESP, pelo suporte financeiro. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

“Conheça todas as teorias, domine 

todas as técnicas, mas quando to-

cares uma alma humana, seja 

apenas outra alma humana.” 

 

Carl Gustav Jung 



 
 
 
  

RESUMO 

 
 

A hortaliça ora-pro-nóbis - Pereskia aculeata oferece múltiplos benefícios ao 

ser humano. Pertencente à família das cactáceas, está entre as que possuem 

maior teor proteico, com algumas variedades chegando a mais de 25%. A ora-

pro-nóbis é fonte potencial de substâncias bioativas, com folhas tenras, gros-

sas, equiparado ao do caruru, da couve e do espinafre. É uma espécie nutra-

cêutica, com características de alimento funcional com propriedades protetoras 

e medicinais, sendo constatada a relação do uso da ora-pro-nóbis com a redu-

ção do risco de incidência de várias doenças como varizes, câncer de cólon, 

tumores intestinais e diabetes. Diante do exposto, esse estudo visou a extração 

e quantificação de proteínas e peptídeos, análise e quantificação de aminoáci-

dos por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência e possíveis atividades antibac-

terianas e antifúngicas. Neste contexto, o maior teor proteico obtido foi em ex-

tração aquosa (91 µg/mg de material) e entre as extrações hidroalcoólicas, em 

30% de metanol, foi de 70 µg/mg de material.  Análises cromatográficas, em 

220nm e 280nm, indicaram a presença de proteínas e aminoácidos aromáticos, 

em todos os extratos. A quantificação de aminoácidos corroborou com os da-

dos reportados na literatura, com exceção da lisina que apresentou, em média, 

10 vezes maior. No que diz respeito aos ensaios antimicrobianos, os extratos 

não apresentaram efeitos inibitórios. Este estudo identificou a presença de to-

dos os aminoácidos essenciais, com potencial aplicação farmacológica, poden-

do auxiliar no tratamento de patologias relacionadas às deficiências proteicas. 

 

 

Palavras chaves: Pereskia, Proteína, Hidrolisados, Antimicrobiana. 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



 
 
 
  

ABSTRACT 

 
 
The vegetable ora-pro-nóbis - Pereskia aculeata offers multiple benefits to the human 

being. It belong to the family of cacti and it is among the highest protein content with 

some varieties reaching more than 25%. Ora-pro-nóbis is a potential source of bioac-

tive substances with tender and thick leaves similar to caruru, cabbage and spinach. 

It is a nutraceutical specie with characteristics of functional feed with protective and 

medicinal properties. It is being observed a relation of the use of the ora-pro-nóbis 

with the reduction of the risk of incidence of several diseases such as varicose veins, 

colon cancer, intestinal tumors and diabetes. Thus, this study aims at the extraction 

and quantification of proteins and peptides, the analysis and quantification of amino 

acids by High Performance Liquid Chromatography, and the anti-bacterial and anti-

fungal activities. In this context, the highest protein content was in aqueous extraction 

(91 μg/mg of material) and in 30% of methanol between the hydroalcoholic extrac-

tions was 70 μg/mg of material. Chromatographic analyzes indicated the presence of 

proteins and aromatic amino acids in all the extracts in 220nm and 280nm. The ami-

no acid quantification corroborated with the data reported in literature, except from 

the lysine presented 10 times higher on average. With regard to antimicrobial testing, 

the extracts cannot be legitimated. This study identified the presence of all essential 

amino acids with the strong pharmacological application, and may assist in the treat-

ment of pathologies related to protein deficiencies. 

 
 

Keywords:   Pereskia, Protein, Hydrolysates, Antimicrobial. 

 

 
 

 
 

 
 

 
 

 



 
 
 
  

LISTA DE FIGURAS 
 
 

 
Figura 1. Distribuição geográfica mundial da espécie Pereskia aculeata Miller, 

representada por círculos. ......................................................................................... 30 

Figura 2. Área sombreada no mapa caracteriza a distribuição geográfica da família 

Cactaceae no continente americano. ........................................................................ 31 

Figura 3. Ora-pro-nóbis, Pereskia aculeata Miller: trepadeira (A), folhas (B), 

espinhos (C), flor (D), flor (E) e fruto (F). ................................................................... 33 

Figura 4. Fluxograma simplificado dos experimentos realizados neste trabalho ...... 39 

Figura 5. Fluxograma de fracionamento em coluna de EFS..................................... 43 

Figura 6. Eluatos obtidos após aplicação em coluna de EFS* das extrações com 

NaCl 0,1 M (A) (EXTSAL1), com 30% de metanol (B) (EXT30MET1), com 70% de 

metanol (C) (EXT70MET1), aquosa (D) (EXTAGUA2) seguida de 30% de metanol 

(E) (EXT30MET2) e 70% de metanol (F) (EXT70MET2). .......................................... 51 

Figura 7. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de 

EFS: 100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em 30% 

Metanol (EXT30MET1). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. .................... 53 

Figura 8. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de 

EFS: 100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em 70% 

Metanol (EXT70MET1). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. .................... 54 

Figura 9. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de 

EFS: 100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em 

solução de NaCl (EXTSAL1). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. ........... 55 

Figura 10. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de 

EFS: 100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em água 

(EXTAGUA2). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. ................................... 56 

Figura 11. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de 

EFS: 100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em 30% 

de metanol (EXT30MET2). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. ............... 57 

Figura 12. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de 

EFS: 100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em 70% 

de metanol (EXT70MET2). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. ............... 58 

Figura 13. Perfil cromatográfico de aminoácidos presentes na amostra OPN água da 



 
 
 
  

fração 30% de solução B........................................................................................... 60 

Figura 14. Perfil de picos purificados da fração 100 % solução A da extração aquosa 

(EXTAGUA2). ............................................................................................................ 64 

Figura 15. Ensaios antifúngicos do extrato bruto da extração aquosa (EXTAGUA2) 

(2). Aspergillus niger (A), Aspergillus flavus (B), Aspergillus fumigatus (C), 

Aspergillus nidulans (D) e Aspergillus parasiticus (E). Miconazol (1) e Extrato bruto 

da extração aquosa (EXTAGUA2) (2). ...................................................................... 68 

 

 

 

 

  
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



 
 
 
  

LISTA DE TABELAS 

 
 
Tabela 1 -  Composição de aminoácidos de carnes frescas e percentual fornecido 

por cada 100 g. ......................................................................................................... 26 

Tabela 2. Teor proteico das amostras....................................................................... 48 

Tabela 3. Massas (mg) das respectivas extrações após EFS e liofilização. ............. 52 

Tabela 4. Composição de aminoácidos e teor proteico, em massa (μg/mg), nas 

diferentes frações de extração e sedimentados retidos no filtro, bem como dados 

encontrados na literatura. .......................................................................................... 62 

Tabela 5. Composição de aminoácidos e teor proteico, em massa (μg/mg), nos 

diferentes eluatos. ..................................................................................................... 63 

Tabela 6. CIM (µg/mL) para as amostras estudadas em diferentes linhagens 

bacterianas. ............................................................................................................... 66 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



 
 
 
  

LISTA DE ABREVIATURAS 
 

 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

 

atm – atmosfera 

BDA – Batata Dextrose Ágar 

BSA – Albumina Soro Bovino 

CLAE- Cromatografia Líquida de Alta Eficiência 

EFS - Extração em Fase Sólida 

OPN - Ora-pro-Nóbis 

PANC – Plantas Alimentícias Não Convencionais 

pH – potencial hidrogeniônico 

pK – constante de dissociação 

v/v – volume por volume 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 
 
 
  

SUMÁRIO 

 

1    INTRODUÇÃO ................................................................................................... 23 

1.1 Hortaliça não convencional ............................................................................. 24 

1.2 Ora-pró-nobis – Pereskia aculeata Miller ....................................................... 27 

1.1.1 Pereskia aculeata Miller e atividade biológica ............................................ 34 

2    OBJETIVOS ....................................................................................................... 37 

2.1 Objetivo geral ................................................................................................... 37 

2.2 Objetivos específicos ....................................................................................... 37 

3    MATERIAIS E MÉTODOS .................................................................................. 38 

3.1 Coleta e processamento das folhas de OPN ................................................. 40 

3.2 Obtenção de extratos ....................................................................................... 40 

3.2.1 Extração de OPN triturada em água pura.................................................... 40 

3.2.2 Extração salina e hidroalcoólicas ................................................................ 40 

3.2.3 Extrações aquosa e hidroalcoólicas sequenciais ...................................... 41 

3.3 Quantificação proteica ..................................................................................... 41 

3.4 Fracionamento em coluna de EFS (Extração de Fase Sólida) ...................... 41 

3.5 Hidrólise ............................................................................................................ 44 

3.5.1 Hidrólise dos extratos salino e hidroalcoólicos ......................................... 44 

3.5.2 Hidrólise parcial da amostra triturada e sedimentada ............................... 44 

3.6 Análises por CLAE dos extratos salino, hidroalcoólicos e aquoso............. 44 

3.6.1 Análise das frações obtidas por EFS, modo analítico ............................... 44 



 
 
 
  

3.6.2 Purificação das frações obtidas por EFS, modo semipreparativo............ 44 

3.6.3 Análise dos aminoácidos ............................................................................. 45 

3.7 Ensaios antimicrobianos ................................................................................. 45 

3.7.1 Antibacterianos ............................................................................................. 45 

3.7.1.1 Preparação das amostras para avaliação antibacteriana ....................... 45 

3.7.2 Antifúngicos .................................................................................................. 46 

3.7.2.1 Preparação das amostras para avaliação antifúngica ............................ 46 

4    RESULTADOS E DISCUSSÃO .......................................................................... 48 

4.1 Quantificação proteica ..................................................................................... 48 

4.2 Filtração em coluna de EFS (Extração de Fase Sólida) ................................ 50 

4.3 Análises cromatográficas dos extratos fracionados por EFS e perfil de 

aminoácidos por CLAE ......................................................................................... 52 

4.4 Análises dos ensaios antimicrobianos ......................................................... 65 

5    CONCLUSÕES ................................................................................................. 69 

REFERÊNCIAS....................................................................................................... 70 

 

 

 

 

 

 



 
 
 

   23  

1   INTRODUÇÃO 
 

 

A medicina atual deve muito de seus avanços à sabedoria popular e no co-

nhecimento do poder de plantas. Apesar de ainda causar polêmica entre adeptos da 

medicina complementar e da medicina tradicional, o uso de plantas medicinais e fito-

terápicos é crescente e já conta com a regulamentação da Agência Nacional de Vigi-

lância Sanitária (Anvisa) e apoio do Sistema Único de Saúde (SUS). Segundo a Or-

ganização Mundial da Saúde (OMS), 80% da população mundial faz uso de plantas 

medicinais para o tratamento de doenças (MONTEIRO, 2011). 

Quando uma espécie vegetal é usada com fins terapêuticos, seja ela              

cultivada ou não, é designada por planta medicinal (BRASIL, 2006, BRASIL, 2011). 

