RESSALVA Atendendo solicitação do(a) autor(a), o texto completo desta dissertação será disponibilizado somente a partir de 19/04/2026. UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “Júlio de Mesquita Filho” Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Campus de Botucatu, SP Etiologia microbiana e multirresistência aos antimicrobianos em isolados obtidos de infecções umbilicais em borregos diagnosticados por espectrometria de massas THAÍS SPESSOTTO BELLO Botucatu-SP Abril, 2024 UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “Júlio de Mesquita Filho” Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Campus de Botucatu, SP Etiologia microbiana e multirresistência aos antimicrobianos em isolados obtidos de infecções umbilicais em borregos diagnosticados por espectrometria de massas THAÍS SPESSOTTO BELLO Dissertação apresentada ao Programa de Pós-graduação em Medicina Veterinária como requisito para obtenção do título de Mestre. Orientador: Prof. Titular Márcio Garcia Ribeiro Coorientadores: Prof. Dr. Geraldo de Nardi Júnior Profa. Dra. Lorrayne de Souza Martins Prof. Dr. Rodrigo Garcia Motta BOTUCATU-SP Abril, 2024 FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA SEÇÃO TÉC. AQUIS. TRATAMENTO DA INFORM. DIVISÃO TÉCNICA DE BIBLIOTECA E DOCUMENTAÇÃO - CÂMPUS DE BOTUCATU - UNESP BIBLIOTECÁRIA RESPONSÁVEL: MARIA CAROLINA A. CRUZ E SANTOS-CRB 8/10188 Bello, Thaís Spessotto. Etiologia microbiana e multirresistência aos antimicrobianos em isolados obtidos de infecções umbilicais em borregos diagnosticados por espectrometria de massas / Thaís Spessotto Bello. - Botucatu, 2024 Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Orientador: Márcio Garcia Ribeiro Coorientador: Geraldo de Nardi Júnior Coorientador: Lorrayne de Souza Martins Coorientador: Rodrigo Garcia Motta Capes: 50502000 1. Cordeiros. 2. Etiologia. 3. Espectrometria de Massas. 4. Cordão umbilical. 5. Farmacorresistência bacteriana. 6. Infecções neonatais - Medicina veterinária. Palavras-chave: Cordeiros; Etiologia; MALDI-TOF MS; Onfalopatias infecciosas; Resistência bacteriana. Impacto potencial desta pesquisa Etiologia microbiana e multirresistência aos antimicrobianos em isolados obtidos de infecções umbilicais em borregos diagnosticados por espectrometria de massas Impacto científico esperado: Identificação molecular dos patógenos encontrados em infecções umbilicais em cordeiros, resistência múltipla bacteriana e avaliar a microbiota umbilical de cordeiros sadios. Impacto social: A identificação dos micro-organismos isolados possibilitará o uso racional de antimicrobianos e a adoção de ações específicas de controle/profilaxia da doença. Impacto econômico: A identificação dos principais patógenos permite ao produtor traçar estratégias de profilaxia e controle mais direcionadas, diminuindo as perdas econômicas com mortalidade e custos veterinários. Potential impact of this research Etiology and antimicrobial resistance in isolates from lamb's umbilical infection diagnosed by mass spectrometry Scientific impact: Molecular identification of pathogens found in umbilical infections in lambs, multidrug-resistant bacteria and evaluate the umbilical cord’s microbiota. Social impact: The identification of microorganisms isolated from umbilical infections enables the rational use of antibiotics and the adoption of actions of prophylaxis/control of the disease. Economic impact: The identification of the main pathogens allows the producer to build strategies to prevent and control the umbilical infection more efficiently, reducing the economic losses with mortality and veterinary costs. Nome da autora: Thaís Spessotto Bello Título: Etiologia microbiana e multirresistência aos antimicrobianos em isolados obtidos de infecções umbilicais em borregos diagnosticados por espectrometria de massas COMISSÃO EXAMINADORA: Prof. Titular Márcio Garcia Ribeiro Presidente e Orientador Departamento de Produção Animal e Medicina Veterinária Preventiva FMVZ-UNESP, Botucatu, SP Prof. Associado Rogério Martins Amorim Membro Departamento de Clínica Veterinária FMVZ-UNESP, Botucatu, SP Prof. Colaborador Rodolfo José Cavalcanti Souto Membro Clínica de Bovinos- UFRPE- Garanhuns/PE UFRPE- Universidade Federal Rural de Pernambuco, Garanhuns, PE Data da defesa: 19 de abril de 2024. iii AGRADECIMENTOS À minha família, em especial meus