2024 

MATEUS JOSÉ DUTRA 

 

 

INDUÇÃO DA MORTE CELULAR IMUNOGÊNICA EM 

LINHAGENS CELULARES DE LEUCOPLASIA E CARCINOMA 

DE CÉLULAS ESCAMOSAS ORAL SOB TRATAMENTO DE 

ARTEMISININA E CISPLATINA 

 



 
 

   
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

São José dos Campos 

2024 

MATEUS JOSÉ DUTRA 

 

 

INDUÇÃO DA MORTE CELULAR IMUNOGÊNICA EM LINHAGENS CELULARES 

DE LEUCOPLASIA E CARCINOMA DE CÉLULAS ESCAMOSAS ORAL SOB 

TRATAMENTO DE ARTEMISININA E CISPLATINA 

 

Dissertação apresentada ao Instituto de Ciência e Tecnologia, Universidade Estadual 

Paulista (Unesp), Campus de São José dos Campos, como parte dos requisitos para 

obtenção do título de MESTRE, pelo Programa de Pós-Graduação em CIÊNCIAS 

APLICADAS À SAÚDE BUCAL. 

Área: Patologia e Diagnóstico Bucal. Linha de pesquisa: Inflamação, reparação tecidual 

e patologia do sistema estomatognático. 

Orientadora: Profa. Assoc. Estela Kaminagakura Tango 



Instituto de Ciência e Tecnologia [internet]. Normalização de tese e dissertação
[acesso em 2024]. Disponível em http://www.ict.unesp.br/biblioteca/normalizacao

Apresentação gráfica e normalização de acordo com as normas estabelecidas pelo Serviço de
Normalização de Documentos da Seção Técnica de Referência e Atendimento ao Usuário e
Documentação (STRAUD).

Ficha catalográfica elaborada pela Biblioteca Prof. Achille Bassi e Seção Técnica de Informática, ICMC/USP 
 com adaptações - STATI, STRAUD e DTI do ICT/UNESP. 

 Renata Aparecida Couto Martins CRB-8/8376

Dutra, Mateus José
   Indução da morte celular imunogênica em linhagens celulares de leucoplasia
e carcinoma de células escamosas oral sob tratamento de artemisinina e
cisplatina / Mateus José Dutra. - São José dos Campos : [s.n.], 2024.
   95 f. : il.

   Dissertação (Mestrado) - Pós-Graduação em Ciências Aplicadas à Saúde Bucal -
Universidade Estadual Paulista (Unesp), Instituto de Ciência e Tecnologia,
São José dos Campos, 2024.
   Orientadora: Estela Kaminagakura Tango.
   

   1. Morte celular imunogênica. 2. Células apresentadoras de antígenos. 3.
Leucoplasia oral. 4. Carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço. 5.
Imunomodulação. I. Tango, Estela Kaminagakura, orient. II. Universidade
Estadual Paulista (Unesp), Instituto de Ciência e Tecnologia, São José dos
Campos. III. Universidade Estadual Paulista 'Júlio de Mesquita Filho' -
Unesp. IV. Universidade Estadual Paulista (Unesp). V. Título.



 
 

   
 

IMPACTO POTENCIAL DESTA PESQUISA 

 

O impacto desta pesquisa está relacionado a uma nova forma de tratamento da 

Leucoplasia Oral, que é uma lesão potencialmente maligna, que acomete a boca de 

indivíduos e pode se transformar em um Carcinoma de Células Escamosas Oral que 

possui um pior prognóstico. A Leucoplasia Oral não possui protocolos de tratamentos 

estabelecidos, assim, a presente pesquisa objetivou verificar se dois compostos 

seriam uteis ao tratamento da desta lesão e do Carcinoma de Células Escamosas 

Oral, que são duas doenças bucais de importância em saúde pública a nível mundial. 

 

POTENTIAL IMPACT OF THIS RESEARCH 

 

The impact of this research is related to a new form of treatment for Oral Leukoplakia, 

which is a potentially malignant lesion that affects the mouth of individuals and can 

transform into Oral Squamous Cell Carcinoma, which has a worse prognosis. Oral 

Leukoplakia does not have established treatment protocols, therefore, the present 

research aimed to verify whether two compounds would be useful in the treatment of 

this lesion and Oral Squamous Cell Carcinoma, which are two oral diseases of 

importance in public health worldwide. 

 

 

 

 

 

 

 

  



 
 

   
 

 

 

 

 

BANCA EXAMINADORA 

 

 

Prof. Assoc. Estela Kaminagakura Tango (Orientadora) 

Universidade Estadual Paulista (Unesp)  

Instituto de Ciência e Tecnologia 

Campus de São José dos Campos 

 

 

Prof. Dr. José Jara Sandoval 

Universidade de Chile  

Faculdade de Odontologia 

Santiago 

 

 

Prof. Assoc. Luana Marotta Reis de Vasconcellos  

Universidade Estadual Paulista (Unesp)  

Instituto de Ciência e Tecnologia 

Campus de São José dos Campos 

 

 

São José dos Campos, 02 de fevereiro de 2024. 



 
 

   
 

DEDICATÓRIA  

 

 

 Dedico este trabalho a Deus, que nos dá oportunidades diárias de recomeçar, 

forças para seguir e perseverança para não desistir. 

 Ao meu pai, Clóvis, e à minha mãe, Dulcimar, que me deram todo o suporte 

necessário nesta trajetória, sempre me estimularam e me encorajaram para que eu 

seguisse trilhando meu caminho e alcançando os meus sonhos, sem vocês isso não 

seria possível, amo vocês. 

 À minha irmã, Aline, e meus dois sobrinhos, Lorenzo e Luiza, pelo apoio e 

compreensão de sempre, também dedico esta conquista a vocês. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 
 

   
 

AGRADECIMENTOS  

 

 

 O mestrado foi um grande desafio na minha formação profissional, e com o 

apoio e incentivo de inúmeras pessoas, essa trajetória fluiu mais tranquila. Assim, 

dedico algumas páginas do meu trabalho para agradecer a todos que contribuíram 

direta ou indiretamente na minha formação. 

 Agradeço ao ICT Unesp e ao diretor Prof. Assoc. Cesar Rogério Pucci, também  

ao Programa de Pós-graduação em Ciências Aplicadas à Saúde Bucal (CASB) e ao 

coordenador Prof. Assoc. Alexandre Luiz Souto Borges.  

 Agradeço a Deus pela vida, saúde e coragem que me concede diariamente. 

Embora desafios tenham surgido, Ele sempre mostrou o caminho a ser seguido. 

Também, agradeço a Ele pela família que me presenteou, que sempre esteve ao meu 

lado e me incentivando. 

 Assim, agradeço ao meu pai, Clóvis, e à minha mãe, Dulcimar, que nunca 

mediram esforços para que eu alcançasse meus sonhos, tiveram paciência em me 

ouvir por ligações, entenderam minhas longas ausências e sempre me deram suporte 

e energia para seguir em frente.   

 À minha irmã Aline, que sempre foi uma grande companheira, incentivadora e 

minha fiel amiga, que me escuta, me entende e compreende. 

 Aos meus sobrinhos, Lorenzo e Luiza, que compreenderam a minha distância 

e ausência, o “ti” ama vocês. 

 A todos da minha família, minha vó, tios e primos que sempre me desejaram 

sucesso e me enviaram boas energias. Também aos meus avós que já partiram mas 

que sempre me incentivaram quando criança. 

 À minha orientadora e amiga, professora Estela, obrigado pelo apoio, 

ensinamentos e orientações ao longo deste tempo. Diariamente me mostra caminhos 

que me tornam melhor como profissional e como pessoa. É uma referência pra mim. 

Agradeço o acolhimento, companheirismo e amizade que cultivamos neste período e 

por todo o ensinamento que me proporcionou em Estomatologia e Patologia, 

especialidades que me sinto realizado em atuar como cirurgião dentista. Onde eu 

florescer lá você estará!! 



 
 

   
 

 A todos os professores que contribuíram e contribuem com a minha formação, 

em especial as professoras da Estomatologia e Patologia Oral. Registro meu 

agradecimento em especial à professora Ana Lia, que me ensinou tanto de Patologia 

e à professora Janete com quem dividimos os desafios na clínica semanalmente. 

Também agradeço à professora Luana, que sempre me deu apoio e orientações para 

que esse trabalho fosse executado. 

 Agradeço também à professora Daniela Adorno, da Universidade do Chile, que 

se disponibilizou em me receber para o intercâmbio, e me recebeu tão bem, tornou 

minha experiencia incrível e contribuiu muito na minha formação profissional e 

pessoal, além disso, se tornou uma grande amiga, à quem eu tenho muita admiração. 

 Agradeço à Universidade do Chile, lugar que me acolheu por um período do 

meu mestrado, e a todos professores da UChile, que tornaram minha experiência a 

melhor possível. Agradeço aos professores Gina, Gabriel, Íris, Ana, Juan Pablo, José 

J., José S. e Vicente Torres, obrigado pelos ensinamentos e amizade, e aos amigos 

que fiz neste período, Maca, Camila, Consuelo, Javiera, Karla e Tânia, obrigado pela 

troca de experiências nas clínicas e laboratórios.  

 Agradeço aos professores José Jara e Vicente Torres, que gentilmente 

cederam as células que foram essenciais para que esse estudo fosse executado. 

 A todos os funcionários do ICT Unesp, especialmente à Michelle, pelos 

milhares cafezinhos, confraternizações e conversas diárias. Também ao Sérgio, que 

sempre esteve pronto para ajudar quando fosse preciso.  

 Aos meus professores e a Universidade de Passo Fundo, que me formaram 

como cirurgião-dentista, especialmente à professora Gisele que me apresentou ao 

mundo da Patologia e Estomatologia, e que sempre me incentivou a trilhar esse 

caminho. Também a professora e amiga Daniela Corralo, com quem trabalhei muito e 

fiz minha primeira iniciação científica. 

 Aos alunos do ICT Unesp que contribuí na formação neste período e a todos 

os pacientes que por mim passaram, na clínica e no laboratório de patologia, sem 

vocês nada faria sentido, muito obrigado. 

 Aos meus colegas de pós graduação Maria Leticia, Charles, Kamilla, Luiza, 

Natalia, Bruna, Genesis, Gabi, Thais, Fernanda, Leticia, Lucas, Fábia e Jaque... são 

muitos nomes para recordar, mas obrigado pelos momentos de descontração e 

risadas diárias. 



 
 

   
 

 A todos os alunos de IC da professora Estela, que sempre estiveram dispostos 

à ajudar, Brunna, Isa, Nathan, Gustavo, Daniela... 

 A todos os colegas e alunos do LEIC, laboratório em que executei este estudo, 

obrigado pela ajuda, apoio e trocas neste período. 

 Aos meus amigos que sempre compreenderam a minha distância e ausência, 

Karol, Lucas, Weigleson, Iara, Bia, Karen, Jayne, Daniela, Ana, Luís, Ale, Pati, Nati, 

Pati B., Laís, Lucas e Milena, dos quais muitos são colegas dentistas, amigos que fiz 

durante a minha formação e que sempre levarei comigo. 

 À CAPES pela concessão da minha bolsa de mestrado. 

 Ao Programa Escala da Associação de Universidades do Grupo Montevidéu 

pela concessão da minha bolsa de internacionalização. 

 Ao Laboratório de Estudos Interdisciplinar em Células (LEIC) onde esta 

pesquisa foi desenvolvida. 

 À Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) pelo 

financiamento da pesquisa (processo 20/07375-3).  

 

  



 
 

   
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

“A sabedoria suprema é ter sonhos bastante grandes para não se perderem de vista 

enquanto os perseguimos.” William Faulkner 

 

 

 



 
 

   
 

RESUMO 

 
 
Dutra MJ. Indução da morte celular imunogênica em linhagens celulares de 
leucoplasia e carcinoma de células escamosas oral sob tratamento de artemisinina e 
cisplatina [dissertação]. São José dos Campos (SP): Universidade Estadual Paulista 
(Unesp), Instituto de Ciência e Tecnologia; 2024. 

 
 

Novos fármacos, como a artemisinina (ART), podem ser promissores no tratamento 

de lesões potencialmente malignas (LPM) e podem ser úteis quando usados em 

associação com outros quimioterápicos, especialmente na redução dos seus efeitos 

colaterais. A leucoplasia oral (LO) é a LPM mais comum da cavidade bucal e, pode 

evoluir para um carcinoma de células escamosas oral (CCEO). Não há terapia para 

evitar a sua transformação maligna, a quimioprevenção pode iniciar a morte celular 

imunogênica (MCI) que ativa o sistema imunológico para que reconheça e elimine as 

células malignas ou pré-malignas, sendo um potencial tratamento para as LPM. O 

presente estudo objetivou avaliar se a ART e a cisplatina (CSP) associadas ou não 

seriam capazes de induzir a MCI em linhagens celulares de LO (DOK) e CCEO (SCC-

180). Material e métodos: As linhagens celulares HaCat (controle), DOK e SCC-180 

foram tratadas por ART e CSP de forma combinada ou isolada, a fim de analisar a 

citotoxicidade e a genotoxicidade destes fármacos, além da capacidade destes em 

reduzir a migração celular e, se os compostos seriam capazes de induzir a expressão 

da proteína box de alta mobilidade (HGMB-1), caspase 3, 8, 9, e Calreticulina (CALR). 