Essas plantas possuem substâncias químicas ativas farmacologicamente (princí-

pios ativos), normalmente em conjunto com um grupo de substâncias que fazem 

parte da constituição daquele vegetal (FURLAN, 1999; CALIXTO, 2000). 

O governo brasileiro tem promovido ações para o desenvolvimento do setor 

que envolve a pesquisa e a produção de plantas medicinais, a partir da publicação 

do decreto 5.813 de 22 de junho de 2006, criando a Política Nacional de Plantas 

Medicinais e Fitoterápicos. As diretrizes foram traçadas por meio do Programa Na-

cional de Plantas Medicinais e Fitoterápicos (BRASIL, 2007). Entre seus fundamen-

tos estão a ampliação das opções terapêuticas no Sistema Único de Saúde (SUS), 

o uso sustentável da biodiversidade brasileira e o desenvolvimento industrial e tec-

nológico (BRASIL, 2007). Também tem sido estimulada a pesquisa envolvendo 

plantas nativas, de modo que possam ser exploradas e aproveitadas no comple-

mento das necessidades nutricionais da população - “Guia Alimentar Para Popula-

ção Brasileira e Alimentos Regionais Brasileiros” (BRASIL, 2002; BRASIL, 2004).  

No entanto, a maioria das plantas não convencionais é desconhecida, e um 

reduzido número delas apresenta comprovação científica, sendo paulatinamente 

estudadas por pesquisadores. Portanto, deve ser cada vez mais estimulada a divul-

gação do entendimento científico acerca dos benefícios ocasionados pela utilização 

alimentar dessas plantas não convencionais para a melhoria da saúde humana 

(SOUZA, 2009; BORGES, 2017).  As hortaliças não convencionais são um grupo de 

espécies pouco exploradas da flora brasileira e podem constituir uma fonte de ren-

da alternativa na atividade agropecuária, sobretudo na agricultura familiar. Essas 



 
 
 

   24  

hortaliças apresentam distribuição limitada à determinada região, não fazendo parte 

de uma cadeia produtiva, à semelhança das hortaliças convencionais. Essas pode-

riam exercer grande influência na alimentação e na cultura de populações tradicio-

nais, porém não recebem o devido interesse da comunidade e consequentemente 

também não despertaram o interesse de empresas das áreas de fertilizantes, se-

mentes ou agroquímicos (BRASIL, 2010). 

Visando aumentar o conhecimento do biota brasileiro, extratos aquosos 

e/ou alcoólicos de folhas, caules ou raízes têm sido testados e inseridos em formu-

lações terapêuticas, para ações antimicrobiana, antitumoral, anti-inflamatória, cica-

trizante e tripanocida (QUEIROZ, 2012). Mesmo com estas aplicações, há pouquís-

sima exploração comercial de hortaliças não convencionais. 

 

1.1 Hortaliça não convencional 

 

O Brasil possui uma vasta biodiversidade de plantas nas quais são en-

contrados ricos nutrientes e minerais. As plantas alimentícias não convencionais 

(PANC), muitas vezes inconvenientes e denominadas daninhas, pragas, inços e 

invasoras, são espécies relevantes frente aos problemas climáticos que afetam a 

produção de plantas alimentícias convencionais, e contribuem para a diversificação 

de cultivos agrícolas e viabilização econômica de pequenas propriedades. Dentre 

as PANC destacam-se as hortaliças não-convencionais (HONC), que vem sendo 

caracterizadas pela sua importância ecológica, econômica, pelo alto valor nutricio-

nal, fácil cultivo e baixo custo (KINUPP, 2007; ROCHA et al., 2008). 

Na literatura e no meio técnico, há certa indefinição quanto à denominação 

deste grupo de hortaliças. Por vezes, são identificadas, por uma vertente de técni-

cos, como “hortaliças tradicionais”. Denominá-las dessa forma, em referência ao 

seu cultivo associado a populações tradicionais, é também uma forma de valorar a 

questão cultural agregada a estas espécies; entretanto, pode causar confusão por 

alusão às hortaliças mais corriqueiramente consumidas (BRASIL, 2010). Outros 

autores utilizam o termo “não convencionais” para aquelas que não receberam a 

devida atenção por parte da comunidade científica, econômica e pela sociedade 

como um todo, resultando em consumo apenas em algumas localidades ou regiões 

(ALMEIDA et al., 2014). 

As hortaliças são plantas herbáceas, geralmente de ciclo curto e tratos cul-



 
 
 

   25  

turais intensos e compreendem todos os vegetais cultivados em horta, cujas partes 

comestíveis são caule, flores, frutos, raízes, sementes frescas e folhas (BRASIL, 

2010; PIGOLI, 2012). Classificam-se genericamente em legumes (quando utilizado 

a fruta ou a sementes), verduras (parte comestível de cor verde), tubérculos e raí-

zes (parte subterrânea das espécies), e bulbos e talos (ORNELLAS, KAJISHIMA, 

VERRUMA-BERNARDI, 2007; PHILIPPI, 2006). 

Hortaliças não convencionais são plantas produzidas geralmente em pe-

quenas proporções, sendo assim limitadas a determinadas localidades ou regiões, 

e dessa forma sem grande valor comercial, diferentemente das hortaliças convenci-

onais (alface, agrião, entre outras) as quais estão organizadas enquanto cadeia 

produtiva (DIAS et al., 2005). No conjunto de hortaliças não-convencionais o cul-

tivo é de forma marginal e rudimentar (KINUPP, 2007). As hortaliças não conven-

cionais não necessitam de grandes quantidades de insumos e condições de pré-

plantio devido a sua rusticidade, por isso podem ser utilizadas na agricultura familiar 

como fonte de renda e de diversificação agrícola (VIANA et al., 2015).  

Entre as hortaliças não convencionais podemos citar: almeirão-de-árvore 

(Cichorium intybus L.), araruta (Maranta arundinacea L.), azedinha (Rumex acetosa 

L.), beldroega (Portulaca oleracea L.), bertalha (Basella alba L.), capuchinha (Tro-

paeolum majus L.), capiçoba (Erechtites valerianifolius), caruru (Amaranthus spp.), 

chicória-do-pará (Eryngium foetidum L.), cúbio (Solanum sessiliflorum D.), inhame 

(cará - Dioscorea spp.), jacatupé (Pachirrhyzus tuberosus), jambu (Acmella oleracea 

L.), labaça (Rumex obtusifolius L.), mangarito (Xanthossoma maffaffa), maria-gorda 

(Talinum paniculatum), maxixe (Cucumis anguria L.), maxixe-do-reino (Cyclanthera 

pedata L.), peixinho (Stachys lanata L.), serralha (Sonchus oleraceus L.), taioba 

(Xanthosoma sagittifolium L.), taro (inhame; Colocasia esculenta L.), vinagreiras (Hi-

biscus acetosella L. e Hibiscus sabdariffa L.), entre outras, que fizeram e/ou fazem 

parte da cultura brasileira introduzidas por colonizadores europeus ou por escravos 

africanos (BRASIL, 2010). Segundo Kinupp e Barros (2008), as frutas e hortaliças 

não-convencionais geralmente apresentam teores de minerais e proteínas significa-

tivamente maiores, além de serem mais ricas em fibras e compostos com funções 

antioxidantes que as fontes de hortaliças convencionais, favorecendo assim, uma 

dieta de melhor qualidade nutricional. Esses mesmos autores determinaram os teo-

res de proteínas em 69 hortaliças, mostrando o potencial das cactáceas do gênero 

Pereskia como plantas de conteúdo proteico elevado. A Resolução da Diretoria Co-



 
 
 

   26  

legiada (RDC) nº 54 de 2012 (BRASIL, 2012) determina que, para um alimento ser 

considerado fonte de proteína deverá ter no mínimo 6% de proteína, e se possuir 

12% de proteína poderá ser considerado de alto valor proteico. Conforme essa de-

terminação, as folhas secas das plantas do gênero Pereskia estudadas apresenta-

ram teor médio de proteínas maior que 14%, e, de acordo com a legislação vigente, 

podem ser consideradas como alimento de alto valor proteico (BRASIL, 2012).  

A carne é uma excelente fonte de proteínas e de aminoácidos (Tabela 1) cu-

ja composição atende as necessidades dietéticas humanas (WILLIAMS, 2007), for-

necendo os nove aminoácidos essenciais que os humanos necessitam para seu 

crescimento e desenvolvimento, sendo eles a fenilalanina, valina, treonina, metioni-

na, leucina, isoleucina, lisina, triptofano e histidina, em proporções aproximadas às 

necessidades humanas (MACEDO et al, 2008). 

 
 

Tabela 1 -  Composição de aminoácidos de carnes frescas e percentual 
fornecido por cada 100 g. 

Aminoácidos  Bovino Suínos Ovinos Aves 

Arginina   13,7   12,2   12,7 12,8 

Cistina   2,60   2,60   2,70 2,60 

Histidina   7,50   8,90   6,70 6,20 

Isoleucina   10,4   9,20   9,70 9,50 

Leucina   16,3   14,5   15,0 15,4 

Lisina   18,5   19,7   20,3 18,4 

Metionina   5,50   5,60   5,30 4,90 

Fenilalanina   9,10   7,90   8,00 9,20 

Treonina   9,40   8,90   9,70 8,50 

Triptofano   2,60   2,30   2,70 2,30 

Tirosina   7,80   7,60   7,30 7,20 

Valina   10,7   9,90   10,0 9,80 

 
Fonte: Varnam & Sutherland (1995); Philippi (2008).  

 

Contudo, o consumo de carne bovina tem sido desaconselhado devido à 

sua gordura rica em ácidos graxos saturados e consequentemente a problemas 

que daí possam advir para a saúde do consumidor, tais como aparecimento de vá-

rias doenças crônicas, como o câncer e as doenças cardiovasculares (LOPES, 

2015). 

Segundo o Guia Alimentar para a População Brasileira, desenvolvido pelo 



 
 
 

   27  

Ministério da Saúde, o consumo de hortaliças contribui para a prevenção da obesi-

dade e das doenças crônicas associadas (BRASIL, 2014; BRASIL, 2015). A busca, 

por parte dos diversos segmentos da sociedade, pelo consumo de alimentos alter-

nativos tem sido impulsionada pela necessidade de se tentar minimizar os proble-

mas nutricionais da população utilizando-se recursos mais acessíveis a todos (MA-

DRUGA et al., 2004). De acordo com as definições do International Plant Genetic 

Resources Institute - IPGRI (2006), atual Bioversity International, culturas subutili-

zadas são aquelas que já foram largamente utilizadas e que caíram em desuso de-

vido a fatores agronômicos, genéticos, econômicos, sociais e culturais. Definidas 

por Eyzaguirrem Padulosi e Hodgkin (1999) como “culturas negligenciadas”, são 

cultivadas primariamente em seus centros de origem por agricultores familiares. 

Para ser considerada subutilizada ou negligenciada, uma espécie deve preencher 

requisitos como necessidade de poucos insumos externos para a sua produção, 

adaptação à produção orgânica, ser cultivável em áreas marginais, contribuir para a 

estabilidade dos ecossistemas frágeis, ser integrável ao sistema produtivo dos agri-

cultores familiares, apresentar importância tradicional local ou regional, ser de fácil 

armazenamento e processamento, e apresentar aptidão de mercado, alto valor nu-

tritivo e/ou medicinal e múltiplos usos (IPGRI, 2006).  

