Luiz Gustavo Nascimento de Melo 
 
 
 
 
 
 

Influência da associação do plasma rico em 

plaquetas ao enxerto de osso autógeno no 

reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico 

em calvárias de coelhos. Estudo histológico e 

histométrico.  

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

2007 



 

Luiz Gustavo Nascimento de Melo 
 
 
 
 

Influência da associação do plasma rico em 

plaquetas ao enxerto de osso autógeno no 

reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico 

em calvárias de coelhos. Estudo histológico e 

histométrico. 

 

 

  

 

 
 
 
 
 

ARAÇATUBA-SP 

2007 

 

Tese apresentada à Faculdade de 

Odontologia do Campus de Araçatuba – 

Unesp, para obtenção do Grau de “Doutor em 

Odontologia” - Área de Concentração 

Periodontia. 

Orientador: Profa. Dra. Maria José Hitomi Nagata 



 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Catalogação-na-Publicação 

Serviço Técnico de Biblioteca e Documentação – FOA / UNESP 

 
 Melo, Luiz Gustavo Nascimento de 
M528i  Influência da associação do plasma rico em plaquetas ao enxerto 
 de osso autógeno no reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico em 
 calvárias de coelhos : estudo histológico e histométrico / Luiz Gustavo 
 Nascimento de Melo. -Araçatuba : [s.n.], 2007 
  79 f. : il.  
 
  Tese (Doutorado) – Universidade Estadual Paulista, Faculdade de 
 Odontologia, Araçatuba, 2007 
  Orientador: Profa. Dra. Maria José Hitomi Nagata 
 
  1. Regeneração óssea 2. Fatores de crescimento 3. Plaquetas 
 4. Enxerto ósseo 
    Black D64 
    CDD 617.632 
 

 
 
 

 

 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

DADOS CURRICULARES 
 



Dados Curriculares 

 

Luiz Gustavo Nascimento de Melo 
 

 

 

Nascimento: 31.05.1974 – Goiânia/GO 

  

Filiação: João Catarino de Melo 

Maria Alice Nascimento de Melo 

  

1996-1999: Curso de Graduação em Odontologia  

Faculdade de Odontologia de Araçatuba (FOA – UNESP).  

  

2001-2002: Curso de Mestrado do Programa de Pós-Graduação em 

Odontologia, Área de Periodontia da Faculdade de Odontologia 

de Araçatuba (FOA-UNESP). 

  

2004-2005: Especialização em Implantodontia pelo Hospital de Reabilitação 

de Anomalias Craniofaciais da Universidade de São Paulo (HRAC-

USP). 

  

2004-2006: Curso de Doutorado do Programa de Pós-Graduação em 

Odontologia, Área de Periodontia da Faculdade de Odontologia 

de Araçatuba (FOA-UNESP). 



 

 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 

DEDICATÓRIA 
 



Dedicatória 

 

 

 

 

 

         

        A Deus 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                 “... Não sou nada. Não posso querer ser nada. À parte disso, tenho em mim todos 

os sonhos do mundo...”  

(Fernando Pessoa)  

Obrigado, meu senhor, pela Vossa presença, 

Em todos os momentos da minha vida. 

Obrigado pelas dificuldades, porque precisei ter força para superá-las,  

Pelas dúvidas, porque precisei de sabedoria para entendê-las, 

Obrigado pelas oportunidades, mesmo quando não as enxergava, 

Pela dor, porque foi quando eu mais cresci, 

Pela fé, porque precisei seguir em frente... Sempre 

Obrigado pelo Vosso amor,  

Até mesmo nos momentos em que não 

Fui digno dele. 



Dedicatória 

 

 

 

 

 

      Aos meus pais, 

     João Catarino e Maria Alice 

 

 

 

 

 

 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

                                  “...Teus ombros suportam o mundo e ele não pesa mais que a mão de uma 

criança...” 

(Carlos Drummond de Andrade) 

 

Nossos pais carregam um enorme sentimento de responsabilidade, 

com a missão de transformar seus filhos em homens e mulheres de 

verdade. Os anos passam e nós, filhos, crescemos e a grande 

transformação se passa dentro deles também. Os nossos sentimentos 

em relação às expectativas da vida são os deles. Por isso, é a eles que 

eu dedico toda uma vida de esforço e dedicação ao estudo.     



Dedicatória 

 

 

 

     Aos meus irmãos 

     Anna Paula e Carlos Sérgio, 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

“... Depois de algum tempo você aprende que verdadeiras amizades 

continuam a crescer, mesmo a longas distâncias. E o que importa não é 

o que você tem na vida, mas quem você tem na vida. E a família são os 

bons amigos que a vida nos permitiu ter...” Obrigado pelo suporte de 

vocês durante todos esses anos e por compreenderem a minha 

ausência nos vários momentos em que eu não pude estar presente.  

 

“... Pode ser que um dia o tempo passe...  

Mas, se a união permanecer,  

Um do outro há de se lembrar.  

 

Pode ser que um dia nos afastemos...  

Mas, se formos unidos de verdade,  

A amizade nos reaproximará...” 

(Albert Einstein) 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                           

 

 

 

 

AGRADECIMENTO ESPECIAL 
 



Agradecimento Especial 

 

 

 

   

  A Profa. Dra. Maria José Hitomi Nagata 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                             “Por vezes sentimos que aquilo que fazemos não é senão uma gota de 

água no mar. Mas o mar seria menor se lhe faltasse uma gota.” 

(Madre Teresa de Calcutá) 

 

Obrigado por acreditar em mim,  

Quando eu achei difícil acreditar em mim mesmo.  

Obrigado por dizer, algumas vezes,  

O que eu realmente precisava ouvir,  

Em vez do que eu queria que você dissesse,  

E por ter me mostrado um outro lado a considerar, além do meu. 

Porque para ensinar é preciso também saber humanizar e 

Tão importante quanto formar bons pesquisadores é transformá-los em 

Pesquisadores bons. 

Aprendi a conhecê-la, respeitá-la e admirá-la nestes cinco anos de convívio.  

