RESSALVA Atendendo solicitação do(a) autor(a), o texto completo deste relatório de pós-doutorado será disponibilizado somente a partir de 05/04/2025. KATIA APARECIDA DA SILVA VIEGAS CARACTERIZAÇÃO HISTOLÓGICA E HISTOMORFOMÉTRICA DA ESTEATOSE HEPÁTICA EM PERDIZ (RHYNCHOTUS RUFESCENS TEMMINCK, 1815) Relatório de Pós-doutorado realizado na Universidade Estadual Paulista (UNESP), Instituto de Biociências, Departamento de Biologia Estrutural e Funcional, Botucatu. Supervisor: Prof. Dr. André Luís Filadelpho Cossupervisora: Profª Drª Camila Contin Diniz de Almeida-Francia Botucatu 2024 Sumário 1. INTRODUÇÃO ......................................................................................................................2 2. REVISÃO DA LITERATURA ...............................................................................................3 2.1 Morfologia do fígado em aves .......................................................................................3 2.2 Metabolismo lipídico e lipidose .....................................................................................3 2.3 Caracterização da lipidose hepática ............................................................................4 3. OBJETIVOS ...........................................................................................................................5 3.1 Objetivo geral ..................................................................................................................5 3.2 Objetivos específicos ......................................................................................................5 4. MATERIAL E MÉTODOS ....................................................................................................6 4.1 Animais, coleta e fixação do material ...........................................................................6 4.2 Análises Histológica e Histomorfométrica ...................................................................7 5. RESULTADOS E DISCUSSÃO ..........................................................................................8 5.1 Avaliação Macroscópica ................................................................................................8 5.2 Avaliação Microscópica ................................................................................................10 5.3 Avaliação Morfométrica ................................................................................................17 6. CONCLUSÃO ......................................................................................................................21 7. REFERÊNCIAS ...................................................................................................................22 ANEXOS ...................................................................................................................................27 ANEXO I – Atestado do CEUA – Comitê de Ética em Uso de Animais .......................27 ANEXO II – Link do Repositório UNESP ..........................................................................28 ANEXO III – Avaliação do Supervisor ..............................................................................29 Resumo O presente estudo teve como objetivo caracterizar histologicamente e histomorfometricamente a lipidose hepática em fígados de perdizes (Rhynchotus rufescens) mantidas em cativeiro. A lipidose hepática, caracterizada pelo acúmulo anormal de lipídios nos hepatócitos, compromete a função hepática e pode levar a distúrbios metabólicos graves. Foram analisados fígados de 15 perdizes adultas, utilizando colorações com Hematoxilina e Eosina (H.E.) e Tricrômico de Masson, além de análises morfométricas realizadas com o software ImageJ. Os resultados mostraram vacuolização significativa dos hepatócitos, particularmente nas zonas periacinares, onde o acúmulo lipídico foi mais acentuado, em comparação com as zonas periportais, que apresentaram menor grau de vacuolização. A análise dos diâmetros dos hepatócitos revelou variações entre as regiões periportais e periacinares. As áreas periacinares apresentaram diâmetros maiores e maior quantidade de vacúolos, sugerindo um estágio mais avançado de lipidose nessa zona, associada a menor oxigenação e maior vulnerabilidade ao estresse metabólico. Em contraste, as regiões periportais mostraram hepatócitos com diâmetros menores e menos vacúolos, indicando menor comprometimento estrutural. Além disso, foi observada compressão dos sinusoides hepáticos, desorganização dos cordões de hepatócitos, e infiltrados inflamatórios em algumas regiões, o que sugere um estágio progressivo de lipidose que pode evoluir para fibrose e esteato-hepatite. A análise morfométrica confirmou a heterogeneidade do acúmulo lipídico entre as diferentes zonas hepáticas, evidenciando o impacto da lipidose na morfologia e função celular. Este estudo fornece dados importantes sobre a lipidose hepática em aves de cativeiro, ressaltando a importância de estratégias nutricionais e de manejo para prevenir a doença. Os resultados