Comportamento dos nucléolos 
e mitocôndrias durante a ovogênese de peixes teleósteos de àgua doce (*) 

Resumo 

Os ovócitos de peixes teleósteos em fa~e pré-v•te­
logênica apresentam numerosos nucléolos localizaoos 
periferic::~mente no núcleo . Existem evidências morfo­
lógicas da passagem do material destt:s nucléolos pa­
ra o citoplasma onde se associa a mitocôndnos e se 
dispersa, mantendo sempre a associação . Este mate­
rial pode ser detectado no ovócito mesmo após o ini· 
cio da deposição de vitelo possivelmente vindo a cons­
tituir o plasma germinativo. 

INTRODUÇÃO 

Vários estudos têm sido realizados sobre 
o comportamento e função dos nucleolos du­
rante a ovogênese. A observação mais geral 
a respeito, indica papel proeminente deste 
orgânulo nuclear na armazenagem do ANA 
ribossômico necessário para atender à sínte­
se de proteínas nos estágios iniciais do de­
senvolvimento embrionário (Brown & Littna. 
1964; Perry, 1966). 

G3nsen & Schram (1968) estudando a ul­
tra-estrutura e citoquímica da vesícula germi­
na! do ovócito de Xenopus Jaevis descreveram 
três tipos de nucléolos que correspondem a 
variações durante o ciclo ovogênico: 1) gran­
des nucléolos típicos, geralmente em número 
de um por célula; 2) alguns nucléolos com 
protuberânci3s; 3) número variável de micro­
nucléolos . Basicamente estes nucléolos não 
diferem nos seus componentes ultra-estrutu· 
rais ou químicos e apresentam-se na célula 
em uma seqüência temporal. Todos os nucléo­
los são constituídos de fibrilas com 1 - 2 nm 
de diâmetro e grânulos de 20 nm de diâmetro 
e apresentam composição de ANA e proteínas. 
sendo a única diferença entre eles a distribui 
ção espacial dos elementos estruturais e a 

Carminda da Cruz-land im (**) 
M ar ia Alice da Cruz-Hõfling (H*) 

presença de DNA nos nucléolos grandes 
Müller (1966) por sua vez, relata a presença 
de centenas de nucléolos localizados perife­
ricamente no núcleo de ovócitos de salaman­
dra, destac::~dos dos cromossomos, os quais 
correspondem aos micronucléolos menciona­
dos acima . Segundo o autor, estes nucléolos 
apresentam um componente membranoso sob 
3 forma de túbulos achatados que teria impor­
tância na transferência ou transformação in­
tra-nuclear das moléculas precursoras do 
ANA ribossômico após sua transcrição do 
DNA. Já Dallai (1967) e Hinsh (1970). des­
crevem a presença de membranas intranuclea­
res, associados aos nucléolos, cujo papel po­
deria ser no transporte do material nucleolar 
para o citoplasma . 

Esta transferência de ANA ribossômico do 
núcleo para o citoplasma apesar de universa!­
mente aceita, permanece obscura quanto ao 
modo da passagem . embora várias maneiras 
tenham sido sugeridas por diferentes autores 
(Hinsch, 1970) . 

No caso dos ovócitos é bastante comum 
encontrarem-se acúmulos de material seme­
lhante ao dus nucléolos do lado citoplasmáti· 
co do envelope nuclear (Lewis & McMillan, 
1965; Droller & Aoth, 1966; Eddy, 1975; Clérot, 
1976). O aparecimento desse material no 
citoplasma próximo ao envelope nuclear é 
freqüentemente acompanhado por modifica­
ções nos nucléolos, como por exemplo vacuo­
lização (Esper, 1965) e mais tarde por modifi ­
cações citoplasmáticas que ocorrem associa­
das a mitocôndrios (Ciérot, 1976) . 