Tenha certeza de ter impresso em mim os princípios que norteiam a sua vida 

profissional: a dedicação incondicional à pesquisa e o amor à docência. 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

AGRADECIMENTOS 
 



Agradecimentos 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Quando se consegue chegar ao final de um trabalho proposto, 

pode-se sentir o peso das contribuições dadas por pessoas que 

ao ajudarem, mesmo supondo serem contribuições simples ou 

obrigações, muitas vezes não avaliam o peso de suas atitudes 

para quem as recebeu. Minha gratidão a todos que, direta ou 

indiretamente, contribuíram para elaboração deste trabalho.   



Agradecimentos 

A minha sincera gratidão. . . 
 

À Faculdade de Odontologia do Campus de Araçatuba da Universidade 

Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” (FOA-UNESP), nas pessoas de seu 

Diretor Prof. Dr. Paulo Roberto Botacin e Vice-Diretor Prof. Dr. Célio Percinotto 

pela oportunidade da realização deste curso e desta pesquisa nesta 

instituição. 

 

Ao Programa de Pós-Graduação em Odontologia da FOA-UNESP, na pessoa 

de seu coordenador Prof. Dr. Wilson Roberto Poi pela seriedade e 

responsabilidade na condução do programa e pelo apoio e viabilização dos 

recursos para realização desta pesquisa. 

 

Ao Prof. Dr. Alvaro Francisco Bosco da Disciplina de Periodontia do 

Departamento de Cirurgia e Clínica Integrada da FOA-UNESP, por ter tido 

influência, de maneira decisiva, nos principais momentos da minha vida 

acadêmica, desde os tempos do estágio na disciplina. Lembro que decidi 

pela Periodontia na primeira vez em que o vi fazer uma cirurgia.  Desde o 

início professor, você foi meu referencial como profissional.   

 

Ao Prof. Dr. Valdir Gouveia Garcia da Disciplina de Periodontia do 

Departamento de Cirurgia e Clínica Integrada da FOA-UNESP, pela 

possibilidade de poder ter aprendido sobre a Periodontia e sobre a vida, 

com sua experiência e sabedoria. Meu profundo respeito e admiração à sua 

pessoa, professor. 

 

Ao Prof. Dr. Tetuo Okamoto do Departamento de Cirurgia e Clínica Integrada 

da FOA-UNESP pela valiosa contribuição na análise das lâminas histológicas 

deste trabalho e pela humildade com que sempre me recebeu durante 

todo o curso de pós-graduação. 



Agradecimentos 

 

Á Profa. Dra. Rita Cássia Menegati Dornelles, da Disciplina de Fisiologia do 

Departamento de Ciências Básicas da FOA-UNESP, por ter tido sempre a 

generosidade de disponibilizar e conciliar o uso do seu laboratório com os 

meus horários, geralmente irregulares. Obrigado também pelas boas 

condições oferecidas para realização da etapa experimental deste trabalho 

em seu laboratório.   

 

Á Profa. Dra. Sandra Helena Penha de Oliveira da Disciplina de Farmacologia 

do Departamento de Ciências Básicas da FOA-UNESP, pela confiança em 

permitir a realização de parte deste trabalho em seu laboratório de cultura 

de células. 

 

Ao Prof. Dr. Cláudio Aparecido Casatti e Profa. Dra. Alaíde Gonçalves da 

Disciplina de Histologia do Departamento de Ciências Básicas da FOA-

UNESP, por disponibilizarem os meios necessários para o armazenamento das 

amostras de parte desta tese.  

 

À Profa. Dra. Suely Regina Mogami Bomfim do Laboratório Clínico Veterinário 

da FMVA-UNESP, responsável pelas análises clínicas das amostras de sangue 

dos animais usados neste experimento. Obrigado pela dedicação, 

tranqüilidade e grande paciência demonstrada durante a realização deste 

difícil trabalho. A sua assistência durante os experimentos foram 

fundamentais para realização desta tese.  

 

À Profa. Dra. Valéria Nobre Leal de Souza Oliva da Disciplina de 

Anestesiologia do Depto. de Clínica e Cirurgia e Reprodução Animal da 

FMVA-UNESP, pela orientação criteriosa na determinação dos protocolos de 

terapia antibiótica, anestesia e cuidados pós-operatórios usados nos animais 

deste experimento. 

 

 



Agradecimentos 

Ao Prof. Dr. José Eduardo Corrente do Departamento de Bioestatística do 

Instituto de Biociências de Botucatu (IBB-UNESP), pelo empenho na 

realização da análise estatística desta pesquisa. 

 

Ao Departamento de Bioquímica do Instituto de Biologia (IB) da Universidade 

Estadual de Campinas (UNICAMP), na pessoa de seu Chefe de 

Departamento, profa. Dra. Carmem Veríssima Ferreira pela oportunidade do 

uso do laboratório para realização dos procedimentos de cultura de células. 

  

À profa. Dra. Giselle Zenker Justo do Departamento de Bioquímica do Instituto 

de Biologia da UNICAMP pelas valiosas sugestões na conduta de todo o 

experimento em cultura de células. 

 

Ao Dr. Stephen Fuccini, pelo auxílio fundamental nas traduções durante todo 

o curso de pós-graduação. Obrigado também pelas importantes sugestões 

no início da tese e por ter torcido, mesmo à distância, para que tudo desse 

certo.  

 

Ao prof. Dietmar Weng, ex-professor do “Department of Prosthodontics, 

School of Dental Medicine, Julius-Maximilians-University, Würzburg, Germany” 

pela possibilidade única de poder ter trabalhado ao lado de um grande 

pesquisador em importantes pesquisas na área de Implantodontia e 

regeneração durante o curso de pós-graduação. 

 

Ao prof. Guy Gagnon do “Department of Periodontics, Faculté de Médecine 

Dentaire, Université Laval, Canadá” pelas importantes sugestões e 

orientações fornecidas para realização de parte dos procedimentos 

experimentais desta tese. 

 

Ao prof. Rheinard Gruber do “Department of Oral Surgery, Bernhard Gottlieb 

Dental School, Medical University of Vienna, Vienna, Austria” que, mesmo por 



Agradecimentos 

e-mail, contribui com informações importantes para os experimentos com 

cultura de células. 

 

Á 3i Implant Innovations pelo financiamento parcial dos materiais usados 

nesta tese.  