Resultados: Em todas as linhagens celulares a CSP e CSP+ART causaram uma 

resposta dose dependente, apresentando maior citotoxicidade com doses mais altas, 

o que não foi observado com a ART. A formação de micronúcleos não foi observada 

no teste de genotoxicidade. A taxa de migração foi reduzida com as concentrações de 

IC50 de CSP e ART+CSP para as células de CCEO. Não foram encontradas 

expressões significativas de proteínas relacionadas à MCI ou apoptose nas linhagens 

de LO e CCEO, tratadas com ART, CSP ou ART+CSP, indicando que outro tipo de 

morte celular possa ter ocorrido. Conclusão: A MCI e a apoptose não foram 

evidenciadas como forma de morte celular após as linhagens de LO e CCEO 

receberem tratamentos com ART, CSP e a associação de ambas. Efeitos genotóxicos 

não foram observados nas doses testadas. O tratamento de CSP e ART+CSP foi 



 
 

   
 

capaz de reduzir a migração de células de CCEO. Também concluímos que novos 

estudos são necessários para elucidar se a ART e CSP podem ocasionar a MCI ou 

apoptose em linhagens celulares de LO e CCEO. 

 
 
Palavras-chave: Morte celular imunogênica; Células apresentadoras de antígenos; 
Leucoplasia oral; Carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço; 
Imunomodulação. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



 
 

   
 

ABSTRACT 

 
 
Dutra MJ. Induction of immunogenic cell death in leukoplakia and oral squamous cell 
carcinoma cell lines under artemisinin and cisplatin treatment [dissertation]. São José 
dos Campos (SP): São Paulo State University (Unesp), Institute of Science and 
Technology; 2024. 

 
 

New drugs, such as artemisinin (ART), may be promising in the treatment of potentially 
malignant lesions (PML) and may be useful when used in combination with other 
chemotherapy drugs, especially in reducing their side effects. Oral leukoplakia (OL) is 
the most common LPM of the oral cavity and can progress to oral squamous cell 
carcinoma (OSCC). There is no therapy to prevent its malignant transformation, 
chemoprevention can initiate immunogenic cell death (ICM) that activates the immune 
system to recognize and eliminate malignant or pre-malignant cells, being a potential 
treatment for LPM. The present study aimed to evaluate whether or not ART and 
cisplatin (CSP) combined would be capable of inducing MCI in LO (DOK) and CCEO 
(SCC-180) cell lines. Material and methods: HaCat (control), DOK and SCC-180 cell 
lines were treated by ART and CSP in combination or alone, in order to analyze the 
cytotoxicity and genotoxicity of these drugs, in addition to their ability to reduce cell 
migration and, whether the compounds would be able to induce the expression of high 
mobility box protein (HGMB-1), caspase 3, 8, 9, and Calreticulin (CALR). Results: In 
all cell lines, CSP and CSP+ART caused a dose-dependent response, showing greater 
cytotoxicity at higher doses, which was not observed with ART. The formation of 
micronuclei was not observed in the genotoxicity test. The migration rate was reduced 
with the IC50 concentrations of CSP and ART+CSP for OSCC cells. No significant 
expressions of proteins related to MCI or apoptosis were found in the LO and CCEO 
lines, treated with ART, CSP or ART+CSP, indicating that another type of cell death 
may have occurred. Conclusion: MCI and apoptosis were not evidenced as a form of 
cell death after the LO and CCEO lines received treatments with ART, CSP and the 
combination of both. Genotoxic effects were not observed at the doses tested. CSP 
and ART+CSP treatment was able to reduce OSCC cell migration. We also conclude 
that new studies are necessary to elucidate whether ART and CSP can cause MCI or 
apoptosis in LO and CCEO cell lines. 
 
 
Keywords: Immunogenic cell death; Antigen presenting cells; Oral leukoplakia; 
Squamous cell carcinoma of the head and neck; Immunomodulation. 
 
 
 



 
 

   
 

 LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS 

 

 

ART 

ATP 

CALR 

CCEO 

CSP 

DAMPs 

ELISA 

ERO 

HMGB1 

IL-1β 

IL-18 

LO 

LPM 

MCI 

NM 

RE 

Artemisinina 

Adenosina trifosfato 

Calreticulina 

Carcinoma de células escamosas oral 

Cisplatina 

Damage associated molecular patterns 

Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay  

Espécies reativas de oxigênio  

High mobility group box protein 1 

Interleucina 1 beta 

Interleucina 18 

Leucoplasia oral  

Lesões potencialmente malignas 

Morte celular imunogênica 

Neoplasia maligna 

Retículo endoplasmático  

  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 
 

   
 

    

SUMÁRIO 

 
 

1 INTRODUÇÃO ................................................................................................ 15 

2 REVISÃO DE LITERATURA ........................................................................... 19 

2.1 Leucoplasia Oral ......................................................................................... 19 

2.2 Carcinoma de Células Escamosas Oral ................................................... 21 

2.3 Morte Celular Imunogênica ........................................................................ 23 

2.4 Artemisinina ................................................................................................ 25 

2.5 Cisplatina .................................................................................................... 26 

2.6 Associação de Compostos ........................................................................ 28 

3 PROPOSIÇÃO ................................................................................................ 30 

3.1 Objetivo geral:............................................................................................. 30 

3.2 Objetivos específicos: ................................................................................ 30 

4 MATERIAL E MÉTODOS ................................................................................ 32 

4.1 Seleção das linhagens celulares e divisão dos grupos experimentais . 32 

4.2 Cultura celular............................................................................................. 32 

4.3 Diluição dos compostos ............................................................................ 33 

4.4 Teste de viabilidade celular ....................................................................... 34 

4.5 Teste de genotoxicidade ............................................................................ 35 

4.6 Teste de migração celular .......................................................................... 35 

4.7 Ensaio de ELISA ......................................................................................... 36 

4.8 Forma de análise dos resultados .............................................................. 38 

5 RESULTADO .................................................................................................. 39 

5.1 Viabilidade celular ...................................................................................... 39 

5.1.1 Linhagem HaCat ...................................................................................... 39 

5.1.2 Linhagem DOK ......................................................................................... 42 

5.1.3 Linhagem SCC-180 .................................................................................. 46 

5.2 Teste de genotoxicidade ............................................................................ 48 

5.3 Teste de migração celular .......................................................................... 50 

5.3.1 Linhagem HaCat ...................................................................................... 50 

5.3.2 Linhagem DOK ......................................................................................... 53 

5.3.3 Linhagem SCC-180 .................................................................................. 56 



 
 

   
 

5.4 Expressão de proteínas ............................................................................. 59 

5.4.1 Linhagem HaCat ...................................................................................... 59 

5.4.2 Linhagem DOK ......................................................................................... 65 

5.4.3 Linhagem SCC-180 .................................................................................. 71 

6 DISCUSSÃO ................................................................................................... 78 

7 CONCLUSÃO ................................................................................................. 83 

REFERÊNCIAS .................................................................................................. 84 

 

 



15 
 

   
 

1 INTRODUÇÃO 

 

 

 Novos meios e fármacos para o tratamento de NM ou das LPM devem ser 

estudados para a melhora no prognóstico e na qualidade de vida dos pacientes (Hsiao, 

Liu, 2010). Fármacos de origem natural apresentam vantagens no tratamento de NM, 

como a redução de efeitos colaterais no decorrer da terapia. A ART é extraída de uma 

planta medicinal que age contra diversas doenças, principalmente contra a malária e, 

também apresenta uma ação antineoplásica (Efferth et al., 2001; Efferth et al., 2003; 

Reungpatthanaphong, Mankhetkorn, 2002; Woerdenbag et al., 1993). Por possuir 

origem natural, a ART é um composto muito estudado para ser empregado no 

tratamento do câncer, pois possui grande importância na redução dos efeitos 

colaterais quando comparado aos quimioterápicos empregados atualmente (Santos 

et al., 2020). 

  A ART foi relacionada com eventos importantes no tratamento de NM. Ela 

permeia a membrana celular e reage com o ferro das células produzindo ERO, que 

induz o estresse oxidativo celular e a apoptose, conferindo citotoxicidade e gerando 

um efeito citostático sobre células malignas, ocasionando uma desorganização do 

DNA, afetando o ciclo, a divisão e o crescimento das células, promovendo perda da 

integridade e a morte celular (Jia et al., 2016; Lang et al., 2019; Letis et al., 2017; Tin 

et al., 2012; Wong et al., 2017), sendo propriedades importantes para o tratamento de 

NM. Ainda, o estresse oxidativo pode ocasionar a MCI, que é um meio promissor no 

tratamento do câncer e das LPM (Efferth et al., 2011; Slezakova, Ruda-Kucerova, 

2017).  

 Estudos in vitro e in vivo mostraram que o composto teve ação antineoplásica 

contra vários tipos de câncer (Jia et al., 2016; Letis et al., 2017; Wong et al., 2017) e 

foi capaz de inibir a formação de metástases (Feng et al., 2016; Li et al., 2017) além 

de, ter ocasionado a morte de células de NM de boca em um estudo in vitro 

(Yamachika et al., 2004) demonstrando um potencial para ser empregado como 

quimioterápico juntamente com os disponíveis atualmente, à exemplo da CSP. 

 A CSP é um quimioterápico à base de metais muito utilizada contra uma ampla 

gama de NM, como as de testículo, ovário, câncer de bexiga, pulmão, colo do útero, 

câncer gástrico e cabeça e pescoço (Ho et al., 2016; Shen et al., 2012). Atua no DNA 



16 
 

   
 

da célula, onde se liga ao DNA genômico ou mitocondrial, criando alterações que 

interrompem a replicação, ativando vias de transdução que levam à necrose ou 

apoptose da célula (Achkar et al., 2018). Porém, mudanças genéticas e epigenéticas 

podem acarretar a resistência da neoplasia ao fármaco, especialmente pelo aumento 

da capacidade de reparo a danos ao DNA, pela inibição da via de apoptose e pela 

própria inativação da CSP (Shen et al., 2012). Outra limitação importante do 

tratamento com CSP são os efeitos colaterais como nefrotoxicidade, ototoxicidade, 

hepatotoxicidade e neurotoxicidade (Oun et al., 2018). 

 Especialmente para reduzir a resistência da CSP pelas NM e para diminuir os 

efeitos colaterais do tratamento, tem-se estudado a terapia combinada com outros 

fármacos que também apresentam propriedades antineoplásicas, principalmente em 

associação com compostos de origem natural. Essas estratégias terapêuticas têm 

sido investigadas para o tratamento de diversas NM (Santos et al., 2020). 

 As terapias combinadas de fármacos podem reduzir as doses e a toxicidade, 

modificar a biodisponibilidade e alterar as propriedades físico-químicas, gerando 

efeitos sinérgicos e potencializando o tratamento (Eling et al., 2015). O artemeter, 

derivado da ART, quando combinado com paclitaxel, aumentou o valor terapêutico 

deste quimioterápico e diminuiu a sua toxicidade (Li et al., 2014), a ART e seus 

derivados podem ser úteis quando associados a quimioterápicos atualmente 

disponíveis (Li et al., 2021).  

 A CSP associada com diidroartemisinina, um outro derivado da ART, aumentou 

significativamente a quantidade de células apoptóticas em linhagens celulares de 

hepatocarcinoma mesmo com a redução da dosagem dos quimioterápicos. A 

diidroartemisinina atuou como uma sensibilizadora antitumoral da CSP (Rao et al., 

2022). 

 Os tratamentos para as NM com os quimioterápicos empregados atualmente, 

como o caso da CSP, geram a morte celular por apoptose, que ocorre de forma 

silenciosa, vista como fisiológica para o sistema imune, onde as células sofrem 

alterações citoplasmáticas, nucleares e alterações na permeabilidade da membrana 

plasmática, e então formam-se corpos apoptóticos que são rapidamente eliminados 

por fagocitose, não provocando a geração da imunidade antitumoral que é formada 

pela MCI (Ahmed, Tait, 2020; Kroemer et al., 2022; Messmer et al., 2019).  



17 
 

   
 

 Especificamente, a MCI é uma forma de morte celular e quando ocorre em 

células malignas liberam antígenos que ativam o sistema imunológico adaptativo 

(Kepp et al., 2014; Vanmeerbeeg et al., 2020), gerando resposta imune especifica ao 

tumor para que posteriormente as células de defesa possam atuar no reconhecimento 

e eliminação das células (Diederich, 2019; Galluzzi et al., 2016; Kroemer et al., 2013; 

Obeid et al., 2007; Troitskaya et al., 2022; Vanmeerbeeg et al., 2020). A MCI é 

reconhecida como imunogênica pelo sistema imune pois induz uma imunidade 

antitumoral além de melhorar a eficácia da terapia empregada no tratamento de NM. 

Esse método de morte celular ganhou um enfoque de estudos no ramo da 

imunoncologia devido às suas contribuições no tratamento do câncer (Garg et al., 

2013; Kroemer et al., 2022). 

 Assim, fármacos que induzam a MCI são promissores na terapia de NM e das 

LPM. As células moribundas, que entram neste tipo de morte celular, expõem 

superficialmente algumas moléculas como CALR, proteínas de choque térmico 

(HSP70 e HSP90), ATP e o HMGB1, sendo importantes para evidenciar se os 

fármacos empregados podem ocasionar a MCI (Ahmed, Tait, 2020; Kroemer et al., 

2022).  

 A ART já foi relacionada com eventos ligados à MCI (Slezakova, Ruda-

Kucerova, 2017), bem como a CSP e seus derivados (Hato et al., 2014; Martins et al., 

2011), sinalizando que podem ser fármacos alternativos no tratamento imunogênico 

contra LPM e o CCEO (Petroni et al., 2021).  