pais, Cristiana Cagnoni Spessotto Bello e Cícero Rubens Ribeiro Nogueira Bello, por serem meu alicerce e confiarem em mim até nos dias em que eu não confiava mais. Vocês dois são meus exemplos de resiliência e força. Amo vocês, essa conquista é nossa. Ao professor Márcio Garcia Ribeiro, por ter aceitado ser meu orientador de estágios há 7 anos, me acompanhando também na residência e no mestrado. Obrigada por ser um exemplo de profissional, por ter confiado em mim para realização do trabalho, pela empatia e compreensão quando passei por momentos difíceis e por todos os conselhos. Aos meus co-orientadores, Geraldo de Nardi Júnior, Lorrayne de Souza Martins Motta e Rodrigo Garcia Motta. Agradeço pela ajuda nas coletas e pelos conselhos na pós-graduação. Sem a colaboração de vocês, esse trabalho não teria sido possível. Ao técnico do laboratório (agora ex-técnico) Fernando José Listoni, por todos os ensinamentos microbiológicos e pelos inúmeros conselhos de vida. Sou muito grata por ter tido a oportunidade de aprender tanto com o senhor e espero ter o privilégio de passar seu conhecimento adiante. Aos meu colegas do laboratório, em especial Fábio Portilho, pelos momentos compartilhados na bancada, pela ajuda com as buracracias da pós-graduação, com o SAGE- Fapesp, pelos conselhos e pelo companheirismo nos dois anos de mestrado. Quem ajuda pode não se lembrar, mas que é ajudado, jamais esquecerá. Aos meus amigos Wendel Carlos e Camila Mendes, pelo companheirismo, risadas e apoio durante o mestrado. Vocês tornaram a caminhada mais leve e por isso serei para sempre grata. O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 e da Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP; processo 2021/15085-8). Sumário RESUMO ................................................................................................................................................... v ABSTRACT ................................................................................................................................................ vi 1. INTRODUÇÃO ............................................................................................................................. 1 2. REVISÃO DE LITERATURA ........................................................................................................... 4 2.1 Aspectos da ovinocultura e criação de cordeiros ...................................................................... 4 2.2.2 Etiologia das infecções umbilicais em cordeiros ....................................................................... 6 2.2.3 Epidemiologia ............................................................................................................................. 6 2.2.4 Sinais clínicos .............................................................................................................................. 7 2.2.5 Métodos de diagnóstico ............................................................................................................ 8 2.2.6 Prognóstico ................................................................................................................................ 9 2.2.7 Ações de profilaxia e controle ................................................................................................. 9 2.2.8 Abordagem terapêutica e resistência bacteriana aos antimicrobianos .................................. 10 3. OBJETIVOS ................................................................................................................................... 12 4. MATERIAL E MÉTODOS ............................................................................................................ 13 4.1 Comitê de Ética e Uso dos Animais (CEUA)................................................................................ 13 4.2 Delineamento amostral ............................................................................................................ 13 4.3 Colheita e processamento de amostras ................................................................................... 14 4.4 Cultivo bacteriológico e fúngico: ................................................................................................ 14 4.5 Teste de sensibilidade microbiana in vitro dos isolados .............................................................. 