O presente estudo refere-se à ultra-estru­
tut a dos micronucléolos presentes em ovóci­
tos de peixes e à análise das evidências 

( • ) - Pesquisa financiada pelo CNPq e NSF - Grant n.o BNS 75-10457A01 
( • • ) - Instituto de Biociências - UNESP - Rio Claro, SP . 
r•••) - Instituto de Biologia - UNICAMP - Campinas, SP. · 

AcrA AMAZONICA 9(4): 723-728. 1979 -723 



morfológicas da passagem de seu conteúdo 
para o citoplasma, bem como de sua evolução 
neste compartimento celular, durante a fase 
pré-vitelogênica do ovócito. 

MATERIAL E MÉTODOS 

Foram estudadas sete espécies de peixes. 
quatro pertencem à superordem Ostariophysi 
(Cypriniformes) Serrasalmus sp; Hemiodus 
gracilis, Hemiodus immaculatus e Semapro­
chilodus sp e 3 pertencentes à superordem 
Acantopterygii (Perciformes) Crinicichla jo­
hanna e Plegioscion squamosissimus e (Ar­
therimiformss); Pseudotylosurus microps. Os 
peixes foram capturados nos rios Solimões 
(lago Janauacá) e Negro (arquipélago Anavi­
lhanas). Amazonas, durante o mês de janeiro. 
enquanto a bordo do R/V Alpha-Helix da Uni· 
versidade de La Jolla, Cal ifornia. 

Fragmentos dos ovários foram fixados em 
gluta raldeído a 2. 5% em tampão fosfc.to, pH 
7 . 2, a 4°C durante 3 - 12 horas. Após lava­
gem em tampão, foi feita a post-fixação com 
ácido ósmico a 1% no mesmo tampão duran­
te 2 horas. A desidratação foi feita em série 
crescente de etanóis após o que se procedeu 
a inclusão em araldite. Os cortes foram ete­
tuados em ultramicrótomo Porter-Bium MT 28 
com navalhas de vidros e examinados em mi 
croscôpio eletrônico Zeiss EM 9-S2. Cortes 
grossos foram corados com mistura em pêlrtes 
igu3is de azul de metileno e azur 11. 

RESULTADOS 

As gônadas se encontravam em estágios 
diferentes de desenvolvimento, mas todas 
apresentaram ninhos de cél~las com ovócitos 
eiTI fase pré-vitelogênica {designamos fase 
pré-vitelogên1ca à fase que precede o êlpareci­
mento dos primeiros grânulos de vitelo no 
citoplasma) . Nesta fase os ovócitos aprtsen­
tam núcleoe relativamente grandes (10 J.Lm de 
d1âmetro) e citoplasma altamente basoiílico 
(F1g. 1a) . Em cortes o núcleo se apresenta 
preenchido por nucleoplasma de baixa densi­
dade eletrônica, contendo alguns grânulos es­
parsos de cromatina e numerosos nucléolos 
localizados periféricamente (Fig. 1b) . os quais 
correspondem aos micronucléolos de Gansen 

724-

e Schram. O número e tamanho dos nucléo­
los é variável, sendo sua forma a princípio 
predominantemente esférica mas tendendo 
para irregular à medida que os ovóc1tos se 
apresentam mais desenvolvidos. 

Inicialmente os nucléolos se apresentam 
altamente compactos e constituídos de mate­
rial fibra-granular. Com o desenvolvimento 
dCJs ovócitos torna-se distinta uma medula 
compacta com menor eletrondensidade e uma 
córtex granular mais eletrondensa e mais di­
fusa. cujos prenúncios já podem ser observa­
dos na figure 1 b e também na 2a. 

O processo de difusão ou dissolução do 
nucléolo se intensifica podendo atingir a re­
gião medular, deixando uma ma!:>sa compacta 
em forma de anel ao seu redor tFig. 2b) . Ao 
microscópio óptico nucléolos desse tipo apre­
sentam-se como se contivessem um vacúolo 
central. (Fig. 2c) . A característica granular 
do material em dispersão é bem evidente. me­
dindo os grânulos 30nm de diâmetro (Fig. 3a). 

