RESSALVA Atendendo solicitação do(a) autor(a), o texto completo desta tese será disponibilizado somente a partir de 31/10/2024. ARAÇATUBA – SP 2022 Ana Paula Miranda Vieira Adição de extrato da casca de romã em um enxaguatório bucal com polifosfato-fluoreto reduz a desmineralização do esmalte dentário Tese apresentada à Faculdade de Odontologia de Araçatuba da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” – UNESP, como parte dos requisitos para a obtenção do título de Doutora em Ciência Odontológica – Área Biomateriais. Orientadora: Profa. Dra. Debora Barros Barbosa Coorientadora: Profa. Dra. Marcelle Danelon Coorientadora: Profa. Dra. Juliana Issa Hori ARAÇATUBA – SP 2022 Ana Paula Miranda Vieira Adição de extrato da casca de romã em um enxaguatório bucal com polifosfato-fluoreto reduz a desmineralização do esmalte dentário Catalogação na Publicação (CIP) Diretoria Técnica de Biblioteca e Documentação – FOA / UNESP Vieira, Ana Paula Miranda. V658a Adição de extrato da casca de romã em um enxaguatório bucal com polifosfato-fluoreto reduz a desmineralização do esmalte dentário / Ana Paula Miranda Vieira. – Araçatuba, 2022 89 f. : il. ; tab. Tese (Doutorado) – Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Odontologia de Araçatuba Orientadora: Profa. Debora Barros Barbosa Coorientadora: Profa. Marcele Danelon Coorientadora: Profa. Juliana Issa Hori 1. Romã (Fruta) 2. Fosfatos 3. Fluoretos 4. Cárie dentária 5. Desmineralização do dente 6. Embrião de galinha 7. Antis- sépticos bucais I. T. Black D15 CDD 617.695 Claudio Hideo Matsumoto CRB-8/5550 Dados curriculares ANA PAULA MIRANDA VIEIRA Nascimento 08/03/1993 Ilha Solteira - SP Filiação Luiz Carlos Vieira Maria Lucia Miranda Mendes 2011/2015 Curso de graduação em Odontologia na Faculdade de Odontologia de Araçatuba – Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” 2016/2018 2018/2022 Curso de Pós-Graduação em Ciência Odontológica – área Saúde Bucal da Criança, nível de Mestrado, na Faculdade de Odontologia de – Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” Curso de Pós-Graduação em Ciência Odontológica – área Biomateriais, nível de Doutorado, na Faculdade de Odontologia de Araçatuba – Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, com período sanduíche na Universidade de Lisboa (2021/2022) Associações CROSP - Conselho Regional de Odontologia de São Paulo SBPqO - Sociedade Brasileira de Pesquisa Odontológica IADR - International Association for Dental Research Comissão examinadora TESE PARA OBTENÇÃO DO GRAU DE DOUTOR Dra. Laís Salomão Arias: Doutora em Ciência Odontológica, Área de Saúde Bucal da Criança, pela Faculdade de Odontologia de Araçatuba/UNESP. Profa. Dra. Sónia Carina Morais da Silva: Professora Doutora do Departamento de Engenharia Biológica da Universidade do Minho – Braga, Portugal. Prof. Dr. Antônio Hernandes Chaves Neto: Professor Assistente Doutor do Departamento de Ciências Básicas, Disciplina de Bioquímica, da Faculdade de Odontologia de Araçatuba/UNESP. Dra. Andresa Aparecida Berretta e Silva: Doutora em Ciências Farmacêuticas, Área de Fármacos e Medicamentos, pela Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto/USP. Profa. Dra. Debora Barros Barbosa: Professora Assistente Doutora do Departamento de Materiais Odontológicos e Prótese, Disciplina de Prótese Total, da Faculdade de Odontologia de Araçatuba/UNESP Dedicatória À minha mãe Maria Lucia Miranda Mendes Dedico essa tese a maior amiga que a vida me deu, que desistiu de seus próprios sonhos para viver os meus, gostaria de agradecer ao esforço incessante que fez para que eu pudesse exclusivamente estudar, essa conquista é sua! À minha avó Carolina Cavaton Miranda (in memoriam) Minha saudade eterna Agradecimentos especiais A Deus “Porque dele, e por ele, e para ele, são todas as coisas; glória, pois, a ele eternamente. Amém.” (Romanos 11:36) À minha família Por estarem amorosamente perto, mesmo que fisicamente distantes. Agradeço, em especial, aos meus tios Aparecida Ramirez e Nelson Ramirez pelo apoio ao longo da minha jornada. À minha orientadora Profª. Drª. Debora Barros Barbosa Por ter me recebido de braços abertos quando perguntei se poderia me orientar. Sou extremamente grata por todo conhecimento compartilhado, e não digo só conhecimento acadêmico, pois a “prof” não se limita a ensinar somente aquilo que é exigido a nível educacional. Compartilhou comigo conhecimentos para a “vida”, me aproximou mais de Deus com sua fé inabalável e me ajudou a ser um ser humano melhor. Obrigada por tudo. À minha coorientadora Profª. Drª. Marcelle Danelon Eu sempre digo: “a Marcelle é uma das pessoas mais bondosas que eu conheci em minha vida”. Você tem o dom de ensinar tudo com amor e paciência, te admiro muito e tenho orgulho de ter sido sua coorientada, obrigada por essa oportunidade. À minha coorientadora Profª. Drª. Juliana Issa E ao seu orientado Mikhael, por toda colaboração no projeto, por me ensinaram novos conceitos e metodologias em uma área que eu não dominava. Ao meu coorientador no exterior Prof. Dr. Nuno Gonçalo Pereira Mira Que não hesitou em me receber em seu laboratório, mesmo com todos os empecilhos provocados pela pandemia. Obrigada por ter sido extremamente compreensivo durante todo meu doutorado sanduíche, por ter me incluído em seus projetos e em seu grupo de pesquisa. Aos voluntários dessa pesquisa Por terem aceitado essa missão penosa, agradeço a todos vocês que participaram dessa difícil tarefa em nome da ciência, sem vocês nada disso seria possível. À Gabriela Lopes Fernandes e família Por ter me convidado para trabalhar junto com você no projeto em que estava executando com a professora Debora e que originou essa tese. Obrigada pela nossa amizade, por ter me ajudado durante o momento em que mais precisei me acolhendo em sua casa com seus pais. Eu ganhei uma irmã e uma mãe postiça. Obrigada Lucia e Cassapa por terem me tratado como uma filha, agradeço a Deus por ter colocado vocês em meu caminho. A todos os meus amigos Eu sou tão abençoada, a pós-graduação me permitiu conhecer pessoas maravilhosas. Laís Arias, Nayara Emerenciano, Francyenne Gonçalves, Priscila Toledo, Gabriel Nunes, Igor Zen, Leonardo de Morais e Mayra Frasson obrigada por toda ajuda durante esses anos, sinto saudades da nossa convivência diária. Agradecimentos Agradecimentos À Faculdade de Odontologia de Araçatuba – UNESP, na pessoa de seu diretor Prof. Tit. Glauco Issamu Miyahara. Ao Programa de Pós-graduação em Ciência Odontológica da Faculdade de Odontologia de Araçatuba (UNESP), a todos seus docentes e discentes. Ao Departamento de Odontologia Preventiva e Restauradora e ao Departamento de Materiais Odontológicos e Prótese da Faculdade de Odontologia de Araçatuba – UNESP, em especial ao Prof. Dr. Alberto Carlos Botazzo Delbem, Prof. Dr. Robson Frederico Cunha, Jânder de Carvalho Inácio, e a todos os professores, funcionários e pós-graduandos. À Diretoria Técnica Acadêmica e a Seção Técnica de Pós-graduação da Faculdade de Odontologia de Araçatuba – UNESP, Valéria de Queiroz Marcondes Zagatto, Lilian Sayuri Mada Pinheiro, Cristiane Regina Lui Matos e Eduardo Moure Cícero. À Faculdade de Ciências e Letras - Câmpus de Assis – UNESP, em especial, a Profª. Drª. Lucinéia dos Santos. À empresa Apis Flora Ltda, e sua farmacêutica responsável Drª. Andresa Aparecida Berretta e Silva. À Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), pelo financiamento na forma de bolsa de doutorado (Processo 2018/06582-5). À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoa de Nível Superior (CAPES), pelo financiamento na forma de bolsa de doutorado sanduíche (Programa Institucional de Internacionalização – Edital nº 41/2017, Processo nº 88887.570096/2020-00), código financeiro 001. Ao Instituto Superior Técnico e a Universidade de Lisboa, em especial ao Instituto de Bioengenharia e Biociências e ao Prof. Dr. Nuno Gonçalo Pereira Mira. Muito obrigada! “Cada descoberta nova da ciência é uma porta nova pela qual encontro mais uma vez Deus, o autor dela” Albert Einstein Resumo Resumo Vieira, A. P. M. Adição de extrato da casca de romã em um enxaguatório bucal com polifosfato-fluoreto reduz a desmineralização do esmalte dentário. 2022 89f. Tese (Doutorado em Ciência Odontológica, área de Biomateriais) - Faculdade de Odontologia de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Araçatuba 2022. Objetivos: Avaliar o efeito anti-desmineralizante de um enxaguatório bucal com extrato de casca de romã (3% PPE), trimetafosfato de sódio (0,3% TMP) e flúor (225 ppm F) em um estudo in situ e determinar seu potencial de irritação em um estudo ex vivo. Métodos: Este estudo foi duplo-cego cruzado e realizado em quatro fases com 7 dias cada. Doze voluntários utilizaram dispositivos orais contendo blocos de esmalte bovino que foram submetidos a desafios cariogênicos com sacarose (30%) seis vezes ao dia. A formulação ETF (PPE+TMP+F), formulação TF (TMP+F), água deionizada e um enxaguatório comercial (CM) foram gotejados nos blocos de esmalte duas vezes ao dia. Em seguida, determinou-se a porcentagem de perda de dureza superficial (%SH), perda integrada de dureza subsuperficial (ΔKHN), bem como cálcio (Ca), fósforo (P) e fluoreto (F) no esmalte e nos biofilmes. Além