15 4.6 Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) . 15 4.7 Análise estatística ..................................................................................................................... 16 5. RESULTADOS ............................................................................................................................ 17 5.1 Dados dos cordeiros amostrados .................................................................................................... 17 5.2 Isolamento de micro-organismos de origem bacteriana e fúngica ................................................ 18 5.3 Teste de sensibilidade microbiana in vitro ...................................................................................... 24 5.4 Análise estatística ..................................................................................................................... 28 6. DISCUSSÃO ............................................................................................................................... 31 7. CONCLUSÕES ............................................................................................................................ 37 8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................................................... 39 Anexo I - ................................................................................................................................................ 45 v BELLO, T.S. Etiologia microbiana e multirresistência aos antimicrobianos em isolados obtidos de infecções umbilicais em borregos diagnosticados por espectrometria de massas. Botucatu, SP, 2024. 51p. Dissertação (Mestrado) – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Campus de Botucatu, Universidade Estadual Paulista - UNESP. RESUMO 2 Os primeiros meses após o nascimento são considerados críticos na vida do cordeiro, em 3 virtude da elevada ocorrência de mortalidade secundária às infecções umbilicais, comumente 4 relacionadas ao consumo inadequado de colostro, deficiências na antissepsia umbilical pós-5 parto e manutenção dos animais recém-nascidos em ambientes com sujidades, fezes e umidade. 6 Apesar dos prejuízos causados na ovinocultura, número restrito de estudos tem investigado os 7 agentes causais de onfalopatias infecciosas em cordeiros, ficando restritos a relatos de caso e 8 com o diagnóstico em nível de espécie dos micro-organismos usualmente baseados em testes 9 fenotípicos convencionais. Diante deste cenário, o presente estudo investigou a etiologia 10 microbiana das infecções umbilicais em cordeiros - diagnosticada por espectrometria de massas 11 -, os escores de gravidade clínica das lesões umbilicais (escore 1 ou leve, escore 2 ou moderada 12 e escore 3 ou grave) e a ocorrência de multirresistência dos isolados aos antimicrobianos. Foram 13 coletados assepticamente suabes umbilicais de 128 cordeiros com sinais clínicos de infecções 14 umbilicais e de 41 cordeiros hígidos. Os suabes foram submetidos ao cultivo microbiológico, 15 teste de sensibilidade microbiana in vitro e identificação dos micro-organismos por 16 espectrometria de massas. Foram identificados 214 micro-organismos (bactérias e leveduras) 17 em amostras de infecção umbilical e 116 isolados em cordeiros sadios. Nos casos de infecções 18 umbilicais, foi observado predomínio do grupo das enterobactérias (87/214=41%), com 19 associação significante (p<0,05) da Escherichia coli (24/214=11%) em cordeiros com escores 20 2 e 3 de gravidade clínica. Em cordeiros sadios, ampla variedade de bactérias foi isolada com 21 número expressivo de micro-organismos gram-positivos, com predomínio de Desemzia incerta 22 (14/116=12%). Nas infecções umbilicais envolvendo bactérias gram-negativas, gentamicina foi 23 o antimicrobiano mais efetivo (106/131=81%), enquanto os isolados foram resistentes 24 principalmente a ampicilina (66/87=75%). Para as bactérias gram-positivas, a amoxicilina com 25 ácido clavulânico apresentou boa eficácia (20/26=77%). A multirresistência bacteriana foi 26 observada em 20% (36/182) dos isolados obtidos de infecção umbilical. Dentre 60 animais com 27 sinais clínicos compatíveis com complicações das infecções umbilicais (pneumonia, artrite, 28 sepse), 58% (35/60) evoluíram para óbito. Grande variedade de espécies de bactérias foram 29 identificadas nos animais amostrados, em cultura pura e/ou em associação, ressaltando a 30 complexidade etiológica das infecções umbilicais em cordeiros, com predomínio de 31 vi enterobactérias, e a necessidade de adoção de ações de profilaxia/controle da doença nos 32 criatórios. 