 

Ao Hospital de Reabilitação de Anomalias Craniofaciais da Universidade de 

São Paulo (HRAC-USP), nas pessoas de seu Superintendente, Prof. Dr. José 

Alberto de Souza Freitas e Diretor da Divisão de Assistência Odontológica, 

Prof. Dr. Laerte Fiori de Godoy, por ter tido a oportunidade de me formar em 

Implantodontia em um centro de referência mundial no tratamento de 

pacientes portadores de anomalias craniofaciais. 

 

À Profa Dra. Maria Lúcia Rubo de Rezende, da Disciplina de Periodontia do 

Departamento de Prótese da Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB-USP) 

e minha orientadora pela Especialização em Implantodontia no HRAC-USP. 

Tive a grande oportunidade de ter sido orientado por uma das mais 

importantes profissionais da área de Implantodontia do país. A sua 

competência e senso de ética serão sempre referenciais para minha vida 

profissional e pessoal. Agradeço por ter me aceito como orientado e pela 

compreensão e paciência em todos os momentos de dificuldade que 

enfrentei durante o curso.  

 

Ao Prof. Dr. Luís Eduardo Marques Padovan, do Setor de Implantodontia do 

HRAC-USP, pelos valiosos ensinamentos dados durante o curso de 

Especialização em Implantodontia. Admiro-o pela seriedade profissional, 

pela liderança e pelo entusiasmo que tem em ensinar. Agradeço pelas 

oportunidades dadas no início do curso e também pelas cobranças e 

conselhos nos momentos de erro, que foram muito importantes para minha 

formação. Terá sempre o meu respeito professor. 

 



Agradecimentos 

Aos Profs. Roberta Pires Dias, Caio Márcio Figueiredo e Flávio Monteiro 

Amado, do Setor de Implantodontia do HRAC-USP, pela contribuição 

fundamental à minha formação em Implantodontia. Agradeço também 

pela compreensão nos dias de estresse e por permitirem, em todos os 

momentos necessários, o concílio da dura rotina diária da Especialização 

com o Doutorado. 

 

À Profa. Dra. Ana Lúcia Pompéia Fraga de Almeida, do Setor de Periodontia 

do HRAC-USP pela oportunidade de poder ter trabalhado, mesmo que no 

final da Especialização, com uma pessoa determinada. Tenho admiração 

pela sinceridade e praticidade com que leva a vida. São pessoas assim que 

fazem as coisas acontecerem.  

 

Ao Dr. Luiz Henrique Marchesano, farmacêutico bioquímico do Laboratório 

de Análises Clínicas do HRAC-USP, pela oportunidade de ter tido acesso ao 

seu laboratório para podermos aplicar, na prática clínica cirúrgica, os 

princípios do Plasma Rico em Plaquetas e pela constante troca de 

informações sobre este tema durante os dois anos de convivência no 

Centrinho. 

 

Ao amigo Michel Reis Messora. Quantas dificuldades para fazer esta tese. 

Quantos momentos de estresse, cansaço e sacrifício de vários finais de 

semana para realizar os experimentos desta tese. Quantos dias de dúvidas 

sobre o que fazer e como fazer, para terminar a tese. Em todos estes 

momentos, era você quem estava sempre ajudando. Foram nesses 

momentos que eu conheci o valor de uma amizade e o significado real da 

palavra altruísmo. 

  

À amiga Flávia Aparecida Chaves Furlaneto, por ter convivido, durante o 

Doutorado, com uma amiga de verdade. Obrigado por todas as vezes que 

pude contar com seu apoio e, principalmente, por ter me mostrado que a 

humildade e simplicidade são, sempre, as melhores escolhas.     



Agradecimentos 

 

À amiga Tatiana Miranda Deliberador. Obrigado por todos os momentos em 

que me ajudou durante o curso de pós-graduação. Tenho a sorte de poder 

ter você como amiga e a certeza de que conheci uma das futuras grandes 

periodontistas do país.  

 

Ao amigo Alex Semenoff Segundo, pelas boas conversas e importantes 

conselhos recebidos durante todo o curso de Doutorado. Tenho respeito 

pela pessoa e profissional que é. Vejo o reflexo de um grande pesquisador 

em você e agradeço pela possibilidade de ser seu amigo.   

 

À Luciana Liarte Gasparini Ribeiro, amiga durante todo o curso de pós-

graduação. Começamos juntos e terminamos juntos. Tenho admiração por 

sua integridade como pessoa e pela amizade que sempre teve por mim. 

Agradeço por todas as ocasiões em que pôde me ajudar, em todos esses 

anos de convivência. 

  

Aos amigos e colegas do Mestrado e Doutorado em Periodontia da FOA-

UNESP, Alex Semenoff Segundo, Célia Tomiko Matida Hamata Saito, Danielle 

Shima Luize, Fernando José de Oliveira Nóbrega, Flávia Aparecida Chaves 

Furlaneto, Juliano Milanezi de Almeida, Luciana Liarte Gasparini Ribeiro, 

Leandro Araújo Fernandes, Michel Reis Messora, Samara Bonfante, Sérgio 

Ricardo de Oliveira, Tatiana Miranda Deliberador, Thiago Marchi Martins e 

Valmir Macarini, pelas oportunidades de aprendizado e crescimento pessoal 

com o convívio de vocês. 

 

Às amigas Natália Campos e Natália Pola, estagiárias da Periodontia e 

futuras colegas de profissão. Obrigado pela boa companhia e ajuda nos 

longos dias de trabalho ao lado do micrótomo.  

 

Às colegas Celina e Tatiana, residentes em Diagnóstico Veterinário do 

Laboratório de Clínico Veterinário da FMVA-UNESP. Quantas vezes, por 



Agradecimentos 

telefone, nós passamos por momentos de grande expectativa diante dos 

resultados das análises de parte desta tese. No final, deu tudo certo. 

Obrigado pela ajuda fundamental de vocês para realização deste trabalho. 

 

Ao amigo Frederico Ciporkin. Tenho saudade das nossas conversas sobre as 

inúmeras possibilidades de podermos mudar o que já existe na Odontologia 

e das várias vezes em que íamos à capela de São Francisco de Assis no 

Centrinho pra pedir proteção para nossas cirurgias. Agradeço o 

companheirismo verdadeiro durante todo o curso no Centrinho e a certeza 

de ter conquistado sua amizade. 

 

Ao amigo José Sérgio Maia Neto. Não vou esquecer dos bons momentos no 

centro cirúrgico do Centrinho. Com o bisturi nas mãos e um pouco de 

criatividade, nós colocamos nossas idéias sempre “revolucionárias” em 

prática e escrevemos nossa estória no Centrinho. Inventamos técnicas, 

modificamos técnicas e com isso percebemos que ainda temos muito que 

fazer na nossa profissão.  

 

À amiga Mônica Moraes Waldemarin Lopes, mestre em Ciência da 

Reabilitação pelo HRAC-USP, pelo importante auxílio durante todo o período 

da Especialização no Centrinho. Sem sua ajuda na realização da 

monografia, eu jamais teria conseguido terminá-la. 

 

Aos amigos e colegas da Especialização em Implantodontia do HRAC-USP, 

Adriana Correa Queiroz, Fernando Rizzo Alonso, Frederico Ciporkin, Gabriela 

Gennaro, João F. Avelar Pinto, José Sérgio Maia Neto, Milena Nahás Matiello 

e Wendel Teixeira. Obrigado a cada um de vocês por terem me ajudado 

tanto, estando sempre presentes nas minhas ausências e aceitando meus 

momentos de estresse durante os dois anos de convívio no Centrinho. 

 

Ao amigo Antônio Hernandes Chaves Neto, doutorando em Bioquímica pelo 

Instituto de Biologia da UNICAMP, pela grande capacidade de trabalho 



Agradecimentos 

demonstrada na realização de todos os experimentos com cultura de 

células. A possibilidade de termos incorporado esta nova e importante 

metodologia à tese só foi possível pelo seu total comprometimento com esta 

parte da pesquisa. Não vou esquecer do seu empenho, sempre deixando 

em segundo plano a própria tese, para finalização dos experimentos nos 

prazos estabelecidos. Tive a grande sorte de ter conhecido um verdadeiro 

pesquisador e a possibilidade de tê-lo como amigo. 

 

Ao amigo Marcelo Pereira Nunes e seus irmãos Djalma Pereira Nunes Filho e 

Fernando Pereira Nunes, amigos para uma vida inteira.  Amizade que 

começou na graduação e está muito presente até hoje. Obrigado por 

poder fazer parte desta família que a vida permitiu-me conhecer e a qual eu 

considero tanto.  

 

Ao amigo Marcos Heidy Guskuma, pelos momentos de descontração, pelas 

várias saídas prometidas e não cumpridas. Obrigado por ter tornado este 

último ano muito divertido aqui em casa. Terei saudades das nossas “festas” 

no apartamento, que foi só uma, mas que valeu por várias. 

 

À Nica, por ter cuidado de mim e da casa desde que eu me formei. 

Obrigado por ter feito parte da minha estória aqui em Araçatuba. Vou sentir 

saudades da sua presença alegre. 

À Antônia, Claudiomiro, Maria Dirce C. Boatto, Gilmar Martins de Oliveira e 

Bernadete Maria Nunes Kimura, funcionários do Departamento de Cirurgia e 

Clínica Integrada, da FOA-UNESP, pelos serviços prestados durante todo o 

curso de pós-graduação. Em especial à Dirce e ao Gilmar pelo empenho e 

dedicação com que coraram e montaram as lâminas no prazo 

estabelecido.  

Ao Odair, funcionário da Periodontia da FOA-UNESP, pelo apoio fundamental 

no manuseio dos animais usados neste experimento. Obrigado pelo 



Agradecimentos 

importante auxílio na difícil tarefa de coleta de sangue dos animais e, 

principalmente, pela companhia agradável durante as cirurgias.  

 

Ao Camilo, José Lúcio e João Batista, funcionários do Biotério da FOA-UNESP, 

pela disponibilidade e a alegria com que sempre me trataram durante todo 

o curso de pós-graduação. 

 

À Marina M. S. Kawagoi e Adélia Barreto C. Silva, funcionárias da Seção de 

Pós-Graduação da FOA-UNESP, pela atenção, simpatia e paciência que 

sempre tiveram comigo. 

 

À Alexandra, Ana Claudia, Claudia, Cláudio, Helena, Isabel, Ivone, Izamar, 

Jessica, Luzia e Maria Cláudia, funcionários da Biblioteca da FOA – UNESP, 

pela disponibilidade com que sempre me atenderam.   

 

À Beth e Roseli, auxiliares do Setor de Implantodontia do HRAC-USP, pela 

oportunidade de ter trabalhado com vocês, profissionais experientes e 

altamente qualificadas, durante os dois anos de curso no Centrinho.  

 

A todos os funcionários do HRAC-USP, que contribuíram de forma direta ou 

indireta para minha formação em Implantodontia. Conheci e aprendi a 

respeitar o notável trabalho realizado por todas as pessoas que fazem parte 

desta instituição. Nos dois anos de convívio direto, pude compreender o real 

significado da palavra caridade, que expressa literalmente o que vocês 

fazem todos os dias neste hospital.  

 

Aos pacientes do HRAC-USP, que foram imprescindíveis à minha formação 

em Implantodontia, o meu sincero agradecimento. Que Deus os abençoe. 

 

 



Agradecimentos 

 

 

 

 

 

 

 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

EPÍGRAFE 
 



Epígrafe 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                                                            “Ad partus ovium noscuntur pondera ventrum” 

“No final é que se cantam as glórias” 

(Cícero)  

 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 



 

 
 
 
 
 
 
 
 

 

RESUMO 
 



Resumo 

 
Melo LGN. Influência da associação do plasma rico em plaquetas ao enxerto 

de osso autógeno no reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico em calvárias 

de coelhos. Estudo histológico e histométrico. [tese]. Araçatuba: Faculdade de 

Odontologia da Universidade Estadual Paulista; 2007. 

 

O objetivo do presente trabalho foi avaliar, histologicamente, a influência da 

associação do plasma rico em plaquetas (PRP) ao enxerto de osso autógeno (OA) no 

reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico (DTC) em calvárias de coelhos. Sessenta 

coelhos foram divididos em 3 grupos: C (controle), OA (osso autógeno) e OA/PRP (osso 

autógeno associado ao plasma rico em plaquetas). Um defeito de tamanho crítico, 

com 15 mm de diâmetro, foi criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito 

foi preenchido somente com coágulo sanguíneo. No Grupo OA, o defeito foi 

preenchido com osso autógeno particulado. No Grupo OA/PRP, o defeito foi 

preenchido com osso autógeno particulado associado ao PRP. Todos os grupos foram 

divididos em subgrupos (n = 10) para eutanásia aos 30 ou 90 dias pós-operatórios. 

Foram realizadas análises histológica e histométrica. A quantidade de osso neoformado 

foi calculada como uma porcentagem da área total do defeito original. Os dados em 

porcentagem foram transformados em raiz quadrada para análise estatística (ANOVA, 

teste t, p<0,05). Aos 30 dias pós-operatórios, o Grupo OA/PRP apresentou uma 

quantidade significativamente maior de osso neoformado que o Grupo OA (64,44% e 

46,88%, respectivamente). Aos 90 dias, todos os espécimes dos Grupos OA/PRP e OA 

mostraram fechamento ósseo completo do defeito, com quantidades similares de osso 

neoformado (77,9% e 75%, respectivamente). Dentro dos limites deste trabalho, pode-se 

concluir que o PRP acelerou o processo de reparo do enxerto de osso autógeno em 

defeitos de tamanho crítico em calvária de coelhos.  

Palavras-chave: Regeneração óssea; fatores de crescimento; plaquetas. 



 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

ABSTRACT 
 



Abstract 

 
 
Melo LGN. Effect of platelet-rich plasma on bone healing in autogenous bone 

graft in critical-size defects. A histologic and histometric study in rabbit calvaria 

[tesis]. Araçatuba: Dental School of Araçatuba, São Paulo State University. 2007. 

 

The purpose of this study was to histologically analyze the effect of platelet-rich plasma 

(PRP) on bone healing in an autogenous bone graft placed in surgically created critical-

size defects (CSD) in rabbit calvaria. 60 rabbits were divided into 3 groups: C (control); 

AB (autogenous bone graft) and AB/PRP (autogenous bone graft with platelet-rich 

plasma). A 15 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group 

C the defect was filled by blood clot only. In Group AB the defect was filled with 

particulate autogenous bone. In Group PRP it was filled with particulate autogenous 

bone in combination with platelet-rich plasma. All groups were divided into subgroups 

(n=10) and euthanized at either 30 or 90 days post-operative. Histometric, using image 

analysis software, and histologic analyses were performed. Amount of new bone was 

calculated as a percentage of the total area of the original defect. Percentage data 

were transformed into square root for statistical analysis (ANOVA, t test, p<0.05). At 30 

days post-op, Group AB/PRP had a statistically greater amount of bone formation than 

Group AB (64.44% and 46.88%, respectively). At 90 days, complete bone regeneration of 

the defect was seen in all specimens of Groups AB/PRP and AB, with similar amounts of 

newly formed bone (77.9% and 75%, respectively). Within the limits of this study, it can be 

concluded that PRP accelerated the healing of autogenous bone graft in critical-size 

defects in rabbit calvaria. 

Key-words: Bone regeneration; growth substances; blood platelets. 

 

 



 

 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

LISTA DE FIGURAS 
 



Lista de Figuras 

Lista de Figuras 
 

 
 
 

 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Figura 1    -   Defeito de tamanho crítico (15 mm de diâmetro) e as duas 

marcações de referência criados na calvária. 

 

63 

Figura 2    -  (A) Corte longitudinal ao longo da linha central (y) do DTC; 

(B) cortes tranversais (x); (C) espécime histológico pronto 

para inclusão em parafina. 

 

 

63 

Figura 3    -   Quantidade média de plaquetas por microlitro (µl) nas 

amostras de PRP e de sangue periférico. 

 

64 

Figura 4    -   Efeito da concentração do sPRP sobre a proliferação dos 

pré-osteoblastos MC3T3-E1 (72 horas). *p < 0.05 em relação 

aos controles (Análise de Variância; teste de Dunnett). 

 

 

64 

Figura 5    -   Vistas panorâmicas dos defeitos cirúrgicos mostrando osso 

neoformado.  (A) Grupo C - 30 dias; (B) Grupo C - 90 dias; 

(C) Grupo OA - 30 dias; (D) Grupo OA - 90 dias; (E) Grupo 

OA/PRP - 30 dias; (F) Grupo OA/PRP - 90 dias. Tricrômico de 

Masson. Aumento original 25x. 

 

 

 

    

65 

Figura 6    - Médias (%) e desvios-padrão da AON para os Grupos C, OA 

e OA/PRP. 30 e 90 dias pós-operatórios. 

 

66 

Figura 7    - Efeito da concentração do sPRP sobre a proliferação dos 

pré-osteoblastos MC3T3-E1 (24 horas). *p < 0.05 em relação 

aos controles (Análise de Variância; teste de Dunnett). 

 

 

76 

 



Lista de Figuras 

 

 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Figura 8   -   Cultura de pré-osteoblastos MC3T3-E1 (72 horas). (A) Alfa-

MEM +10% SBF; (B) (A) Alfa-MEM + 10% SBF + 10% sPRP. 

 

76 

Figura 9   -   Esfregaço de amostra de sangue periférico (A) mostrando 

menor número de plaquetas (setas) que o esfregaço de 

amostra de PRP (B). Panótico. Aumento de 1000x. 

 

 

78 



 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 

LISTA DE TABELAS 
 



Lista de Tabelas 

 
LISTA DE TABELAS 

 
 
 

 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Tabela 1    - Porcentagem média da Área de Osso Neoformado (AON) 

dentro da área do defeito cirurgicamente criado, com 

comparação entre os grupos. 30 e 90 dias pós-operatórios. 

 

 

62 

Tabela 2    - Teste de Correlação de Pearson para a quantidade de 

plaquetas presentes nas amostras de sangue periférico e de 

Plasma Rico em Plaquetas (PRP) 

 

 

77 

Tabela 3    - Teste de Correlação de Pearson para a quantidade de 

plaquetas presentes nas amostras de Plasma Rico em 

Plaquetas (PRP) e a Área de Osso Neoformado (AON) 

 

 

77 



 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

LISTA DE ABREVIATURAS 
 



Lista de Abreviaturas 

 
 

LISTA DE ABREVIATURAS 
 

 
 

ACD-A = Ácido Citrato Dextrose-A 

ANOVA = Análise de Variância 

AON   = Área de Osso Neoformado 

AT   = Área Total 

C   = Controle 

cm   = Centímetro(s) 

cm2 = Centímetro(s) quadrado(s) 

DTC   = Defeito(s) de Tamanho Crítico 

EDTA = Ácido Etilenodiaminotetracético  

g = Grama(s) 

H.E. = Hematoxilina e Eosina 

Kg = Quilograma(s) 

Ltda.   = Limitada 

mg   = Miligrama(s) 

ml   = Mililitro(s) 

mm = Milímetro(s) 

mm2   = Milímetro(s) quadrado(s) 

µl = Microlitro(s) 

µm   = Micrômetro(s) 

PCCS = Platelet Concentrate Collection System 

PRP = Plasma Rico em Plaquetas 

rpm =  Rotações por minuto 



Lista de Abreviaturas 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

LISTA DE SÍMBOLOS 
 



Lista de Símbolos 

 
 

LISTA DE SÍMBOLOS 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

p = Probabilidade do valor do teste 

< = Menor 

n = Tamanho da amostra 

%   = Por cento 

ºC   = Graus Celsius 

x =  Vezes 

r = Coeficiente de correlação 

> = maior 



 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 

SUMÁRIO 
 



Sumário 

SUMÁRIO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Manuscrito para Publicação 40 

Resumo 41 

Introdução 42    

Material e Métodos 43 

Resultados 49 

Discussão 52 

Referencias Bibliográfica 56 

Tabela 62 

Figuras 63 

Anexos 67 

 



 

 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

1De acordo com as normas da Revista Clinical Oral Implants Research 

MANUSCRITO PARA PUBLICAÇÃO1 

 



 

 
 

40 

 

 

Influência da associação do plasma rico em plaquetas ao enxerto de osso 

autógeno no reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico em calvárias de 

coelhos. Estudo histológico e histométrico. 

 

 

Luiz Gustavo N. Melo, DDS, MS1 

Maria J. H. Nagata, DDS, PhD1 

 
1Disciplina de Periodontia, Departamento de Cirurgia e Clínica Integrada, Faculdade de 

Odontologia do Campus de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita 

Filho” – UNESP, Brasil. 

 

Título resumido: Defeitos de tamanho crítico tratados com osso autógeno e PRP 

 

Autora responsável para correspondência: 

Maria José Hitomi Nagata 

Telephone: +55 18 3636 3200 – Ramal 3871 

Fax: +55 18 3636-3333 

Rua José Bonifácio, 1193 

CEP: 16015 - 050  Araçatuba, SP, Brazil 

e-mail: mjnagata@foa.unesp.br 

 

Palavras-chave: Regeneração óssea; Fatores de crescimento; Plaquetas; Enxerto ósseo 



 

 
 

41 

 

Melo, L. G. N.; Nagata, M. J. H. Influência da associação do plasma rico em plaquetas ao 

enxerto de osso autógeno no reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico em calvárias de 

coelhos. Estudo histológico e histométrico. Clin Oral Impl Res   

 

O objetivo do presente trabalho foi avaliar, histologicamente, a influência da associação do 

plasma rico em plaquetas (PRP) ao enxerto de osso autógeno (OA) no reparo ósseo de 

defeitos de tamanho crítico (DTC) em calvárias de coelhos. Sessenta coelhos foram divididos 

em 3 grupos: C (controle), OA (osso autógeno) e OA/PRP (osso autógeno associado ao 

plasma rico em plaquetas). Um defeito de tamanho crítico, com 15 mm de diâmetro, foi 

criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito foi preenchido somente com 

coágulo sanguíneo. No Grupo OA, o defeito foi preenchido com osso autógeno particulado. 

No Grupo OA/PRP, o defeito foi preenchido com osso autógeno particulado associado ao 

PRP. Todos os grupos foram divididos em sub-grupos (n = 10) para eutanásia aos 30 ou 90 

dias pós-operatórios. Foram realizadas análises histológica e histométrica. A quantidade de 

osso neoformado foi calculada como uma porcentagem da área total do defeito original. Os 

dados em porcentagem foram transformados em raiz quadrada para análise estatística 

(ANOVA, teste t, p < 0,05). Aos 30 dias pós-operatórios, o Grupo OA/PRP apresentou uma 

quantidade significativamente maior de osso neoformado que o Grupo OA (64,44% e 

46,88%, respectivamente). Aos 90 dias, todos os espécimes dos Grupos OA/PRP e OA 

mostraram fechamento ósseo completo do defeito, com quantidades similares de osso 

neoformado (77,9% e 75%, respectivamente). Dentro dos limites deste trabalho, pode-se 

concluir que o PRP acelerou o processo de reparo do enxerto de osso autógeno em defeitos de 

tamanho crítico em calvária de coelhos.  

 

 



 

 
 

42 

 

Introdução  

 

Os fatores de crescimento representam uma classe de mediadores biológicos que regulam a 

proliferação, quimiotaxia e diferenciação celular (Lynch et al. 1989). A aplicação terapêutica 

desses fatores, objetivando a regeneração de um determinado tecido, fundamenta-se na 

tentativa de mimetizar os eventos biológicos responsáveis pela formação (estágio 

embrionário) e manutenção (estágio pós-natal) deste tecido (Schilephake 2002).  

Marx et al. (1998) propuseram o uso do plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo como uma 

técnica economicamente viável para obter-se uma alta concentração de fatores de 

crescimento. Esses autores observaram uma maturação mais rápida dos enxertos ósseos 

autógenos, quando associados ao PRP, usados no tratamento de defeitos mandibulares 

resultantes da remoção de tumores benignos e malignos. Este estudo clínico pioneiro de Marx 

et al. (1998) foi importante para o estabelecimento da metodologia e aplicação clínica do PRP 

na odontologia. Posteriormente, outros pesquisadores avaliaram os efeitos clínicos do PRP 

associado ou não a enxertos ou substitutos ósseos usados em levantamento de seio maxilar 

(Wiltfang et al. 2003; Raghoebar et al. 2005), procedimentos para aumento ósseo vertical ou 

horizontal de rebordos atróficos (Shanaman et al. 2001), alvéolos de extração de terceiros 

molares (Sammartino et al. 2005), defeitos ósseos de fissura lábio-palatina (Oyama et al. 

2004), defeitos mandibulares provocados por cirurgias ressectivas (Simon et al. 2006) e em 

defeitos periodontais (Christgau et al. 2006). Estes trabalhos, entretanto, têm demonstrado 

resultados contraditórios em relação à formação e maturação óssea. 

Resultados contraditórios também têm sido observados em modelos animais. A influência do 

PRP tem sido avaliada em defeitos em crânios de coelhos tratados com osso autógeno 

(Aghaloo et al. 2002), osso bovino inorgânico (Kim et al. 2001; Aghaloo et al. 2004), 

aloenxerto ósseo desmineralizado seco e congelado (Aghaloo et al. 2005) ou proteína óssea 



 

 
 

43 

 

morfogenética (Jung et al. 2005); em defeitos mandíbulares de cabras (Fennis et al. 2004) e 

cães (Choi et al. 2004; Gerard et al. 2006) tratados com osso autógeno e em defeitos em 

crânios de porcos tratados com colágeno bovino (Schlegel et al. 2004), osso autógeno 

(Wiltfang et al. 2004; Thorwarth et al. 2005) ou osso bovino inorgânico (Thorwarth et al. 

2006).  

Analisando-se a grande variação de resultados desses estudos, pode-se notar que muitos deles 

são empíricos, sem dados controles. Por existirem poucos estudos controlados, com variação 

nos materiais de enxerto e sítios usados e nos protocolos de preparação do PRP, há ainda 

muitas dúvidas existentes sobre o quão efetivo o PRP é em favorecer a cicatrização de 

enxertos ósseos.    

O objetivo do presente trabalho foi avaliar, histologicamente, a influência da associação do 

plasma rico em plaquetas (PRP) ao enxerto de osso autógeno (OA) no reparo ósseo de 

defeitos de tamanho crítico (DTC) em calvárias de coelhos. 

 

 

Material e métodos 

 

Modelo experimental  

O protocolo experimental foi aprovado pela Comissão de Ética na Experimentação Animal da 

Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” – UNESP, Campus de Araçatuba. 

Foram utilizados 60 coelhos machos (New Zealand), com idade entre 4 a 5 meses, pesando 

entre 3,5 a 4,5 kg (UNESP, Biotério da Faculdade de Medicina, Campus de Botucatu). Os 

animais foram aleatoriamente divididos em 3 grupos experimentais: Grupo C (controle), 

Grupo OA (osso autógeno) e Grupo OA/PRP (osso autógeno associado ao plasma rico em 

plaquetas). 

  



 

 
 

44 

 

Procedimento cirúrgico 

Vinte e quatro horas antes da realização das cirurgias, os coelhos receberam injeção 

intramuscular de enrofloxacino (0,1 ml/kg) (Baytril, Bayer S.A., São Paulo, SP, Brasil). 

Para realização de todos os procedimentos experimentais, os animais foram anestesiados por 

injeção intramuscular de xilazina (0,25 ml/kg de peso corporal) e quetamina (0,35 ml/kg de 

peso corporal). Após anti-sepsia, foi feita uma incisão semi-lunar na calvária e um retalho de 

espessura parcial foi levantado em direção posterior, seguido de uma incisão no periósteo, o 

qual foi também afastado na mesma direção (Vikjaer et al. 1997). Um defeito de tamanho 

crítico (DTC) de 15 mm de diâmetro (Hollinger & Kleinschmidt 1990) foi criado com uma 

trefina acoplada em uma peça de mão de baixa rotação, sob irrigação abundante com solução 

salina estéril. O defeito incluiu uma porção da sutura sagital. Com auxílio de um guia 

cirúrgico previamente confeccionado, uma marcação no formato de “L” foi feita 2 mm 

anterior e outra 2 mm posterior às margens do defeito cirúrgico com uma broca carbide 

tronco-cônica. O longo eixo de cada “L” localizou-se sobre uma linha imaginária longitudinal 

que dividia o defeito cirúrgico ao meio. As marcações foram, então, preenchidas com 

amálgama (Fig. 1). Estas foram usadas para identificação do meio do defeito cirúrgico 

original durante o processamento laboratorial e, também, para localização das suas margens 

ósseas originais durante a análise histométrica.   

No Grupo C, o defeito cirúrgico foi preenchido somente com coágulo sangüíneo. No Grupo 

OA, o defeito foi preenchido com aproximadamente 0,30 g de osso autógeno particulado. No 

grupo OA/PRP, o defeito foi preenchido com aproximadamente 0,30 g de osso autógeno 

particulado associado com 0,5 ml de PRP. O osso autógeno foi obtido da calota craniana 

durante a criação dos defeitos e particulado usando um particulador ósseo manual (Quentin 

Bone Mill, Quentin Dental Products, Leimen, BW, Germany).    



 

 
 

45 

 

Os tecidos moles foram, então, reposicionados e suturados para obter um fechamento 

primário da ferida (Vycril 4-0, Ethicon, São Paulo, SP, Brasil para suturas internas e Seda 4-

0, Ethicon, São Paulo, SP, Brasil para suturas externas). Cada animal recebeu injeções 

intramusculares diárias de enrofloxacino (0,1 ml/kg de peso corporal) (Baytril, Bayer S.A., 

São Paulo, SP, Brasil) durante cinco dias pós-operatórios e de cloridrato de tramadol (0,04 

ml/kg de peso corporal) (Tramal®, Pfizer Ltda, São Paulo, SP, Brasil) durante três dias pós-

operatórios. 