servem como base para futuras investigações e para o desenvolvimento de protocolos preventivos e terapêuticos em aves de criação. Palavras-chave: lipidose hepática; metabolismo lipídico; histopatologia; patologia animal; aves. 2 1. INTRODUÇÃO A esteatose, também conhecida como transformação gordurosa, lipidose ou doença hepática gordurosa não alcoólica, é uma condição degenerativa caracterizada pela acumulação anormal e reversível de lipídeos no citoplasma de células parenquimatosas, como hepatócitos e fibras do miocárdio, onde normalmente não seriam encontrados histologicamente. Isso resulta na formação de vacúolos devido a desequilíbrios na síntese, utilização ou mobilização de lipídeos. Devido ao fígado ser o responsável pelo metabolismo lipídico, a esteatose é mais comumente encontrada nesse órgão (BEAUFRÈRE et al., 2019; HERMIER, 1997; MIDDENDORF et al., 2021). A lipidose hepática é uma doença comum em aves domésticas, incluindo galinhas, patos, gansos e perus (BEAUFRÈRE et al., 2019; DONELEY, 2011; HERMIER et al., 1999; MIDDENDORF et al., 2021; PERUSSI, 2019). É caracterizada pelo acúmulo excessivo de lipídios no fígado, levando a uma disfunção hepática grave (MIDDENDORF et al., 2021). Essa condição pode ser causada por vários fatores, incluindo dieta rica em gordura, obesidade, imobilidade e deficiências nutricionais. A lipidose hepática é uma preocupação significativa para a produção avícola, já que pode levar a perda de produção e mortalidade significativa (BEAUFRÈRE et al., 2019; MIDDENDORF et al., 2019, 2021; VISSCHER et al., 2017). Alguns estudos vêm mostrando que a lipidose hepática afeta, principalmente, aves de postura (MAHARJAN et al., 2021; SILVA et al., 2017). As aves afetadas geralmente apresentam sintomas clínicos, como fraqueza, anorexia, perda de peso e produção de ovos reduzida (APPLEGATE; ANGEL, 2014; AWAD et al., 2019; MAHARJAN et al., 2021; SILVA et al., 2017). A prevenção da lipidose hepática é a melhor abordagem para evitar a doença. Uma dieta balanceada com baixo teor de gordura e rica em nutrientes é crucial para a prevenção da lipidose hepática em aves (APPLEGATE; ANGEL, 2014; BAKER; HAN, 1994). De acordo com um estudo realizado por Li et al. (2018), a suplementação de antioxidantes, como selênio e vitamina E, pode ajudar a prevenir a lipidose hepática em aves(LI et al., 2018) . A confirmação diagnóstica é realizada por meio de exames laboratoriais, incluindo exames de sangue e biópsia hepática (RITCHIE et al., 1994). No entanto, uma vez que a lipidose hepática é diagnosticada, o tratamento é necessário para evitar complicações graves. Em geral, a abordagem terapêutica da lipidose hepática em aves inclui mudanças na dieta, administração de medicamentos e suporte nutricional. Em casos graves, a remoção cirúrgica do fígado pode ser necessária. 3 A implementação de programas de manejo adequados é fundamental para a prevenção da lipidose hepática em aves. A manutenção da higiene, ventilação e espaço adequados são importantes para garantir a saúde das aves. O controle do estresse também é importante para evitar a lipidose hepática, já que o estresse pode afetar negativamente o metabolismo lipídico em aves. 21 6. CONCLUSÃO A análise histológica e histomorfométrica do fígado das perdizes (Rhynchotus rufescens) revelou características típicas da lipidose hepática, como a presença de vacuolização lipídica nos hepatócitos, desorganização tecidual e variação na quantidade e tamanho dos vacúolos entre as zonas periportais e periacinares. Esses achados sugerem que o acúmulo de lipídios nos hepatócitos afeta significativamente a estrutura e função do fígado, com maior comprometimento nas áreas periacinares, onde o suprimento de oxigênio é menor, tornando-as mais vulneráveis ao estresse metabólico. A identificação de infiltrados inflamatórios e sinais de fibrose indica que o processo de esteatose (lipidose) pode estar evoluindo para um estágio mais avançado, como esteato-hepatite, o que corrobora com a literatura existente. As alterações morfológicas observadas, especialmente a compressão dos sinusoides hepáticos, evidenciam o impacto potencial da lipidose sobre a circulação hepática, podendo levar a complicações metabólicas mais severas. Esse estudo contribui para a compreensão dos efeitos da lipidose hepática em perdizes mantidas em cativeiro, ressaltando a importância de estratégias de manejo nutricional e ambiental, com redução do estresse, que possam prevenir o acúmulo excessivo de lipídios no fígado. Além disso, os resultados obtidos podem servir de base para futuros estudos sobre intervenções terapêuticas e dietéticas voltadas para a melhoria da saúde hepática em aves de criação. 22 7. REFERÊNCIAS APPLEGATE, T. J.; ANGEL, R. Nutrient requirements of poultry publication: History and need for an update. Journal of Applied Poultry Research, v. 23, n. 3, p. 567– 575, 2014. Acesso em: 18 jun. 2023. AWAD, E. A.; ZULKIFLI, I.; SOLEIMANI, A. F.; LAW, F. L.; RAMIAH, S. K.; MOHAMED-YOUSIF, I. 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