Embora o consumo de hortaliças não convencionais seja estimulado pelo 

governo brasileiro, faz-se necessário assegurar por meio da pesquisa científica o 

consumo seguro, com informações que revelem as características nutricionais e 

também antinutricionais, visto que as últimas, embora não sejam tóxicas em si, atu-

am no organismo impedindo a absorção de nutrientes essenciais para o ser huma-

no (BRASIL, 2010; FIRMO et al., 2011). 

De acordo com Santos et al. (2010), entre as várias hortaliças não conven-

cionais que apresentam propriedades terapêuticas, as do gênero Pereskia, apre-

sentam uma elevada ação na saúde humana, especialmente no auxílio de trata-

mento de certos tipos de cânceres e doenças cardiovasculares. Como são plantas 

de elevado teor nutricional, também têm sido utilizadas como fontes suplementares 

de alimentação para seres humanos e animais. Na medicina, a grande vantagem da 

planta é no abrandamento dos processos inflamatórios e como emoliente na recu-

peração da pele em casos de queimadura (MARINELLI, 2016). 

     

1.2 Ora-pró-nobis – Pereskia aculeata Miller 



 
 
 

   28  

 

O Brasil está entre os países de maior diversidade biológica do mundo, com 

cerca de 22% da diversidade mundial (CONSERVAÇÃO INTERNACIONAL, 2011), 

da qual 56.000 espécies são de plantas superiores, 162 de cactáceas e 123 delas 

endêmicas (GIULIETTI et al., 2002). Porém, ainda há poucos estudos em relação 

às plantas brasileiras (KINUPP; BARROS, 2008; KINUPP, 2007). Muitas delas, 

além de serem utilizadas na alimentação humana são também utilizadas como fito-

terápicos (HOLLIS; SCHEINVAR, 1995; DUARTE; HAYASHI, 2005; SILVA JÚNIOR 

et al., 2010). 

A família Cactaceae é representada por 124 gêneros e 1.427 espécies e es-

tá dividida em três subfamílias que são: a) Opuntioideae, que apresenta espécies 

tipo árvore ou arbusto, com folhas suculentas e aréolas axilares com espinhos, divi-

didas em cinco gêneros; b) Pereskioideae, representada pelo gênero Pereskia, com 

hastes não suculentas, folhas grandes, aréolas axilares com espinhos e c) Cactoi-

deae, a mais numerosa, com 91 gêneros, geralmente árvores sem folhas ou com 

vestígios de folhas e hastes suculentas com aréolas bem desenvolvidas 

(BARTHLOTT; HUNT, 1993). Edwards e Diaz (2006) referendam ainda uma quarta 

subfamília, a Maihuenioideae. 

Inicialmente, o gênero Pereskia foi descrito como Peireskia, por Plumier, em 

1703. De acordo com Hollis e Scheinvar (1995), essa designação foi uma homena-

gem ao cientista francês Nicolas Claude Fabri de Peiresc (1580-1637). Linnaeus 

usou o nome Cactus pereskia, em 1753, mas é atribuído a Miller, em 1754, a eleva-

ção do nome para o nível de “gênero”, considerada como primeira classificação vá-

lida (BUTTERWORTH; WALLACE, 2005). 

No Brasil, a “ora-pro-nóbis” (OPN) é o nome popular dado às variedades 

comestíveis mais comuns do gênero Pereskia - Pereskia grandifolia Haworth e Pe-

reskia aculeata Miller (CASTRO; SCIO, 2014; EDWARDS; NYFELER; DONOGHUE, 

2005; TURRA et al., 2007). O nome indígena é mori ou guaiapá (tupi-guarani) e sig-

nifica “planta que produz frutos com muitos espinhos finos”; o termo aculeata vem do 

latim e significa espinho, agulha (ACCORSI; DOSOUTO, 2006). A Pereskia aculeata 

Mill. é encontrada nos documentos oficiais brasileiros desde 2002 e popularmente 

conhecida como “ora-pro-nóbis” (OPN), que do latim significa “rogai por nós”. No 

Brasil, além de ser conhecida como ora-pro-nóbis, possui designações populares 

como: lobrobó, lobrodo, guaiapá, groselha-da-américa, cereja-de-barbados, cipó-



 
 
 

   29  

santo, matavelha, trepadeira-limão, espinho-preto, jumbeba, espinho-de-santo-

antônio e rosa-madeira.  

Ela pertence à classe Magnoliopsida, ordem Caryophyllales, família Cacta-

ceae e gênero Pereskia (ALMEIDA; CORRÊA, 2012; ALMEIDA et al., 2014; BRASIL, 

2002; BRASIL, 2004; BRASIL, 2010), classificada como exótica por Marchese et al. 

(2006) e como nativa não endêmica por Zappi et al. (2012). A OPN é uma planta 

nativa, originária dos trópicos, perene, com caules finos e geralmente se apresenta 

na forma de trepadeira, podendo atingir dez metros de altura, com ramos longos, 

espinhos, folhas carnudas e com presença de mucilagem (DUARTE; HAYASHI, 

2005; TOFANELLI; RESENDE, 2011), sendo aproveitada em sopas e refogados 

(QUEIROZ, 2015; ROSA; SOUZA, 2003), bem como em farinhas, saladas, tortas e 

massas alimentícias como o macarrão (ROCHA et al., 2008). É encontrada no Brasil, 

do Rio Grande do Sul até o nordeste e cresce em diferentes biomas (CARVALHO et 

al., 2014; TURRA et al., 2007). Ela também é encontrada nos Estados Unidos (Flóri-

da) (SWIRSK et al., 1997) e no sul da África (MORAN; ZIMMERMANN, 1991). Se-

gundo Almeida Filho e Cambraia (1974) a Pereskia aculeata é nativa da América 

Tropical, mas pode ser encontrada, também, na Índia Oriental (Figura 1).  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 
 
 

   30  

Figura 1. Distribuição geográfica mundial da espécie Pereskia aculeata Miller, repre-

sentada por círculos. 

   

Fonte: Missouri Botanical Garden Database (2015) e Taylor et al. (2015).  

  

Provavelmente, a região noroeste da América do Sul tenha sido o centro 

original da diversificação e propagação do gênero Pereskia (BUTTERWORTH; 

WALLACE, 2005) e, a partir daí, as cactáceas povoaram desde regiões ligeiramen-

te mésicas do Caribe, América Central e a América do Sul. Isso inclui o norte da 

Argentina, Costa andina do Peru, oeste do Paraguai e Uruguai e leste do Brasil, 

embora também sejam encontradas em climas frios e úmidos (Figura 2) (ARIAS; 

PÉREZ, 2006). 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 
 
 

   31  

Figura 2. Área sombreada no mapa caracteriza a distribuição geográfica da família 

Cactaceae no continente americano. 

 

 

Fonte: Porto (2009).  

 

Na Austrália ela faz parte de uma lista de espécies não nativas considera-

das daninhas e de grande potencial para causar danos ambientais, em função da 

alta quantidade de espinhos e capacidade de crescimento, com formação de moitas 

densas, não obstante haja o conhecimento declarado de planta com alto valor nutri-

tivo e medicinal (AUSTRALIAN GOVERNMENT, 2003). 

A OPN é uma planta de fácil cultivo, resistente a seca e adapta-se aos di-

versos tipos de solos, não sendo exigente em fertilidade (BRASIL, 2010). Pereskia 

aculeata Miller é uma trepadeira arbustiva (Figura 3 A), caules sublenhosos ou le-

nhosos, com ramos longos e espinhos na axila das folhas elípticas e carnosas 

considerada detentora do maior número de caracteres primitivos da família Cac-

taceae. As folhas da ora-pro-nobis são carnudas e mucilaginosas, forma elíptica e 

simétrica, com cerca de 7 cm de comprimento e 3 cm de largura (Figura 3 B) (DU-

ARTE; HAYASHI, 2005). Seu pecíolo é curto, agrupando-se de duas a seis folhas 

em ramos laterais, contendo espinhos em seu caule sublenhoso (Figura 3 C), (TO-

FANELLI; RESENDE, 2011). As flores são de coloração branca, com miolo alaran-

jado (Figura 3 D) e odor atraente, dessa forma atraem abelhas (Figura 3 E), as 

quais têm papel fundamental, com função de espalhar o pólen abundante proveni-

ente das flores da P. aculeata Miller. Tanto as folhas como as flores da P. aculeata 

Miller são comestíveis (VARGAS, 2017). As flores possuem cerca de 4 cm de diâ-



 
 
 

   32  

metro e seus receptáculos possuem de 6 a 8 bractéolas foliares que aparecem nos 

frutos, mas quando estes amadurecem, elas caem (ROSA; SOUZA, 2003). O perí-

odo em que essas permanecem abertas é rápido, cerca de um dia (BOKE, 1966), 

da manhã ao entardecer.  

Por ser uma planta trepadeira, seu caule é do tipo ereto na fase jovem e 

rasteiro na fase adulta. Possui espinhos agrupados entre si presentes no tronco de 

forma alongada e finos; nos ramos os espinhos são curtos, recurvados e geralmen-

te aos pares e voltados para baixo. Também pode haver nas axilas das folhas espi-

nhos solitários ou agrupados em três (DUARTE; HAYASHI, 2005), no entanto, es-

ses arranjos são raros. Os frutos podem ainda apresentar formato arredondado, 

oval ou piriforme, de coloração verde-amarelado, amarelo-alaranjado ou averme-

lhado (Figura 3 F) (BRASIL, 2010; MORTON, 1987). Os frutos também apresentam 

acúleos (ROSA; SOUZA, 2003). 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 
 
 

   33  

Figura 3. Ora-pro-nóbis, Pereskia aculeata Miller: trepadeira (A), folhas (B), espinhos (C), 

flor (D), flor (E) e fruto (F).                           

         

        

 

 

           

 

 

 

 

 

 

 

 

 

      Fonte: A, B, C, D e E: Autora; F: Shaman Australis. 

 

A 

 

  

 

 

A B
 A  

C
 A  

D
 A  E

 A  

F
 A  



 
 
 

   34  

Devido aos elevados teores de proteínas apresentados pelas cactáceas do 

gênero Pereskia, essa planta é denominada "carne de pobre" (ROCHA et al., 2008), 

pois já foi identificado na Pereskia aculeata Mill. alto conteúdo proteico, variando de 

17,40% para 28,59% em suas folhas (ALMEIDA et al., 2014, ROCHA et al., 2008, 

TAKEITI et al., 2009). Almeida et al. (2014) e Rocha et al. (2008) em estudos com 

folhas de OPN secas, relataram também elevados teores de fibras e minerais, em 

destaque ao cálcio (3.800 mg.100 g-1) e ferro (28,12 mg.100 g-1). 