Flg . 1 - Ovócltos em fase pré-vltologênica : A) - Ml­
crografia de corte grosso ao microscópio de luz. B) -
Mlcrografia eletrônica de pequeno aumento n = núcleo; 
n= nucléolo: md=materlal denso de origem nuclear; 
m= mitocôndrlos: oo = ovóclto . (Serrasalmus sp.) 

Cruz-Landim & Cruz-Hõlling 



Nesta fase pode observar-se mater:at com 
o mesmo aspecto morfológico colocado junto 
ao envelope nuclear, do lado citoplasmático, 
em pequenos agrupamentos (Figs 1b, 2a e b, 
3b e 4a) dando idéia de que o material dos 
micronucléolos deve ter sido transferido para 
o citoplasma. 

Fíg . 2 - A) - Nucléolo (nu) em tose de descompacta­
ção dando origem a fitas anastomosadas de matertal 
granular (flechas): B) - Nucléolo (nu) em fase de des­
compactação dando origem à vacúolo (va) íntranucleo­
lar; C) - Micrografia de corte grosso ao microscópio 
de luz mostrando nucléolos vacual izados. oo= ovócitas; 
en = envelope nuclear; md = m2teria! denso. (Hemiodus 
immaculatus) 

O envelope nuclear dos ovócitos apresen­
ta grande quantidade de poros e em alguns 
casos foi possível observar comunicação en­
tre JJ material do nucléolo e esses poros 
(Fig . 3a) . É também muito freqüente em cor­
tes transversais dos poros, observar-se mate­
rial granular na sua luz. 

Comportamento dos . 

Estruturas membranosas, formando vesí­
culas ou enovelados irregulares (figuras mie­
línicas) intranucleares foram também obser­
vados nesta fase de transferência do material 
do núcleo para o citoplasma (Figs. 3a e b 
e 4b) . 

No citoplasma o material eletrondensc- pe­
rinuclear se associa a mitocôndrias (Figs. 3b, 
4a e b, 5a e b e 6) . Inicialmente os mitocôn­
drias se colocam ao redor da massa de mate­
rial, enquanto esta ainda está justaposta ao 
envelope nuclear (Fig. 3b). A massa a princí­
pio compacta (Fig. 4a) passa por um processo 
de àifusão semelhante ao que ocorre no nu­
cléolo formando-se um retículo de fitas cons­
tituídas por material granular (Fig. 4b) . A me­
dida que isto acontece o material se dispersa 
pelo citoplasma afastando-se do núcleo (Figs. 

Fig. 3 - A) - Nucléolo (nu) em corte tangencial m'ls­
trando a natureza granular dos componentes e pr(\íe­
ções (flechas) deste material para os poros (po) do en­
velope nuclear (en): B) - Associação do material 
(md) denso a mitocõndrios (m) do lado citoplasmático . 
ve=vesículas, rb= ribossomos , fm = figuras mielimcas. 
(Piagioscion squamosissimus) 

- 725 



Fig 4 - A) - Material denso (md) c.nvolv;do por mito­
cõndrios (m); B) - Dispersão do material denso ao se 
afastar do núcleo (n) . fm = figuras mlelínicas). (Serra· 
salmus sp) 

4b e 5a e b) . A dispersão vai se tornando cada 
vez maior, desfazendo-se o retículo (Fig. Sa). 
mas conservando-se o material denso, de pro­
vável origem nucleolar, associado aos mito­
côndrias (F1g. Sb). 

Em alguns ovócitos foram também obser­
vadas lamelas anuladas (Figs. Sb e c) asse· 
ciadas aos mitocôndrias e ao material ele­
trondenso. As lamelas anuladas têm estrutura 
semelhante à do envelope nuclear, apresenta 
do poros . O aparecimento destas i ameias 
não foi muito freqüente nas espécies estuda· 
das e a sua origem não pôde ser determinada. 
Em alguns pontos as lamelas anuladas apre­
sentam dilaraçôes nas extremidades (Fig. Se) 
dando origem a membranas a que ficam ade­
ridos ribossomos, originando assim, os pou­
cos perfis de retículo endoplasmático granular 
presentes no ovócito. Como já foi dito, o ci­
toplasma dcs ovócitos nesta fase inicial do 
desenvolvimento, antes da deposiçiío de vitelo 

726 -

é muito basofílico e concordantemente muito 
rico em ribossomos . Cisternas de retículo 
endoplasmático são no entanto, muito raras e 
os ribossomos geralmente apresentam-se li­
vres ou sob a forma de polissomos . 

Em fase posterior, quando a deposição de 
vitelo já se acha em processamento ainda po­
dem ser observadas as fitas de material den· 
so granular, no citoplasma intersticial ao vite­
la, sempre nas proximidades de mitocôndrias 
(Fig. 6) . 

DISCUSSÃO 

A formação de numerosos nucléolos du­
rante a ovogênese é fato bem conhecido . 
Esses nucléolos aparecem durante a profase I 
da meiose, concomitantemente aos cromosso-

Fig . 5 - A) - Dispersão do material denso (md) com 
fragmentação do retlculo inicial; B) - Associação de 
mitocôndrlos (m) materitJI denso (md) e lamelas anula­
das (ta); C) - Lamelos anulaóas (ta) em corta tangen­
cial mostrando a ocorrência de poros (po) e alguns 
pontos que parecem dar origem a membr~nas do retí­
culo . rb = rlbossomos. fm figuras mlelínicas (Serra­
salmus sp.) 

Cruz-Landim & Cruz-Hõfling 



Fig. 6 - Citoplasma de ovócito mostrando já alguns 
grãos de vitelo (gr) e por entre estes o material derso 
(md) ainda associado a mitocôndrios (m). gl = glicogê. 
nio (Crencichla johanna) 

mos plumulados e muito do seu material é 
originado nas alças destes cromossomos. Es­
tes, são, portanto, nucléolos que provavelmen­
te não contém apenas material da região or­
ganizadora do nucléolo e que não se conser­
vam ligados aos cromossomos de origem. 
sendo a sua localização na periferia do núcleo, 
também, bastante conhecida (Müller, 1966). 

A passagem do material destes nucléolos 
para o citoplasma tem sido aventada por vá­
rios autores, bem como sua associação a 
mitocôndrias após atingir o citoplasma (Eddy, 
1974; Clérot 1976). Esse fenômeno de trans­
ferência de material de origem nucleolar para 
o citoplasma é de ocorrência generalizada 
mas, raramente o fenômeno pode ser morto­
logicamente observado, como acontece no 
caso dos acúmulos de material eletrondenso 
perinuclear€·$ nos ovócitos, observados pre­
sentemente. Outras evidências da passagem 
do material nucleolar para o citoplalsma são: 
a) a natureza morfológica semelhante dos 
nucléolos e das massas de material denso 

Comportamento dos ... 

citoplasmático: b) a comunicação entre os 
nucléolos em dissolução e os poros nucleares; 
c) a presença de estruturas membranosas in­
tranucleares (Dallai, 1967; Hinsch , 1970) . A 
ocorrência de material eletrondenso com ori­
gem e comportamento semelhante foi descrito 
por alguns autores, dos quais citamos Russel 
& Frank ( 1978) durante a espermatogênese . 
Eddy (1974) e estes últimos autores citados 
dão a este material a designação '' nuage" 
justamente por em muitos casos ele se dis­
persar de forma irregular apresentando-se 
como manchas ou "nuvens" em certas regiões 
do citoplasma. O trabalha de Eddy consiste 
numa revisão sobre a relação do plasma ger­
mmativo com a origem da íinhagem germina­
tiva durante o desenvolvimento embrionários 
em vários animais. Nesta revisão é postulado 
que a .. nu age n' ou seja, o material 31etronden­
so de origem nuclear vai constituir na célula 
ovo o plasma germinativo o qual determina o 
destino de linhagem germinai dos blastôme­
ros que o vierem a conter. 

No presente caso existem evidências mor­
fológlc:~s da passagem de material do núcleo, 
mais claramente dos nucléolos para o cito· 
plasma. Este material, provavelmente ribonu­
cleoproteínas com função ribossômica, se as­
socia a mitocôndrias e pôde ser seguido até 
depois da deposição de vitela nos ovócitos . 
Este material apresenta-se morfologicamente 
e do ponto de vista da evolução na célula, 
muito semelhante àquele a quem Eddy atribue 
a função de plasma germinativo. 

AGRADECIMENTOS 

Somos gratos aos Drs. Heraldo Britski e 
Naércia Nascimento, do Museu de Zoologia da 
USP, pela identificação dos exemplares usa­
dos. 

SUMMARY 

The teleostean ovocytes in phase pre-vltelogenic 
show numerous nucleoli in the nucleus periphery. 
Morphological evidences indicate that the nucleolar 
moterial is transfered to the cytoplasm whese it assoei­
ate with mitochondria . Late r this dense m:~terial o f 
nucleolar origln disperse in the cytoplasm always 
associated to the mitochondria . This material can be 
detected even after the yolk deposition and may consti­
tute the ovocyte germ plasm. 

-727 



BIBLIOGRAFIA 

BROWN, D . D. & LITINA, E. 

1964 - Varíations in the synthesis of stable 
RNA's during oogenesis and development 
of Xenopus laevís. J. Moi. Biol., 8 : 688 . 

CLÉROT, J . C. 

1976 - Le agroupements mitochondriaux des 

DALLAI, R. 

cellules germinaies des poissons teléos­
téens Cypinidés. I . ttude ultrastruoturale. 
J . Ultrastruct. Res., 54 : 461 . 

1967 - lntranuclear vesículation in Collembola. 
Monitore Zool. l tal., 1 : 101. 

D ROLLER, M .J. & RoTH, T .F . 
1966 - An electron microscope study of yolk 

formatíon during oogenesis in Lebistes 
reticulatus Guppyi . J. Cell. Biol., 28 : 209. 

Eoov, E.M. 

1975 - Get·m plasm and the dlfferentiation of the 
germ cell líne. lnt. Rev. Cytol., 43: 229. 

ESPER, H . 

1965 - Studies of thc nucleolar vacuole !n the 
oogenesis of Arbacía punctulata Exp. Cell 
Res., 38 : 85 . 

728 -

G ANSEN, P .V. & SCHRAM, A. 

1968 - Ultrastructure et cytochímle ultrastructu­
rale de la vésicule germinative et du 
cytoplasme périnucléaire de l'oocyte mOr 
de Xenopus laevis. J. Embryol. exp. 
Morphol., 20 : 375 . 

HlNSCH, G . w . 
1970 - Possible role of lntranuclear membranas 

in nuclear-cytoplasmic exchanges in spider 
crab oocytes. J . Cell Biol., 47 : 531. 

Lewrs, J .C. & McMI LLAN, D .B . 

1965 - The development of the ovary of the sea 
Lamprey (Petromison ma ri nus L .) . J. 
Morphol., 117 : 425 . 

MÜLLER, O. L . 

1966 - Structure and composition of peripheral 
nucleoli of salamander oocytes . Cancer 
lnst. Monogr., 23: 53. 

PERRY, R .P . 

1966 - On ribosome biogenesls. Nat. Cancer lnst. 
Monogr., 23 : 527 . 

RUSSEL, L. & FRANK, B. 

1978 - Ultrastructural characterlzation of nuage 
in spermatocytes os the rat testis. Anat. 
Rec., 190 : 79 . 

(Aceito para publicação em 06/ 01 / 79) 

Cruz-Landim & Cruz·Hõfling