33 Palavras-chave: onfalopatias infecciosas, cordeiros, etiologia, resistência bacteriana, MALDI-34 TOF MS 35 BELLO, T.S. Etiology and antimicrobial resistance in isolates from lamb's umbilical 36 infection diagnosed by mass spectrometry. Botucatu, SP, 2023. 51p. Dissertação 37 (Mestrado) – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Campus de Botucatu, 38 Universidade Estadual Paulista - UNESP. 39 ABSTRACT 40 The first months after birth are considered critical in the life of the sucking lamb, due to the 41 high occurrence of mortality secondary to umbilical infections, commonly related to inadequate 42 consumption of colostrum, deficiencies in postpartum umbilical antisepsis, and maintenance of 43 newborn animals in environments with dirt, feces, and moisture. Despite the losses in sheep 44 farming, a lack of studies has focused on the causal agents of umbilical infections in lambs, and 45 descriptions have been restricted to the report of cases and diagnosis at the species level of the 46 pathogens based on conventional phenotypic tests. Considering this scenario, the present study 47 investigated the bacterial and fungi etiology of umbilical infections in suckling lambs diagnosed 48 by mass spectrometry, the clinical scores of umbilical severity of infections (score 1 or mild, 49 score 2 or moderate and score 3 or severe), and multidrug resistance of isolates. Were 50 aseptically collected 128 and 41 umbilical samples from diseased and apparently healthy lambs, 51 respectively. All samples were subjected to microbiological culture, antimicrobial susceptibility 52 pattern, and identification of agents based on mass spectrometry. Two hundred and fourteen 53 bacteria and yeast species were identified among diseased lambs and 116 bacterial species from 54 apparently healthy animals. Enterobacteria group (87/214=41%), particularly Escherichia coli 55 (24/214=11%) showed significant association (p<0,05) in lambs with scores 2 and 3 at clinical 56 severity. Among healthy umbilical samples, a set of bacteria was identified, particularly 57 Desemzia incerta (14/116=12%). In animals with umbilical infection, gentamicin was the most 58 effective antimicrobial (106/131=81%) in gram-negative bacteria, whereas the isolates revealed 59 resistance mainly against ampicillin wasn’t effective (66/87=75%). Among the gram-positive 60 micro-organisms, amoxicillin/ clavulanic acid was effective (20/26=77%). Multidrug resistance 61 was observed among 20% (36/182) of lambs with umbilical infections. Among 60 animals 62 showing clinical signs compatible with complications secondary to umbilical infections 63 (pneumonia, arthritis, sepsis) 58% (35/60) died. A variety of bacteria were identified among 64 animals sampled, either in pure culture or in coinfections/cooccurrence, highlighting the nature 65 vii of umbilical infections in lambs, with a predominance of Enterobacteria group, and the need to 66 adopt measures to control/prevent the disease in farms. 67 68 *Keywords: infectious omphalopathies, lambs, etiology, bacterial resistance, MALDI-TOF 69 MS70 1 71 1. INTRODUÇÃO 72 73 A produção de produtos e subprodutos de origem ovina tem aumentado em todo o 74 mundo, incluindo carne, leite e produção de lã, particularmente por consumidores adeptos ao 75 sabor da carne ovina ou intolerantes ao leite bovino. Estima-se que o Brasil detenha cerca de 76 21,5 milhões de ovinos, concentrados principalmente nas regiões nordeste e sul do país 77 (Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística-IBGE, 2022). 78 Os processos infecciosos estão entre as principais causas de morbimortalidade nos 79 primeiros três meses de vida dos ruminantes (HOLMØY et al., 2012; NÓBREGA JR. et al., 80 2014; TORA et al., 2021; MEE, 2023). Em bezerros, a taxa de morbidade por enfermidades 81 infecciosas neste período pode atingir 73% dos animais. Entre as principais infecções em 82 cordeiros merece destaque as onfalopatias infecciosas, que podem evoluir para complicações 83 pulmonares, articulares, abscessos em órgãos e septicemias, com elevada mortalidade. Estima-84 se entre 6% e 31,3% a mortalidade de cordeiros relacionadas às infecções umbilicais 85 (HOLMØY et al., 2012). 