As folhas dessas cactáceas podem ser consumidas in natura, processadas 

ou adicionadas à preparados cozidos e assados (ALMEIDA; CORRÊA, 2012; MAR-

TINEVSKI et al., 2013). Entretanto, ainda que utilizada tradicionalmente na alimen-

tação humana, pouco é conhecido sobre a inocuidade dessa planta (SOUZA et al., 

2009). Além de serem consumidas como hortaliças e do potencial para a explora-

ção agrícola nutricional, constituem importante influência em culturas locais.  A OPN 

é consumida por algumas comunidades tanto rurais quanto urbanas e contribuem 

para complementar a alimentação, inclusive com redução de custos e aprimora-

mento da economia familiar (ALMEIDA; CORREA, 2012).  

A OPN ainda apresenta um número limitado de estudos, como a maioria 

das hortaliças não convencionais, não sendo conhecidas cientificamente suas pro-

priedades. Por isso, faz-se necessário o conhecimento técnico sobre os componen-

tes químicos e suas atividades biológicas (KINUPP, 2006; SOUZA et al., 2009). 

 

1.1.1 Pereskia aculeata Miller e atividade biológica 

 

Há muito tempo acredita-se que o consumo de vegetais auxilie na preven-

ção de doenças e numerosos estudos têm demonstrado que a ingestão adequada 

de vegetais está associada à redução do risco de desenvolvimento de obesidade, 

diabetes, problemas cardiovasculares, hipertensão, osteoporose, câncer e da redu-

ção da morbimortalidade (WORLD HEALTH ORGANIZATION, 2003).  

O Brasil possui um biota com grande diversidade de espécies. Entre elas 

encontram-se muitas com potencial para serem usadas como alimento, suprindo 

necessidades nutricionais humanas e também podendo agir como medicamentos 

fitoterápicos para isolamento de princípios ativos e tratamento de doenças (FIRMO 

et al., 2011). Segundo Filho (2010), essa diversidade da flora brasileira apresenta 

uma das mais ricas fontes de substâncias naturais com potencial químico e metabó-



 
 
 

   35  

licos.  

Os metabólitos têm suas atividades investigadas desde a Grécia antiga na 

experimentação in vivo com diferentes plantas (PAVARINI et al., 2012). Muitos fár-

macos importantes são provenientes de produtos naturais ou tem estes como protó-

tipo, considerando a quase infinita diversidade e complexidade de estruturas mole-

culares que a natureza fornece (YUNES; CECHINEL FILHO, 2012). As aplicações 

desses metabólitos para o ser humano são variadas, pois podem agir como agentes 

antibacterianos, antifúngicos, redutores do colesterol, imunossupressores, antipara-

sitários, herbicidas, entre outros (VAISHNAV; DEMAIN, 2010).  

Mesmo sendo pouco estudada, sabe-se que a OPN apresenta, em mé-

dia, 20% de teor proteico e 85% de digestibilidade, além de elevados valores 

de aminoácidos essenciais, destacando-se a lisina, leucina e valina, podendo 

apresentar ação no tratamento e prevenção de patologias relacionadas a defici-

ências proteicas (ROCHA et al., 2008; MAZIA, 2012) e suas folhas não apresentam 

relatos de toxicidade (SANTOS et al., 2011). Por serem plantas de alto teor nutricio-

nal têm sido utilizadas como fontes suplementares de alimentação para seres hu-

manos e animais. Somado a isso, estudos preliminares demonstram grandes 

possibilidades destas plantas virem a serem aproveitadas como agentes medicinais, 

sob diversas formas de aplicação (TAN et al., 2004). 

De acordo com Couto (2006), a OPN é também considerada planta de 

uso medicinal. Cientificamente, extratos aquosos e/ou alcóolicos de folhas, caules 

ou raízes têm sido testados e inseridos em formulações terapêuticas, para ações 

antimicrobiana, antitumoral, anti-inflamatória, analgésicas, dermatológicas, cicatri-

zante, tripanocida e antioxidante (ROYO et al., 2005; VALENTE et al., 2007; KI-

NUPP; BARROS, 2008; OLIVEIRA, 2008; BARROS et al., 2009; SARTOR et al., 

2010). Segundo Almeida e Corrêa (2012), o uso de OPN está associada principal-

mente ao tratamento de anemia, câncer, cicatrização, osteoporose e à constipação 

intestinal (ALMEIDA; CORRÊA, 2012). Noelli (1998) relata o uso da casca da OPN 

como adstringente pelos índios Guaranis e Champs et al. (2003) relatam seu uso 

popular para tratamento de feridas. Outros levantamentos etnofarmacológicos reve-

lam seu uso como forma de combate à anemia (DAMASCENO; BARBOSA, 2008).  

O governo brasileiro tem promovido ações para o desenvolvimento do setor 

que envolve a pesquisa e a produção de plantas medicinais, a partir da publicação 

do decreto 5.813 de 22 de junho de 2006, criando a Política Nacional de Plantas 



 
 
 

   36  

Medicinais e Fitoterápicos.  As diretrizes estão definidas por meio do Programa Na-

cional de Plantas Medicinais e Fitoterápicos (BRASIL, 2007), sendo assim, faz-se 

necessária a identificação de compostos bioativos presentes em plantas medicinais, 

como Pereskia aculeata Miller. 

 

  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 
 
 

   37  

2 OBJETIVOS 

 

 
2.1 Objetivo geral 

 

 
O objetivo geral deste trabalho foi isolar e extrair proteínas e peptídeos 

de Pereskia aculeata Miller com possíveis atividades biológicas. 

 

 

2.2  Objetivos específicos 

 

 
 Desenvolver um método simplificado de extração de proteínas e peptí-

deos;  

 Analisar o teor e composição de aminoácidos por CLAE (cromatografia 

líquida de alta eficiência);  

 Avaliações antibacterianas e antifúngicas. 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 



 
 
 

   38  

 
3  MATERIAIS E MÉTODOS 

 
Os procedimentos experimentais de extração e análise das frações obtidas 

foram realizados no Laboratório de Síntese e Estudos de Biomoléculas (LaSEBio) do 

Instituto de Química da UNESP - Araraquara sob orientação do Prof. Dr. Eduardo 

Maffud Cilli. Os ensaios antibacterianos foram realizados no laboratório de Epidemio-

logia e Microbiologia Molecular do Instituto de Física da USP – São Carlos, campus 

II, sob orientação da Profa. Dra. Ilana L. B. C. Camargo. Os ensaios antifúngicos 

foram realizados no Laboratório de Microbiologia e Biologia Celular da Faculdade de 

Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto/SP - USP, sob orientação do Prof. Dr. 

Luis Henrique Souza Guimarães.  

A Figura 4 descreve, simplificadamente, os procedimentos realizados. 

 

 

 



 
 
 

   39  

Lavagem das folhas com água 
pura 

Secagem em estufa a 37 oC por 72 h 

Extração 

Pesagem 

COLUNA DE EFS 
 

1º: 3 x 5 mL 100% solução A 
2º: 3 x 5 mL 30% solução B em solução 
A 3º: 3 x 5 mL 70% solução B em solu-
ção A 4º: 3 x 5 mL 95% solução B em so-

lução A 

Figura 4. Fluxograma simplificado dos experimentos realizados neste trabalho 

 

    

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Fonte: Autora. 

OPN triturada em 
água (EXTAGUA1) 

NaCl 
0,1 M 

   (EXTSAL1) 

Liofilização 

 

30% 
Metanol 
(EXT30MET1) 

70% 
metanol 

(EXT70MET1) 
 

 
água ultrapura 

(EXTAGUA2) 

       
30% metanol 

(EXT30MET2) 
 

      
70% metanol 

(EXT70MET2) 

Liofilização 

Hidrólise 

Análises de aminoácidos 
Análises antimicro-

bianas 
Análises por  

CLAE 

 



 
40 

 
    

3.1 Coleta e processamento das folhas de OPN 

 
 

As folhas de Pereskia aculeata Miller foram fornecidas por um pequeno agri-

cultor da região de Alfenas, MG; localizada a 21° 25′ 45″ de latitude S e 45° 56′ 50″ 

de longitude W. O clima da região é subtropical úmido, quente e temperado (KOT-

TEK et al., 2006). A temperatura média anual em Alfenas é de 20,2 °C e a pluviosi-

dade média anual é 1.516 mm. 

A colheita das folhas ocorreu entre outubro de 2016 e abril de 2017, sendo 

acondicionadas em sacos plásticos e armazenadas em freezer. Posteriormente, as 

folhas foram descongeladas e lavadas com água ultrapura. Seguidamente, foram 

desidratadas em estufa a 37 ºC por 72 h. Após a secagem as folhas de OPN foram 

trituradas manualmente com o auxílio de almofariz e pistilo. 

A exsicata da planta foi registrada no Herbário SPFR (Herbário do Departa-

mento de Biologia da FFCLRP - USP, Ribeirão Preto – SP) sob o número 17.155. 

Vários protocolos de extração foram utilizados, como descritos a seguir. 

 

3.2 Obtenção de extratos 
 

3.2.1 Extração de OPN triturada em água pura. 
 

Inicialmente, as folhas secas foram maceradas em água com auxílio de almo-

fariz e pistilo por aproximadamente 20 min, na proporção de 1:20 (m/v). 

O extrato obtido foi filtrado a vácuo, liofilizado e armazenado em freezer para 

análises posteriores (EXTAGUA1). O material retido no filtro, denominado sedimen-

tado, foi armazenado em freezer para análises posteriores. 

 

3.2.2  Extração salina e hidroalcoólicas 
 

Para obtenção dos extratos, as folhas secas foram maceradas com auxílio 

de almofariz e pistilo por aproximadamente 20 min, e o material obtido foi submetido 

a diferentes soluções. 

A extração salina foi realizada por maceração utilizando solução de NaCl 0,1 

M na proporção de 1:20 (m/v; EXTSAL1). Para extração com solução hidroalcoólica, 

outras amostras de folhas secas e trituradas foram utilizadas na proporção de 1:20 



 
41 

 
    

(m/v). As soluções hidroalcoólicas utilizadas para maceração continham 30% meta-

nol (EXT30MET1) e 70% metanol (EXT70MET1) em água ultrapura. 

Os extratos obtidos foram filtrados a vácuo, liofilizados e armazenados em 

freezer para análises posteriores. O material retido no filtro, denominado sedimenta-

do, foi armazenado em freezer para análises posteriores. 

 

3.2.3 Extrações aquosa e hidroalcoólicas sequenciais 

 

Em outro procedimento, o material triturado foi submetido a extrações com 

soluções aquosa e hidroalcoólicas de modo sequencial. Inicialmente 5 g de folhas 

trituradas foram acondicionadas em frasco Erlenmeyer e extraídas com 40 mL de 

água ultrapura, em mesa agitadora, durante 10 min a 130 rpm. 

O sobrenadante foi filtrado à vácuo e o material sólido, retido no filtro, era re-

tornado ao frasco Erlenmeyer. O processo foi repetido nove vezes. Após a décima 

extração aquosa, o extrato líquido foi transferido para tubos falcon e em seguida liofi-

lizados para as extrações posteriores (EXTAGUA2). 