disso, as concentrações de polissacarídeos extracelulares solúveis (EPS) foram analisadas a partir do biofilme coletado dos blocos. O potencial de irritação dos enxaguatórios foi avaliado pelo teste da membrana corioalantóica do ovo de galinha através do efeito vascular produzido durante 300 s de exposição. Resultados: A formulação ETF promoveu os melhores resultados para %SH e ΔKHN entre todos os grupos (p < 0,001), apresentou a maior concentração de Ca e P no esmalte e no biofilme, e a menor quantidade de EPS no biofilme (p < 0,001). ETF produziu leve rubor, enquanto CM levou a hiperemia e hemorragia nos ovos. Significado: A adição de PEE na formulação para enxaguatório sem álcool contendo TMP e F aumentou sua propriedade anti-desmineralizante, e esta formulação apresentou menor potencial de irritação quando comparada ao CM testado. Palavras-chave: Romã; Fosfatos; Fluoretos; Cárie dentária; Desmineralização do dente; Embrião de galinha; Antissépticos bucais. Abstract Abstract Vieira, A. P. M. Addition of pomegranate peel extract in a mouthwash with polyphosphate-fluoride reduces the tooth enamel demineralization. 2022 89f. Tese (Doutorado em Ciência Odontológica, área de Biomateriais) - Faculdade de Odontologia de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Araçatuba 2022. Objectives: This study evaluated the anti-demineralizing effect of a mouthwash comprising pomegranate peel extract (PPE 3%), sodium trimetaphosphate (TMP 0.3%), and fluoride (F 225 ppm) in an in situ study and assessed its irritation potential in an ex vivo study. Methods: This double-blind crossover study was conducted in four phases with 7 days each. Twelve volunteers used palatal appliances containing bovine enamel blocks that were subjected to cariogenic challenges with sucrose (30%) six times daily. The ETF formulation (PPE+TMP+F), TF formulation (TMP+F), deionized water, and commercial mouthwash (CM) were dropped onto the enamel blocks twice daily. The percentage of surface hardness loss (%SH), integrated loss of subsurface hardness (ΔKHN), calcium (Ca), phosphorus (P), and F in enamel and biofilms were determined. In addition, alkali-soluble extracellular polysaccharide (EPS) concentrations were analyzed in the biofilms collected from the blocks. The irritation potential of the mouthwashes was evaluated using the hen’s egg chorioallantoic membrane test through the vascular effect produced during 300 s of exposure. Results: The ETF formulation presented the best results for %SH and ΔKHN among all groups (p < 0.001), showed the highest concentrations of Ca and P in the enamel and biofilm, and the lowest amount of EPS in the biofilm (p < 0.001). The ETF produced light reddening, whereas CM led to hyperemia and hemorrhage in the eggs. Significance: The addition of PPE to alcohol-free mouthwash formulations containing TMP and F increased its anti-demineralizing property, and this formulation presented a lower irritation potential than the CM tested. Keywords: Pomegranate; Phosphates; Fluorides; Dental Caries; Tooth Demineralization; Chick Embryo; Mouthwashes. Lista de figuras Lista de figuras LISTA DE FIGURAS FIGURE 1 Experimental design of the study. 46 FIGURE 2 Representative images: (Egg) Fertilized chicken egg showing the chorioallantoic membrane. Sequence of photographs illustrating the macroscopic changes on the chorioallantoic membrane vasculature after administration of solutions for 300 s: (NaOH) sodium hydroxide 0.1N; (DDS) sodium dodecyl sulfate 1%; (NaCl) sodium chloride 0.9%; (N) formulation without pomegranate peel extract (PPE), sodium trimetaphosphate (TMP) and fluoride (F); (E) formulation with 0.3% PPE; (TF) formulation with 0.3% TMP and 225 ppm F; (ETF) formulation with 0.3% PPE, 0.3% TMP and 225 ppm F; (CM) commercial mouthwash of essential oil. 47 Lista de tabelas Lista de tabelas LISTA DE TABELAS TABLE 1 Grading of vascular reactions (hyperemia, hemorrhage, and coagulation) in the chorioallantoic membrane of the embryonated egg chicken in the HET-CAM test. 48 TABLE 2 Mean (SD) initial surface hardness loss (SHi), percentage of surface hardness loss (%SH), integrated loss of subsurface hardness (ΔKHN), fluoride, calcium, and phosphorus concentration in enamel and biofilm according to the different treatments. 49 Sumário Sumário SUMÁRIO TITLE PAGE 22 ABSTRACT 23 INTRODUCTION 24 MATERIALS AND METHODS 25 RESULTS 30 DISCUSSION 31 CONCLUSION 35 REFERENCES 35 FIGURE AND TABLES CAPTIONS 45 SUPPLEMENTARY MATERIAL 50 ANEXOS 51 36 [4] Cheng L, Zhang L, Yue L, Ling J, Fan M, Yang D, et al. 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