86 A inadequada transferência de imunidade passiva pelo colostro é considerado o 87 principal fator de risco de mortalidade em cordeiros por causas infecciosas (incluindo 88 umbilicais) (BINNS et al., 2002; BARRY et al., 2022), aliada às deficiências na antissepsia 89 umbilical no pós-parto imediato, nascimento de animais fracos, má nutrição, e a permanência 90 dos animais recém-nascidos em ambientes sujos, úmidos, com excesso de matéria orgânica 91 (fezes) e variações bruscas de temperatura (GIADINIS et al., 2011; NÓBREGA JR. et al., 2014; 92 WIELAND et al., 2016). Hordofa et al. (2021) referiram que, nas regiões de clima tropical, a 93 temperatura e a umidade favorecem a transmissão e a multiplicação de micro-organismos 94 patogênicos, favorecendo infecções em ruminantes domésticos nos primeiros meses de vida. 95 Cordeiros acometidos por infecções nos primeiros meses de idade impactam 96 negativamente a produção, pois se tornam animais fracos, apresentam menor peso corporal 97 (com consequente menor remuneração pela carcaça), e requerem gastos adicionais com 98 assistência e tratamento (ROBINSON et al., 2015). 99 As onfalopatias de origem infecciosa em ruminantes domésticos - incluindo cordeiros - 100 apresentam etiologia complexa, principalmente de origem bacteriana, com predomínio de 101 enterobactérias (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae), estafilococos, estreptococos e certos 102 actinomicetos (Trueperella pyogenes) (HOLMØY et al., 2012; RUTHERFORD et al., 2014; 103 2 NÓBREGA JR. et al., 2014; RIBEIRO et al., 2015; CONSTABLE et al., 2016; MARTINS et 104 al., 2022). 105 As infecções umbilicais em ruminantes domésticos ocorrem por via ascendente, a partir 106 do contato do resquício do cordão umbilical com sujidades, matéria orgânica, solo, fezes e 107 utensílios de uso comum (WINDEYER et al., 2014; CONSTABLE et al., 2016; GOMES, 108 2021). Os patógenos se estabelecem primariamente na região umbilical dos cordeiros e, 109 comumente, se disseminam para outros órgãos, causando pneumonia, (poli)artrite, abscessos 110 em órgãos, encefalites e/ou sepse, com prognóstico reservado e alta mortalidade neonatal 111 (NÓBREGA JÚNIOR et al., 2014; SATO et al., 2021; SMISTAD et al., 2021). 112 Edema, dor à palpação e hiperemia do umbigo, com ou sem secreção purulenta aparente, 113 representam os sinais clínicos mais comuns das onfalopatias de origem infecciosa em 114 ruminantes domésticos (RUTHERFORD et al., 2014; STEERFORTH e VAN WINDEN, 115 2018), embora, frequentemente, os animais evoluam para sinais sistêmicos decorrentes da 116 disseminação dos patógenos (HOLMØY et al., 2012; NÓBREGA JÚNIOR et al., 2014). Em 117 bezerros bovinos, a gravidade das lesões umbilicais é classificada em escores: 1 (leve), 2 118 (moderada) e 3 (grave) (RODRIGUES et al., 2010; STEERFORTH e VAN WINDEN, 2018). 119 O diagnóstico de rotina das infecções umbilicais em cordeiros é baseado nos achados 120 clínico-epidemiológicos, incluindo o exame físico do umbigo e parâmetros fisiológicos dos 121 animais, além do cultivo microbiológico dos agentes (UNDERWOOD et al., 2015; 122 STEERFORTH; VAN WINDEN, 2018). No entanto, o diagnóstico em nível de espécies dos 123 agentes etiológicos identificados em infecções umbilicais em cordeiros tem sido fundamentado 124 usualmente em testes fenotípicos convencionais (RUTHERFORD et al., 2014; NÓBREGA 125 JÚNIOR et al., 2014; RIBEIRO et al., 2015). 126 O tratamento das infecções umbilicais em cordeiros tem sido baseado em 127 antimicrobianos de amplo espectro, com apresentação por via sistêmica, em virtude dos riscos 128 de disseminação linfo-hematógena dos patógenos (SCOTT et al., 2011; HOLMØY et al., 2012; 129 NÓBREGA JÚNIOR et al., 2014; UNDERWOOD et al., 2015). 130 Apesar do impacto econômico decorrente das complicações clínicas e mortalidade de 131 cordeiros secundárias às infecções umbilicais, estudos compreensivos sobre onfalopatias 132 infecciosas em cordeiros estão praticamente restritos a espécie bovina (STEERFORTH e 133 WINDEN, 2018; TORA et al., 2021; MARTINS et al., 2022) e a descrição de relatos de casos 134 em ovinos com diagnóstico dos agentes baseados em testes fenotípicos convencionais (BINNS 135 et al., 2002; REIS et al., 2009; NÓBREGA JÚNIOR et al., 2014; UNDERWOOD et al., 2015). 