 As LPM da boca, apresentam-se, na maioria das vezes, como placas brancas 

(leucoplasia) ou vermelhas (eritroplasia) (WHO, 2022). O termo LO é designado para 

uma mancha ou placa branca, não caracterizada clínica ou patologicamente como 

outra doença, não sendo um diagnóstico histopatológico (Shafer, Waldron, 1961). As 

LO são consideradas LPM, pois mesmo que as lesões sejam pequenas, estas já 

podem apresentar elevados graus de displasia epitelial ou até mesmo carcinomas, 

favorecendo a sua evolução maligna, culminando posteriormente em um CCEO 

(Warnakulasuriya, Ariyawardana, 2016; Woo et al., 2014). 

 A porcentagem de LO que se transformam em malignas é muito ampla, 

variando de 1,1 até 40,8% (Aguirre-Urizar et al., 2021), podendo evoluir para um 

CCEO ou não, entretanto quanto maior for o grau de displasia epitelial, maiores são 

as chances de malignização (Chaturvedi et al., 2020). Alguns autores indicam que 



18 
 

   
 

lesões com displasia epitelial moderada ou severa devem ser totalmente removidas, 

sendo uma limitação para LO de grande extensão (Neville, Day, 2002). Portanto, não 

há um protocolo estabelecido de tratamentos eficazes para a LO, nem para a 

prevenção da sua transformação maligna, tendo o manejo e o acompanhamento 

clínico da LO variando de acordo com profissionais e pela própria literatura (Mehanna 

et al., 2009). 

 O CCEO corresponde à cerca de 90% das NM de cabeça e pescoço (Kong, 

Hong, 2015), sendo a NM mais comum da boca (Ferlay et al., 2020). No ano de 2020, 

esperava-se que 377.713 novos casos tenham surgido em todo o planeta  (Ferlay et 

al., 2020). Geralmente, apresenta-se como uma úlcera que não cicatriza, mas placas 

eritematosas também podem ser uma forma de apresentação do CCEO (Aguirre-

Urizar et al., 2021; Chi et al., 2015; Neville, Day, 2002). 

 O CCEO possui um curso clínico desafiador, implicando na piora da qualidade 

de vida e a redução de sobrevida de seus portadores, além disso, o tratamento é 

complexo, requerendo uma equipe multidisciplinar, e pode gerar sequelas mutilantes, 

afetando a função e a estética (Valdez, Brennan, 2018). 

O consumo de bebidas alcoólicas e tabaco estão fortemente relacionados aos 

casos de LO e CCEO, principalmente se estas dependências estiverem associadas  

(Warnakulasuriya et al., 2007). Evitar a exposição a esses produtos é a principal forma 

de prevenção do CCEO, também, a detecção precoce do CCEO e das LPM tem um 

papel fundamental em relação a um melhor prognóstico e previsibilidade de 

tratamento destes pacientes, especialmente devido a taxa de mortalidade gerada pelo 

CCEO, que atinge 45 a 55% dentro dos primeiros cinco anos (Ferlay et al., 2020), 

justamente por as lesões se apresentarem em estágios avançados pelo diagnóstico 

tardio, reduzindo as chances de sucesso do tratamento que é feito por meio de 

cirurgias, radioterapia, quimioterapia ou associação das técnicas (Chow et al., 2016). 

. 



19 
 

   
 

2 REVISÃO DE LITERATURA 

 

 

 Produtos naturais e seus derivados têm sido estudados por muitos anos para 

serem empregados nos tratamentos de diversas doenças, especialmente por suas 

vantagens como baixa toxicidade, efeitos colaterais reduzidos e a ampla atividade 

biológica que possuem. Por 20 anos consecutivos, institutos norte-americanos 

contribuíram na análise de extratos de mais de 15.000 espécies de plantas, buscando 

identificar atividade antineoplásica em compostos naturais (Weaver, 2014). 

 Em triagens como estas, extratos naturais foram identificados com 

propriedades antineoplásicas e estudados a fundo, alguns estão sendo empregados 

atualmente no tratamento  de NM (Efferth et al., 2001; Efferth et al., 2003; 

Reungpatthanaphong, Mankhetkorn, 2002; Woerdenbag et al., 1993). Estas 

descobertas têm grande impacto no tratamento quimioterápico, pois estes compostos 

podem agir causando a MCI, ativando o sistema imunológico adaptativo, gerando 

resposta imune contra o tumor (Kepp et al., 2014; Vanmeerbeeg et al., 2020), 

diferentemente dos quimioterápicos atuais empregados. Outro grande impacto dos 

quimioterápicos de origem natural é que geram menos efeitos colaterais como a 

nefrotoxicidade, ototoxicidade, hepatotoxicidade e neurotoxicidade e, resistência ao 

fármaco, que é comum com CSP, um composto a base de metais (Ho et al., 2016; 

Oun et al., 2018; Shen et al., 2012). 

Embora o tratamento principal do CCEO seja por meio de cirurgia, quando a 

quimioterapia é empregada, a CSP é o fármaco de escolha (Kong, Hong, 2015; de 

Castro et al., 2018; Li et al., 2020). Sabendo das limitações deste quimioterápico, 

fármacos de origem natural podem ser úteis no tratamento do CCEO, sendo uma 

possível forma de tratamento inclusive das LPM, que apresenta um potencial de 

transformação maligna, e não possui tratamento estabelecido (Aguirre-Urizar et al., 

2021). 

 

 

2.1 Leucoplasia Oral 

 

 



20 
 

   
 

 As LPM ou “distúrbios potencialmente malignos orais” quando ocorrem podem 

revelar histologicamente uma displasia epitelial ou um CCEO, por isso as LPM são 

denominadas qualquer anormalidade da mucosa oral associada a um risco 

aumentado de desenvolver câncer oral (Warnakulasuriya et al., 2020). As LPM são 

observadas em até 4,47% da população mundial, sendo a LO a mais comum, com 

prevalência de 4,11% (Carrard, Van der Waal, 2018; Mello et al., 2018). A presença 

da displasia epitelial nas LPM é utilizada como um fator indicativo que pode ocorrer a 

transformação maligna destas lesões (Warnakulasuriya et al., 2007). Como exemplo, 

se a displasia epitelial for observada na LO, a sua probabilidade de transformação 

maligna é de 15,3% (Stojanov, Bin 2022).  

 A LO é definida como uma placa predominantemente branca de risco 

questionável que excluiu outras doenças ou distúrbios conhecidos que não 

apresentam risco aumentado de câncer (Warnakulasuriya et al., 2007).  

 Clinicamente, a LO pode se apresentar como manchas ou placas brancas, de 

superfície lisa, plana, verrucosa ou fissurada (Carrard, Van der Waal, 2018). Quando 

houver a presença de áreas vermelhas é denominada eritroleucoplasia e apresentam 

um alto risco de transformação maligna (Carrard, Van der Waal, 2018). 

 Fatores de risco para o surgimento de uma LO são as diversas formas de 

tabaco e o consumo crônico de álcool, porém pode ser observada em pacientes que 

não possuem essas dependências (Warnakulasuriya, Ariyawardana, 2016). 

Alterações cromossômicas, como deleções e mutações em genes supressores de 

tumor ou proto-oncogenes favorecem que a LO e outras LPM sofram transformação 

maligna (Banerjee et al., 2005).  

 Embora a malignização possa ser reduzida com a excisão completa da LO, 

esse risco não é excluído totalmente, pois além de recidivas, outros sítios clinicamente 

saudáveis podem desenvolver um CCEO (Iocca et al., 2020; Warnakulasuriya, 

Ariyawardana, 2016). Atualmente, o tratamento padrão da LO é a excisão cirúrgica e 

acompanhamento clínico do paciente, mesmo que possa recorrer e sofrer 

transformação maligna (van der Waal, 2009).  

 Outras formas de tratamento como criocirurgia, cirurgia à laser, retinoides 

tópicos ou sistêmicos foram testados, porém, não revelaram evidências concretas 

para evitar ou reduzir as chances de transformação maligna (Chiesa et al., 2005; 

Kvaal, Warloe, 2007; Lodi, Porter, 2008; Tradati et al., 1997; van der Waal, 2009). 



21 
 

   
 

 A quimioprevenção também tem sido testada no tratamento da LO, podendo 

ser de origem natural ou sintética, podendo ser utilizado por via tópica ou sistêmica 

(Liao et al., 2023). Todavia, essa forma de tratamento possui sucesso limitado 

(Kuriakose, Sharan, 2006; Xie, Liu, 2017), não tendo uma estratégia farmacológica 

estabelecida (Monteiro de Oliveira Novaes, William, 2016). 

 A quimioprevenção pode atuar em diferentes estágios da carcinogênese, como 

no bloqueio de danos ao DNA evitando a transformação maligna, ou suprimindo a 

proliferação de células pré-malignas que são observadas em LPM com displasia 

epitelial (Mohan Shankar et al., 2021).  

Agentes quimiopreventivos revelaram-se promissores no tratamento da LPM. 

A vitamina A foi capaz de causar regressão completa de 57,1% de LO, sem causar 

efeitos colaterais (Stich et al., 1988). Já o ZengShengPing, que é uma mistura das 

ervas Sophra tonkinensis, Polygonum bistorta, Prunella vulgaris, Sonchus brachyotus, 

Dictamnus dasycarpus e Dioscorea bulbifera, diminuiu em mais da metade o tamanho 

de LO, em 67,8% dos pacientes incluídos no estudo, após três meses de tratamento 

(Sun et al., 2010). 

 

 

2.2 Carcinoma de Células Escamosas Oral 

 

 

 O CCEO é a NM mais comum em boca, representando 90% de todos os tipos 

de câncer neste sítio (WHO, 2022), sendo um problema global de suma importância. 

Vários fatores estão associados ao desenvolvimento de um CCEO, como fatores 

genéticos e principalmente os habituais como o tabagismo e etilismo 

(Warnakulasuriya, Ariyawardana, 2016). Geralmente acomete pessoas acima dos 40 

anos, do sexo masculino, embora tenha-se descrito recentemente um aumento de 

casos em pacientes abaixo desta faixa etária (Kaminagakura et al., 2022). 

 Sugere-se que para que se estabeleça um CCEO invasivo ocorra uma série de 

eventos ambientais, histológicos e moleculares antes, onde, por exemplo o álcool, 

pode servir como solvente para carcinógenos presentes no tabaco e outras fontes, ou 

a presença de uma LPM que pode conter displasia epitelial possam progressivamente 

transformar-se em um CCEO (Johnson et al., 2020; Warnakulasuriya et al., 2020). 



22 
 

   
 

Desta forma, antes de um CCEO invasor, o epitélio pode apresentar hiperplasia, 

distintos graus de displasia ou um carcinoma in situ (Johnson et al., 2020). 

 O estudo de biomarcadores moleculares é um campo muito pesquisado para o 

CCEO, visando fins prognósticos de um CCEO já estabelecido ou e prever a 

transformação maligna nos casos das LPM. Como exemplo, o CD44, um receptor de 

superfície da célula para ácido hialurônico e metaloproteinases de matriz, está 

relacionado com a migração celular, assim, sua expressão em CCEO indica piores 

prognósticos (Faber et al., 2011). Altos níveis de expressão das proteínas CD133 e 

ALDH1, assim como o CD34, também são indicadores de invasão e metástases das 

células cancerígenas, sendo marcadores com significado prognóstico nos casos de 

CCEO (Yu, Cirillo, 2020; Zhang et al., 2010). 

 Embora haja um aumento de evidências e estudos envolvendo fatores 

prognósticos para os casos de CCEO, novos meios e modalidades de tratamento para 

essa NM permanecem sem grandes avanços, sendo a cirurgia a principal forma de 

tratamento para o CCEO, que ocasiona sequelas estéticas e funcionais, além de não 

eliminar a doença em estádios avançados, portanto, têm limitações importantes e 

muitas vezes, não contribuiu para a sobrevida do paciente (Chow et al., 2016; Valdez, 

Brennan, 2018). A cirurgia pode ser complementada com radioterapia e/ou 

quimioterapia, geralmente quando as margens cirúrgicas estão comprometidas, 

quando há invasão perineural, embolização vascular e/ou linfática (Ettinger et al., 

2019). 

 Os quimioterápicos empregados, de forma geral, atuam danificando o DNA ou 

formando ERO, causando uma série de eventos que geram a morte celular por 

apoptose (Schomberg, 2019). A CSP, carboplatina, bleomicina, docetaxel, 

hidroxiuréia, metotrexato, entre outros, são quimioterápicos usados para tratamento 

do CCEO quando essa modalidade é empregada (Schomberg, 2019). Porém, várias 

são as limitações e efeitos colaterais destes quimioterápicos, como ser tóxico ao 

sistema nervoso, rins, fígado e por causar morte não imunogênica e resistência da 

neoplasia a estes quimioterápicos. Desta forma, novos compostos que causem a 

morte da célula neoplásica ativando outras vias e que tenham menores efeitos 

colaterais e baixa resistência, devem ser investigados. 

 

 



23 
 

   
 

2.3 Morte Celular Imunogênica 

 

 

 Os quimioterápicos atuais, na grande maioria, induzem a morte das células 

neoplásicas por meio da apoptose, que é um tipo de morte celular programada. As 

células que entram em apoptose passam por uma série de etapas como encolhimento 

do citoplasma, fragmentação do núcleo, condensação da cromatina e bolhas na 

membrana plasmática, gerando os corpos apoptóticos, ou pequenos fragmentos da 

célula apoptótica, que posteriormente são reconhecidos e eliminados por fagocitose 

(Arandjelovic, Ravichandran, 2015).  

 A apoptose é iniciada por fatores extrínsecos e/ou intrínsecos, tais fatores 

ativam as caspases apoptóticas iniciadoras, como a caspase 2, 8, 9 e 10, que ativam 

as caspases efetoras, como a 3, 6 e 7, fragmentando a célula e gerando os corpos 

apoptóticos (Kesavardhana et al., 2020).  

 Caspases ativadas inativam a liberação de DAMPs que são imprescindíveis 

para que ocorra a MCI (Giampazolias et al., 2017), quando a morte da célula não 

ocorre por ativação da cascata de caspases há geração de DAMPs e 

consequentemente uma MCI, portanto a ativação de caspases apoptóticas impede 

com que ocorra a MCI (Rongvaux et al., 2014).  

 Já a morte celular com a ativação de caspases inflamatórias, como a caspase 

1, 4, 5, 11 e 12, induz a morte celular inflamatória chamada de piropstose, onde ocorre 

liberação de DAMPs, porém esse tipo de morte não é observado com todos os 

quimioterápicos em uso atualmente (Kesavardhana et al., 2020).  

 A MCI é uma forma de morte celular que é regulada e capaz de induzir a 

ativação do sistema imunológico adaptativo em ambiente imunocompetente (Galluzzi 

et al., 2018). Pode ser iniciada por algumas drogas quimioterápicas, vírus oncolíticos, 

terapia fotodinâmica, entre outros (Galluzzi et al., 2018). As células que passam por 

esse tipo de morte podem regular a atividade imune, já que são capazes de liberar ou 

expor moléculas em sua superfície, servindo como sinais de estímulo ao sistema 

imune (Ahmed, Tait, 2020), portanto a MCI é um tipo de morte celular importante para 

o tratamento de NM e na imunoterapia. 



24 
 

   
 

 A imunoterapia no tratamento do câncer estimula o sistema imunológico a criar 

uma resposta antitumoral, que pode ser alcançada por meio da MCI, que é iniciada 

por DAMPs, não observada com os quimioterápicos atuais (Ahmed, Tait, 2020). 

 A MCI inicia-se com algum tipo de estresse celular, como o estresse do retículo 

endoplasmático (RE), produção de espécies reativas a oxigênio (ERO), a autofagia 

ou a cadeia de apoptose, então a célula libera DAMPs, como a calreticulina (CALR), 

adenosina trifosfato (ATP) e o high mobility group box protein 1 (HMGB1) que são 

expostos na superfície da célula moribunda, ativando células dendríticas que 

englobam e apresentam os antígenos da célula morta para o sistema imunológico, 

especialmente para os linfócitos T (CD8+) (Garg et al., 2012; Kepp et al., 2014; 

Kroemer et al., 2022; Troitskaya et al., 2022; Vanmeerbeeg et al., 2020; Yamazaki et 

al., 2020). A MCI pode ser responsável por gerar a resposta imune específica ao 

tumor, para que posteriormente as células de defesa possam atuar no reconhecimento 

e eliminação das células malignas (Diederich, 2019; Galluzzi et al., 2016; Kroemer et 

al., 2013; Obeid et al., 2007; Troitskaya et al., 2022; Vanmeerbeeg et al., 2020), 

também, provocando a eficácia a longo prazo de medicamentos antineoplásicas, já 

que ocasionam a morte direta das células neoplásicas e conferem a imunidade 

antitumoral e  memória imunológica (Galluzzi et al., 2018). 

 A CALR, um dos DAMPs, quando exposta na superfície da membrana celular 

atua de uma forma sinalizadora ao interagir com receptores CD91 nos fagócitos para 

que se ativem e façam a fagocitose (Galluzzi et al., 2016; Li, 2018). Outro tipo de 

DAMP, o ATP, quando liberado para fora da célula, sinaliza para que células de defesa 

reconheçam as células moribundas, ainda, age na pró-inflamação, já que atua em 

receptores de células apresentadoras de antígenos fazendo sua quimioatração (Yatim 

et al., 2017). O ATP, quando se liga em receptores das células apresentadoras de 

antígenos pode liberar interleucinas que ativam células T, contribuindo na eliminação 

destas células moribundas, assim, todos esses fatores agem diretamente no sistema 

imunológico, promovendo a memória celular (Galluzzi et al., 2016; Kepp et al., 2014; 

Martins et al., 2014; Vanmeerbeeg et al., 2020). 

 Já o HMGB1, uma proteína nuclear, quando liberado para o meio extracelular 

pode ligar-se a TLR4 de células dendríticas estimulando a apresentação de antígenos 

tumorais de células moribundas ao sistema imune (Apetoh et al., 2007; Ghiringhelli et 



25 
 

   
 

al., 2009). O HMGB1, é inativado indiretamente pela ativação de caspases (Kazama 

et al., 2008).   

 Estudos in vivo em camundongos vacinados contra tumores mostraram em 

células neoplásicas, que a depleção ou neutralização de HMGB1 comprometeram a 

capacidade dos animais em resistir à tumorigênese, evidenciando a importância do 

HMGB1 na ativação do sistema imune para combater tumores (Apetoh et al., 2007).  

 Embora muito dos quimioterápicos atuais não causem a MCI, tratamentos 

complementares que causem estresse nas células, poderiam restaurar a 

imunogenicidade de quimioterápicos como a CSP por exemplo (Martins et al., 2011). 

As terapias combinadas de fármacos podem ser extremamente benéficas, já que a 

ação sinérgica pode possibilitar a redução das doses e efeitos colaterais, melhorando 

o tratamento (Eling et al., 2015) como é o caso da ART e seus derivados, que podem 

ser úteis quando associados a quimioterápicos atualmente disponíveis (Li et al., 2021). 

A diidroartemisinina, um derivado da ART foi capaz de atuar como um sensibilizador 

antitumoral da CSP (Rao et al., 2022), evidenciando que novos compostos podem 

melhorar os tratamentos quimioterápicos atuais por meio da sensibilização imune e 

da MCI. 

 

 

2.4 Artemisinina 

 

 

 A ART, derivada da erva Artemisia annua, uma planta chinesa, é um composto 

de origem natural muito investigado devido as suas propriedades antineoplásicas 

(Konstat‐Korzenny, 2018). Diversos derivados sintéticos da ART foram desenvolvidos, 

como a diidroartemisinina, artesunato, arteméter e o arteter, e estudos mostraram que 

estes possuem ações imunoterapêuticas em linhagens de células malignas, inclusive 

as que são resistentes aos quimioterápicos atuais (Efferth 2017; Konstat‐Korzenny, 

2018). 

 A ART e seus derivados possuem pontes de endoperóxido que reagem com 

ferro dentro de eritrócitos gerando as espécies reativas de oxigênio (ERO), a formação 

de ERO contribui para a morte de parasitas, no caso da malária (Zhang et al., 1992). 

Além disso, as ERO podem dar início ao processo da MCI, sendo um composto 



26 
 

   
 

promissor para o tratamento imunogênico de NM, ou ainda, pode dar início a outros 

tipos de morte celular, incluindo apoptose e ferroptose (Li et al., 2008; Wang et 

al., 2012). 

 Evidências in vitro e in vivo foram reportadas sobre o uso da ART e seus 

derivados em relação as suas propriedades antineoplásicas. Uma investigação em 

linhagens de CCEO mostrou que a ART foi citotóxica e ocasionou a morte destas 

células por apoptose, que é o tipo de morte celular que ocorre em quimioterápicos 

empregados atualmente, assim, o estudo sugeriu que a ART possui uma possível 

aplicação clínica para o tratamento quimioterápico do CCEO (Yamachika et al., 2004). 

 Cao et al., (2019) avaliaram in vitro e in vivo os efeitos da ART no câncer de 

mama murino. Os resultados mostraram que a ART aumentou a apoptose das células 

malignas in vitro e impediu o crescimento de tumores in vivo aumentando a sobrevida 

dos camundongos, além de ter atuado promovendo a ativação de células T, indicando 

que pode ser útil tanto para a apoptose das células neoplásicas quanto para a MCI. 

 Roh et al., (2017) investigaram os efeitos do artesunato em linhagens de células 

derivadas de câncer de cabeça e pescoço, incluindo linhagens resistentes à CSP. O 

artesunato matou as células neoplásicas seletivamente e foi capaz de induzir a 

ferroptose destas células. 

 O artesunato, derivado semi-sintético da ART, reduziu em 30% o tamanho de 

um carcinoma de células escamosas em laringe de um paciente que recebeu 

tratamento de 60 mg via intramuscular, aplicado duas vezes na semana; sugerindo 

que o composto possui potencial para ser empregado no tratamento quimioterápico 

de NM em região de cabeça e pescoço (Singh, Verma, 2002). 

 Embora existam evidências da utilidade e eficácia da ART e seus derivados no 

tratamento das mais diversas neoplasias, não há resultados na literatura evidenciando 

qual seria a sua ação em células displásicas. Sabe-se que a ART atuou de forma 

seletiva reduzindo as células malignas (Roh et al., 2017). 

 

 

2.5 Cisplatina 

 

 



27 
 

   
 

 NM de diversos sítios anatômicos, como colo de útero, ovário, testículo, bexiga, 

pulmão e em região de cabeça e pescoço, incluindo o CCEO, são tratados com a CSP 

(Ho et al., 2016; Shen et al., 2012).  

 Embora a CSP seja muito empregada e tenha ação comprovada, mudanças 

genéticas e epigenéticas, aumento de reparo a danos do DNA, inibição da via de 

apoptose e a inativação do composto podem ocorrer, ocasionando ineficácia e 

resistência da neoplasia ao quimioterápico (Shen et al., 2012). Outra limitação do 

tratamento com CSP é a capacidade tóxica que possui, afetando diversos sistemas 

do corpo, como rins, fígado e sistema nervoso (Oun et al., 2018). 

 Os compostos à base de platina, em conjunto com a água, sofrem hidratação 

e dissociação resultando em um hidrato de platina carregado positivamente, que é 

atraído pelo DNA com carga negativa no núcleo da célula, assim, o composto de 

platina-água sofre reação de troca de ligante com átomos de nitrogênio em moléculas 

de DNA, gerando adutos de DNA-platina. Tais adutos inibem a replicação celular e 

ativam vias que levam a morte da célula, por necrose ou apoptose (Achkar et al., 2018; 

Ober, Lippard, 2007).  

 Embora seja descrito a forma como a CSP e seus derivados atuam causando 

a morte da célula, Hato et al., (2014) reportaram que esse quimioterápico estimula as 

células Ts, podendo induzir a MCI. 

 A morte celular causada pela oxaliplatina, um derivado da CSP, seria por via 

de estresse ribossômico, e não por danos ao DNA, assim, alguns autores sugerem 

que a oxaliplatina pode causar a MCI, sendo um importante mecanismo antineoplásico 

(Bruno et al., 2017), desta forma, se a CSP, e/ou seus derivados, forem capazes de 

causar a morte celular e causar estresse ribossômico ou do RE estariam atuando de 

forma dupla, na morte direta da célula e restaurando a imunogenicidade de fármacos 

que possivelmente não causam a MCI, como a CSP (Martins et al., 2011). 

 Compostos de platina indicaram capacidade de promover a MCI diretamente, 

como exposição de CALR na superfície celular, liberação de ATP e HMGB1, fatores 

diretamente relacionados com a MCI (Wong et al., 2015). Tham et al., (2020) 

evidenciaram a relação de compostos de platina com a MCI, pois células de câncer 

colorretal tratadas com compostos de platina foram capazes de liberar DAMPs 

imunogênicos e a gerar ERO (Tham et al., 2020). 



28 
 

   
 

 Portanto, investigações adicionais do uso da CSP e sua relação com a MCI no 

CCEO e na LO possuem importância para o manejo destas lesões, sendo um campo 

de importantes estudos. 

 

 

2.6 Associação de Compostos 

 

 

 As práticas terapêuticas utilizando dois ou mais fármacos ou com múltiplas 

drogas são utilizadas há anos no tratamento de diversas doenças, em especial no 

tratamento do câncer. Pois, a combinação de compostos pode potencializar os efeitos 

na célula-alvo ou no mecanismo de ação, fazendo com que as concentrações 

terapêuticas possam ser diminuídas e, consequentemente reduzir os efeitos 

indesejáveis da quimioterapia (Baxevanis et al., 2009; Gao et al., 2020). 

 Quando dois ou mais fármacos são empregados, os diferentes mecanismos de 

ação de cada um podem direcionar o efeito no mesmo alvo, tratando a doença de 

forma mais eficaz. Podem atuar de forma sinérgica, criando resultados favoráveis 

como o aumento da eficácia do efeito terapêutico, redução da dosagem mantendo ou 

aumentando a mesma eficácia, evitando a toxicidade e podendo retardar ou diminuir 

as chances de resistência ao composto, assim, diferentes combinações de fármacos 

têm sido utilizadas no tratamento de inúmeras doenças, especialmente contra as NM 

(Chou et al., 2006). 

 Li et al., (2014), avaliaram, em linhagens de células malignas, se a ART em 

combinação com o resveratrol, que é um polifenol encontrado em sementes de uva, 

seria capaz de gerar um melhor efeito antitumoral se comparado ao uso isolado de 

cada um. Os resultados mostraram que os compostos tiveram uma ação sinérgica, 

reduzindo a IC50, que é a dose que resulta em redução de 50% da viabilidade celular, 

aumentando o número de células apoptóticas e diminuindo a migração das células 

malignas quando comparado ao uso isolado de cada composto, com isso os autores 

concluíram que a combinação é promissora para o tratamento de tumores sólidos. 

Porém, o mecanismo de como atuam em conjunto não foi estudado. 

 Qin et al., (2017) ao analisarem a associação da diidroartemisinina, que é 

derivada da ART, com CSP e oxaliplatina em células neoplásicas hepáticas, 



29 
 

   
 

concluíram que a diidroartemisinina pode aumentar a quimiossensibilidade destas 

células neoplásicas à CSP e oxaplatina, ainda, esteve relacionada com a expressão 

de biomarcadores como o de transição epitélio-mesênquima, sendo uma importante 

observação para o tratamento quimioterápico de pacientes com câncer hepático. 

 Zhang et al., (2018) também encontraram resultados semelhantes, onde a 

diidroartemisinina combinada com a carboplatina, derivada da CSP, apresentou um 

maior efeito inibitório em células neoplásicas malignas pulmonares. 

 Rao et al., (2022) revelaram que a combinação de CSP e diidroartemisinina 

reduziu a proliferação e a migração celular e aumentou a apoptose de células de 

hepatoblastoma humano, sugerindo que a diidroartemisinina atua como um 

sensibilizante para a CSP. 

 Li et al., (2021) revisaram a literatura pretendendo resumir como a 

diidroartemisinina poderia atuar sensibilizando as células malignas, além de elucidar 

os mecanismos moleculares e efeitos farmacológicos deste composto. Os autores 

revelaram que a diidroartemisinina reduziu a resistência da CSP em neoplasias com 

esta característica, aumentando a concentração nas células neoplásicas, contribuindo 

no aumento da quimiossensibilidade resultando, então, na parada do ciclo celular e 

na apoptose. Embora a resistência aos quimioterápicos possa ocorrer, a 

diidroartemisinina parece ser uma boa alternativa para reduzir esses efeitos, quando 

usada em associação com quimioterápicos que possuam essa característica.  

 A associação da CSP com outros compostos de origem natural também parece 

ter um efeito benéfico. Um estudo de Liu et al., (2019) revelou que a berberina, 

extraída de uma erva medicinal, resultou em efeitos sinérgicos com a CSP na indução 

de necroptose e apoptose de células malignas de ovário, desta forma, a ideia de que 

compostos de origem natural atuem sensibilizando o tratamento com a CSP parece 

ser possível, mesmo que este mecanismo não esteja totalmente elucidado (Rao et al., 

2022).  

  

 



30 
 

   
 

3 PROPOSIÇÃO 

 

 

 Há uma divergência no tratamento da LO, onde alguns tratam de maneira 

agressiva e outros apenas no monitoramento do curso clínico da lesão, que pode 

evoluir para um CCEO, necessitando de tratamentos radicais.  

 Não há nenhuma terapia ou fármaco que impossibilite a transformação maligna 

da LO. Assim, o presente estudo pretende obter resultados positivos, de acordo com 

a literatura consultada, de que a ART, CSP e a associação de ambas sejam uteis para 

um possível tratamento para a LO e para o CCEO, por meio da MCI ou apoptose. 

 Desta forma, as seguintes hipóteses foram aventadas: 

H0- A ART, CSP e associação de ambas não são capazes de induzir a MCI e/ou 

apoptose em linhagens celulares testadas. 

H1- A ART é capaz de induzir a MCI e/ou apoptose nas linhagens celulares testadas. 

H2- A CSP é capaz de induzir a MCI e/ou apoptose nas linhagens celulares testadas. 

H3- A associação de ART e CSP é capaz de induzir a MCI e/ou apoptose nas 

linhagens celulares testadas. 

 

 

3.1 Objetivo geral: 

 

 

 Avaliar in vitro, se a ART e a CSP, associadas ou não, são capazes de induzir 

a MCI ou apoptose das linhagens de LO (DOK) e CCEO (SCC-180). 

 

 

3.2 Objetivos específicos: 

 



31 
 

   
 

 

 A) Verificar a citotoxicidade e o potencial genotóxico dos compostos isolados 

ou associados frente as linhagens celulares estudadas; 

 B) Avaliar a expressão das proteínas caspases 3, 8, 9, relacionadas a 

apoptose, após tratamento das linhagens celulares testadas com os compostos 

isolados ou associados; 

 C) Avaliar a expressão das proteínas CALR e HMGB-1, relacionadas a MCI, 

após tratamento das linhagens celulares testadas com os compostos isolados ou 

associados; 

 D) Avaliar a taxa de migração das linhagens celulares após tratamento com os 

compostos isolados ou associados.  

 

 

 

 



32 
 

   
 

4 MATERIAL E MÉTODOS 

 

 

4.1 Seleção das linhagens celulares e divisão dos grupos experimentais 

 

 

A linhagem celular de células displásicas DOK 94122104 (Sigma- Aldrich, St 

Louis, MO, USA) foi gentilmente cedida pelo professor Dr. Vicente Torres (Universidad 

de Chile), a linhagem de carcinoma de células escamosas oral SCC-180 (American 

Type Culture Collection, Manassa, VA, USA) foi gentilmente cedida pelo professor Dr. 

José Jara (Universidad de Chile), e a linhagem de queratinócitos HaCat (American 

Type Culture Collection, Manassa, VA, USA) foi gentilmente cedida pela professora 

Dra. Luciane Dias de Oliveira (Unesp). As linhagens foram testadas, in vitro, e tratadas 

com ART (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), CSP (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, 

USA)  e ART+CSP. Os grupos controles foram compostos pelas mesmas linhagens 

celulares, que, entretanto, não receberam tratamento (Figura 1). 

 

 

Figura 1 - Esquema de divisão e tratamento das linhagens celulares testadas 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor. 

 

 

4.2 Cultura celular 

 

 

Todas as linhagens celulares foram cultivadas de acordo com as 



33 
 

   
 

recomendações dos fornecedores. As linhagens HaCat e SCC-180 foram cultivadas 

com meio de cultura DMEM com alta concentração de glicose (Nova biotecnologia, 

Cotia, SP, Brasil), suplementado com 10% de soro fetal bovino (Nova biotecnologia, 

Cotia, SP, Brasil) e 1% de antibiótico (Penicilina-Estreptomicina Anfotericina, Nova 

biotecnologia, Cotia, SP, Brasil). A linhagem DOK foi cultivada com meio de cultura 

DMEM com alta concentração de glicose (Nova biotecnologia, Cotia, SP, Brasil), 

suplementado com 20% de soro fetal bovino (Nova biotecnologia, Cotia, SP, Brasil) e 

1% de antibiótico (Penicilina-Estreptomicina Anfotericina, Nova biotecnologia, Cotia, 

SP, Brasil). O meio de cultura foi trocado a cada 2 dias, e as células cultivadas à 37°C 

e 5% CO2 até atingirem a confluência de 90% (Figura 2).  

 

 

Figura 2 – Linhagens celulares testadas.  

 

 

Legendas: A. Queratinócitos normais, linhagem HaCat, aumento de 100x. B. Queratinócitos 
displásicos, linhagem DOK, aumento de 100x. C. Queratinócitos malignos, linhagem SCC-180, 
aumento de 100x 
Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

4.3 Diluição dos compostos 

 

 

ART e CSP foram diluídas em solução salina tamponada com fosfato (Nova 

biotecnologia, Cotia, SP, Brasil) como soluções de estoque. Posteriormente, a solução 

de estoque foi diluída em meio de cultura adequado para cada linhagem celular até 

as concentrações de 0.1, 1, 10, 100 e 200 μM. 

 

 



34 
 

   
 

4.4 Teste de viabilidade celular 

 

 

A viabilidade celular foi medida pelo ensaio de brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-

2-il) -2,5-difeniltetrazólio (MTT, Sigma- Aldrich, St Louis, MO, USA). Após atingirem 

confluência de 90%, foram semeadas 4x104 células em cada poço, de placas de 24 

poços, que foram mantidas por 24 horas para sua aderência. Passadas as 24 horas, 

as linhagens celulares foram expostas a ART (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), 

CSP (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) e ART+CSP, nas concentrações de 0.1, 1, 

10, 100 e 200 μM diluída em meio de cultura adequado para cada linhagem celular. 

Passadas 48 horas de exposição, os tratamentos foram retirados dos poços e 

adicionado o sal de MTT diluído em salina tamponada com fosfato, a uma 

concentração de 0,5mg por mL. Depois da incubação com o MTT, este foi removido 

dos poços e adicionado 1mL DMSO, onde após homogeneização, alíquotas de 100μL 

foram passadas para poços de uma placa de 96 poços. As absorbâncias foram 

mensuradas em espectrofotômetro (BioRad, Hercules, CA, E.U.A) ajustado para 570 

nm. 

 A viabilidade celular foi expressa em porcentagem em relação ao controle 

negativo. As análises dose-efeito foram realizadas a partir do cálculo da fração de 

efeito (Fe) de cada droga nas diferentes concentrações, por meio da equação: 

 

% Viabilidade celular = Absorbância das células tratadas – branco x 100 

   Absorbância das células não tratadas – branco x 100 

 

 

 A partir disso, a concentração inibitória de 50% (IC50) foram definidas como as 

concentrações de fármaco necessárias para reduzir a proliferação celular para 50%. 

As doses foram definidas para os experimentos de ELISA e migração.  

 



35 
 

   
 

 

4.5 Teste de genotoxicidade 

 

 

 O teste de genotoxicidade foi feito por meio da análise de micronúcleos, onde 

as linhagens celulares foram semeadas num total de 4x104 células por cada poço de 

placas de 24 poços contendo o meio de cultura indicado pelo fornecedor para cada 

linhagem celular. Depois de semeadas, as linhagens celulares foram incubadas e 

aguardado 24 horas para a aderência celular, depois desse período, as células foram 

tratadas com ART (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), CSP (Sigma-Aldrich, St Louis, 

MO, USA) e ART+CSP nas concentrações de 0.1, 1, 10, 100 e 200 μM diluídas em 

meio de cultura adequado para cada linhagem celular. Após 48 horas do tratamento, 

este foi removido e adicionado citocalasina B (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) na 

concentração final de 6,0 µg/ml de meio de cultura. Após 28 horas da adição da 

citocalasina, esta foi removida e as amostras lavadas com solução salina tamponada 

com fosfato (Nova biotecnologia, Cotia, SP, Brasil) e fixadas com metanol durante 15 

minutos. Posteriormente, as amostras foram lavadas novamente com solução salina 

tamponada com fosfato (Nova biotecnologia, Cotia, SP, Brasil) e o corante DAPI 

(Sigma-Aldrich, USA) foram adicionadas aos poços e incubadas por 5 minutos. O 

grupo controle positivo recebeu tratamento com EMS (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, 

USA).  Os poços foram examinados no microscópio de fluorescência (Microscópio 

Carl Zeiss Microlimaging GmbH – Axiovert 40C, Germany), sob epifluorescência. 

Foram obtidas 10 fotos por poço por meio do software Axio Vision 7.0. As imagens 

foram analisadas, a partir das quais um descritivo foi realizado para obter-se a 

quantidade de micronúcleos em 100 células binucleadas por tratamento. 

 

 

4.6 Teste de migração celular 

 

 

 As linhagens celulares testadas foram semeadas em poços de placas de 6 

poços numa quantidade de 7x104 e mantidas à 37°C e 5% CO2 até atingirem a 



36 
 

   
 

confluência de 100%. Após atingirem 100% de confluência, feridas por arranhão foram 

geradas nos poços das placas contendo as células, usando uma ponta de pipeta 

estéril de 10 µl (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), e então foi feita a adição dos 

tratamentos nos poços. As linhagens celulares foram expostas a doses determinadas 

com base no ensaio de citotoxicidade, que causassem redução da viabilidade de 10 

e 50%. Para isso, as células plaqueadas foram tratadas com as doses de IC10 de ART 

(Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), IC10 e IC50 de CSP (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, 

USA) e IC10 e IC50 de ART+CSP, o grupo controle negativo também foi incluído. 

Depois de criar as feridas e os poços receberem os tratamentos, os poços foram 

analisados em microscopia de luz convencional (Microscópio Carl Zeiss Microlimaging 

GmbH – Axiovert 40C, Germany), fotos foram feitas em 5 pontos distintos e aleatórios 

com software Axio Vision 7.0 no momento da criação da ferida, 24 e 48 horas depois 

do tratamento. As distâncias foram obtidas por meio da contagem do espaço com 

escala Barr, por meio do software Axio Vision 7.0 nos momentos 0, 24 e 48 horas. A 

taxa de migração foi contada de acordo com a seguinte fórmula: 

 

Distância da migração = distância inicial entre as bordas do arranhão livre de 

células  – distância em 24 ou 48 h entre as bordas do arranhão livre de células.  

 

 

4.7 Ensaio de ELISA 

 

 

 O ensaio de ELISA foi feito com amostra de sobrenadante para a proteína 

HMGB-1, pois extracelular ativa a sinalização inflamatória em células e tecidos (Zhang 

et a., 2020) e com amostras de lisado celular para verificar níveis aumentados das 

proteínas CALR e caspases 3, 8 e 9, que são encontradas em sítios como o reticulo 

endoplasmático, membrana celular, citoplasma e núcleo (Zamanian et al., 2013; 

Boice, Bouchier-Hayes L, 2020). Para a coleta do sobrenadante, as linhagens 

celulares testadas foram semeadas em poços de placas de 6 poços numa quantidade 

de 8x105 e mantidas à 37°C e 5% CO2 até atingirem a confluência de 

aproximadamente 80%. Após, as células foram expostas a doses determinadas com 



37 
 

   
 

base no ensaio de citotoxicidade, que causassem redução da viabilidade de 10 e 50%. 

Para isso, as células plaqueadas foram tratadas com as doses de com a dose de IC10 

de ART (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), IC10 e IC50 de CSP (Sigma-Aldrich, St 

Louis, MO, USA) e IC10 e IC50 de ART+CSP, o grupo controle negativo também foi 

incluído. 48 horas após o início do tratamento, o sobrenadante foi coletado, 

centrifugado por 20 minutos e armazenado em alíquotas em freezer -80°C para 

posteriormente ser submetido à reação de ELISA. 

 Para o lisado celular, as linhagens celulares testadas foram semeadas em 

poços de placas de 6 poços numa quantidade de 8x105 e mantidas à 37°C e 5% CO2 

até atingirem a confluência de aproximadamente 80%. Depois, as linhagens celulares 

foram expostas a doses determinadas com base no ensaio de citotoxicidade, que 

causassem redução da viabilidade de 10 e 50%. Para isso, as células plaqueadas 

foram tratadas com as doses de IC10 de ART (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), IC10 

e IC50 de CSP (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) e IC10 e IC50 de ART+CSP, o grupo 

controle negativo também foi incluído. 48 horas após o início do tratamento, o 

sobrenadante foi desprezado e os poços lavados com solução salina tamponada com 

fosfato (Nova biotecnologia, Cotia, SP, Brasil), depois, foi adicionado tripsina (Nova 

biotecnologia, Cotia, SP, Brasil) em cada poço, então a tripsina foi inativada com a 

adição do dobro de meio de cultura e toda a suspensão foi centrifugada por 5 minutos. 

Posteriormente, o sobrenadante foi desprezado e o pellet foi dissolvido em tampão 

para lise celular (T-PER, Rockford, IL, USA) e novamente centrifugado por 20 minutos 

sob temperatura de 2°C, depois o sobrenadante foi aliquotado, identificado e 

armazenado em freezer -80°C para posteriormente ser submetidos à reação de 

ELISA. 

 O ensaio de ELISA foi feito com kits comerciais para as proteínas CAS3 (Cloud-

Clone Corp. TX, USA), CAS8 (Cloud-Clone Corp. TX, USA), CAS9 (Cloud-Clone Corp. 

TX, USA), CALR (Novus Biologicals, CO, USA) e HMGB-1 (Novus Biologicals, CO, 

USA). Todos os reagentes foram diluídos conforme as recomendações do fabricante 

de cada kit. Foram adicionados 100μL do padrão, das amostras de sobrenadante ou 

lisado celular e dos controles negativos, nos poços de uma placa de 96 poços 

disponível em cada kit ELISA, e então foi incubado por 1 hora a 37°C. Após isso, o 

conteúdo foi aspirado e então foi adicionado 100 μL do anticorpo de detecção A e 

novamente incubado por 1 hora a 37°C. Após o período, os poços foram aspirados e 



38 
 

   
 

lavados para então receber 100 μL do reagente de estreptavidina, que foi incubado 

por 30 minutos a 37°C. Passado o tempo, os poços foram lavados e aspirados cinco 

vezes, para então receber 90 μL da solução de cromógeno e incubado por 20 minutos 

a 37°C. Por fim, foi adicionado 50 μL a solução ácida em cada poço e feita a leitura 

em espectrofotômetro (BioRad, Hercules, CA, E.U.A) ajustado para 450 nm. 

 

 

4.8 Forma de análise dos resultados 

 

 

Foi feita uma análise descritiva inicial dos dados contendo a avaliação de 

possíveis Outliers. Foi realizada análise exploratória de dados através do cálculo de 

medidas resumo (média, desvio padrão, mínimo, mediana e máximo). Para avaliar 

citotoxicidade foram usados modelos log-logísticos de dose-resposta. Para comparar 

os fármacos em relação à migração celular e expressão de proteína foram usados 

modelo de ANOVA seguidos do teste de comparação múltipla de Tukey. O nível e 

significância adotado foi de 5%. 

 



39 
 

   
 

5 RESULTADO 

 

 

5.1 Viabilidade celular 

 

 

5.1.1 Linhagem HaCat 

 

 

A Tabela 1 apresenta as medidas descritivas da citotoxicidade por fármaco e 

concentração para a linhagem HaCat. A partir dessa tabela e da Figura 3, nota-se que 

praticamente não houve morte celular quando a ART foi avaliada isolada, mesmo com 

o aumento da concentração, por isso esse medicamento não foi considerado no 

modelo ajustado e que está apresentado na Tabela 2. A IC10 da ART foi alcançada e 

calculada por porcentagem em relação ao grupo controle, portanto a IC10 de CSP e 

ART+CSP também foi determinada.  

 

 

Tabela 1 – Medidas descritivas viabilidade celular por fármaco e concentração 

(Linhagem HaCat). 

 

(continua) 

Fármaco 
Concentra

ção 

Média de 

absorbância 

Desvio 

Padrão 

Míni

mo 

Media

na 

Máxi

mo 

Controle 

negativo 
 0.150 0.0024 0.147 0.150 0.153 

ART 0.1 0.144 0.0008 0.143 0.144 0.145 

ART 1 0.141 0.0012 0.140 0.142 0.143 

ART 10 0.135 0.0020 0.133 0.135 0.138 

ART 100 0.138 0.0017 0.136 0.138 0.141 



40 
 

   
 

 

 

Tabela 1 – Medidas descritivas viabilidade celular por fármaco e concentração 

(Linhagem HaCat). 

 

(conclusão) 

Fármac

o 

Concentraç

ão 

Média de 

absorbância 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Media

na 

Máxim

o 

ART 200 0.145 0.0019 0.142 0.145 0.147 

CSP 0.1 0.147 0.0028 0.144 0.147 0.151 

CSP 1 0.145 0.0019 0.144 0.144 0.149 

CSP 10 0.124 0.0015 0.122 0.124 0.126 

CSP 100 0.050 0.0022 0.046 0.050 0.052 

CSP 200 0.005 0.0012 0.003 0.005 0.006 

ART+C

SP 
0.1 0.145 0.0010 0.144 0.145 0.147 

ART+C

SP 
1 0.141 0.0016 0.139 0.141 0.144 

ART+C

SP 
10 0.128 0.0020 0.124 0.128 0.130 

ART+C

SP 
100 0.040 0.0022 0.036 0.041 0.042 

ART+C

SP 
200 0.004 0.0018 0.001 0.004 0.006 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 3 – Distribuição da viabilidade celular por fármaco e concentração (Linhagem 

HaCat) 



41 
 

   
 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Observou-se comportamento bastante semelhante entre CSP e ART+CSP, por 

isso no modelo dose-resposta a inclinação e os limites inferior e superior estão fixos 

entre os fármacos. A partir da Tabela 2 nota-se a IC50 e IC10 da combinação ART+CSP 

e da CSP. A IC10 de ART calculada por porcentagem foi de 10 µM.  

 

 

Tabela 2 – Ajuste do modelo dose-resposta (Linhagem HaCat) 

 

(continua) 

Parâmetro Estimativa Erro Padrão p-valor 

Inclinação 1.01 0.04 <0.001 

Limite Inferior -0.07 0.01 <0.001 

Limite Superior 0.15 0.00 <0.001 

 



42 
 

   
 

 

Tabela 2 – Ajuste do modelo dose-resposta (Linhagem HaCat) 

 

(conclusão) 

Parâmetro Estimativa Erro Padrão p-valor 

IC50: ART+CSP 103.54 9.36 <0.001 

IC50: CSP 113.17 9.89 <0.001 

IC10: ART+CSP 11.82 0.79 <0.001 

IC10: CSP 12.92 0.85 <0.001 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 4 – Curva log-logística ajustada para CSP e ART+CSP (Linhagem HaCat) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

5.1.2 Linhagem DOK 



43 
 

   
 

 

 

A Tabela 3 apresenta as medidas descritivas da citotoxicidade por fármaco e 

concentração, para a linhagem DOK. A partir dessa tabela e da Figura 5, nota-se que 

praticamente não houve morte celular quando a ART foi avaliada isolada, mesmo com 

o aumento da contração, por isso esse medicamento não foi considerado no modelo 

ajustado e que está apresentado na Tabela 4. A IC10 da ART foi alcançada e calculada 

por porcentagem em relação ao grupo controle, portanto a IC10 de CSP e ART+CSP 

também foi determinada. 

 

 

Tabela 3 – Medidas descritivas da viabilidade celular por fármaco e concentração 

(Linhagem DOK) 

 

(continua) 

Fármaco 
Concentra

ção 

Média de 

absorbância 

Desvio 

Padrão 

Míni

mo 

Media

na 

Máxi

mo 

Controle 

negativo 
 0.251 0.0025 0.249 0.250 0.256 

ART 0.1 0.240 0.0014 0.237 0.240 0.241 

ART 1 0.227 0.0022 0.224 0.227 0.230 

ART 10 0.226 0.0027 0.222 0.225 0.230 

ART 100 0.230 0.0036 0.224 0.231 0.234 

ART 200 0.220 0.0021 0.218 0.220 0.223 

CSP 0.1 0.245 0.0015 0.243 0.244 0.247 

CSP 1 0.222 0.0018 0.219 0.222 0.224 

CSP 10 0.155 0.0011 0.154 0.155 0.157 

CSP 100 0.036 0.0017 0.034 0.036 0.039 



44 
 

   
 

 

 

Tabela 3 – Medidas descritivas da viabilidade celular por fármaco e concentração 

(Linhagem DOK) 

 

(conclusão) 

Fármac

o 

Concentraç

ão 

Média de 

absorbância 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Media

na 

Máxim

o 

CSP 200 0.006 0.0024 0.002 0.006 0.009 

ART+C

SP 
0.1 0.240 0.0034 0.237 0.238 0.246 

ART+C

SP 
1 0.216 0.0025 0.213 0.215 0.219 

ART+C

SP 
10 0.166 0.0021 0.164 0.165 0.170 

ART+C

SP 
100 0.022 0.0023 0.019 0.023 0.025 

ART+C

SP 
200 0.004 0.0027 0.000 0.005 0.007 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 5 – Distribuição da viabilidade celular por fármaco e concentração (Linhagem 

DOK) 

 



45 
 

   
 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Tabela 4 – Ajuste do modelo dose-resposta (Linhagem DOK) 

 

Parâmetro Estimativa Erro Padrão p-valor 

Inclinação 0.79 0.05 <0.001 

Limite Inferior -0.05 0.01 <0.001 

Limite Superior 0.24 0.00 <0.001 

IC50: ART+CSP 30.72 3.67 <0.001 

IC50: CSP 32.34 4.09 <0.001 

IC10: ART+CSP 1.93 0.19 <0.001 

IC10: CSP 2.03 0.20 <0.001 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 



46 
 

   
 

Observou-se comportamento bastante semelhante entre CSP e ART+CSP, por 

isso no modelo dose-resposta a inclinação e os limites inferior e superior estão fixos 

entre os fármacos. A partir da Tabela 4 nota-se a IC50 e IC10 da combinação ART+CSP 

e da CSP. A IC10 de ART calculada por porcentagem foi de 10 µM.  

 

 

Figura 6 – Curva log-logística ajustada para CSP e ART+CSP (Linhagem DOK) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

 

5.1.3 Linhagem SCC-180 

 

 

A Tabela 5 apresenta as medidas descritivas da viabilidade celular por fármaco 

e concentração, para a linhagem SCC-180. Nenhum modelo estudado apresentou 

bom ajuste para esse conjunto de dados, por isso a IC50 e IC10 não foi calculada pelo 



47 
 

   
 

programa, sendo feita a porcentagem em relação ao controle negativo. A dose de IC50 

para CSP+ART foi de 122 µM e de 120 µM para CSP isolada. A dose de IC10 foi de 

0.04 µM para ART, 0.08 µM para CSP e 24 µM para ART+CSP.  

 

 

Tabela 5 – Medidas descritivas da viabilidade celular por fármaco e concentração 

(Linhagem SCC-180) 

 

(continua) 

Fármaco 
Concentra

ção 

Média de 

absorbância 

Desvio 

Padrão 

Míni

mo 

Media

na 

Máxi

mo 

Controle 

negativo 
 0.268 0.0028 0.265 0.268 0.271 

ART 0.1 0.207 0.0027 0.205 0.206 0.212 

ART 1 0.215 0.0015 0.213 0.216 0.217 

ART 10 0.283 0.0024 0.280 0.283 0.287 

ART 100 0.268 0.0031 0.265 0.268 0.273 

ART 200 0.250 0.0016 0.248 0.250 0.253 

CSP 0.1 0.225 0.0013 0.223 0.225 0.227 

CSP 1 0.213 0.0020 0.210 0.213 0.215 

CSP 10 0.221 0.0041 0.215 0.222 0.226 

CSP 100 0.155 0.0024 0.151 0.155 0.158 

CSP 200 0.040 0.0035 0.037 0.039 0.046 

ART+CSP 0.1 0.257 0.0021 0.255 0.256 0.260 

ART+CSP 1 0.226 0.0030 0.220 0.226 0.229 

ART+CSP 10 0.223 0.0019 0.220 0.224 0.225 

ART+CSP 100 0.149 0.0018 0.146 0.149 0.151 

 



48 
 

   
 

 

Tabela 5 – Medidas descritivas da viabilidade celular por fármaco e concentração 

(Linhagem SCC-180) 

 

(conclusão) 

Fármac

o 

Concentraç

ão 

Média de 

absorbância 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Media

na 

Máxim

o 

ART+C

SP 
200 0.052 0.0015 0.050 0.052 0.054 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 7 – Distribuição da viabilidade celular por fármaco e concentração (Linhagem 

SCC-180) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

5.2 Teste de genotoxicidade 



49 
 

   
 

 

 

Em todos os grupos os núcleos foram semelhantes ao normal (Figura 8), 

algumas células binucleadas foram observadas, mas sem a formação de 

micronúcleos. Doses mais altas com o tratamento de CSP e CSP+ART causaram alta 

redução no número das células, mas micronúcleos não foram observados. 

 

 

Figura 8 - Teste de genotoxicidade, linhagem DOK 

 

 
Legenda: A. Controle positivo com formação de micronúcleos. B. Após tratamento com ART na 
concentração de 10μM por 48 horas. C. Após tratamento com CSP na concentração de 10μM por 48 
horas. D. Após tratamento com ART+CSP na concentração de 10μM por 48 horas 
Fonte: Elaborado pelo autor.  

 



50 
 

   
 

5.3 Teste de migração celular 

 

 

5.3.1 Linhagem HaCat 

 

 

A Tabela 6 apresenta as medidas descritivas da distância entre as bordas da 

ferida por fármaco e tempo, além da comparação entre os tempos para cada fármaco, 

para a linhagem HaCat. Como mostra a Figura 9, o comportamento de cada 

fármaco/concentração é diferente, ao longo do tempo, dos demais, ou seja, há 

interação entre fármaco/concentração e tempo, por isso a comparação foi realizada 

entre os tempos para cada fármaco/concentração. 

Os fármacos ART IC10, ART+CSP IC10 e CSP IC10 apresentaram maior distância 

média no tempo 0h que nos tempos 24h e 48h, indicando que estes tratamentos não 

inibiram a migração destas células. Os fármacos ART+CSP IC50 e CSP IC50 

apresentaram maior distância média no tempo 0h que nos tempos 24h e 48h, 

apresentando diferenças estatisticamente significativas (p=<0.001), ou seja, foram 

capazes de reduzir a migração celular. 

O controle negativo não apresentou variação no tempo 48h (distância igual a 

zero em todas as medições), por isso não foi realizada comparação estatística entre 

os tempos. 

 

 

Tabela 6 – Medidas descritivas da distância entre as bordas da ferida por fármaco e 

tempo (Linhagem HaCat) 

 
(continua) 

Fármac

o 

Temp

o 

Média da 

distância 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valor 

ART 

IC10 
0h 414 8 403 416 421 

<0.00

1 



51 
 

   
 

 

 

Tabela 6 – Medidas descritivas da distância entre as bordas da ferida por fármaco e 

tempo (Linhagem HaCat) 

 
(continuação) 

Fármaco 
Tem

po 

Média da 

distância 

Desvio 

Padrão 

Míni

mo 

Media

na 

Máxi

mo 
p-valor 

ART IC10 24h 275 3 270 274 281 
0h>24h>

48h 

ART IC10 48h 129 5 123 128 135  

ART+CSP 

IC10 
0h 395 3 392 395 400 <0.001 

ART+CSP 

IC10 
24h 180 2 177 180 182 

0h>24h>

48h 

ART+CSP 

IC10 
48h 83 3 79 84 88  

ART+CSP 

IC50 
0h 413 3 408 412 417 <0.001 

ART+CSP 

IC50 
24h 329 4 324 329 335 

0h>24h,4

8h 

ART+CSP 

IC50 
48h 325 3 321 325 327  

CSP IC10 0h 422 6 413 421 430 <0.001 

CSP IC10 24h 226 3 223 226 230 
0h>24h>

48h 

CSP IC10 48h 137 6 131 135 147  

CSP IC50 0h 394 2 391 394 396 <0.001 

CSP IC50 24h 348 3 344 348 351 
0h>24h,4

8h 

CSP IC50 48h 348 3 344 348 351  



52 
 

   
 

 

 

Tabela 6 – Medidas descritivas da distância entre as bordas da ferida por fármaco e 

tempo (Linhagem HaCat) 

 
(conclusão) 

Fármaco 
Temp

o 

Média da 

distância 

Desvio 

Padrão 

Míni

mo 

Media

na 

Máxi

mo 

p-

val

or 

Controle 

negativo 
0h 368 19 338 373 384 NC 

Controle 

negativo 
24h 88 6 82 89 96  

Controle 

negativo 
48h 0 0 0 0 0  

Legendas: NC = não calculado. 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 9 – Média da distância entre as bordas da ferida por fármaco e tempo 

(Linhagem HaCat) 

 



53 
 

   
 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 10 - Migração celular da linhagem HaCat, tratada com ART+CISP IC10 

 

Legenda: A. Hora 0. B. Após 24 horas. C. Após 48 horas. Aumento de 100x. 

Fonte: Elaborado pelo autor. 

 

 

5.3.2 Linhagem DOK 

 

 



54 
 

   
 

A Tabela 7 apresenta as medidas descritivas da distância entre as bordas da 

ferida por fármaco e tempo, considerando linhagem DOK. Note que nos tempos 24h 

e 48h a distância entre as bordas foi 0 para praticamente todas as medidas, ou seja, 

nenhum tratamento inibiu a migração destas células. Por essa falta de variação, não 

foi possível realizar teste estatístico comparando os tempos em cada 

fármaco/concentração. 

 

 

Tabela 7 – Medidas descritivas da distância entre as bordas da ferida por fármaco e 

tempo (Linhagem DOK) 

 

(continua) 

Fármaco 
Temp

o 

Média da 

distância 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

ART IC10 0h 271 4 265 270 276 

ART IC10 24h 0 0 0 0 0 

ART IC10 48h 0 0 0 0 0 

ART+CSP 

IC10 
0h 342 3 337 342 345 

ART+CSP 

IC10 
24h 0 0 0 0 0 

ART+CSP 

IC10 
48h 0 0 0 0 0 

ART+CSP 

IC50 
0h 318 2 315 318 320 

ART+CSP 

IC50 
24h 268 2 265 267 272 

ART+CSP 

IC50 
48h 0 0 0 0 0 

CSP IC10 0h 292 6 287 291 302 



55 
 

   
 

 

 

Tabela 7 – Medidas descritivas da distância entre as bordas da ferida por fármaco e 

tempo (Linhagem DOK) 

 

(conclusão) 

Fármaco 
Temp

o 

Média da 

distância 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

CSP IC10 24h 0 0 0 0 0 

CSP IC10 48h 0 0 0 0 0 

CSP IC50 0h 310 4 303 311 314 

CSP IC50 24h 0 0 0 0 0 

CSP IC50 48h 0 0 0 0 0 

Controle 

negativo 
0h 284 2 282 283 287 

Controle 

negativo 
24h 0 0 0 0 0 

Controle 

negativo 
48h 0 0 0 0 0 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 11 - Migração celular da linhagem DOK, tratada com ART IC10  

 

Legenda: A. Hora 0. B. Após 24 horas. C. Após 48 horas. Aumento de 100x 



56 
 

   
 

Fonte: Elaborado pelo autor. 

 

 

5.3.3 Linhagem SCC-180 

 

 

 A Tabela 8 apresenta as medidas descritivas da distância entre as bordas da 

ferida por fármaco e tempo, além da comparação entre os tempos para cada fármaco, 

considerando a linhagem SCC-180. 

A ART IC10, ART+CSP IC10, CSP IC10 e o controle negativo não apresentaram 

variação entre as medições em pelo menos um dos tempos avaliados, por isso não 

foi possível realizar comparação estatística entre os tempos nesses casos. 

A ART+CSP IC50 apresentou maior distância média no tempo 0h que nos tempos 

24h e 48h, e também apresentou maior distância média no tempo 24h que no tempo 

48h, mostrando que esta associação pode retardar a migração de células malignas. 

Já a CSP IC50 apresentou maior distância média no tempo 0h que nos tempos 24h e 

48h, e não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre os 

tempos 24h e 48h (p=<0.001). Desta forma, a ART+CSP IC50 e CSP IC50 tiveram 

resultados significativos na redução da migração das células SCC-180. 

 

 

Tabela 8 – Medidas descritivas da distância entre as bordas da ferida por fármaco e 

tempo (Linhagem SCC-180) 

 

(continua) 

Fármac

o 

Temp

o 

Média da 

distância 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valo

r 



57 
 

   
 

 

 

Tabela 8 – Medidas descritivas da distância entre as bordas da ferida por fármaco e 

tempo (Linhagem SCC-180) 

 

(continuação) 

Fármac

o 

Temp

o 

Média da 

distância 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valo

r 

ART IC10 0h 267 4 260 269 271 NC 

ART IC10 24h 0 0 0 0 0  

ART IC10 48h 0 0 0 0 0  

ART+CSP IC10 0h 300 9 289 300 311 NC 

ART+CSP IC10 24h 148 10 134 148 161  

ART+CSP IC10 48h 0 0 0 0 0  

ART+CSP IC50 0h 284 14 264 285 300 <0.001 

ART+CSP IC50 24h 260 8 248 260 270 
0h>24h>48

h 

ART+CSP IC50 48h 241 14 217 243 255  

CSP IC10 0h 271 4 266 271 278 NC 

CSP IC10 24h 150 5 144 152 154  

CSP IC10 48h 0 0 0 0 0  

CSP IC50 0h 291 14 270 293 307 <0.001 

CSP IC50 24h 201 10 185 203 210 0h>24h,48h 

CSP IC50 48h 199 10 183 200 210  

Controle negativo 0h 377 4 373 376 384 NC 

 

 



58 
 

   
 

Tabela 8 – Medidas descritivas da distância entre as bordas da ferida por fármaco e 

tempo (Linhagem SCC-180) 

 

(conclusão) 

Fármac

o 

Temp

o 

Média da 

distância 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valo

r 

Controle negativo 24h 0 0 0 0 0  

Controle negativo 48h 0 0 0 0 0  

Legendas: NC = não calculado. 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 12 – Média da distância entre as bordas da ferida por fármaco e tempo 

(Linhagem SCC-180) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 



59 
 

   
 

Figura 13 - Migração celular da linhagem SCC-180, tratada com ART+CISP IC10 

 

 

Legenda: A. Hora 0. B. Após 24 horas. C. Após 48 horas. Aumento de 100x 

Fonte: Elaborado pelo autor. 

 

 

5.4 Expressão de proteínas 

 

 

5.4.1 Linhagem HaCat 

 

 

Para a linhagem HaCat, na proteína CALR o controle negativo apresentou maior 

média de expressão apresentando diferença estatística quando comparado aos 

demais grupos (p=0.041). Para as proteínas CAS8 e 9, o controle negativo apresentou 

maior média de expressão do que os grupos experimentais, sem diferenças 

estatísticas, (p=0.133 e p=0.059, respectivamente). Na CAS3, todos os tratamentos 

apresentaram maior média quando comparados ao controle negativo, porém sem 

diferença estatística (p=0.259). A expressão de HMGB-1 foi nula em todas as 

amostras, por isso os valores na tabela 9 são iguais a zero. 

 

 

 



60 
 

   
 

Tabela 9 – Medidas descritivas da quantidade de nanogramas e picogramas das 

proteínas por ml, por fármaco e proteína (Linhagem HaCat) 

 

(continua) 

Proteín

a 
Fármaco 

Médi

a 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valo

r 

CALR 

(ng/mL) 

ART IC10 0.100 0.106 0.025 0.100 0.175 
0.04

1 

ART+CSP IC10 0.044 0.009 0.038 0.044 0.051  

ART+CSP IC50 0.085 0.038 0.058 0.085 0.112  

CSP IC10 0.078 0.057 0.038 0.078 0.119  

CSP IC50 0.007 0.009 0.000 0.007 0.013  

Controle 

negativo 
0.624 0.343 0.381 0.624 0.867  

CAS3 

(ng/mL) 

ART IC10 0.383 0.247 0.208 0.383 0.558 
0.25

9 

ART+CSP IC10 0.298 0.127 0.208 0.298 0.387  

ART+CSP IC50 0.578 0.148 0.473 0.578 0.683  

CSP IC10 0.600 0.059 0.558 0.600 0.642  

CSP IC50 0.194 0.274 0.000 0.194 0.387  

Controle 

negativo 
0.172 0.243 0.000 0.172 0.344  

CAS8 

(ng/mL) 

ART IC10 2.140 1.120 1.340 2.140 2.930 
0.13

3 

ART+CSP IC10 0.297 0.420 0.000 0.297 0.594  

ART+CSP IC50 2.530 0.976 1.840 2.530 3.220  

CSP IC10 2.600 0.000 2.600 2.600 2.600  

CSP IC50 2.430 0.251 2.250 2.430 2.600  



61 
 

   
 

 

 

Tabela 9 – Medidas descritivas da quantidade de nanogramas e picogramas das 

proteínas por ml, por fármaco e proteína (Linhagem HaCat) 

 

(conclusão) 

Proteín

a 
Fármaco 

Médi

a 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valo

r 

CAS8 

(ng/mL) 

Controle 

negativo 
2.910 0.437 2.600 2.910 3.220 

0.13

3 

CAS9 

(ng/mL) 

ART IC10 0.109 0.058 0.069 0.109 0.150 
0.05

9 

ART+CSP IC10 0.033 0.018 0.020 0.033 0.046  

ART+CSP IC50 0.130 0.056 0.090 0.130 0.169  

CSP IC10 0.131 0.000 0.131 0.131 0.131  

CSP IC50 0.121 0.014 0.111 0.121 0.131  

Controle 

negativo 
0.150 0.027 0.131 0.150 0.169  

HMGB-

1 

(pg/mL) 

ART IC10 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 NC 

ART+CSP IC10 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000  

ART+CSP IC50 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000  

CSP IC10 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000  

CSP IC50 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000  

Controle 

negativo 
0.000 0.000 0.000 0.000 0.000  

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 



62 
 

   
 

 

Figura 14 – Distribuição da quantidade de proteína CALR expressa após os 

tratamentos (Linhagem HaCat) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 15 – Distribuição da quantidade de proteína CAS3 expressa após os 

tratamentos (Linhagem HaCat) 

 



63 
 

   
 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 16 – Distribuição da quantidade de proteína CAS8 expressa após os 

tratamentos (Linhagem HaCat) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 



64 
 

   
 

 

Figura 17 – Distribuição da quantidade de proteína CAS9 expressa após os 

tratamentos (Linhagem HaCat) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 18 – Distribuição da quantidade de proteína HMGB1 expressa após os 

tratamentos (Linhagem HaCat) 

 



65 
 

   
 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

5.4.2 Linhagem DOK 

 

 

Para a linhagem DOK, nas proteínas CAS8 e 9, a ART IC10 apresentou maior 

média de expressão e juntamente com o controle negativo diferiram estatisticamente 

dos demais tratamentos (p=0.003 e p=0.001, respectivamente).  

Na proteína CALR os tratamentos ART+CSP IC50, ART+CSP IC10 e ART IC10 

apresentaram maior média quando comparado ao controle negativo, porém sem 

diferenças significantes (p=0.490). Para a CAS3 todos os tratamentos, com exceção 

da CSP IC10 apresentaram maior média de expressão do que o controle negativo, 

embora diferenças estatísticas não tenham sido encontradas (p=0.457), assim como 

para a proteína HMGB1, onde ART+CSP IC50 e CSP IC50 apresentaram maior média 

comparada ao controle negativo, porém sem diferenças estatísticas (p=0.462). 

 

 



66 
 

   
 

Tabela 10 – Medidas descritivas da quantidade de nanogramas e picogramas das 

proteínas por ml por fármaco e proteína (Linhagem DOK) 

 

(continua) 

Proteín

a 
Fármaco 

Médi

a 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valo

r 

CALR 

(ng/mL) 

ART IC10 0.277 0.083 0.218 0.277 0.336 
0.49

0 

ART+CSP IC10 0.290 0.183 0.161 0.290 0.419  

ART+CSP IC50 0.321 0.042 0.291 0.321 0.351  

CSP IC10 0.190 0.081 0.132 0.190 0.247  

CSP IC50 0.115 0.034 0.091 0.115 0.139  

Controle 

negativo 
0.223 0.138 0.125 0.223 0.321  

CAS3 

(ng/mL) 

ART IC10 0.909 0.087 0.848 0.909 0.970 
0.45

7 

ART+CSP IC10 0.546 0.773 0.000 0.546 1.090  

ART+CSP IC50 0.621 0.030 0.600 0.621 0.642  

CSP IC10 0.137 0.035 0.112 0.137 0.161  

CSP IC50 0.637 0.414 0.344 0.637 0.930  

Controle 

negativo 
0.266 0.293 0.060 0.266 0.473  

CAS8 

(ng/mL) 

ART IC10 2.910 0.437 2.600 2.910 3.220 
0.00

3 

ART+CSP IC10 2.250 0.000 2.250 2.250 2.250  

ART+CSP IC50 2.050 0.288 1.840 2.050 2.250  

CSP IC10 0.594 0.000 0.594 0.594 0.594  

CSP IC50 1.590 0.352 1.340 1.590 1.840  



67 
 

   
 

 

 

Tabela 10 – Medidas descritivas da quantidade de nanogramas e picogramas das 

proteínas por ml por fármaco e proteína (Linhagem DOK) 

 

(conclusão) 

Proteín

a 
Fármaco 

Médi

a 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valo

r 

CAS8 

(ng/mL) 

Controle 

negativo 
2.770 0.227 2.600 2.770 2.930 

0.00

3 

CAS9 

(ng/mL) 

ART IC10 0.150 0.027 0.131 0.150 0.169 
0.00

1 

ART+CSP IC10 0.111 0.000 0.111 0.111 0.111  

ART+CSP IC50 0.101 0.015 0.090 0.101 0.111  

CSP IC10 0.046 0.000 0.046 0.046 0.046  

CSP IC50 0.080 0.015 0.069 0.080 0.090  

Controle 

negativo 
0.141 0.014 0.131 0.141 0.150  

HMGB-

1 

(pg/mL) 

ART IC10 1579 95.6 1511 1579 1647 
0.46

2 

ART+CSP IC10 1520 61.4 1477 1520 1563  

ART+CSP IC50 1639 64.6 1594 1639 1685  

CSP IC10 1587 4.54 1584 1587 1590  

CSP IC50 1613 33.8 1589 1613 1636  

Controle 

negativo 
1601 5.76 1597 1601 1605  

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 



68 
 

   
 

 

Figura 19 – Distribuição da quantidade de proteína CALR expressa após os 

tratamentos (Linhagem DOK) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 20 – Distribuição da quantidade de proteína CAS3 expressa após os 

tratamentos (Linhagem DOK) 

 



69 
 

   
 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 21 – Distribuição da quantidade de proteína CAS8 expressa após os 

tratamentos (Linhagem DOK) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 



70 
 

   
 

 

Figura 22 – Distribuição da quantidade de proteína CAS9 expressa após os 

tratamentos (Linhagem DOK) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 23 – Distribuição da quantidade de proteína HMGB1 expressa após os 

tratamentos (Linhagem DOK) 

 



71 
 

   
 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

5.4.3 Linhagem SCC-180 

 

 

Para a linhagem SCC-180, na proteína CALR todas as concentrações de CSP 

IC50 foram iguais a zero e, por isso, esse tratamento não entrou na comparação. Na 

proteína CAS3 todas as concentrações de CSP IC10 e CSP IC50 são iguais a zero e, 

por isso, esses tratamentos também não entraram na comparação.  

Para a proteína HMGB-1 o controle negativo, a ART IC10, CSP IC10 e ART+CSP 

IC10 apresentaram maiores médias que os demais tratamentos, diferindo 

estatisticamente (p=<0.001).  

Nas proteína CALR os tratamentos com ART IC10, ART+CSP IC10 e CSP IC10 

apresentaram maior média que o controle negativo, porém sem diferenças estatísticas 

(p=0.058). Na proteína CAS3 o controle negativo expressou maior concentração desta 

proteína, sem diferenças significantes (p=0.081). Para a CAS8 e CAS9 os tratamentos 

com ART+CSP IC50 e ART IC10 expressaram maiores médias que o controle negativo, 

porém sem diferenças significantes, (p=0.056 e p-0.118, respectivamente).  



72 
 

   
 

 

 

Tabela 11 – Medidas descritivas da quantidade de nanogramas e picogramas das 

proteína por ml por fármaco e proteína (Linhagem SCC-180) 

 

(continua) 

Proteín

a 
Fármaco Média 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valor 

CALR 

(ng/mL) 

ART IC10 0.464 0.265 0.277 0.464 0.651 0.058 

ART+CSP 

IC10 
0.446 0.005 0.442 0.446 0.449  

ART+CSP 

IC50 
0.051 0.028 0.032 0.051 0.071  

CSP IC10 0.430 0.005 0.427 0.430 0.434  

CSP IC50 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000  

Controle 

negativo 
0.158 0.075 0.105 0.158 0.211  

CAS3 

(ng/mL) 

ART IC10 0.279 0.395 0.000 0.279 0.558 0.081 

ART+CSP 

IC10 
0.279 0.395 0.000 0.279 0.558  

ART+CSP 

IC50 
0.237 0.335 0.000 0.237 0.473  

CSP IC10 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000  

CSP IC50 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000  

Controle 

negativo 
1.280 0.029 1.260 1.280 1.300  

CAS8 

(ng/mL) 

ART IC10 2.250 0.000 2.250 2.250 2.250 0.056 

ART+CSP 

IC10 
0.000 0.000 0.000 0.000 0.000  

 



73 
 

   
 

 

Tabela 11 – Medidas descritivas da quantidade de nanogramas e picogramas das 

proteína por ml por fármaco e proteína (Linhagem SCC-180) 

 

(continuação) 

Proteín

a 
Fármaco Média 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valor 

CAS8 

(ng/mL) 

ART+CSP 

IC50 
2.930 1.540 1.840 2.930 4.010 0.056 

CSP IC10 1.590 0.352 1.340 1.590 1.840  

CSP IC50 1.590 0.352 1.340 1.590 1.840  

Controle 

negativo 
1.590 0.352 1.340 1.590 1.840  

CAS9 

(ng/mL) 

ART IC10 0.111 0.000 0.111 0.111 0.111 0.118 

ART+CSP 

IC10 
0.010 0.014 0.000 0.010 0.020  

ART+CSP 

IC50 
0.157 0.094 0.090 0.157 0.224  

CSP IC10 0.080 0.015 0.069 0.080 0.090  

CSP IC50 0.080 0.015 0.069 0.080 0.090  

Controle 

negativo 
0.080 0.015 0.069 0.080 0.090  

HMGB-

1 

(pg/mL) 

ART IC10 1456 18.8 1443 1456 1469 
<0.00

1 

ART+CSP 

IC10 
1356 82.2 1298 1356 1414  

ART+CSP 

IC50 
264 46.6 231 264 297  

CSP IC10 1401 17.7 1388 1401 1413  

 



74 
 

   
 

 

Tabela 11 – Medidas descritivas da quantidade de nanogramas e picogramas das 

proteína por ml por fármaco e proteína (Linhagem SCC-180) 

 

(conclusão) 

Proteín

a 
Fármaco Média 

Desvio 

Padrão 

Mínim

o 

Median

a 

Máxim

o 

p-

valor 

HMGB-

1 

(pg/mL) 

CSP IC10 1401 17.7 1388 1401 1413 
<0.00

1 

CSP IC50 848 38.8 821 848 876  

Controle 

negativo 
1522 84.8 1462 1522 1582  

Fonte: Elaborado pelo autor.  
 

 

Figura 24 – Distribuição da quantidade de proteína CALR expressa após os 

tratamentos (Linhagem SCC-180) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  



75 
 

   
 

 

 

Figura 25 – Distribuição da quantidade de proteína CAS3 expressa após os 

tratamentos (Linhagem SCC-180) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 26 – Distribuição da quantidade de proteína CAS8 expressa após os 

tratamentos (Linhagem SCC-180) 

 



76 
 

   
 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

Figura 27 – Distribuição da quantidade de proteína CAS9 expressa após os 

tratamentos (Linhagem SCC-180) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 



77 
 

   
 

 

Figura 28 – Distribuição da quantidade de proteína HMGB1 expressa após os 

tratamentos (Linhagem SCC-180) 

 

 

Fonte: Elaborado pelo autor.  

 

 

  



78 
 

   
 

6 DISCUSSÃO 

 

 

 A ART e seus derivados apresentam propriedades anticancerígenas contra 

diversas neoplasias in vitro e in vivo, como de mama (Cao et al., 2019; Wen et al., 

2018), de cabeça e pescoço (Roh et al., 2017), laringe (Singh, Verma, 2002), ovário, 

fígado (Zhou et al., 2021) e de câncer de boca (Nam et al., 2007), além de atividade 

antimalárica (Dembitsky et al., 2021). O isolamento e identificação de novos 

compostos são importantes para que substituam os quimioterápicos que possuem 

diversos efeitos adversos como náuseas, vômitos, efeitos tóxicos em diferentes 

órgãos e resistência de alguns tumores, como é o caso da CSP (Lee et al., 2007; Oun 

et al., 2018; Shen et al., 2012). 

 No presente estudo observamos que a ART não causou uma redução 

significativa da viabilidade celular das linhagens de LO e CCEO, embora a ART tenha 

sido descrita capaz de atuar seletivamente em células cancerígenas (Efferth, 2017). 

Em um estudo de Tin et al. (2012) a ART atuou de maneira distinta entre células 

tumorais e não tumorais de mama, indicando que propriedades intrínsecas de cada 

tipo celular podem causar diferentes respostas ao composto, assim, em células de 

LO e CCEO ocorrem mudanças a níveis moleculares que podem afetar a maneira de 

resposta ao composto. Ainda, Posadino et al. (2023) sugeriram que os efeitos da ART 

dependem da linhagem celular e do desenho experimental, como meio de diluição e 

doses testadas, o que pode explicar os nossos resultados encontrados com este 

composto.  

 No presente estudo, a diluição da CSP e ART foi feita em PBS que é um meio 

aquoso, pois Massart et al., (1993) relataram que o DMSO (dimetilsulfóxido) reduziu 

a citotoxicidade da CSP, que pode mascarar os resultados. Bhakuni et al. (2001) 

relataram que a melhor biodisponibilidade da ART é em suas folhas secas, ainda, 

Titulaer et al. (1991) relataram que a inclusão da ART em óleo mostrou uma absorção 

mais rápida com concentrações de pico relativamente altas quando comparado com 

a suspensão aquosa, que revelou uma ação baixa. 

 O DMSO é conhecido como um solvente universal e é muito empregado na 

solubilização de soluções de estoque de medicamentos de base orgânica (Pereira,  

Williams, 2007). Ainda, o DMSO pode interagir com compostos de platina, mudando 



79 
 

   
 

seus complexos, tornando-os instáveis neste meio de diluição (Hall et al., 2014; 

Kerrison, Sadler, 1985), comprometendo a citotoxicidade do fármaco, favorecendo a 

proliferação celular (Hall et al., 2014). Com isso, autores sugerem outros meios de 

diluição de drogas, como o soro fisiológico e o PBS, que foi diluente empregado por 

nós (Hall et al., 2014). 

 A CSP possui atividade anticancerígena bem estabelecida apesar de seus 

efeitos adversos, o que foi possível observar em nossos resultados, onde a 

viabilidade de todas as linhagens celulares testadas diminuiu conforme a 

concentração aumentou, evidenciando que a CSP não atua seletivamente em células 

neoplásicas pois causou redução na viabilidade de queratinócitos normais, o que não 

foi observado com a ART, que apresentou baixa citotoxicidade em todas as linhagens 

testadas. 

 A ART não demonstrou efeitos genotóxicos nas doses testadas, assim como 

a CSP em baixas concentrações, porém, a CSP causou uma redução no número de 

células nas maiores doses, não sendo observado a formação de micronúcleos, 

ape