A parte sólida retida no filtro passou por extrações com soluções hidroalcoó-

licas contendo 30% metanol (EXT30MET2) e em seguida 70% de metanol 

(EXT70MET2), repetindo o mesmo processo descrito anteriormente. Os extratos hi-

droalcoólicos foram concentrados em rota-evaporadores e posteriormente liofiliza-

dos. O material retido no filtro, denominado sedimentado, foi armazenado em freezer 

para análises posteriores. 

 

3.3  Quantificação proteica 

 
 

Para a quantificação proteica foi utilizado o método descrito por Bradford 

(1976), utilizando o reagente de Bradford (Sigma®). A curva padrão foi obtida utili-

zando Albumina Soro Bovino (BSA) em concentrações de 1,05 µg/mL a 16,9 µg/mL. 

 

3.4   Fracionamento em coluna de EFS (Extração de Fase Sólida) 
 
 

Na tentativa de identificar frações de peptídeos/compostos com diferentes 

polaridades, foram utilizadas colunas de EFS de acordo com o protocolo colocado 

na Figura 5. 



 
42 

 
    

Para o experimento foi utilizado cartucho do tipo C18 com 500 mg de resina. 

Os extratos (água ultrapura, 30% de metanol, 70% de metanol e NaCl 0,1 M) foram 

ressuspendidos em 0,045% de ácido trifluoracético – TFA em água (solução A) e 

levados ao Vortex, por 1 min; em seguida foram submetidos ao banho de ultrassom 

por 1 min e centrifugados. Posteriormente foram eluídos na coluna de EFS conforme 

o procedimento abaixo: 

 1º - aplicação na coluna e lavagem com 3 volumes de 5 mL de solução A; 

 2º - a coluna foi lavada com 3 volumes de 5 mL de solução contendo 30% de 

solução com 0,036% TFA em acetonitrila (solução B) e 70% de solução A; 

 3º - a coluna foi lavada com 3 volumes de 5 mL de solução contendo 70% de 

solução B e 30% de solução A. 

 4º - a coluna foi lavada com 3 volumes de 5 mL de 95% de solução B e 5% de 

solução A. 

 

Todas as frações foram recolhidas e acondicionadas em frascos de cintila-

ção, liofilizadas e armazenadas em freezer, para posterior análise.  

 As frações obtidas foram analisadas por cromatografia líquida de alta efici-

ência (CLAE).  

 
 

 

 



 
43 

 
    

Lavagem da coluna com 3 volumes 
de 5 mL de solução contendo 70% 

de solução B e 30% de solução A 

Lavagem da coluna com 3 volumes 
de 5 mL de solução contendo 30% 

de solução B (0,036% TFA em 

acetonitrila) e 70% de solução A 

Aplicação na coluna e lavagem com 

3 volumes de 5 mL de solução A 

Lavagem da coluna com 3 volumes 
de 5 mL de solução contendo 95% 

de solução B e 5% de solução A 

Extratos ressuspendidos em 0,045% de ácido 
trifluoracético – TFA em água (solução A) 

Figura 5. Fluxograma de fracionamento em coluna de EFS.  

 

       

 

Fonte: Autora. 

 

  

 

 

 

 

Liofilização 



 
44 

 
    

3.5  Hidrólise 
 

3.5.1  Hidrólise dos extratos salino e hidroalcoólicos 
 

As amostras obtidas anteriormente também foram avaliadas em relação ao 

teor e composição de aminoácidos. Para isso, aproximadamente 1 mg das frações 

obtidas por EFS foram submetidas a solução de HCl - 6 M (1 mL) e fenol 5% em 

água (50 µL) a 110 ºC por 48 h, após borbulhamento de nitrogênio gasoso por 1 min. 

Após o período de incubação, as amostras foram submetidas ao speedvac por 16 h, 

para retirada do solvente. 

 

3.5.2  Hidrólise parcial da amostra triturada e sedimentada 
 

Visando a obtenção de peptídeos do material extraído, realizou-se a hidróli-

se parcial das proteínas existentes. Para isso foram tomadas alíquotas de aproxima-

damente 0,5 g da amostra triturada e sedimentada, em dois tubos de ensaio. Essas 

foram submetidas a solução de ácido clorídrico (HCl) 1 M (5 mL), e após borbulha-

mento de nitrogênio gasoso por 1 min, foram incubadas na estufa à 65 ºC, retirando-

se 100 µL de solução após 2, 4, 6, 8, 12 e 24 h. Na alíquota retirada foi adicionado 

100 µL de NaOH (1 M) com posterior diluição com 2,8 mL de 70% solução B em 

cada tubo. A solução obtida foi eluída na coluna de extração em fase sólida (EFS), 

filtradas em membrana e analisadas por CLAE. 

 
3.6  Análises por CLAE dos extratos salino, hidroalcoólicos e aquoso 

 
3.6.1  Análise das frações obtidas por EFS, modo analítico 

 

 Para as avaliações das frações obtidas por EFS foi utilizada a técnica de 

CLAE com uma coluna C18 de diâmetro com partícula de 5 µm (150 mm X 4,6 mm). 

O gradiente utilizado foi de 5 a 95% de solução B em 30 minutos, sendo solução A 

(água + 0,045% TFA) e solução B (acetonitrila + 0,036% TFA). A detecção foi reali-

zada nos comprimentos de ondas de 220 nm e 280 nm. 

 
3.6.2  Purificação das frações obtidas por EFS, modo semipreparativo 

 

Para purificação das frações obtidas por EFS foi utilizada a técnica de CLAE 

com uma coluna C12 Jupiter Proteo de diâmetro com partícula de 10 µm (250 mm X 



 
45 

 
    

10 mm). O gradiente utilizado foi de 5 a 45% de solução B em 120 min, sendo solu-

ção A (água + 0,045% TFA) e solução B (acetonitrila + 0,036% TFA). Para detecção, 

o comprimento de onda utilizado foi de 220 nm. 

 
3.6.3  Análise dos aminoácidos 

 

As amostras que sofreram hidrólise ácida, foram solubilizadas em 500 µL de 

solução de 0,2 M de citrato de sódio (pH 2,2) e filtradas em unidade filtrante GV Millex 

- Millipore antes de serem injetadas no aparelho - alíquota de 10 µL.  

As análises de aminoácidos foram efetuadas pelo método da derivatização 

pós-coluna por orto-phtalaldeído (OPA) em um analisador automático Shimadzu LC-

10A/C-47A. A coluna de separação utilizada foi a Shim-Pack Amino-NA. A detecção 

ocorreu por fluorescência em comprimento de onda de excitação de 350 nm e de 

emissão em 450 nm. O sistema foi calibrado com uma mistura padrão de aminoáci-

dos (1000 nmol.mL-1), obtendo-se um valor para o tempo de saída de cada aminoá-

cido e o fator de conversão entre a área de cada pico e a concentração da amostra.  

 

3.7    Ensaios antimicrobianos 
 

3.7.1  Antibacterianos 

 

A avaliação da atividade antibacteriana in vitro foi realizada frente aos mi-

crorganismos Staphylococcus epidermidis (ATCC 35984), Staphylococcus aureus 

(ATCC 25923), Enterococcus faecalis (ATCC 29212), Enterococcus faecium 

(VRE16), Klebsiella pneumoniae (ATCC 700603), Escherichia coli (ATCC 25922) e 

Acinetobacter baumannii (ACI50). 

 
3.7.1.1  Preparação das amostras para avaliação antibacteriana 
 

As bactérias foram semeadas por método de esgotamento em placas de 

Brain Heart Infusion (BHI) Ágar e incubadas em estufa à 37°C por 24 h. Após a in-

cubação, o caldo de bactérias foi preparado, selecionando uma bactéria isolada da 

placa e inoculando em 10 mL de meio BHI. O caldo foi incubado em estufa a 37ºC 

de 16 a 18 h, de modo que as bactérias se encontrem em fase ‘log” de crescimento 

para o experimento. Uma solução estoque 100x concentrada das amostras foram 



 
46 

 
    

obtidas por diluição em água. Posteriormente a solução estoque foi diluída 1:100 em 

caldo Mueller Hinton Cátion Ajustado (MHCA) segundo o Clinical & Laboratory Stan-

dards Institute (CLSI) (2013). A partir disso, o extrato bruto e as frações obtidas, 

100% de solução A e 30% de solução B, da extração água foram testadas em 512 

μg/mL, segundo o CLSI (2013), ou na maior concentração em que foi possível dis-

solver o composto sem que houvesse precipitação.  

Para o controle negativo e controle positivo foram adicionados caldo Mueller 

Hinton Cátion ajustado 1% DMSO. O controle negativo corresponde ao meio de cul-

tura sem a adição da bactéria e composto, permanecendo estéril; já o controle posi-

tivo refere-se ao controle de crescimento das bactérias, correspondendo ao meio de 

cultura com a adição das bactérias, sem o composto. As bactérias foram então ajus-

tadas em solução salina no Densimat até a escala de 0,5 Mc Farland (equivalente a 

aproximadamente 1,5 x 108 UFC/mL). Um volume de 200 µL desta solução ajustada 

foram adicionadas a 1,8 mL de meio MHCA. Desta solução, 5 µL foram adicionados a 

cada poço, da microplaca de 96 poços. 

A incubação foi feita a 37°C e a leitura visual dos resultados após 24 h. Os 

testes foram realizados em duplicatas. 

 
3.7.2  Antifúngicos 
 

A avaliação da atividade antifúngica in vitro foi realizada frente aos micror-

ganismos Aspergillus nidulans, Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus 

parasiticus e Aspergillus niger. 

 

3.7.2.1  Preparação das amostras para avaliação antifúngica 
 

Para avaliação da atividade antifúngica também foi realizada pela técnica de 

difusão em ágar seguindo a metodologia descrita por Farag e colaboradores (2016). 

As amostras de extrato bruto de OPN e as extrações aquosas fracionadas, 100% 

solução A e 30% solução B, foram liofilizadas. Após liofilização, 200 mg de cada 

amostra foi solubilizada em 1 mL água esterilizada, originando uma solução na con-

centração 200 mg/mL. Como controle da inibição de crescimento foi utilizada solu-

ção de miconazol na concentração de 500 μg/mL. A suspensão de esporos, na con-

centração de 1x104 esporos/mL, dos fungos Aspergillus sp foram espalhados, com 



 
47 

 
    

auxílio da alça de drigalski, em placas de Petri contendo meio BDA (Batata – Dextro-

se – Ágar), onde poços de 0,5 cm de diâmetro por 0,5 cm de profundidade foram per-

furados nos meios com auxílio de ponteiras autoclavadas e 100 μL das amostras e 

70 μL do antifúngico controle foram aplicadas em diferentes poços nas placas. As 

placas foram incubadas a 30°C por 48 h. A avaliação foi feita pelo halo de inibição. 

Os testes foram realizados em duplicata. 



 
48 

 
    

4 RESULTADOS E DISCUSSÃO 

 
4.1  Quantificação proteica 

 
Para verificar o teor de proteínas da OPN, as diferentes frações obtidas fo-

ram avaliadas em relação ao teor de proteína (µg/mg) pelo método de Bradford e 

estão apresentadas na Tabela 2. 

 

Tabela 2. Teor proteico das amostras. 

EXTRAÇÃO 
PROTEÍNA 

(µg/mg de material) (%) 

OPN Triturada 
(EXTAGUA1) 

48 ± 0,13 4,8 
 

NaCl 0,1 M 

(EXTSAL1) 

46 ± 0,37 4,6 

30% Metanol 
(EXT30MET1) 

70 ± 0,33 7,0 

70% Metanol 

(EXT70MET1) 

45 ± 0,34 4,5 

Aquosa* 

(EXTAGUA2) 

91 ± 0,42 9,1 

30% Metanol* 

(EXT30MET2) 

47 ± 0,12 4,7 

70% Metanol* 

(EXT70MET2) 

32 ± 0,60 3,2 

* extração sequencial. 

 

Fonte: Autora. 
 

Para a OPN triturada em água (EXTAGUA1), cujas folhas foram previamente 

desidratadas, a porcentagem de proteína foi de 4,8%. Esse valor aumenta para a 

extração aquosa após liofilização - 9,1% de proteína. A extração salina, em NaCl 0,1 

M, resultou em 4,6 % de proteína, mostrando que a presença de sal (aumento da 

força iônica) diminui a extração proteica. Já na extração hidroalcoólica, utilizando 

30% de metanol, o teor proteico foi de 7% de proteína; diminuindo para 4,5% em 

70% de metanol. Os dados obtidos foram diferentes dos reportados na literatura, 

visto que Rodrigues (2016) determinou 15,71% de teor de proteína bruta de Pereskia 

aculeata Miller utilizando solução hidroalcoólica com 70% de etanol (v/v). Rocha et 



 
49 

 
    

al. (2008) obtiveram 22,9% de proteína bruta em folhas desidratadas; já os autores 

Takeiti et al. (2009), por meio do método de Kjeldhal, obtiveram 28,4% de proteínas 

em folhas frescas. Esta diferença pode ser explicada pelo fato de que o cálculo utili-

zado neste trabalho usa somente proteínas solúveis devido a limitação do método, 

enquanto os demais métodos consideram o teor total de proteínas. Além do que, 

essas diferenças nos teores de proteínas podem estar relacionadas a vários fatores, 

tais como idade fisiológica e origem botânica da planta (SOUSA, 2014). 

Para confirmar a colocação acima, foi realizado a análise de aminoácidos do 

hidrolisado do material seco obtido. Os valores obtidos foram de 32,6% e 22,8%, os 

quais serão discutidos no item 4.3 (Tabela 4, página 59) mostrando que, indepen-

dente do material estudado, o teor proteico se mantém acima de 20%. Esse dado 

será melhor discutido posteriormente. Somado a isso, o teor de aminoácido essenci-

ais (fenilalanina, valina, leucina, isoleucina, treonina, metionina, lisina) foi de elevado 

em relação ao total da OPN. O triptofano não foi determinado, pois é degradado du-

rante a hidrólise. Além de apresentar alto teor proteico, a OPN também possui 85% 

de digestibilidade (MAZIA, 2012), podendo-se sugerir aplicação farmacológica (FA-

HEY, 2005) no tratamento e prevenção de patologias relacionadas a deficiências 

proteicas (MAZIA, 2012; ROCHA et al., 2008). Comparando o teor de proteína na 

matéria seca de 4,2% descrito para o feijão cozido (TACO, 2011), a farinha desta 

cactácea apresenta aproximadamente 5 vezes mais - 23% (ROCHA et al., 2008; Sil-

va et al. 2006). Como alguns grupos populacionais ainda apresentam dieta com 

acesso limitado às proteínas animais, o consumo de fontes vegetais ricas em proteí-

nas e de alto valor biológico, como a OPN, poderá prevenir ou tratar carências nutri-

cionais relacionadas a este nutriente (QUEIROZ et al., 2011). A Dose Diária Reco-

mendada (DDR) para o consumo de proteínas na dieta está atualmente fixada em 50 

gramas por dia para um adulto normal, sendo que o seu valor para ser calculada é 

cerca de 0,75 gramas por quilo de peso corporal, por dia (YOUNG; PELLETT, 1994). 

Quando observamos os resultados da extração sequencial, podemos obser-

var menor valor de proteínas. Esse resultado é o esperado, pois algumas proteínas 

já foram extraídas no solvente anterior, diminuindo o valor obtido.  

 

 

 

 



 
50 

 
    

4.2  Filtração em coluna de EFS (Extração de Fase Sólida) 

 
Visando a obtenção de frações proteicas da OPN, foi utilizada a extração em 

fase sólida (EFS). A EFS é uma técnica de separação líquido-sólido extensamente 

usada para extrair analitos de amostras líquidas, mas também pode ser usada para 

amostras sólidas pré-extraídas com solventes (NOVÁKOVÁ; LCKOVÁ, 2009). Se-

gundo Lanças (2004), a EFS, na sua forma mais comum, emprega fases sólidas 

também denominadas de sorventes, recheadas em cartuchos, nas formas de barril 

ou seringa, e os mecanismos de retenção são similares àqueles envolvidos em cro-

matografia líquida em coluna. 

Esta etapa além de poder ser considerada uma etapa de purificação, garan-

te a longevidade das colunas utilizadas na CLAE, evitando limpezas constantes no 

sistema de injeção (LANÇAS, 2004) e a contaminação das colunas. Segundo Her-

nández-Borges et al. (2007), a filtração utilizando EFS apresenta vantagens, pois há 

um menor consumo de solvente orgânico, não há formação de emulsões, é de fácil 

manuseio, apresenta altas porcentagens de recuperação do analito, produz volume 

reduzido de resíduos tóxicos e aumenta a concentração do analito. Porém a desvan-

tagem está nos altos custos dos cartuchos, podendo ser utilizados apenas uma úni-

ca vez (NOVÁKOVÁ; LCKOVÁ,2009). 

Segundo Jardim (2010), os procedimentos de extração em fase sólida con-

têm quatro etapas: 1) condicionamento do sorvente com solvente adequado para 

ajustar as forças de eluição da amostra; 2) introdução da amostra, quando ocorre a 

retenção do analito e às vezes de alguns interferentes; 3) limpeza da coluna para reti-

rar os interferentes menos retidos que o analito, etapa esta conhecida como lavagem 

com solvente ou clean-up; 4) eluição do analito. 

Esta técnica simples já foi utilizada anteriormente no LaSeBio e se mostrou 

eficiente no isolamento de peptídeos cíclicos (ALTEI, et al., 2014; FERREIRA, et al., 

2015). Neste trabalho, utilizou-se esta metodologia relativamente nova para isola-

mento de peptídeos em planta em substituições as demoradas colunas de separa-

ção de sílica, colunas de permeação em gel, etc. 

As soluções resultantes do processo de extração em fase sólida após liofiliza-

ção e dissolução em 1 mL das respectivas soluções estão apresentadas na Figura 6. 

Para Jardim (2010), os extratos de planta requerem um método de preparo adequa-

do, já que apresenta uma matriz complexa, com muitos interferentes, além do que os 



 
51 

 
    

analitos se encontram em baixas concentrações; para isso é necessário preparo 

prévio da amostra, cujos objetivos principais estão envolvidos com a concentração 

dos analitos de interesse e a remoção do máximo dos interferentes. 

 
Figura 6. Eluatos obtidos após aplicação em coluna de EFS* das extrações com NaCl 0,1 M 

(A) (EXTSAL1), com 30% de metanol (B) (EXT30MET1), com 70% de metanol (C) 

(EXT70MET1), aquosa (D) (EXTAGUA2) seguida de 30% de metanol (E) (EXT30MET2) e 
70% de metanol (F) (EXT70MET2). 

 

    

 

 

 

        

*Leitura de cada imagem feita da esquerda para direita: 100% de solução A, 30% de solução B, 70% 
da solução B e 95% da solução B. 

 

Fonte: Autora. 
 

A cor da solução obtida da eluição da extração de 70% metanol 

(EXT70MET2) com 70% e 95% de solução B, sugere um arraste maior de pigmentos 

(Figura 6C, 6E e 6F), sugerindo principalmente a presença de clorofila. Outras fra-

ções também mostraram alto teor de pigmentos pela coloração, principalmente as 

A B 

C D 

C 
E F 



 
52 

 
    

extraídas com solventes mais apolares.  

As massas obtidas após liofilização, partindo de 400 mg de massa de OPN, 

extraída em coluna de EFS, estão apresentadas na Tabela 3. Estes dados mostram 

que, os materiais mais polares estão em maior quantidade; e, de maneira geral, a 

fração de 95% de solução B apresentou menor quantidade de componentes, visto a 

menor massa obtida. 

 

     Tabela 3. Massas (mg) das respectivas extrações após EFS e liofilização. 

EXTRAÇÃO 

 

EFS 

NaCl 
(EXTSAL1) 

30% 
Metanol 

(EXT30MET1) 

70%    
Metanol 

(EXT70MET1) 

H20* 

(EXTAGUA2) 

 

 

30% 
Metanol* 
(EXT30MET2) 

 

70% 
Metanol* 
(EXT70MET2) 

 

100% Solução A 35 ± 2 36 ± 5 20 ± 8 210 ± 23 27 ± 6 11 ± 2 

30% Solução B 3 ± 1 4 ± 2 2 ± 1 8 ± 3 2 ± 1 1 ± 0,03 

70% Solução B 1 ± 0,2 3 ± 1 2 ± 1 0,1 ± 0,001 1 ± 0,5 0 

95% Solução B 0 2 ± 1 3 ± 1 0 0 0 

Ʃ (massas) 39 ± 3,2 45 ± 9 27 ± 11 218,1 ± 26 30 ± 7,5  12 ± 2,03 

*extração sequencial. 

Fonte: Autora. 

 
 

A extração aquosa sem a presença de sal apresentou o maior rendimento 

em massa na extração com 100% de solvente A. No entanto, como esperado, ocor-

reu diminuição na massa das demais frações sequenciais, quando comparada com a 

extração direta do extrato.  

 
4.3  Análises cromatográficas dos extratos fracionados por EFS e perfil de 

aminoácidos por CLAE 

 
 

A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência consiste em um método analítico 

cuja principal finalidade é a separação, identificação e quantificação de diferentes 

substâncias químicas presentes em uma amostra, por meio de um mecanismo de 

interação seletiva entre as moléculas do soluto e as duas fases, uma estacionária e 

outra móvel (NELSON e COX, 2014). A fase estacionária refere-se à coluna croma-

tográfica e a fase móvel é o solvente, que flui continuamente através do sistema ar-

rastando a amostra injetada pela coluna. Assim os componentes com maior intera-

ção na fase estacionária são seletivamente retidos por ela e enquanto os que apre-



 
53 

 
    

sentam menor interação são transportados mais rapidamente pela fase móvel 

(CHUST, 1990; COLLINS, BRAGA; BONATO, 1997).  

As proteínas mostram absorção nas regiões de 254 a 280 nm devido aos 

aminoácidos aromáticos (triptofano, tirosina e fenilalanina), e 220 nm referente a li-

gação peptídica (NELSON; COX, 2014). 

Nas Figuras 7, 8 e 9 estão os perfis cromatográficos dos extratos obtidos de 

30% metanol (EXT30MET1), 70% metanol (EXT70MET1) e NaCl (EXTSAL1), res-

pectivamente. 

 

Figura 7. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de EFS: 

100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em 30% Metanol 
(EXT30MET1). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. 

 
 
 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

1,6

1,8

A
B

S
 (

2
2

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO ( min)

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

-0,02

0,00

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

A
B

S
 (

2
2

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  
 

 

 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

0,30

0,35

A
B

S
 (

2
8

0
n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,000

0,005

0,010

0,015

0,020

0,025

0,030

0,035

A
B

S
 (

2
8

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  

 

 

Fonte: Autora.

A B 

C D 



 
54 

 
    

Figura 8. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de 

EFS: 100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em 70% 
Metanol (EXT70MET1). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. 

 
 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

A
B

S
 (

2
2
0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

A
B

S
 (

2
2
0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)

 
 
 
 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

A
B

S
 (

2
8

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)   0 5 10 15 20 25 30

0,00

0,01

0,02

0,03

0,04

0,05

0,06

A
B

S
 (

2
8

0
 n

m
)

TEMPO DERETENÇÃO (min)

 
        TEMPO DE RETENÇÃO (min) 

 

 

 Fonte: Autora

A B 

C D 



 
55 

 
    

Figura 9. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de EFS: 

100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em solução de NaCl 
(EXTSAL1). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. 

 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

A
B

S
 (

2
2
0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,00

0,02

0,04

0,06

0,08

A
B

S
 (

2
2
0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  

 

 

 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,00

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

A
B

S
 (

2
8

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,000

0,001

0,002

0,003

0,004

0,005

0,006

A
B

S
 (

2
8

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  

 

Fonte: Autora. 

 

 

Independentemente do solvente de extração utilizado, a primeira fração eluida 

da coluna de extração em fase sólida em 100% de solvente A mostrou o mesmo per-

fil, isto é, a presença de um pico principal em 7,3 minutos e outros em menor con-

centração. Em 30% de solvente B podemos observar, como esperado, a presença de 

materiais mais hidrofóbicos, pois os picos mais expressivos aparecem com um maior 

tempo de retenção. As amostras extraídas em 70% e 95% de B não foram analisa-

das por apresentarem pequena massa. 

A extração obtida com água também foi avaliada. Na Figura 10 estão apre-

sentados os perfis cromatográficos das eluições da coluna de extração em fase sóli-

da em 100% de solvente A, que mostrou a presença de três picos expressivos entre 

7 e 10 minutos, e em 30% de solvente B, que novamente confirmou a presença de 

A B 

C D 



 
56 

 
    

materiais mais hidrofóbicos. 

 

Figura 10. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de EFS: 

100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em água (EXTA-
GUA2). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. 

 

 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

-0,02

0,00

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

A
B

S
 (

2
2
0
n
m

)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,00

0,01

0,02

0,03

0,04

0,05

A
B

S
 (

2
2

0
n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  

 

 

 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0

0,000

0,005

0,010

0,015

0,020

A
B

S
 (

2
8

0
n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  

0 5 10 15 20 25 30

0,000

0,002

0,004

0,006

0,008

0,010

A
B

S
 (

2
8

0
n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  

 

Fonte: Autora. 

 

 
As Figuras 11 e 12 apresentam os perfis de soluções hidroalcoólicas se-

quenciais à extração aquosa. 

 

 

 

 

 

A B 

C D 



 
57 

 
    

Figura 11. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de EFS: 

100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em 30% de metanol 
(EXT30MET2). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. 

 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0 32,5

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

A
B

S
 (

2
2

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)    
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0 32,5

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

A
B

S
 (

2
2

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  

 

 

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0 32,5

-0,002

0,000

0,002

0,004

0,006

0,008

0,010

0,012

0,014

0,016

0,018

A
B

S
 (

2
8

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0 32,5

0,00

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

A
B

S
 (

2
8
0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)
         

 

Fonte: Autora. 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

C 

A B 

D 



 
58 

 
    

Figura 12. Perfis cromatográficos em 220 nm e 280 nm da OPN eluída em coluna de EFS: 

100% solução A (A e C), 30% de solução B (B e D) – fração extraída em 70% de metanol 
(EXT70MET2). Utilizou-se 1 mg/mL de amostra para análise. 

 
 
 

        
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0 32,5

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

A
B

S
 (

2
2

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)           

0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0 32,5

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

A
B

S
 (

2
2

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  
 
 
 
         

        
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0 32,5

-0,2

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

1,6

A
B

S
 (

2
8

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)         
0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0 27,5 30,0 32,5

0,00

0,01

0,02

0,03

0,04

0,05

0,06

A
B

S
 (

2
8

0
 n

m
)

TEMPO DE RETENÇÃO (min)  

   

Fonte: Autora. 
                                                                             
 

Os cromatogramas obtidos (Figuras 7, 8, 9, 10, 11 e 12) sugerem a existên-

cia de possíveis compostos proteicos, já que no comprimento de onda de 220 nm 

ocorre a absorção da ligação peptídica. No entanto, deve ser ressaltado que não só 

ligações peptídicas absorvem no comprimento de onda 220 nm (COLLINS, BRAGA; 

BONATO, 1997). Para Zaia e Lichtig (1998), no comprimento de onda em 280 nm, 

em pH neutro, somente os aminoácidos triptofano, tirosina e cistina (ligação entre 

duas cisteínas) possuem uma absortividade molar significativa. Como a maioria dos 

picos observados nos perfis cromatográficos foram identificados nos dois compri-

mentos de onda, isso é um indicativo que esses materiais sejam proteicos. Na elui-

A B 

C D 



 
59 

 
    

ção com 100% solução A, todos os perfis cromatográficos em 280 nm mostraram 

semelhanças com os obtidos em 220 nm, com exceção da extração 30% metanol 

sequencial. 

Para confirmar a presença de proteínas ou peptídeos nos eluatos acima 

descritos, as amostras e eluatos foram submetidos a análise de aminoácidos para 

quantificação do teor proteico e da composição de aminoácidos. 

A cromatografia de troca iônica é o método mais largamente empregado pa-

ra separar, identificar e quantificar os aminoácidos presentes em uma mistura. Esta 

técnica explora primariamente as diferenças no sinal e na magnitude das cargas elé-

tricas líquidas dos aminoácidos em um dado pH, as quais são previsíveis a partir de 

seus valores de pKa e de suas curvas de titulação. A coluna cromatográfica consiste 

de uma coluna preenchida por partículas de resina sintética insolúvel em água e 

contendo grupos carregados; aquelas resinas com grupos fixos aniônicos são cha-

madas de resinas trocadoras de cátions e aquelas com grupos fixos catiônicos, resi-

nas trocadoras de ânions (NELSON; COX, 2014). Na análise de aminoácidos a resi-

na utilizada é a carregada negativamente. No entanto, somente a carga, dos amino-

ácidos, não é suficiente para a separação destes, visto que alguns aminoácidos 

possuem valores de pI muito próximos. Essa problemática é resolvida utilizando re-

sinas de poliestireno, que adiciona a interação hidrofóbica entre as cadeias laterais 

dos aminoácidos e a malha polimérica apolar deste polímero na separação. 

O perfil cromatográfico de um dos eluatos obtidos após a hidrólise ácida é 

mostrado na Figura 13. 

 

 
 
 
 
 



 
60 

 
    

Figura 13. Perfil cromatográfico de aminoácidos presentes na amostra OPN água da fração 

30% de solução B. 

 

Fonte: Autora. 
 

Os aminoácidos serina, treonina, aspartato e glutamato, por serem polares 

e/ou carregados negativamente, apresentam tempo de retenção menor; enquanto 

que os aminoácidos prolina, glicina, alanina, valina, metionina, leucina, isoleucina e 

fenilalanina apresentaram um tempo maior de retenção, por pertencerem ao grupo 

dos aminoácidos com cadeia lateral apolar; seguido pela tirosina, e pela histidina, 

lisina e arginina, que são aminoácidos positivos. Esses últimos se ligam a coluna 

com maior força e, portanto, apresentam maior tempo de retenção. 

A composição de aminoácidos nas diferentes extrações pode ser observada 

nas Tabelas 4 e 5. A comparação de alguns dados obtidos da OPN triturada com os 

descritos por Takeiti et al. (2009) foram similares para a maioria dos aminoácidos 

(Tabela 4). O teor de proteína obtido para a OPN triturada foi diferente em razão da 

época do ano de colheita. Os valores foram de 32,6% para as folhas colhidas em 

outubro de 2016 (OUT/16) e de 22,8% para as folhas colhidas em abril de 2017 

(ABR/17), sendo a principal divergência entre as duas análises o resíduo de lisina. 

Se desconsiderarmos este aminoácido o teor proteico é igual para as duas amostras 

analisadas (aproximadamente 20%). Somado a isso, outros aminoácidos também 

apresentaram grandes divergências, foram o aspartato, prolina e leucina. Acredita-

mos que esta divergência deve estar ligada à época do ano de colheita. No entanto, 



 
61 

 
    

independente da amostra realizada o teor de aminoácidos foi elevado, mostrando a 

possibilidade de esta planta ser utilizada como suplemento proteico. O valor obtido 

por nós, acima de 22,8%, está próximo do obtido por Takeiti et al. (2009), que obteve 

28,4 % de proteínas em folhas frescas. Conforme Mercê et al. (2001b), o aminoácido 

lisina constituiu 5,4% do conteúdo total de proteína neste vegetal (P. aculeata Mill.), 

que é de 2 a 23 vezes o conteúdo encontrado em vegetais, como couve e alface, e 

em cereais, como o milho comum e em leguminosas, como feijões. Segundo Almei-

da Filho e Cambria (1974), o teor de lisina em ora-pro-nobis foi de 1,153 g de lisina 

por 100 gramas de massa seca, maior se comparado com couve (0,44 g/100 g), mi-

lho (0,25 g/100 g), alface (0,05 g/100 g) e espinafre (0,02 g/100 g) (ATANASOVA, 

2008; EPPENDORFER; BILLEM, 1996; RODRIGUES et al., 2001). Os valores obti-

dos neste trabalho foram bem superiores, isto é 3,27 g e 13,18 g por 100 g de mate-

rial triturado. A avaliação do teor de aminoácidos realizada por Takeiti et al. (2009) 

evidenciou que essa espécie vegetal tem o triptofano como aminoácido abundante. 

Ressaltamos que na hidrólise ácida, o resíduo de triptofano é totalmente degradado. 

Na extração salina, a composição de proteínas extraída foi de 52 mg/g, en-

quanto a maioria das proteínas permaneceram no material sedimentado após a ex-

tração (260,6 mg/g). Esse resultado também foi obtido na análise das extrações hi-

droalcóolicas. No material sedimentado da extração sequencial com 30% de metanol 

o valor obtido foi de 28% de conteúdo proteico e 10,9% com 70% de metanol, o que 

mostra que a maioria das proteínas são do tipo fibrosas.  

As quantificações proteicas das frações eluídas na coluna de extração em fa-

se sólida foram inferiores a OPN triturada (Tabela 4), mostrando que apesar de “lim-

par” a amostra de pigmentos, a etapa de aplicação em colunas de extração em fase 

sólida possivelmente promoveu uma diminuição no conteúdo proteico. 

A eluição do material obtido na fase aquosa, mostrou que em 100% de sol-

vente A o teor proteico foi baixo, isto é, apenas 4,32% do material obtido era proteí-

na. Esse valor aumentou para 20,8% quando a eluição foi de 30% de solvente B e 

70% de solvente A. Já na eluição da fração extraída com 70% metanol, teor proteico 

foi o mais baixo de todos, o que mostra a polaridade intermediária das proteínas 

contidas na OPN. A composição de aminoácidos também variou com a amostra ini-

cial e com o solvente utilizado, mostrando que as proteínas extraídas são diferentes. 



 
62 

 
    

Tabela 4. Composição de aminoácidos e teor proteico, em massa (μg/mg), nas diferentes frações de extração e sedimentados retidos no filtro, 
bem como dados encontrados na literatura. 

* Valores de acordo com Takeiti et al. (2009) (μg/mg). 
** Não encontrado na análise devido degradação em meio ácido. 
*** Material retido no filtro, após o processo de filtração. 
nd – não determinado 
 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Fonte: Autora. 
 

EXTRAÇÃO 
 
 

AA 

OPN 
Triturada 

OUT/16            ABR/17 

H2O 

(EXTAGUA2) 

NaCl 

(EXTSAL1) 

NaCl 

(EXTSAL1) 
Sedimentado*** 

Dados da 
Literatura* 

Asp 25,6 14,3 4,3 3,8 27,1 17,1 
Thr 8,9 10,3 2,2 1,4 13,7 10 
Ser 9,2 8,4 1,6 1,7 13,2 10 
Glu 32,4 34,6 9,1 7,7 53,7 26,7 
Pro 6,1 46,4 3,5 3,2 8,0 11,1 
Gly 10,8 15,2 3,1 2,5 12,8 13,1 
Ala 10,5 11,2 2,4 2,0 16,1 13,6 
Val 10,4 11,9 2,3 2,3 14,4 12,8 
Met 0,8 1,5 0,1 0,3 2,9 2,30 
Ile 10,8 8,0 1,7 1,4 15,6 10,7 

Leu 39,6 10,5 2,9 2,5 35,0 20,0 
Tyr 6,9 4,7 1,1 1,8 14,7 12,1 
Phe 8,9 6,4 1,2 1,7 17,0 12,7 
His 3,6 1,7 0,5 0,4 6,3 5,9 
Lys 131,8 32,7 11,0 16,0 6,9 14,3 
Arg 10,2 10,6 2,7 3,0 3,2 14,4 

Trp ** nd nd nd nd nd 55,2 
TEOR PROTEI-

CO 
326,5 228,3 49,6 51,7 260,6 262,0 



 
63 

 
    

Tabela 5. Composição de aminoácidos e teor proteico, em massa (μg/mg), nos diferentes eluatos. 
** Não encontrado na análise devido degradação em meio ácido. 
nd – não determinado 
 
 

 
Fonte: Autora. 
 
 

EXTRAÇÃO 
 
 

AA 

                 H2O 
          (EXTAGUA2) 
100% sol A     30% sol B 

          30% Metanol 
        (EXT30MET2) 
100% sol A     30% sol B 

           70% Metanol 
          (EXT70MET2) 
100% sol A     30% sol B 

Asp 3,8 20,6 17,4 6,4 2,6 1,3 
Thr 1,9 6,6 5,4 nd 1,3 0,8 
Ser 1,4 10,9 6,7 nd 2,2 0,9 
Glu 9,9 31,0 23,2 nd 5,9 2,0 
Pro 2,5 18,3 4,9 6,9 1,6 1,2 
Gly 2,5 12,9 6,6 6,3 2,2 0,9 
Ala 2,2 9,3 5,7 10,6 1,3 0,6 
Val 2,3 11,4 5,8 6,2 1,2 0,9 
Met 0,3 1,6 0,8 1,4 0,3 0,1 
Ile 1,6 5,2 6,0 6,3 1,1 0,6 

Leu 2,5 12,5 9,6 12,4 1,1 0,4 
Tyr 1,1 7,9 4,4 3,9 0,7 0,6 
Phe 1,2 10,2 3,7 4,7 0,7 0,8 
His 0,5 2,3 1,2 1,3 0,3 0,1 

Lys 8,5 27,4 7,1 11,0 2,4 3,3 
Arg 1,0 20,5 9,1 7,4 13,0 0,4 

Trp ** nd nd nd nd nd nd 

TEOR PROTEI-
CO 

    43,2 208,4      117,6 84,7      37,8     15,0 



 
64 

 
    

1,4 
 

1,2 
 

1,0 
 

0,8 
 

0,6 
 

0,4 
 

0,2 
 

0,0 
 

-0,2 

0 5 10 15 20 25 30 

TEMPO DE RETENÇÃO (min) 

Um entendimento mais profundo dos dados obtidos requer estudos mais 

aprofundados dos materiais obtidos, tais como, hidrólise parcial das proteínas, purifi-

cação dos materiais, etc.  

Visando a obtenção de materiais mais puros e com maior teor proteico, os 

eluatos obtidos da solução de 100% solução A da extração EXTAGUA2 (Figura 10) 

foram submetidos a CLAE em modo semipreparativo para purificação dos picos mais 

proeminentes. Dessa purificação, 3 materiais diferentes foram obtidos (Figura 14). 

 
Figura 14. Perfil de picos purificados da fração 100 % solução A da extração aquosa (EX-

TAGUA2). 

 

 
2,5 

 
 

2,0 

 
 

1,5 

 
 

1,0 

 
 

0,5 

 
 

0,0 

 
 

0 5 10 15 20 25 30 

TEMPO DE RETENÇÃO (min) 

 

0,07 

 
0,06 

 
0,05 

 
0,04 

 
0,03 

 
0,02 

 
0,01 

 
0,00 

 
-0,01 

 

 
0 5 10 15 20 25 30 

TEMPO DE RETENÇÃO (min) 
 

 

 
 

 

 

 
 

 

 

 
 

 

 

 
 

 

 

 
 

 

 

 
 

Fonte: Autora.

A
B

S
 (

22
0 

nm
) 

A
B

S
 (

2
2

0
 n

m
) 

A
B

S
 (

2
2

0
 n

m
) 



65 
 

Devido a pequena massa obtida, a análise das frações puras não foi conti-

nuada.  

 

 

4.4  Análises dos ensaios antimicrobianos 
 
 

Nos últimos anos, a resistência de microrganismos patogênicos às múltiplas 

drogas tem aumentado devido ao uso indiscriminado de antimicrobianos, utilizados no 

tratamento de doenças infecciosas. Essa situação vem despertando a necessidade 

de busca de novas drogas. As plantas constituem em uma excelente fonte de subs-

tâncias para novas drogas antimicrobianas, tendo em vista que a diversidade mole-

cular dos produtos naturais é muito superior àquela derivada dos processos de sín-

tese química (SILVA et al., 2010). 

A resistência dos microrganismos frente aos antimicrobianos em geral vem 

sendo um problema no tratamento de infecções. Neste sentido, os produtos naturais 

ganham destaque como uma fonte alternativa na busca de novos agentes antimicro-

bianos (SILVA et al., 2010). A resistência bacteriana aos antimicrobianos é considera-

da como um problema inerente à terapia antimicrobiana, por este motivo é preciso 

sempre buscar novas fontes terapêuticas. Testar produtos naturais pode ser uma 

medida alternativa importante para ajudar a resolver esse problema de resistência 

(SILVA et al., 2010). 

Segundo Vargas (2017), na literatura ainda não há relatos de estudos envol-

vendo a análise da concentração inibitória mínima (CIM) para microrganismos, das 

folhas de P. aculeata. Contudo, em se tratando de extratos de plantas, podem haver 

variações nos resultados de CIM, que estão atreladas a diferentes fatores, como o 

microrganismo, a cepa utilizada, a origem, a época de coleta do vegetal e o trata-

mento das amostras, entre outras (OSTROSKY et al., 2008). 

O extrato bruto da extração aquosa (EXTAGUA2), e os eluatos obtidos da 

passagem em coluna de EFS com 100% solução A e 30% solução B, não apresenta-

ram efeito inibitório, tanto para as linhagens de bactéria como para as linhagens de 

fungos estudados para este trabalho. Estas amostras foram escolhidas por apresen-

tarem maior rendimento em massa, picos mais expressivos polares e possivelmente 

proteicos. 

Na Tabela 6 é possível observar que o crescimento bacteriano foi superior na 



66 
 

concentração de 512 µg/mL, que, segundo o protocolo CLSI (2013), indica que ne-

nhuma bactéria foi afetada pelas amostras testadas (extrato bruto da extração aquo-

sa (EXTAGUA2), 100% solução A e 30% solução B). 

  

Tabela 6. CIM (µg/mL) para as amostras estudadas em diferentes linhagens bacterianas. 

 CIM 
(µg/mL) 

 

LINHAGENS BACTERIANAS H2O 
(EXTAGUA2) 

H2O 
(EXTAGUA2) 

30% solução B 

H2O 
 (EXTAGUA2) 

100% solução A 

S. aureus (ATCC 25923) >512 >512 >512 

S. epidermidis (ATCC 35984) >512 >512 >512 

E. faecalis (ATCC 29212) >512 >512 >512 

E. faecium (VRE16) >512 >512 >512 

K. pneumoniae (ATCC 700603) >512 >512 >512 

E. coli (ATCC 25922) >512 >512 >512 

A. baumannii (ACI 50) >512 >512 >512 

Fonte: Autora. 

 

As plantas têm sua produção de metabólitos modificada sazonalmente, o 

que acarreta alterações na bioatividade dos mesmos, como atividade antioxidante 

e antimicrobiana.  Dependendo da época em que o material é coletado e analisado 

(FIGUEIREDO, 2010; HUSSEIN et al., 2008; MATIAS et al., 2016), a quantidade 

e/ou natureza das substâncias ativas não é constante durante todo o ano (GOBBO-

NETO; LOPES, 2007). A variação da atividade, além das condições climáticas, 

também pode ser devida a diferenças no local de plantio, tipo de solo, grau de matu-

ração, estocagem da matéria prima e métodos de análises utilizados (ROHANI- 

GHADIKOLAEI et al., 2012).  

Segundo Vargas (2017), apenas frações apolares (éter de petróleo) dos ex-

tratos de folhas coletadas no inverno apresentaram potencial de inibição de cres-

cimento microbiano para Staphylococcus aureus, presumindo-se que durante o in-

verno a P. aculeata produz alguma substância diferente capaz de inibir o cresci-

mento de S. aureus, ou, então, que houve variação na concentração de algum 

composto, vindo a apresentar atividades antimicrobianas distintas de acordo com a 

estação de coleta do material vegetal.  

Souza et al. (2016) realizaram ensaios com diferentes extratos de P. aculea-



67 
 

ta (éter de petróleo, clorofórmio e metanol), nos quais o extrato de menor polaridad