136 3 Ainda, na literatura consultada, não foram encontrados estudos que avaliassem a gravidade 137 clínica das infecções umbilicais em cordeiros, tampouco a associação dos escores de gravidade 138 das onfalopatias com os agentes etiológicos. Neste cenário, o presente estudo investigou a 139 etiologia microbiana das infecções umbilicais em cordeiros diagnosticada por espectrometria 140 de massas (Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry – 141 MALDI TOF MS), os escores de gravidade clínica das lesões umbilicais e a ocorrência de 142 multirresistência in vitro dos isolados aos antimicrobianos comumente utilizados no tratamento 143 da afecção. 144 37 987 988 989 990 991 992 993 994 995 996 997 998 999 1000 1001 1002 1003 1004 1005 1006 1007 1008 1009 7. CONCLUSÕES1010 1011 1012 Grande variedade de espécies de micro-organismos, particularmente de origem 1013 bacteriana, foram identificados nos animais amostrados, em cultura pura ou em 1014 associação, ressaltando a complexidade etiológica e o comportamento oportunista dos 1015 patógenos na gênese das infecções umbilicais em cordeiros; 1016 Enterobactérias (em especial E. coli) e outras bactérias gram-negativas (como espécies 1017 de Pseudomonas) foram os principais micro-organismos identificados por 1018 38 espectrometria de massas, reforçando a participação desse grupo de bactérias ambientais 1019 como agentes primários de infecções umbilicais em cordeiros; 1020 Foi observada associação significante entre o isolamento de E. coli e a ocorrência de 1021 casos moderados e graves de infecção umbilical em cordeiros, indicando elevada 1022 patogenicidade/ virulência deste patógeno nas onfalopatias em cordeiros; 1023 1024 Grande variedade de micro-organismos foram isolados em cordeiros sadios, com alta 1025 frequência de bactérias gram-positivas (estafilococos, estreptococos e enterococos), 1026 reforçando a presença destes grupos de micro-organismos como pertencentes a 1027 microbiota de mucosas em animais domésticos, aumento significativo e relevante de 1028 bactérias gram-positivas e diminuição visível do isolamento de enterobactérias. 1029 1030 Várias espécies dos gêneros Raoutella, Rahnella, Massilia, Achromobacter, 1031 Acinetobacter, Arthrobacter, Kluyvera, Leclercia, Siccibacter, Oceanobacillus e 1032 Wickerhamomyces foram identificadas pela primeira vez como agentes primários em 1033 infecções umbilicais em cordeiros devido ao uso no diagnóstico da técnica molecular 1034 de espectrometria de massas, que apresenta alta capacidade de distinção de espécies 1035 bacteriana e leveduras; 1036 1037 Gentamicina e marbofloxacino foram os antimicrobianos de melhor eficácia in vitro 1038 diante dos micro-organismos isolados e a amoxicilina com ácido clavulânico foi o de 1039 melhor eficácia para bactérias gram-positivas, sugerindo que estes fármacos sejam 1040 considerados em abordagens terapêuticas nas infecções umbilicais em cordeiros; 1041 Alta resistência múltipla aos antimicrobianos (20%) foi observada nos isolados 1042 bacterianos obtidos das infecções umbilicais em cordeiros, particularmente para 1043 ampicilina, sulfa/trimetoprim e tetraciclina, alertando para a necessidade do uso racional 1044 de antimicrobianos no tratamento de infecções em cordeiros; 1045 Elevado desfecho letal (58%) foi observado nos cordeiros amostrados que apresentaram 1046 graves complicações clínicas (poliartrite, pneumonia, sepse) secundárias às infecções 1047 umbilicais, indicando a necessidade de adoção de ações sistemáticas de 1048 profilaxia/controle nos criatórios amostrados nas onfalopatias, em especial, higiene do 1049 ambiente, antissepsia umbilical e adequada ingestão de colostro nos cordeiros recém-1050 nascidos. 1051 1052 39 8. 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MATERIAL E MÉTODOS 4.1 Comitê de Ética e Uso dos Animais (CEUA) 4.2 Delineamento amostral 4.3 Colheita e processamento de amostras 4.4 Cultivo bacteriológico e fúngico: 4.5 Teste de sensibilidade microbiana in vitro dos isolados 4.6 Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) 4.7 Análise estatística 5. RESULTADOS 5.1 Dados dos cordeiros amostrados 5.2 Isolamento de micro-organismos de origem bacteriana e fúngica 5.3 Teste de sensibilidade microbiana in vitro 5.4 Análise estatística 6. DISCUSSÃO 7. CONCLUSÕES 8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS