Vanessa Rodrigues dos Santos 
 
 

 
 

 
 
 
 
 
 
 
 

Araçatuba - SP  
2019 

EFEITO CITOTÓXICO E AÇÃO 
ANTIMICROBIANA/ANTIBIOFILME DE 

HÍBRIDOS DE CURCUMINA E CINAMALDEÍDO 
SOBRE MICRORGANISMOS DE INTERESSE 

ENDODÔNTICO 



 

Vanessa Rodrigues dos Santos 
 
 

 
 

 
 

 

Dissertação apresentada à Faculdade de Odontologia 

da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita 

Filho”, Campus de Araçatuba, para obtenção de título 

de Mestre em Ciência Odontológica - Área de 

Concentração: Saúde bucal da criança 

        
                                               Orientadora: Profª Drª Cristiane Duque  

Coorientadora: Profª Drª Aimée Maria Guiotti             
                     

                
 
 
 

 
 

Araçatuba - SP 
2019

EFEITO CITOTÓXICO E AÇÃO 
ANTIMICROBIANA/ANTIBIOFILME DE 

HÍBRIDOS DE CURCUMINA E CINAMALDEÍDO 
SOBRE MICRORGANISMOS DE INTERESSE 

ENDODÔNTICO 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Catalogação-na-Publicação (CIP) 

Diretoria Técnica de Biblioteca e Documentação – FOA / UNESP 

 

 Santos, Vanessa Rodrigues dos. 

S237e  Efeito citotóxico e ação antimicrobiana/antibiofilme de 

 híbridos de curcumina e cinamaldeído sobre microrganismos 

 de interesse endodôntico / Vanessa Rodrigues dos Santos. - 

 Araçatuba, 2019 

  97 f. : il. ; tab.  

 

  Dissertação (Mestrado) – Universidade Estadual Paulista,  

 Faculdade de Odontologia de Araçatuba 

  Orientadora: Profa. Cristiane Duque 

  Coorientadora: Profa. Aimée Maria Guiotti 

 

  1. Curcumina 2. Cinamaldeído 3. Atividade antimicrobiana 

 4 Biofilmes 5. Citotoxicidade I. T. 

 

    Black D27 

    CDD 617.645 

 

Claudio Hideo Matsumoto – CRB-8/5550 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 
 

 

 

 

 

 

 
 

 

 

 

 

Dados Curriculares 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Vanessa Rodrigues dos Santos 
 

 
Nascimento 

 
22.07.1992 – Santa Helena de Goiás - GO 
 

 

Filiação 
Antonio Roberto dos Santos 

Euciene Rodrigues da Silva dos Santos 

 
2012/2016 Curso de Graduação em Odontologia pela Faculdade de Odontologia 

de Araçatuba –UNESP.  

 
2013/2013 

 

 

 

2014/2016 

 

 

2016/2016 

 

Desenvolvimento de Projeto de Iniciação Científica, com auxílio 

PIBIC-CNPq. 

 

Desenvolvimento de Projeto de Iniciação Científica, com auxílio da 

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo-FAPESP. 

 

Desenvolvimento de Projeto de Iniciação Científica, com auxílio 

PIBIC-CNPq. 

 

2017/2017 

 
 
 
 
2017/2019 
 
 
 
 

Desenvolvimento de Projeto de Mestrado com auxílio do Conselho 

Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-CNPq. 

 

Desenvolvimento de Projeto de Mestrado com auxílio da Fundação de 

Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo-FAPESP. 

Associações CROSP - Conselho Regional de Odontologia de São Paulo. 

SBPqO - Sociedade Brasileira de Pesquisa Odontológica. 

 

 
 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 

Comissão Examinadora 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Defesa de Dissertação 
 

 
Profa. Dra. Cristiane Duque - Orientadora Professora Associada do Departamento de 

Odontologia Infantil e Social, Disciplina de Odontopediatria da Faculdade de 

Odontologia – FOA/UNESP - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, 

Araçatuba.  

 

Profa. Dra. Aline Rogéria Freire de Castilho – Professora Doutora Colaboradora do 

Departamento de Odontologia Infantil, Disciplina de Odontopediatria da Faculdade de 

Odontologia – FOP/UNICAMP – Universidade Estadual de Campinas, Campinas  

 

Profa. Dra. Marcelle Danelon – Professora Doutora permanente no Programa de Pós-

graduação em Ciência Odontológica, Área de Concentração Saúde Bucal da Criança, na 

Faculdade de Odontologia – FOA/UNESP - Universidade Estadual Paulista Júlio de 

Mesquita Filho, Araçatuba.  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 

 

Epígrafe 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
  
 

“Consagre ao Senhor tudo o que você faz, e os seus planos serão bem-

sucedidos. ”  Provérbios 16:3 

https://www.bibliaonline.com.br/nvi/pv/16/3+


 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 

 

Dedicatória 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

À Deus,  

 

Por me conceder o dom da vida e guiar meu caminho. Vejo Suas mãos em cada 

momento dessa trajetória e reconheço seu cuidado em cada detalhe. As forças que por 

muitas vezes me faltavam vinham de Ti; nos momentos de dificuldade foste o meu 

apoio. Me fez acreditar que nada é difícil demais quando se confia no Senhor. Me fez 

enxergar aquilo que os meus olhos ainda não podiam contemplar. 

Ao Senhor dedico esta conquista!  

 

“Bendito o homem que confia no SENHOR, e cuja confiança é o SENHOR’’ 

Jeremias 17:7 

 

 

Aos meus pais, 

 

Aqueles sem os quais nada disso seria possível. Por estarem comigo em cada fase dessa 

trajetória. Por todo amor e carinho dedicados a mim. Saber que tenho o apoio de vocês 

faz toda a diferença. Me faz sentir segura e capaz de realizar grandes sonhos, pois sei 

que estão sonhando ao meu lado. 

Esta vitória é por vocês e para vocês! 

 

 

“...honra a teu pai e a tua mãe, como o SENHOR, teu Deus, te ordenou, para que se 

prolonguem os teus dias e para que te vá bem na terra que o SENHOR, teu Deus, te 

dá. ”  Deuteronômio 5:16 

 

 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 

 

Agradecimentos Especiais 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Aos meus pais, Roberto e Euciene 

 

Obrigada por estarem sempre ao meu lado, ajudando a realizar meus sonhos. Sei que 

lutam todos os dias para dar o melhor futuro para mim e para meus irmãos. Não medem 

esforços para nos ver felizes. Obrigada pelos princípios e valores ensinados a mim. Me 

orgulho imensamente de fazer parte dessa família e de ser filha de vocês. Te amo Pai! 

Te amo Mãe! 

 

Aos meus irmãos, Victor e Renata 

 

Obrigada maninhos por sempre poder contar com vocês e por todo apoio dado a mim. 

Mesmo de longe sei que torcem por mim, assim como desejo que alcancem sempre o 

que há de melhor nesse mundo. Amo vocês! 

 

A minha orientadora, Cristiane Duque 

 

Muito obrigada pelo enorme privilégio de fazer parte da sua equipe! Obrigada pela 

oportunidade e confiança que tem depositado em mim há quase sete anos. Tempo esse 

suficiente para eu poder afirmar com toda certeza quão maravilhosa é a sua pessoa. 

Pessoa essa de um coração generoso, humilde e sempre disposto a ajudar. Uma 

professora e orientadora dedicada, e que ama o que faz. Muito além de realizar suas 

tarefas com esmero, traz inspiração a todos a sua volta. Me sinto privilegiada por ser 

sua orientada e de nossa convivência ter ultrapassado os limites da universidade. 

Agradeço todo conhecimento transmitido a mim, assim como a paciência e o carinho. 

Vencemos mais essa etapa e espero que outras conquistas ainda estejam por vir. 

 

A minha querida amiga Morganna  

 

Muito obrigada pela amizade e companheirismo. Sempre pronta para o que eu 

precisasse. Sua amizade foi muito importante nessa trajetória. Momentos alegres e 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

tristes que passei pude ver o quão precioso é ter com quem contar. Sou feliz em saber 

que sempre poderei contar com você. Te amo amiga!  

 

A minha querida amiga Karina  

 

Agradeço a Deus por ter te colocado no meu caminho. Você é peça fundamental na 

execução desse trabalho. E muito mais do que uma colega de trabalho, você se tornou 

uma grande amiga! Obrigada por ser essa amiga de coração enorme e de grande 

cumplicidade. Companheira para todas as horas. Com toda certeza sua amizade fez os 

meus dias se tornarem mais fáceis e divertidos durante esse período. Sua luz contagia! 

Amo você!  

 

Aos amigos Isabela, Caio, Heitor e Igor  

 

Obrigada queridos amigos por nossa amizade! Bem mais fácil levar a vida com amigos 

do lado. Muitas vezes foram a família que eu não tinha por perto. Vou sempre levá-los 

em meu coração.  

 

Ao Leonardo Morais 

 

Obrigada por sua amizade e companheirismo. Principalmente nessa reta final sua 

companhia tem sido de grande importância. É bom ter você por perto! 

 

Ao querido José Antônio 

 

Obrigada Zé pela sua enorme paciência em me ajudar quando preciso. Você com seu 

jeito sério e ao mesmo tempo todo brincalhão de ser faz de você essa pessoa tão 

especial. Obrigada pelas gargalhadas e momentos que passamos juntos nessa trajetória. 

 

 

 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Aos colegas de laboratório Amanda, Márjully, Thayse,  Nayara, Mayra, 

Gabriel, Jadison, Sara, Rafaela, Jesse, Gabriela, Warlley, Cecília, Gabriela 

Fernandes, Priscila, Francienne, Carla, Isabel e Ana Paula 

 

Obrigada pela excelente convivência no laboratório e toda prestatividade quando foi 

necessária. 

 

A minha coorientadora, Aimée Maria Guiotti 

 

Muito obrigada por toda colaboração. Te admiro como profissional e pessoa. 

 

Aos docentes da Disciplina de Odontopediatria da Faculdade de 

Odontologia de Araçatuba, UNESP 

 

Prof. Dr. Alberto Carlos B. Delbem, Prof. Dr. Célio Percinoto, Prof. Dr. Robson Federico 

Cunha, Prof. Dr. Juliano Pelim Pessan e Profª Dra. Sandra M. H. C. Ávila de Aguiar, muito 

obrigada por todo conhecimento transmitido, pela fácil acessibilidade, assim como a 

ótima convivência. 

 

Aos alunos Colaboradores do trabalho: Thainara, Gabriela, Jesse, 

Rafaela, Warlley e Gabriel Abuna 

 

Obrigada por toda ajuda e empenho no desenvolvimento deste trabalho. O 

companheirismo de vocês foi muito importante. 

 

 

 

 

 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Ao professor e alunos colaboradores: Prof. Dr. Luís Octávio Regasini, ao 

aluno Carlos Roberto Polaquini e toda equipe de trabalho do 

Departamento de Química e Ciências Ambientais, do Instituto de 

Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE), UNESP, São José do Rio 

Preto pelo desenvolvimento dos híbridos estudados  

 

Obrigada pela parceria e por toda colaboração durante o desenvolvimento do trabalho. 

  

Aos funcionários do Departamento de Odontopediatria 

 

Ricardo, Mário e Luisinho. Por manterem a organização no laboratório; por toda a ajuda 

e dedicação. Muito obrigada! 

 

À Banca do Exame Geral de Qualificação e à Banca de Defesa 

 

Muito obrigada por toda contribuição no trabalho e pelos conhecimentos trocados. 

 

À Faculdade de Odontologia de Araçatuba, na pessoa dos professores Dr. 

Wilson Roberto Poi, digníssimo Diretor e Dr. João Eduardo Gomes Filho, digníssimo 

Vice-Diretor. 

 

A Faculdade de Odontologia de Piracicaba- FOP, Unicamp, por disponibilizar 

o laboratório de Microbiologia e de Microscopia Confocal, através dos quais foi 

possível realizar parte dos ensaios desenvolvidos neste estudo.  

 

Ao Curso de Pós-Graduação em Ciência Odontológica da Faculdade de 

Odontologia de Araçatuba-UNESP, na pessoa do coordenador Prof. Dr. Luciano 

Tavares Ângelo Cintra. 

 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Aos funcionários da biblioteca da Faculdade de Odontologia de 

Araçatuba da UNESP, Ana Cláudia, Luzia, Ivone, Cláudio, Maria Cláudia, Luiz, 

Denise e Izamar pela atenção e disponibilidade com que nos recebem.  

 

À Valéria, Cristiane e Lilian da Seção de Pós-Graduação da Faculdade de 

Odontologia de Araçatuba-UNESP, pelo profissionalismo e atenção sempre 

carinhosa.  

 

Ao Frigorífico Friboi, que permitiram a coleta dos dentes bovinos. 

Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-
CNPq (131205/2017-0), pela concessão de recursos que possibilitou a realização 

deste Curso de Mestrado.  
 

 

A Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo-FAPESP 

(Processo 2017/05892-8) pela concessão de recursos que possibilitou a realização 

deste Curso de Mestrado. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 

 

 

Resumo  



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Santos VR. Efeito citotóxico e ação antimicrobiana/antibiofilme de híbridos de 
curcumina e cinamaldeído sobre microrganismos de interesse endodôntico. 2019 97f. 
Dissertação (Mestrado em Ciência Odontológica, área de Saúde Bucal da Criança) - 
Faculdade de Odontologia de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Araçatuba 
2019. 
 

Resumo  

Embora o tratamento endodôntico convencional reduza significativamente a microbiota 

presente no interior dos canais radiculares, a permanência de microrganismos devido à 

complexidade anatômica do sistema de canais radiculares e a resistência destes ao 

tratamento químico-mecânico pode ocasionar infecções persistentes ou secundárias. 

Muitos estudos têm explorado o uso de fitoquímicos, buscando obter novos compostos 

que apresentem propriedades farmacológicas. A curcumina, pigmento amarelo isolado 

dos rizomas da Curcuma longa (Zingiberaceae), e o cinamaldeido, substância volátil 

responsável pelo odor e sabor das cascas dos caules de plantas do gênero Cinnamomum 

(Lauraceae) são possíveis substâncias promissoras. O objetivo do estudo foi avaliar o 

efeito citotóxico e ação antimicrobiana/antibiofilme de compostos híbridos de 

curcumina e cinamaldeído sobre microrganismos de interesse endodôntico. Foram 

realizados ensaios para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e 

Concentração Bactericida Mínima (CBM) do cinamaldeído, da curcumina e dos 23 

híbridos sobre Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Lactobacillus casei, 

Actinomyces israelii e Fusobacterium nucleatum. Os melhores compostos foram 

avaliados em ensaios de biofilme simples (cada cepa bacteriana isoladamente) e dual-

espécies (E. faecalis + L. casei, E. faecalis + S. mutans, E. faecalis + A. israelii, E. faecalis 

+ F. nucleatum) em placas de poliestireno objetivando-se determinar o efeito sobre o 

metabolismo bacteriano utilizando o ensaio de XTT e sua viabilidade através da 

contagem das Unidades Formadoras de Colônias (UFCs), após 24 ou 48 horas de 

exposição ao composto. A toxicidade também foi avaliada sobre fibroblastos (linhagem 

L-929) utilizando o ensaio de methyltetrazolium (MTT). Além disso, biofilmes mistos com 

as mesmas espécies bacterianas selecionadas e multiespécies com amostras de biofilme 

humano foram formados em dentina radicular de dentes bovinos e após tratamento de 

48 horas com o composto/controle, foram avaliados por microscopia confocal. Os dados 

apresentaram distribuição normal e as diferenças entre grupos (antimicrobianos e 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

tempos de crescimento – 1 ou 2 semanas) foi analisada por ANOVA (One-way ou Two-

way) seguido pelo teste de Tukey. Dos 25 compostos testados, 9 deles apresentaram 

efeito inibitório para, no mínimo, uma das espécies bacterianas testadas com valores de 

MIC/MBC variando entre 0,009 a 0,625 mg/mL. O composto LA11 e o controle 

clorexidina (CHX) apresentaram o melhor efeito inibitório para todas as espécies 

bacterianas testadas e, por este motivo, foram selecionados para os ensaios 

subsequentes. LA11 apresentou compatibilidade em fibroblastos em concentração 

superior à da Clorexidina (CHX) e teve efeito superior ou semelhante à CHX, reduzindo 

estatisticamente o metabolismo e viabilidade bacteriana nos biofilmes simples e dual-

espécies, sendo que biofilmes de S. mutans foram os mais afetados. Para os biofilmes 

formados em dentina radicular, LA11 teve efeito significante sobre os biofilmes mistos 

com redução de 85,93%, enquanto que nos biofilmes multiespécies, a redução 

microbiana foi de 33,76%. Conclui-se que o composto híbrido LA11 apresentou 

citocompatibilidade e efeito antimicrobiano e contra biofilme de espécies bacterianas 

relacionadas às infecções radiculares e poderia ser uma opção de agente antimicrobiano 

para aplicação no tratamento endodôntico. 

 

Palavras-chave: Curcumina, Cinamaldeído, Atividade antimicrobiana, Biofilme, 

Citotoxicidade 

 

 

 
 
 
 
 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 

Abstract 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Santos VR. Cytotoxic effect and antimicrobial action / antibiofilm of hybrids of curcumin 
and cinnamaldehyde on microorganisms of endodontic interest. 2019 97f. Dissertação 
(Mestrado em Ciência Odontológica, área de Saúde Bucal da Criança) - Faculdade de 
Odontologia de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Araçatuba 2019. 
 
Abstract 
 

Although conventional endodontic treatment significantly reduces the microbiota present 

inside the root canals, the permanence of microorganisms due to the anatomical 

complexity of the root canal system and their resistance to chemical-mechanical 

treatment can lead to persistent or secondary infections. Many studies have explored 

the use of phytochemicals, seeking to obtain new compounds that present 

pharmacological properties. Curcumin, a yellow pigment isolated from Curcuma longa 

rhizomes (Zingiberaceae), and cinnamaldehyde, the volatile substance responsible for 

the odor and taste of plant stems of the genus Cinnamomum (Lauraceae) are possible 

promising substances. The objective of the study was to evaluate the cytotoxic effect 

and antimicrobial action / antibiofilm of hybrid compounds of curcumin and 

cinnamaldehyde on microorganisms of endodontic interest. The minimum inhibitory 

concentration (MIC) and minimum bacterial concentration (MBM) of cinnamaldehyde, 

curcumin and 23 hybrids on Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Lactobacillus 

casei, Actinomyces israelii and Fusobacterium nucleatum were determined. The best 

compounds were evaluated on single biofilms (single bacterial strain) and dual-species 

biofilms (E. faecalis + L. casei, E. faecalis + S. mutans, E. faecalis + A. israelii, E. faecalis 

+ F. nucleatum) in polystyrene plates to determine the effect on bacterial metabolism 

using the XTT assay and its viability by counting Colony Forming Units (CFUs) after 24 

or 48 hours of exposure to the compound. Toxicity was also evaluated on fibroblasts 

(L929 cell line) using the methyltetrazolium (MTT) assay. In addition, mixed biofilms with 

the same bacterial species selected and multispecies with human biofilm samples were 

formed in the dentinal root of bovine teeth and after 48 hours treatment with the 

compound / control, they were evaluated by confocal microscopy. The data presented 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

normal distribution and the differences between groups (antimicrobials and growth times 

- 1 or 2 weeks) were analyzed by ANOVA (One-way or Two-way) followed by the Tukey 

test. Of the 25 compounds tested, 9 of them had inhibitory effect for at least one of the 

bacterial species tested with MIC / MBC values ranging from 0.009 to 0.625 mg / mL. 

The LA11 compound and the chlorhexidine control (CHX) had the best inhibitory effect 

for all bacterial species tested and were therefore selected for subsequent assays. LA11 

showed a higher concentration of chlorhexidine (CHX) in the fibroblasts and had a CHX-

like or higher effect, reducing bacterial metabolism and viability in single and dual-

species biofilms, with S. mutans biofilms being the most affected. For biofilms formed in 

root dentin, LA11 had a significant effect on mixed biofilms with a reduction of 85.93%, 

whereas in the multispecies biofilms, the microbial reduction was 33.76%. It is concluded 

that the hybrid compound LA11 presented cytocompatibility and antimicrobial effect and 

against biofilm of bacterial species related to root infections and could be an option of 

antimicrobial agent for application in endodontic treatment. 

 

Keywords: Curcumin, Cinnamaldehyde, Antimicrobial activity, Biofilm, Cytotoxicity 

 

 

 

 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Lista de Figuras 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Lista de Figuras 

Figura 1 Planejamento dos Híbridos Curcumina-Cinamaldeído 

das Série I, II e III 

 

68 

Figura 2 Esquema representando a reação química entre 

cinamaldeído (1) e a subunidade acetofenona da 

curcumina (2) que gerou os híbridos supracitados. 

 

69 

Figura 3 Média (DP) da porcentagem de metabolismo dos 

fibroblastos L929 expostos aos compostos LA11 e CHX. 

A Letras diferentes mostram diferença estatística entre 

os grupos, de acordo com ANOVA e Tukey, 

considerando p<0.05. 

 

72 

Figura 4 Efeito do composto híbrido LA11 e CHX sobre a 

atividade metabólica dos biofilmes simples formados 

por 1 semana ou 2 semanas. A Letras diferentes 

mostram diferença estatística entre os grupos, de 

acordo com ANOVA e Tukey, considerando p<0.05. 

  

73 

Figura 5 Efeito do composto híbrido LA11 e CHX sobre a 

viabilidade dos biofilmes simples formados por 1 

semana ou 2 semanas. A Letras diferentes mostram 

diferença estatística entre os grupos, de acordo com 

ANOVA e Tukey, considerando p<0.05. 

 

74 

Figura 6 Efeito do composto híbrido LA11 e CHX sobre a 

atividade metabólica dos biofilmes dual-espécies de E. 

faecalis e as demais espécies testadas, formados por 2 

75 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

semanas. A Letras diferentes mostram diferença 

estatística entre os grupos, de acordo com ANOVA e 

Tukey, considerando p<0.05.  

 

Figura 7 Efeito do composto híbrido LA11 e CHX sobre a 

viabilidade dos biofilmes dual-espécies de E. faecalis e 

as demais espécies testadas, formados por 2 semanas. 
A Letras diferentes mostram diferença estatística entre 

os grupos, de acordo com ANOVA e Tukey, 

considerando p<0.05.  

 

 

76 

Figura 8 Efeito do composto híbrido LA11 e CHX sobre a 

viabilidade dos biofilmes mistos com as cepas padrão 

testadas, formados por 2 semanas em dentina 

radicular. A Letras diferentes mostram diferença 

estatística entre os grupos, de acordo com ANOVA e 

Tukey, considerando p<0.05.  

 

77 

Figura 9 Efeito do composto híbrido LA11 e CHX sobre a 

viabilidade dos biofilmes multiespécies formados a 

partir de amostras de biofilmes supra e subgengival 

humano, formados por 2 semanas em dentina 

radicular. A Letras diferentes mostram diferença 

estatística entre os grupos, de acordo com ANOVA e 

Tukey, considerando p<0.05.  

 

78 

Figura 10 Imagens 2-D obtidas por microscopia confocal 

representativas dos biofilmes mistos (A,B,C) e 

biofilmes multiespécies (D,E,F) formados em dentina 

radicular e expostos à CHX (A,D); LA11 (B, E) e 

controles: (C) biofilme misto e (F) biofilme 

multiespécies. 

79 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Lista de Tabelas 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Lista de Tabelas 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Tabela 1 Estrutura química dos compostos híbridos mostrando 

os substituintes químicos (OH, NH3, OCH3, CH3 e CF3)  

 

69 

Tabela 2 Valores de CIM e CBM (em mg/mL) para os compostos 

híbridos e controles 

70 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 

Sumário       



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

 

                         Sumário   

Resumo    30 

Introdução    32 

Material e Métodos                          38 

Resultados    47 

Discussão    52 

Referências     58 

Figuras e Tabelas    68 

Anexo A    81 

Anexo B    82 

Anexo C    83 

Anexo D    86 

Anexo E    87 

Anexo F    89 

Anexo G    90 

Anexo H    93 

Anexo I    94 



 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

Efeito citotóxico e ação antimicrobiana/antibiofilme de híbridos de curcumina e 

cinamaldeído sobre microrganismos de interesse endodôntico 

 
Autores: 

Vanessa Rodrigues dos Santosa, Karina Sampaio Caiaffab, Jesse Augusto Pereiraa, Carlos 

Roberto Polaquinic, Luis Octávio Regasinic, Cristiane Duquea 

 

aDepartamento de Odontologia Infantil e Social, Faculdade de Odontologia de 

Araçatuba, Universidade Estadual Paulista (UNESP), Araçatuba, Brasil.  

 

bDepartamento de Odontologia Restauradora, Faculdade de Odontologia de Araçatuba, 

Universidade Estadual Paulista (UNESP), Araçatuba, Brasil.  

 

cLaboratório de Química Verde e Medicinal, Departamento de Química e Ciências do 

Ambiente, Instituto de Biociências, Ciências Humanas e Exatas, Universidade Estadual 

Paulista (Unesp), São José do Rio Preto, Brasil.  

 

* Correspondência: 

Departamento de Odontologia Infantil e Social, Faculdade de Odontologia de Araçatuba, 

Universidade Estadual Paulista (UNESP), Araçatuba, Brasil. Rua José Bonifácio, 1193, Vila 

Mendonça, 16015050, Araçatuba, São Paulo, Brasil.  

Telefone: 55-18-36363315. 

E-mail: cristianeduque@yahoo.com.br, cduque@foa.unesp.br 

 

 

*O manuscrito está de acordo com as normas da Revista Archives of Oral Biology 

https://www.elsevier.com/journals/archives-of-oral-biology/00039969/guide-for-authors 

 

https://www.elsevier.com/journals/archives-of-oral-biology/00039969/guide-for-authors


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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Resumo  

Objetivos: avaliar o efeito citotóxico e ação antimicrobiana/antibiofilme de compostos 

híbridos de curcumina e cinamaldeído sobre microrganismos de interesse endodôntico. 

Métodos: Foram realizados ensaios para determinação da Concentração Inibitória 

Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) dos compostos sobre 

Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Lactobacillus casei, Actinomyces israelii e 

Fusobacterium nucleatum. Os melhores compostos foram avaliados em ensaios de 

biofilme simples e dual-espécies em placas de poliestireno para determinar o efeito 

sobre o metabolismo e a viabilidade de espécies bacterianas após exposição aos 

compostos. A toxicidade também foi avaliada sobre fibroblastos humanos. Além disso, 

biofilmes mistos com as mesmas espécies bacterianas selecionadas e multiespécies com 

amostras de biofilme humano foram formados em dentina radicular e os compostos 

avaliados por microscopia confocal.  

Resultados: Dos 25 compostos testados, 9 deles apresentaram efeito inibitório para, no 

mínimo, uma das espécies bacterianas testadas. O composto LA11 e o controle 

clorexidina (CHX) apresentaram o melhor efeito inibitório para todas as espécies 

bacterianas testadas e, por este motivo, foram selecionados para os ensaios 

subsequentes. LA11 apresentou compatibilidade em fibroblastos em concentração 

superior à da CHX e teve efeito superior ou semelhante à CHX, reduzindo o metabolismo 

e a viabilidade bacteriana nos biofilmes simples e dual-espécies. Para os biofilmes 

formados em dentina radicular, LA11 teve efeito significante sobre os biofilmes mistos 

com redução de 85,93%, enquanto que nos biofilmes multiespécies, a redução 

microbiana foi de 33,76%.  

Conclusões: Conclui-se que o composto híbrido LA11 apresentou citocompatibilidade e 

efeito antimicrobiano e contra biofilme de espécies bacterianas relacionadas às 

infecções radiculares e poderia ser uma opção de agente antimicrobiano para aplicação 

no tratamento endodôntico. 

 

Palavras-chave: Curcumina, Cinamaldeído, Atividade antimicrobiana, Biofilme, 

Citotoxicidade 

 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 
 

 
 

 

 
 

 

Introdução  



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Introdução 

Embora o tratamento endodôntico convencional reduza significativamente a 

microbiota presente no interior dos canais radiculares (Siqueira et al., 2007), a 

permanência de microrganismos devido à complexidade anatômica do sistema de 

canais radiculares e a resistência destes ao tratamento químico-mecânico pode 

ocasionar infecções persistentes ou secundárias (Siqueira & Rôças, 2009). A 

manutenção ou o desenvolvimento de lesões periapicais após o tratamento 

endodôntico tem sido atribuído a fatores relacionados com a presença e virulência de 

bactérias e fungos no sistema de canais radiculares e/ou tecidos periapicais (Sundqvist 

et al., 1998; Hancock et al., 2001; Nair et al., 1999; Estrela et al., 2014).  

Estudos tem revelado que as bactérias Gram-positivas facultativas são mais 

frequentes nesses casos, incluindo Streptococcus spp., Actinomyces spp. (A. israelii e A. 

odontolyticus), Propionibacterium spp., Lactobacilos spp., Enterococcus faecalis, entre 

outros (Siqueira & Rôças, 2009).  Entretanto algumas bactérias Gram-negativas, como 

Fusobacterium nucleatum, comuns nas infecções primárias, também podem ser 

detectadas após o tratamento químico-mecânico (Sakamoto et al., 2008), 

principalmente devido a membrana externa da sua parede celular, composta de 

lipopolissacarídeo - LPS. Essas endotoxinas dificultam a penetração de antimicrobianos, 

além de apresentarem citotoxicidade e estimularem a reabsorção óssea (Jacinto et al., 

2005).  

A ação antimicrobiana deve ser considerada uma propriedade primordial de 

substâncias que são empregadas na endodontia, sejam elas irrigantes ou medicamentos 

intracanal. Diversas pesquisas relatam uma média de 1 a 5 espécies bacterianas, 

atingindo aproximadamente de 102 a 105 células/canal, mesmo após o preparo químico-

mecânico, seguido ou não de medicação intracanal. (Bystrom & Sundqvist, 1985; 

Sjogren et al., 1997; Vianna et al., 2006; Sakamoto et al., 2007; Siqueira et al., 2007). O 

hipoclorito de sódio é ainda o agente irrigante mais amplamente utilizado em 

Endodontia principalmente por sua ação antimicrobiana e sua capacidade de dissolver 

tecidos orgânicos (Haapasalo et al., 2014; Borsini et al., 2016). Entretanto, o hipoclorito 

de sódio não possui toxicidade seletiva, ou seja, especialmente nas concentrações mais 

altas, ele dissolve tanto tecido vital quanto remanescentes pulpares necróticos, sendo 

tóxico para os tecidos periapicais em casos de extrusão acidental do irrigante do forame 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

apical para o espaço perirradicular, além de apresentar efeitos genotóxicos e potencial 

alérgico (Kaufman & Keila, 1989; Kuruvilla & Kamath, 1998; Serper et al., 2004; Gül et 

al., 2009).  Outro agente utilizado como irrigante endodôntico é a clorexidina, um 

detergente catiônico da classe das bisbiguanidas, encontrado na forma de diacetato, 

hidrocloreto e digluconato, sendo a última a mais utilizada. Apresenta amplo espectro 

de ação contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas, fungos, entre outros 

(Mohammadi et al., 2014). Entretanto, potencial citotóxico e genotóxico também já foi 

descrito na literatura para clorexidina (Lessa et al., 2010; Botton et al., 2016), além de 

risco sistêmico, quando associada a hipoclorito de sódio, pela sua decomposição em 

bioprodutos reativos, como a para-chloroanilina (Basrani et al., 2007). 

 Uma pasta tripla de antibiótico (TAP) contendo Metronidazol, Ciprofloxacina e 

Minociclina, idealizada inicialmente por Hoshino et al. (1996) foi utilizada como 

medicação intracanal com o intuito de regeneração endodôntica. Entretanto, as 

tetraciclinas como a Minociclina podem causar manchamento no dente, devido à sua 

reação com o cálcio via quelação, formando um complexo insolúvel; sendo assim a pasta 

a TAP foi modificada para uma pasta dupla de antibiótico (DAP) composta apenas por 

Metronidazol e Ciprofloxacina (Tanase et al., 1998). O Metronidazol é um composto 

nitroimidazol que exibe ampla atividade antiprotozoária, antibacteriana contra bacilos 

Gram-negativos anaeróbios, bacilos Gram-positivos esporulados e cocos anaeróbios. 

Ciprofloxacina é uma fluoroquinolona que apresenta ação bactericida, principalmente 

contra espécies Gram-negativas. Em virtude das infecções bacterianas serem 

polimicrobianas e essas medicações não possuírem um largo espectro de ação, o uso da 

pasta DAP se torna limitado, além da possibilidade de resistência bacteriana.  Estudos 

demonstram seu efeito tóxico sobre as células-tronco da papila apical, afetando 

negativamente sua proliferação sobre a dentina, interrompendo a liberação de fatores 

de crescimento (Martin et al., 2014, Kim et al., 2015, Galler et al., 2015). 

Atualmente há uma corrente de pesquisadores estudando materiais biológicos 

que possam promover a desinfecção e estimular a regeneração tecidual natural 

preservando a bainha epitelial de Hertwig, a fim de permitir a diferenciação de células 

da papila apical em odontoblastos (Thibodeau et al., 2007; Jung et al., 2008; Ding et al., 

2009; Iglesias-Linares et al., 2013). Embora os tratamentos convencionais 

frequentemente conduzam à resolução dos sinais e sintomas dos processos patológicos 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

pulpares (Sheehy & Roberts, 1997; Bose et al., 2009; Parirokh & Torabinejad, 2010), 

estes promovem pouco ou nenhum benefício para a continuidade do desenvolvimento 

radicular, manutenção da nocicepção pulpar normal e defesa imune esperada para um 

dente permanente jovem (Diogenes et al., 2013, 2014). Sendo assim, a avaliação de 

novas alternativas de tratamento se faz necessária, principalmente no que diz respeito 

aos dentes permanentes imaturos, e poderá favorecer o aprimoramento e/ou 

substituição das técnicas e materiais já existentes. 

Muitos autores tem explorado o uso de fitoquímicos, buscando obter novos 

compostos que apresentem propriedades terapêuticas. A curcumina é um pigmento 

amarelo isolado dos rizomas da Curcuma longa (Zingiberaceae), uma espécie vegetal de 

amplo emprego culinário e medicinal, sendo comumente conhecida como “açafrão-da-

índia”, “açafrão-da-terra”, “cúrcuma”, “turmérico” (Anand et al., 2008). Dependendo da 

origem e das condições do solo em que o tumérico cresce, ele contém de 2 a 9% de 

curcuminóides. Esses curcuminóides indicam um grupo de compostos tais como 

curcumina, demethoxycurcumina, bis-demethoxycurcumina e curcumina cíclica. A 

curcumina é o maior desses compostos e apresenta amplo espectro de atividade 

antimicrobiana, incluindo fungos, como espécies do gênero Candida (Neelofar et al., 

2011) e ação contra espécies bacterianas Gram-positivas, Bacillus cereus, Bacillus 

subtilis, Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis, bem como Gram-

negativas, Escherichia coli, Helicobacter pylori, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella 

choleraesuis, Salmonella tiphymurium, Vibrio cholerae e Yersinia enterocolitica (De et 

al., 2009; Selvakumar e Venkataraman, 2010).  

Em Odontologia,  a curcumina tem sido estudada para diversas finalidades, como 

aplicação tópica, enxaguatório e irrigação de sítios inflamados como terapia 

coadjuvante no tratamento de gengivite e periodontite por sua ação antimicrobiana e 

anti-inflamatória (Waghmare et al., 2011; Stoyell et al., 2016), inibindo importantes alvo 

da reação inflamatória como fator de necrose tumoral (TNF) e interleucinas (Aggarwall 

et al., 2013); para potencializar o efeito da quimioterapia ou radioterapia por suas 

propriedades antimutagências (Wilken et al., 2011), no tratamento de lesões pré-

cancerosas, como fibroses de submucosa oral, leucoplasias e líquen plano (Deepa et al., 

2010). Em Endodontia, estudo comparou o efeito de soluções irrigadoras contra 

biofilme de E. faecalis formado sobre substrato dentinário, e demonstrou que a 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

curcumina teve ação superior a clorexidina. Embora o hipoclorito de sódio (3%), tenha 

tido maior atividade antibacteriana que a curcumina, devido seu potencial citotóxico, a 

curcumina poderia ser uma alternativa natural interessante para propósitos 

endodônticos (Neelakantan et al., 2013).  

Outro fitoquímico também conhecido por suas propriedades terapêuticas é o 

cinamaldeído, uma substância volátil responsável pelo odor e sabor das cascas dos 

caules de plantas do gênero Cinnamomum (Lauraceae). Dentre essas, as cascas dos 

caules de C. zeylanicum são popularmente conhecidas como “canelas”, uma especiaria 

de amplo emprego culinário e medicinal (Ranasinghe et al., 2013). O cinamaldeído é um 

aldeído aromático α,β-insaturado, caracterizado por um esqueleto fenilpropanoídico do 

tipo C6C3. Apresenta amplo espectro de ação antibacteriana, incluindo bactérias de 

relevância médica, odontológica e veterinária, tais como; Mycobacterium avium subsp. 

paratuberculosis (Wong et al., 2008), H. pylori (Ali et al., 2005), Salmonella enteritidis, 

Campylobacter jejuni (Johny et al., 2010), Prevotella bryantii e Prevotella rumnicola 

(Ferme et al., 2008), Streptococcus mutans e Streptococcus sanguinis (Didry, Dubreuil & 

Pinkas, 1994).  

A hibridação molecular é uma estratégia utilizada no planejamento de 

substâncias biologicamente ativas. Compreende a união de características estruturais 

parciais de duas ou mais substâncias bioativas em uma única estrutura. Após a junção 

dessas duas subunidades, por meio de uma ligação covalente, obtém-se uma nova 

substância, a qual pode apresentar as propriedades farmacodinâmicas e 

farmacocinéticas diferentes das subunidades parentais (Viegas-Júnior et al., 2007). Zhi 

et al. (2006) sintetizaram uma série de híbridos com atividade antibacteriana, 

empregando como substâncias parentais; um derivado 6-anilinouracílicos, inibidores 

potentes de DNA polimerase III de bactérias Gram-positivas e uma fluoroquinolona, 

fármacos que atuam contra espécies bacterianas Gram-positivas e Gram-negativas, 

tendo como alvo topoisomerases e girases bacterianas. O híbrido apresentou potente 

atividade contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, demonstrando potência 

antibacteriana e espectro de ação similares às substâncias parentais.  

Embora a curcumina seja um potente agente antimicrobiano e que não causa 

toxicidade aos humanos, sendo tolerado até uma dose diária de 10 g sem causar efeitos 

adversos (Aggarwal et al., 2003), seu uso é limitado pela cor, falta de solubilidade na 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

água e relativa baixa disponibilidade in vivo (Mishra et al., 2005; Cao et al., 2014). Assim, 

a síntese de híbridos de curcumina com outro agente com similar potência 

antibacteriana, como o cinamaldeído, seria uma estratégia interessante para aumentar 

seu potencial terapêutico e reduzir as limitações do uso da curcumina isoladamente. 

Feng et al. (2015) sintetizaram 16 derivados da combinação de curcuminoides e ácidos 

cinâmicos e observaram que quase todos os compostos tiveram boa solubilidade, 

melhor atividade antioxidante que a vitamina C e ação antibacteriana superior à da 

ampicilina contra S. aureus, S. viridans, E. coli e Enterobacter cloacae. Com base no 

exposto, o objetivo do estudo foi avaliar o efeito citotóxico e ação 

antimicrobiana/antibiofilme de compostos híbridos de curcumina e cinamaldeído sobre 

microrganismos de interesse endodôntico. A hipótese nula é que híbridos de curcumina 

e cinamaldeído não serão citocompatíveis e não apresentarão efeito antimicrobiano e 

antibiofilme sobre microrganismos de interesse endodôntico. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 
 

 

 

 

 

 

 

Material e Métodos 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Material e Métodos 

1. Compostos químicos e controles  

1.1. Obtenção dos compostos híbridos 

Neste presente estudo foram sintetizados os seguintes compostos: a curcumina, o 

cinamaldeído e 23 compostos híbridos de curcumina-cinamaldeído e cedidos pelo Prof. 

Dr. Luis Octavio Regasini, coordenador do Laboratório de Química Verde e Medicinal, 

Departamento de Química e Ciências Ambientais, do Instituto de Biociências, Letras e 

Ciências Exatas (IBILCE), UNESP, São José do Rio Preto. Brevemente, os compostos 

híbridos de curcumina e cinamaldeído foram planejados em três séries. Os híbridos da 

série I foram obtidos pela junção da subunidade C6C3 da curcumina (4) com a subunidade 

C2C6 do cinamaldeído (5), culminando na obtenção de difenilpentanoides assimétricos 

(C6C5C6). A série II foi planejada pela junção da subunidade C6C3 da curcumina com a 

subunidade C6 do cinamaldeído e a série III consiste de híbridos obtidos da reunião da 

subunidade C6 da curcumina com a subunidade C3C6 do cinamaldeído (Figura 1, cedido 

pelo Prof. Dr. Luis Regasini). Cada série gerou de 20-40 compostos híbridos por 

hidroxilações/metoxilações nos anéis A e B. Contudo, foram selecionados para o 

presente estudo aqueles com maior possibilidade química de apresentarem efeito 

biológico. Para a preparação dos híbridos curcumina-cinamaldeído das séries I−III foi 

utilizada a reação de condensação aldólica entre aldeídos aromáticos e acetonas 

aromáticas. As reações foram catalisadas com ácido súlfurico (Katsori et al., 2011) ou 

hidróxido de sódio (Shailendra et al., 2007), na presença de etanol como solvente. As 

substâncias das séries I−III foram purificadas por diversas técnicas, testadas para cada 

composto: precipitação, cristalização, extração líquido-líquido e técnicas 

cromatográficas. O monitoramento das reações e a análise de pureza das amostras 

foram realizados por cromatografia em camada delgada analítica. As cromatoplacas 

foram reveladas por meio de inspeção no ultravioleta (254 e 365 nm) e por reagentes 

químicos (anisaldeído sulfúrico e iodo sublimado). A obtenção das substâncias das séries 

I−III foi confirmada por meio da análise de seus espectros de Ressonância Magnética 

Nuclear de Hidrogênio (RMN de 1H) e Ressonância Magnética Nuclear de Carbono Treze 

(RMN de 13C) nos espectrômetros Bruker Avance III 9,397 (400 MHz) e 14,095 T (600 

MHz), os quais fazem parte do Centro Multiusuário de Inovação Biomolecular (Processo 

Fapesp 2009/53989-4). 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

1.2 Preparo dos compostos e controles  

Os compostos híbridos, a curcumina e o cinamaldeído foram diluídos em 5% de 

Dimethyl Sulfoxide,  (DMSO Sigma- Aldrich, St. Louis, MO, USA) na concentração de 30 

mg/mL (solução estoque), o controle de Digluconato de clorexidina (Farmácia Manipullis 

–Araçatuba, SP- Brasil) em água deionizada na concentração de 20 mg/mL (solução 

estoque) e posteriormente filtrada em filtro Millipore 0.2 µm (Kasvi, Curitiba-PR, Brasil). 

 

2. Cepas microbianas e condições de crescimento 

2.1. Cepas padrão 

Para a avaliação das atividades antimicrobiana e antibiofilme dos compostos foram 

utilizadas as seguintes cepas padrão: Streptococcus mutans (ATCC 25175), Lactobacillus 

casei (ATCC 393), Actinomyces israelii (ATCC 12102), Enterococcus faecalis (ATCC 51299) 

e Fusobacterium nucleatum (NCTC 11326). As cepas foram doadas pela Fundação 

Oswaldo Cruz – FIOCRUZ, Rio de Janeiro. Os meios de culturas usados para crescimento 

de cada espécie bacteriana foram os seguintes: Mitis Salivarius Agar (Difco, Kansas City, 

MO, USA) com 0,2 U/mL de bacitracina para S. mutans; MRS Rogosa Agar (Difco) para L. 

casei; Brain Heart Infusion Agar – BHIA (Difco) para A. israelii e E. faecalis. Para F. 

nucleatum, o meio utilizado foi BHIA contendo 5 mg/L de hemina, 5 mg/mL de 

menadiona, 2 g/L de extrato de levedura e 5% de sangue de carneiro desfibrinado.  As 

placas foram incubadas a 37° C em uma atmosfera de 5% de CO2 por 48 h e para F. 

nucleatum em condições de anaerobiose por 1 semana (jarras contendo sistema de 

anaerobiose AnaeroGen (Oxoid, Hampshire, UK).   

 

3. Triagem dos compostos quanto à atividade antimicrobiana  

3.1. Determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida 

Mínima (CBM) 

Inicialmente, curvas de crescimento foram realizadas para cada microrganismo com 

a finalidade de identificar o número de horas necessárias para este atingir sua fase de 

maior multiplicação celular (fase logarítmica ou exponencial). Os ensaios de MIC foram 

realizados pelo método de microdiluição, baseados nas normas do CLSI (Clinical and 

Laboratory Standards Institute - M7-A9, 2012) com algumas modificações. Culturas das 

espécies bacterianas mencionadas no item 2.1 foram repicadas em meio caldo Miller-

https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/276855?lang=en&region=US
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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Hinton (MH) (Difco) por 24 h a 37o C em condições de 5% de CO2 ou anaerobiose, 

dependendo do crescimento de cada microrganismo. Quando a cultura atingiu a metade 

da fase logarítmica, as células foram separadas por centrifugação a 5000 x g por 5 min a 

4o C. Estas foram lavadas e ressuspendidas em tampão fosfato de sódio – PB (10 mM, 

pH. 6,8). Em seguida, o número de células foi ajustado utilizando-se MH caldo para 

obtenção de 105 UFC/mL (Unidades Formadoras de colônias/mL). Um inóculo de 100 µL 

foi então incubado em 100 µL da diluição seriada dos compostos híbridos, curcumina, 

cinamaldeído (625 a 0,3 µg/mL) e controle de digluconato de clorexidina (20000 a 

0,0023 µg/mL). Após incubação por 24 h a 37o C em condições de 5% de CO2 e 

anaerobiose para F. nucleatum, foi adicionada uma solução de resazurina (Sigma) a 5 

µg/mL por 3 h. Suspensões bacterianas foram incubadas com CHX ou sem nenhum 

agente antimicrobiano, como controles positivo e negativo, respectivamente. A CIM foi 

definida como a menor concentração do composto ou clorexidina que não houve 

crescimento detectável (coloração azul da viragem da resazurina). Os meios contendo a 

CIM e duas concentrações maiores foram diluídos seriadamente e plaqueados em MH 

ágar e incubados a 37o C em condições de 5% de CO2 ou anaerobiose por 48 h. As 

colônias foram contadas com auxílio de estereomicroscópio binocular (Labomed, USA) 

e determinado o número de UFC/mL. A CBM foi considerada quando o composto ou 

clorexidina eliminou mais de 99% das bactérias. 

 

4. Avaliação da citotoxicidade dos compostos sobre fibroblastos 

4.1. Análise do metabolismo celular (Ensaio de MTT) 

O metabolismo celular foi avaliado para os compostos em concentrações 

decrescentes (156 a 0,31 µg/mL) utilizando o ensaio de methyltetrazolium (MTT) sobre 

células semelhantes a fibroblastos da linhagem L-929, em conformidade com Soares et 

al. (2014). Este método permite determinar a atividade da succinatodesidrogenase - 

enzima SDH - representando a respiração celular (mitocondrial) e considerando como a 

taxa metabólica de células. Após incubação das células em contato com DMEM (grupo 

controle) ou DMEM contendo os compostos (grupos experimentais) por 24 h, o meio de 

cultura foi aspirado e substituído por 90 µL de DMEM e 10 µL de solução de MTT (5 mg 

/ mL em PBS) e as células foram incubadas a 37° C durante 4 h. Após a incubação, o meio 

de cultura com solução MTT foi aspirado e 200 µL de solução de isopropanol acidificado 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

(HCl 0,04 N) foi adicionado em cada poço por 30 minutos em agitação, para dissolver o 

produto resultante da clivagem de cristais violeta de formazan do anel de sal MTT pela 

atividade da enzima SDH, produzindo uma solução violeta homogênea. A proliferação 

celular foi avaliada utilizando um espectrofotômetro (Synergy H1 híbrido Multi-

ModoMicroplate Reader - BioTekInstrumentsInc, Winooski, EUA) a 570 nm de 

comprimento de onda. 

 

5. Efeito dos compostos sobre biofilmes simples  

5.1. Avaliação da atividade metabólica do biofilme por método colorimétrico 

Os ensaios foram conduzidos de acordo com Yang et al. (2016) e Massunari et al. 

(2017) e com biofilmes isolados de Enterococcus faecalis (ATCC 51299), Streptococcus 

mutans (ATCC 25175), Lactobacillus casei (ATCC 393), Actinomyces israelii (ATCC 12102) 

e Fusobacterium nucleatum (NCTC 11326). Inicialmente, as culturas bacterianas foram 

ajustadas a 10⁶ UFC/mL. A cultura bacteriana isolada foi centrifugada a 5000 x g a 4o C 

por 5 minutos e o sobrenadante descartado. O pellet foi lavado duas vezes em solução 

salina e ressuspendido em BHI caldo. Microplacas de poliestireno estéril de 96 poços de 

fundo em U, foram pré-tratadas com 150 µL de saliva artificial (Composição: 800 mL de 

água deionizada, 1,6 g de extrato de levedura, 4 g de peptona, 0,28 g de NaCl, 1,6 g de 

glicose ou 3,2 g de sacarose, 0,16 g de CaCl2, 0,16 g de KCl e 0,8 g de mucina) durante 

um período de 4 h a 37° C na estufa de 5% CO₂ (coating phase). Após o período de 

incubação, a saliva foi removida. 20 µL de cada cultura bacteriana foram inoculados em 

cada um dos poços contendo 180 µL de caldo BHI suplementado com 0,5% de sacarose 

(para S. mutans), 1% de glicose (para E. faecalis, A. israelii e L. casei) e BHI  suplementado 

1% de glicose contendo 5 mg/L de hemina, 5 mg/mL de menadiona e 2 g/L de extrato 

de levedura (F. nucleatum). As placas foram incubadas a 37° C em uma atmosfera de 5% 

de CO2. Somente para F. nucleatum, as placas foram incubadas em sistema de 

anaerobiose. As culturas foram incubadas por 1 semana e 2 semanas, sendo que o meio 

de cultura foi trocado a cada 48 h para as culturas em estufa de CO2 e 1 vez por semana 

para F. nucleatum. Após esses períodos, o meio de cultura foi removido e os poços foram 

lavados com solução salina estéril (NaCl a 0,9%) para subsequente adição de 100 µL dos 

compostos (LA11 e CHX – 10x CBM mais alto) em cada poço. Digluconato de clorexidina 

(10x CBM) foi considerada como controle positivo, bem como biofilme em meio de 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

cultura sem agentes antimicrobianos. As microplacas contendo ou não os agentes 

antimicrobianos foram incubadas durante 24 h, a 37° C em uma atmosfera de 5% de 

CO2. A atividade metabólica das células foi determinada utilizando o ensaio de XTT [2, 

3-bis (2-methyloxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide] de acordo 

com Chaieb et al. (2011) em que ocorre a redução do sal de tetrazólio pelas células 

metabolicamente ativas em um derivado de formazan solúvel em água que pode ser 

quantificado colorimetricamente. A solução de XTT (Sigma-Aldrich, Switzerland) a 1 

mg/mL foi preparada em PBS, filtrada e estocada a -80o C. Phenazine Methosulfate 

(Sigma) também foi preparado em PBS e filtrada antes do uso. Após esse período de 

incubação, as soluções foram aspiradas e os poços, lavados com salina (NaCl 0.9%). 

Então, foram adicionados 200 µL de solução de XTT-Metassulfato (1:1 v/v) em cada poço 

pré-tratado e controles. As placas foram incubadas por 3 h no escuro a 37o C. Após isso, 

100 µL das soluções foram transferidas para outra placa e a leitura colorimétrica foi 

realizada em espectrofotômetro a 492 nm para determinação da densidade óptica (DO). 

Os valores de DO dos controles (crescimento em meio de cultura sem antimicrobianos) 

foram então subtraídos dos valores de DO dos poços testes para eliminar a interferência 

do background.  

 

5.2. Avaliação da viabilidade do biofilme por contagem das Unidades Formadoras de 

Colônias (UFC) 

Paralelamente, seguindo a mesma metodologia e cepas bacterianas propostas do 

item 5.1, após 24 h de incubação com os compostos (10x CBM mais alto), alíquotas de 

todos os poços foram diluídas seriadamente em solução salina (10-7) e plaqueadas em 

BHI ágar. As placas foram incubadas durante 24 h para posterior contagem das UFC/mL, 

com auxílio de estereomicroscópio binocular (Labomed, USA).  

 

6. Avaliação dos compostos sobre biofilme dual-espécies 

Os mesmos ensaios realizados nos itens 5.1 (ensaio XTT) e 5.2. (Contagem UFC/mL) 

foram realizados com todas as espécies (S. mutans, L. casei, A. israelii e F. nucleatum) 

combinadas em biofilmes dual-espécies com E. faecalis como proposto por Gao et al. 

(2016). Após 48 h de incubação com os compostos (10x CBM mais alto), alíquotas dos 

poços foram plaqueadas em BHI ágar (para contagem das bactérias totais) e as placas 



43 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

incubadas durante 24 h para posterior contagem das UFC/mL. Paralelamente, as 

alíquotas dos biofilmes dual-espécies também foram plaqueadas em BHI contendo 

0,1 mg/mL (E. faecalis + F. nucleatum e E. faecalis + S. mutans), 0,5mg/mL (E. faecalis + 

A. israelii), 0,4 mg/mL (E. faecalis + L. casei) de cefuroxima para permitir somente o 

crescimento de E. faecalis.  

 

7. Efeito dos compostos sobre o biofilme misto e multiespécies formado em dentina 

radicular e análise em Microscopia Confocal 

Para este ensaio, foram realizados dois tipos de biofilme: biofilme misto com as cepas 

padrão utilizadas neste estudo e biofilme multiespécies com amostras clínicas. 

 

7.1. Amostras clínicas 

Amostras de placa supragengival e subgengival foram coletadas de 3 doadores 

adultos saudáveis entre 25-45 anos, como descrito por Yang et al. (2016), após devida 

aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa em Humanos da FOA/UNESP (CAAE 

#92946918.7.0000.5420). As amostras foram inseridas em tubos contendo BHI caldo e 

incubadas a 37° C em uma atmosfera de 5% de CO2. A cultura foi centrifugada e o 

número de células ajustado em 10⁶ UFC/mL.  

 

7.2. Preparo dos espécimes de dentina e contaminação bacteriana 

O ensaio de biofilme para análise em Microscopia Confocal foi realizado de acordo 

com Ma et al. (2011). As amostras (n=6/grupo) foram preparadas a partir de raízes de 

incivisos bovinos. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal da 

FOA (CEP 01195-2017). Esses dentes foram mantidos em solução de NaOCl 0.01% antes 

do uso. Um bloco de dentina radicular com comprimento de 4 mm foi seccionado 

horizontalmente de cada dente a 1 mm de distância da junção cemento-esmalte com 

um disco de diamante de 0.6 mm (Isomet 5000; BuehlerLtd, LakeBluff, IL) a 1000 rpm 

sob irrigação com água. A parede do canal radicular de cada espécime foi desgastada 

com uma broca largo n° 6. O espécime em formato cilíndrico foi novamente seccionado 

em duas metades semicilíndricas com um disco de diamante de 0.6 mm (Isomet 5000; 

BuehlerLtd, LakeBluff, IL). A camada de smear layer de ambos os lados do espécime foi 

removida pela imersão em solução com EDTA 17% em ultrassom por 3 min e 5 min com 



44 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

H2O deionizada. Os espécimes foram esterilizados em autoclave à 121° C por 15 min.  

Em seguida, os espécimes foram inseridos em um microtubo com o lado do canal 

(pulpar) para cima.  Qualquer gap entre o espécime e a parede interna do microtubo foi 

selado com resina composta e polimerizada por 20 s.  

 

7.3. Infecção da dentina  

A infecção da dentina foi realizada com E. faecalis combinado em proporções iguais 

com as 4 espécies bacterianas padrão propostas (S. mutans, L. casei, A. israelii e F. 

nucleatum) (item 2.1) – biofilme misto e ainda com as amostras de biofilme humano - 

biofilme multiespécies (item 7.1). As culturas foram centrifugadas e o número de UFC 

foi ajustado em 10⁶ UFC/mL. Nos microtubos com os espécimes de dentina, foram 

inoculados 500 µL da cultura bacteriana com 3x106 UFC/mL.  Os microtubos foram 

centrifugados em 1400 x g, 2000 x g, 3600 x g e 5600 x g nessa sequência, duas vezes 

cada, por 5 min. Uma alíquota fresca de bactéria foi adicionada entre cada centrifugação 

e a antiga descartada. Todos os microtubos foram incubados a 37o C em BHI caldo 

suplementado com 1% de glicose por 2 semanas, em uma atmosfera de 5% de CO2. A 

troca do meio de cultura foi realizada a cada 48 h.  

 

7.4. Desinfecção da dentina  

Os espécimes de dentina foram removidos do microtubo e lavados com solução 

salina a 0,9% por 1 min.  Os espécimes foram randomizados e divididos em grupos: LA11 

(10x CBM), CHX (10x CBM, controle positivo) e solução salina (controle negativo). Cada 

espécime foi imerso em 350 µL de cada solução por 48 h, sob agitação inicial de 1 h. Em 

seguida, os espécimes foram lavados com água estéril por 1 min e posteriormente, os 

espécimes foram fraturados em duas novas metades para observação da superfície 

longitudinalmente aos canais dentinários visíveis por Microscopia Confocal.   

 

7.5. Análise em Microscopia Confocal de Varredura a Laser 

As análises em Microscopia Confocal foram realizadas na Faculdade de Odontologia 

de Piracicaba – FOP/UNICAMP. As peças de dentina fraturadas foram coradas com o 

corante fluorescente LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability stain (Molecular 

Probes,Eugene, OR) contendo SYTO 9 e iodeto de propídio, de acordo com as instruções 



45 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

do fabricante e então, lavados com solução salina por 1 min. Os comprimentos de 

excitação/emissão foram 480/500 nm para SYTO 9 e 490/635 nm para iodeto de 

propídio. Dois espécimes não infectados foram corados com o mesmo protocolo e 

usados como controle negativo.  A fluorescência das células coradas foi avaliada em 

microscopia confocal (Leica TCS SP5, Microsystems GmbH) e as imagens 2D adquiridas 

pelo software LAS AF Leica Microsystems usando a resolução de 1024x1024 pixels. A 

proporção de células mortas nas imagens 2D foi determinada pela contagem de células 

mortas (coradas em vermelho) sobre a contagem total de células (vivas – em verde + 

mortas – em vermelho) utilizando o programa Image J 1.48 (NIH, Bethesda, MA, USA). 

A espessura dos biofilmes também foi determinada após a reconstrução das imagens 

em 3D, como auxílio do programa Image J.  

 

Análise dos resultados 

Os dados de contagem microbiana (UFC/mL) foram transformados em logaritmos 

(log (UFC/mL) e adicionado +1 pois algumas amostras apresentaram valores iguais a 

zero.  Os dados obtidos para metabolismo celular (método MTT) e para metabolismo 

bacteriano (método de XTT) foram transformados em porcentagem (%), considerado a 

média do controle (sem antimicrobianos) como 100%.  Os dados apresentaram 

distribuição normal e as diferenças entre grupos (antimicrobianos e tempos de 

crescimento – 1 ou 2 semanas) foi analisada por ANOVA (One-way ou Two-way) seguido 

pelo teste de Tukey.  

 

 

 

 

 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 
 

 

 

Resultados 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Resultados 

 

Determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida 

Mínima (CBM) 

A curcumina, o cinamaldeído e os 23 compostos foram testados quanto à sua 

ação antibacteriana por meio de ensaios de CIM e CBM, conforme descrito no item 3.1.  

Destes, 9 compostos da série I (nomeados de TR ou LA somente para facilitar sua 

identificação no laboratório) apresentaram efeito inibitório para, no mínimo, uma das 

espécies bacterianas testadas: S. mutans, E. faecalis, A. israelii, L. casei e/ou F. 

nucleatum. Na Figura 2 é apresentado um esquema da reação química final utilizada 

para obtenção desses compostos. Nota-se que houve uma modificação na reação 

quando comparada àquela apresentada no planejamento inicial dos compostos.  

A Tabela 2 mostra os valores de CIM e CBM obtidos para os 9 compostos 

supracitados contra as espécies bacterianas selecionadas. Os demais compostos não 

apresentaram efeito inibitório contra nenhuma das espécies avaliadas. O composto 

LA11 e o controle clorexidina (CHX) apresentaram o melhor efeito inibitório para todas 

as espécies bacterianas testadas e, por este motivo, foram selecionados para os ensaios 

subsequentes. Testes de crescimento foram realizados com meio de cultura contendo 

DMSO a 5% (diluente dos compostos híbridos) e não houve nenhuma interferência no 

crescimento das espécies testadas. 

 

Avaliação da citotoxicidade dos compostos 

A Figura 3 mostra os resultados de citotoxicidade obtidos para o composto híbrido 

selecionado e o controle CHX. O IC50 (concentração em que o fármaco induz até 50% de 

morte celular) obtido para LA11 foi de 0,052 mg/mL e para a CHX foi abaixo de 0,031 

mg/mL. Houve diferença estatística entre os compostos LA11 e CHX entre 0,052 e 0,031 

mg/mL, mostrando que LA11 apresentou superior citocompatibilidade quando 

comparado a CHX.  O controle meio de cultura contendo DMSO a 5% (diluente do LA11) 

não mostrou efeito tóxico sobre os fibroblastos.  

 

 

 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Ação dos compostos sobre biofilme simples 

Atividade metabólica por método colorimétrico (XTT) 

As Figuras 4A-E mostram o efeito do composto híbrido LA11 e controle CHX sobre 

o metabolismo das bactérias (pelo método do XTT) após 1 ou 2 semanas de crescimento. 

Independentemente do tempo, tanto LA11 quanto a CHX inibiram completamente o 

biofilme de S. mutans. Comparando o efeito dos compostos em 1 e 2 semanas, não 

houve diferença estatística tanto para LA11 quanto para a CHX e nem entre eles, 

considerando A. israelii e L. casei. Para E. faecalis, ambos os compostos tiveram melhor 

efeito em 1 semana, reduzindo o metabolismo em 68.9% para LA11 e 72.65% para CHX.  

Em 2 semanas, a redução do metabolismo foi de 53.07% e 54.29% para LA11 e CHX, 

respectivamente.  Para F. nucleatum, um padrão contrário pôde ser observado. Em 1 

semana, houve redução de 34,7% e 45,79% do metabolismo de F. nucleatum após 

exposição a LA11 e CHX, respectivamente. Em 2 semanas, LA11 reduziu 58.11% e CHX 

reduziu 65% do metabolismo de F. nucleatum. 

 

Viabilidade do biofilme simples por contagem das Unidades Formadoras de Colônias 

(UFC) 

As Figuras 5A-E mostram o efeito do composto LA11 e do controle CHX sobre a 

viabilidade das espécies bacterianas pela contagem em UFC/mL. Confirmando os 

resultados do metabolismo bacteriano, independentemente do tempo, tanto LA11 

quanto a CHX eliminaram o biofilme de S. mutans. Efeito semelhante foi observado para 

LA11 e CHX, reduzindo a viabilidade de E. faecalis (em 3,67 a 4 log para LA11 e 2,4 a 2,87 

log para CHX) e A. israelii (em 1,35 a 2,23 log pra LA11 e 1 a 1,41 log para CHX), em 

ambos os tempos. O mesmo foi observado para L. casei que teve sua viabilidade 

reduzida em 2,41 a 3,28 log por LA11 e 2,95 log pela CHX na primeira semana. A CHX 

reduziu 0,49 log do biofilme de L. casei em 2 semanas, mas não diferiu estatisticamente 

do controle. Para F. nucleatum, tanto LA11 quanto CHX reduziram a viabilidade 

bacteriana (em 4 log), porém CHX não diferiu do controle em 1 semana.  

 

 

 

 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Ação dos compostos sobre biofilme dual-espécies 

Atividade metabólica por método colorimétrico (XTT) 

As Figuras 6A-D mostram o efeito do composto híbrido LA11 e controle CHX sobre 

o metabolismo de biofilmes dual-espécies de todas as espécies testadas (S. mutans, A. 

israelii, L. casei, e F. nucleatum) combinadas com E. faecalis após 2 semanas de 

crescimento. LA11 inibiu completamente e a CHX reduziu significantemente (em 58,2% 

para S. mutans e 55% para L. casei) o metabolismo dos biofilmes dual-espécies de E. 

faecalis com S. mutans ou L. casei quando comparados ao controle. Redução significante 

da atividade metabólica (60-70%) também foi observada quando LA11 e CHX foram 

aplicados sobre biofilmes dual-espécies de E. faecalis com A. israelii e F. nucleatum, 

porém sem diferença estatística entre os compostos.  

 

Viabilidade do biofilme dual-espécies por contagem das Unidades Formadoras de 

Colônias (UFC) 

As Figuras 7A-D mostram o efeito do composto híbrido LA11 e controle CHX sobre 

a viabilidade total e de E. faecalis dos biofilmes dual-espécies de todas as espécies 

testadas (S. mutans, A. israelii, L. casei, e F. nucleatum) combinadas com E. faecalis após 

2 semanas de crescimento. Confirmando os resultados de metabolismo, LA11 eliminou 

completamente o biofilme dual-espécies formado por E. faecalis e S. mutans e E. faecalis 

e L. casei.  CHX reduziu a contagem total em 5 log e de E. faecalis em 5,36 log para a 

combinação E. faecalis e S. mutans e eliminou somente E. faecalis no biofilme dual-

espécies de E. faecalis + L. casei, embora tenha reduzido a contagem de L. casei em 4.87 

log.  

Na combinação de E. faecalis com A. israelii, LA11 e CHX apresentam efeito 

semelhante sobre E. faecalis, reduzindo em 6,47 log e 5,72 log, respectivamente. 

Quanto a contagem total do biofilme de E. faecalis e A. israelii, LA11 teve efeito superior 

a CHX, porém ambos reduziram estatisticamente as bactérias. Na combinação de E. 

faecalis com F. nucleatum, LA11 e CHX eliminaram completamente E. faecalis e 

reduziram significantemente F. nucleatum, sendo que LA11 obteve efeito superior ao 

controle CHX. 

 

 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Ação dos compostos sobre biofilmes formados em dentina radicular bovina 

 

Análise sobre biofilme misto formado a partir da combinação de cepas padrão  

A Figura 8 mostra o efeito do composto híbrido LA11 e controle CHX sobre a 

viabilidade total de biofilmes mistos formados com todas as espécies testadas (S. 

mutans, A. israelii, L. casei, e F. nucleatum e E. faecalis) em proporções iguais em dentina 

radicular bovina. O composto híbrido LA11 teve efeito marcante sobre os biofilmes 

mistos, com redução de 85,93% das bactérias, porém similar à CHX que reduziu 86,45% 

das bactérias. 

 

Análise sobre biofilme multiespécies formado a partir de amostras de biofilme humano 

A Figura 9 mostra o efeito do composto híbrido LA11 e controle CHX sobre a 

viabilidade total de biofilmes multiespécies formados a partir de amostras de biofilme 

supra e subgengival em dentina radicular bovina. O composto híbrido LA11 levou à 

redução de 33,76% dos microrganismos, efeito esse inferior ao da CHX que reduziu 

86,54%.  

 

A Figura 10 mostra as Imagens 2-D obtidas por microscopia confocal 

representativas dos biofilmes mistos (A,B,C) e biofilmes multiespécies (D,E,F) formados 

em dentina radicular e expostos à CHX (A,D); LA11 (B, E) e controles: (C) biofilme misto 

e (F) biofilme multiespécies. Pode-se notar o efeito bactericida do composto LA11 e da 

CHX pela predominância de células mortas (em vermelho) em comparação com o 

controle com predominância de células vivas (em verde), para ambos os tipos de 

biofilmes, com redução desse efeito para o composto LA11 no biofilme 

multiespécies. 

 

 

 

 

 

 

 

 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 
 
 
 
 

 
 

 
 
 

 
 
 
 
 

 
 
 

Discussão 
 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Discussão 

 Infecções endodônticas são polimicrobianas, predominantemente de origem 

anaeróbia, facultativa ou estritas. Microrganismos que colonizam as regiões 

intrarradiculares e perirradiculares podem ser tanto comensais quanto patógenos 

associados com infecções orais, tais como doença periodontal e cárie dentária.  A 

severidade dessas infecções está relacionada com a composição e fatores de virulência 

dessa comunidade.  Entre esses fatores de virulência estão a capacidade de coagregação 

e formação de biofilmes e habilidade de evadir as defesas do hospedeiro (Drucker & 

Natsiou, 2000; Siqueira & Rôças, 2007; Mistry et al., 2011). As espécies bacterianas 

avaliadas neste estudo foram selecionadas por terem sido relacionadas com a infecção 

endodôntica primária (Rolph et al., 2001; Pourhajibagher et al., 2017; Pourhajibagher & 

Bahador, 2018). 

 Este estudo mostrou que o híbrido de curcumina e cinamaldeído LA11 apresentou 

citocompatibilidade e efeitos antimicrobiano e antibiofilme, rejeitando a hipótese nula 

proposta. Dos compostos testados, nove apresentaram efeito inibitório para, pelo 

menos, uma espécie bacteriana testada. Destes, a melhor ação antimicrobiana foi 

observada para o composto LA11 ou (2E,4E)-1-(3-hidroxifenil)-5-fenilpenta-2,4-dien-1-

ona. Os melhores efeitos foram observados contra S. mutans, E. faecalis, L. casei e F. 

nucleatum, com valores de CIM entre 0,009 e 0,039 µg/mL e CBM entre 0,019 e 0,039 

µg/mL. Os valores de CIM e CBM mais altos do LA11 foram obtidos para A. israelii 

(CIM=CBM=0,156). Os compostos originais curcumina e cinalmaldeído apresentaram 

CIM entre 0,156 e >0,625 e CBM entre 0,039 e >0,625. LA11 apresentou menor 

toxicidade sobre fibroblastos quando comparado à clorexidina. Esses resultados 

mostraram que a hibridização molecular gerou um composto com atividade 

antibacteriana 10x maior, quando comparados aos compostos originais, confirmando 

que essa técnica é efetiva na síntese de novos compostos antimicrobianos. Polaquini et 

al. (2016) avaliaram compostos derivados de cinamaldeído, obtidos pelo mesmo 

princípio químico (cinamaldeído + acetofenona) e observaram que os compostos 3 

((2E,4E)-1-(3-hydroxyphenyl)-5-phenylpenta-2,4-dien-1-one m-OH = LA11) e 4 (2E,4E)-

1-(4-hydroxyphenyl)-5-phenylpenta-2,4-dien-1-one p-OH = LA12) obtiveram os 

melhores efeitos inibitórios contra as seguintes bactérias Gram-positivas 

Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans e Streptococcus sanguinis, com valores de 



53 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

CIM/CBM entre 77,9 e 312 μM e não apresentaram efeito contra bactérias Gram-

negativas.  De forma diferente, no presente estudo, LA11 apresentou efeito inibitório 

contra Fusobacterium nucleatum, bactéria anaeróbia Gram-negativa, comumente 

isolada em infecções endodônticas.  No estudo de Polaquini et al. (2016), cinamaldeído 

apresentou valores de CIM e CBM acima de 500 μM contra S. aureus, S. mutans, S. 

sanguinis, P. aeuruginosa e E. coli. Outros trabalhos mostraram valores de CIM ainda 

maiores para cinamaldeído, como por exemplo 1000 mg/L (7566 μM) contra E. coli 

(Domalia et al., 2007) e 0.25 mg/mL (1891 μM) contra cepas de S. aureus (Ferro et al., 

2016). Para curcumina, estudo mostrou valores de CIM variando de 250 a 500 μg/mL e 

CBM de 250 a 1000 μg/mL contra S. aureus, B. subtilis, E. coli, P. aeruginosa e V. cholera 

(Sasidharan et al., 2014).  

 Neste estudo, o composto híbrido LA11 apresentou efeito significante sobre 

biofilmes simples ou mistos em placas de poliestireno, de forma semelhante ou superior 

ao controle clorexidina, agente antimicrobiano largamente utilizado em Odontologia 

devido ao seu amplo espectro de ação sobre bactérias Gram-positivas, Gram-negativas, 

fungos e vírus (Mohammadi et al., 2014).  Poucos estudos têm avaliado o efeito de 

agentes antimicrobianos naturais, como a curcumina e o cinamaldeído ou ainda 

derivados desses compostos, sobre biofilme de microrganismos associados com 

infecções endodônticas. Abbaszadegan et al. (2016) mostraram que óleo essencial de 

Cinnamomum zeylanicum, rico em cinamaldeído, e a pasta triantibiótica (TAP) 

erradicaram biofilme de E. faecalis após 7 e 14 dias, enquanto hidróxido de cálcio não 

eliminou E. faecalis após 14 dias (Abbaszadegan et al., 2016).  Firmino et al. (2018) 

avaliaram a atividade antibiofilme de extratos de Cinnamomum zeylanicum (EOCz), 

Cinnamomum cassia (EOCc) bem como o próprio cinamaldeído, em concentrações de 

0,06 a 50 mg/mL, e observaram redução de até 99% da biomassa do biofilme de 

Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosa e Escherichia coli. Nos testes de 

viabilidade celular, 2 mg/mL de cinamaldeído reduziu as células bacterianas em até 5.74 

log UFC/mL.  A curcumina também tem sido avaliada como irrigante para terapia 

endodôntica, na presença ou não de fotossensibilizantes.  Estudo mostrou que biofilme 

de E. faecalis foi reduzido em 83.6% na presença de curcumina 40 mM, comparando-se 

com 65.3% para CHX 0,2%, 81% para CHX a 2% e 92,6% para hipoclorito de sódio a 5,25% 

(Pourhajibagher et al., 2018).  Um estudo de Li et al. (2014) avaliou biofilmes mistos de 



54 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

E. faecalis com quatro cepas clínicas de S. mutans (C180-2, C67-1, HG723 e UA159) e 

observou que a presença de E. faecalis reduziu significativamente a contagem de células 

viáveis de todas as quatro cepas de S. mutans testadas e o nível de redução diferiu 

significativamente entre as cepas. Achado esse que corrobora com os nossos resultados, 

demonstrando que a competição microbiana pode influenciar na virulência do biofilme. 

Não foram encontrados estudos com derivados de curcumina ou cinamaldeído para 

efeito de comparação com o presente estudo. 

 Atualmente, estudos tem avaliado o efeito de agentes antimicrobianos para 

aplicação em Endodontia por meio de ensaios em dentina radicular e análise em 

microscopia confocal. O presente estudo mostrou que LA11 teve efeito significante 

sobre biofilme radicular, reduzindo em 86% o biofilme misto obtido a partir da 

combinação de cepas padrão. Para o biofilme multiespécies formados a partir de 

amostras de biofilme sub e supragengival humano, o efeito de LA11 se reduziu para 33%, 

o que pode ser explicado pela complexidade da microbiota que se estabeleceu na 

dentina radicular. A curcumina também tem sido avaliada sobre biofilme radicular, 

isolada ou como agente fotossensibilizante em terapia fotodinâmica. Biofilmes de E. 

faecalis foram formados em dentes humanos instrumentados e os seguintes agentes 

antimicrobianos aplicados por 30 minutos: curcumina, hipoclorito de sódio e 

clorexidina.  Curcumina erradicou os biofilmes de 2 dias e de 2 semanas, porém para 

biofilmes de 8 semanas, houve redução para 553±137,6 UFC/mL, menor que do 

hipoclorito e maior que da CHX.  Considerando os efeitos indesejáveis do hipoclorito e 

da clorexidina, os autores concluíram que a curcumina poderia ser um agente 

interessante para aplicação endodôntica (Neelakantan et al., 2013). A eficácia da 

curcumina ativada por LED, das pastas TAP e DAP, CHX e hidróxido de cálcio foi avaliada 

sobre biofilme maduro de E. faecalis em dentina radicular. A curcumina 2,5 mg/mL 

ativada por LED e a TAP reduziram estatisticamente a percentagem de células mortas 

nas profundidades de 200 e 400 µm e a contagem de UFC/mL. Não foram encontrados 

estudos avaliando o efeito do cinamaldeído e de derivados de curcumina/cinamaldeído 

sobre biofilme em dentina radicular (Devaraj et al., 2016).  

 Embora estudos apontem os efeitos antimicrobianos e antibiofilme da curcumina e 

cinamaldeído, altas concentrações desses compostos (até 50 mg/mL para cinamaldeído) 

têm sido utilizadas para obter efeitos satisfatórios. Sendo assim, a busca por novos 



55 

 

Vanessa Rodrigues dos Santos 

compostos com efeito antimicrobiano/antibiofilme em concentrações muito menores é 

interessante não somente em termos financeiros, mas também, em se tratando da 

toxicidade que o composto poderia causar às células humanas. Neste estudo, LA11 teve 

menor efeito tóxico sobre os fibroblastos que a CHX, apresentado IC50 de 0,052 mg/mL 

(abaixo dos valores de CIM/CBM para a maioria das bactérias) enquanto a CHX foi abaixo 

de 0,031 mg/mL.  O óleo essencial de Cinnamomum zeylanicum, rico em cinamaldeído, 

provocou uma redução mínima (16%) na viabilidade de fibroblastos, quando comparado 

com hidróxido de cálcio (46%) e TAP (40%) (Abbaszadegan et al., 2016). No estudo de 

Polaquini et al., (2016), os compostos derivados de cinamaldeído com melhores efeitos 

antimicrobianos apresentaram moderada toxicidade sobre células pulmonares, com 

valores de IC50 entre 46.3 to 96.7 μM. Derivados de curcumina, como os 

tetrahidrocurcuminoides, estimularam a proliferação de fibroblastos gengivais após 72 

a 96 h, em concentrações de 10-4 e 10-5 M, mostrando que podem ter efeitos benéficos 

durante o reparo tecidual (San Miguel et al., 2011).  

 Os óleos essenciais e seus principais compostos possuem uma gama de alvos, 

especialmente a parede celular e a membrana citoplasmática, podendo causar efeitos 

como a degradação da parede celular; dano a membrana citoplasmática, aumento da 

permeabilidade e diminuição do ATP intracelular. O cinamaldeído pode se difundir 

através da matriz polissacarídica do biofilme e desestabilizá-la, favorecendo sua ação 

direta nas células, por meio da perturbação da membrana e as estruturas o que leva à 

saída de íons e a lise celular (Ranasinghe et al., 2013). A curcumina tem demonstrado 

interagir in vitro com FtsZ (homólogo procarionte da tubulina dos eucariotos) e inibir a 

formação dos protofilamentos de Ftsz em Bacillus subtilis, o que interfere na formação 

da parede celular bacteriana (Rai et al. 2008).  Dentre os compostos testados neste 

estudo, LA11 apresentou o melhor efeito antimicrobiano. Considerando que esse 

composto apresenta como substituinte um grupo OH na posição meta e seu análogo 

LA12 na posição para, a posição do grupamento OH influenciou na atividade do 

composto. Além disso, compostos carregando substituintes hidrofóbicos, como F, CF3 e 

NO2 apresentaram reduzida atividade antimicrobiana, mostrando que a hidrofilicidade 

de LA11 pode ter influenciado na sua atividade (Polaquini et al., 2016).  Mais estudos 

são necessários para confirmar o mecanismo de ação antimicrobiano de LA11. 

 



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Vanessa Rodrigues dos Santos 

Conclusão 
       O composto híbrido LA11 apresentou citocompatibilidade e efeito antimicrobiano e 

contra biofilme de espécies bacterianas relacionadas às infecções radiculares e poderia 

ser uma opção de agente antimicrobiano para aplicação no tratamento endodôntico. 

 

Aprovação do Comitê de Ética 

        Os experimentos descritos foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da 

Faculdade de Odontologia de Araçatuba – FOA/UNESP. Processo (CAAE 

#92946918.7.0000.5420) e (CEP 01195-2017). 

 

Agradecimentos 

 Este estudo foi financiado pela Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São 

Paulo - FAPESP (outorga 2017/05892-8) e pelo Conselho Nacional de Desenvolvimento 

Científico e Tecnológico - CNPq (outorga nº 131205/2017-0).  

 

 

 

 

 

 

 

 

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