 

Preparo do PRP 

Quarenta ml de sangue foram coletados de cada animal, via punção cardíaca, com auxílio de 

uma cânula adaptada a uma seringa contendo 5 ml do anti-coagulante ácido citrato dextrose 

(ACD-A). O mesmo volume de soro fisiológico (40 ml) foi, então, injetado via endovenosa 

para manutenção do volume sangüíneo sistêmico do animal. O preparo do PRP foi feito de 

acordo com as instruções do fabricante para uso do sistema PCCS IITM (3i Implant 

Innovations Inc., Palm Beach, FL, EUA). Cada amostra de sangue foi centrifugada a 3200 

rpm por 12 minutos. 0,5 ml de PRP foi ativado com 0,025 ml de solução de cloreto de cálcio 

a 10% (Calcium Chloride 10% Solution, ScienceLab.com Inc., Houston, TX, EUA) e 

imediatamente associado com aproximadamente 0,30 g de osso autógeno particulado. Em 3 a 

5 minutos após a ativação do PRP, esta mistura apresentou-se com consistência gelatinosa, 

sendo então colocada no defeito cirúrgico. 

 



 

 
 

46 

 

Contagem de plaquetas 

O líquido de Brecher foi usado para lisar os eritrócitos e diluir as amostras de sangue 

periférico e de PRP. As plaquetas nas amostras diluídas foram, então, contadas manualmente 

em uma câmara de Neubauer. Além disso, esfregaços de sangue periférico foram corados 

com “Panótico Rápido LB” (LaborClin, Pinhais, PR, Brasil) para verificar a morfologia das 

plaquetas.  

 

Avaliação in vitro das propriedades mitogênicas do sobrenadante do PRP   

Preparo do sobrenadante 

O sobrenadante do PRP (sPRP) foi preparado de acordo com o protocolo recomendado por 

Martineau et al. (2004). Uma amostra de 6 ml de PRP foi ativada com uma solução de cloreto 

de cálcio a 10% (Calcium Chloride 10% Solution, ScienceLab.com Inc., Houston, TX, EUA), 

na proporção de 0,05 ml para cada 1 ml de PRP. Em seguida, foi incubada por uma hora a 

37°C, na presença de 5% de CO2 (Auto-Flow incubator, NuAire Inc., Plymouth, MN, USA). 

Após este período, a amostra foi centrifugada por 10 minutos a 4000 g para coletar o sPRP. 

Este foi, então, imediatamente armazenado à - 80°C, para uso em culturas de células. 

 

Cultura de células 

Células pré-osteoblásticas MC3T3-E1 (subclone 4) foram adquiridas da “American Type 

Culture Collection”. Estas foram mantidas em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) 

(Nutricell Nutrientes Celulares, Campinas, SP, Brasil), sem ácido ascórbico, suplementado 

com soro fetal bovino (SFB) a 10% (Nutricell Nutrientes Celulares, Campinas, SP, Brasil), 

em uma incubadora a 37 °C, com 5% de CO2. O meio foi trocado a cada 3 dias até as células 

alcançarem a confluência, quando foram então subcultivadas.  

 



 

 
 

47 

 

Análise de proliferação celular 

As células foram plaqueadas em uma densidade de 5 x 104 células/cm2 em placas de 96 poços 

(TPP®, Techno Plastic Products AG, Trasadingen, SH, Switzerland). Após um período de 

incubação de 24 horas, o meio de cultura celular foi substituído por meios de cultura 

contendo 1, 5, 10, 15, 20, 30 e 50% de sPRP solubilizado em meio α-MEM livre e 

suplementado com SFB a 10%. Os meios α-MEM livre e suplementado com SFB a 10% 

foram usados como controle. As placas foram incubadas por 24 e 72 horas a 37 °C e 5% de 

CO2. A análise de proliferação celular foi realizada usando o teste do MTT {brometo de [3-

(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazolio]}. Após tratamento com diferentes concentrações 

de sPRP, o meio de cultura foi substituído por outro sem SFB e com MTT a uma 

concentração final de 0,5 mg/mL, por 3 horas. Os cristais de formazan foram solubilizados 

com dimetil sulfóxido, agitados por 5 minutos e os resultados da densidade ótica foram lidos 

num leitor de microplacas a 570 nm. 

 

Processamento tecidual 

Cada grupo de animais foi dividido em 2 sub-grupos, para eutanásia aos 30 e 90 dias pós-

operatórios. A área do defeito cirúrgico original e os tecidos circunjacentes foram removidos 

em bloco. As peças foram fixadas em solução de formol neutro a 10%, lavadas em água 

corrente e descalcificadas em solução de ácido etilenodiaminotetracético a 18%. Após 

descalcificação inicial, cada peça foi dividida longitudinalmente em dois blocos, exatamente 

ao longo do centro do defeito cirúrgico original, usando-se o longo eixo de cada marcação de 

amálgama em formato de “L” como referência. Foram realizados, também, cortes 

transversais que tangenciaram o eixo menor de ambas as marcações em “L”, de modo que 

cada espécime ficou com 19 mm de extensão no sentido longitudinal. Assim, tornou-se 

possível a determinação precisa dos limites do defeito cirúrgico original para realização das 



 

 
 

48 

 

análises histológica e histométrica (Fig. 2). Após um período de descalcificação adicional, as 

peças foram processadas e incluídas em parafina. Foram realizados cortes seriados 

longitudinais, com 6 µm de espessura, iniciados a partir do centro do defeito cirúrgico 

original. Os cortes foram corados pelas técnicas de Hematoxilina e Eosina (H.E.) ou 

Tricrômico de Masson para análises com microscopia de luz. 

 

Análise histomorfométrica 

Foram selecionados 2 cortes histológicos, representando o centro do defeito cirúrgico 

original, para as análises histológica e histométrica. As imagens dos cortes histológicos foram 

capturadas por uma câmera digital acoplada a um microscópio óptico, com um aumento de 

32x e salvas em um computador. Como não foi possível capturar o defeito inteiro em uma 

mesma imagem devido ao aumento usado, foram unidas 4 imagens digitais para formar um 

quadro único que compreendia toda a extensão do defeito e as suas margens ósseas originais. 

A análise histomorfométrica foi realizada com o auxílio do software “ImageLab 2000” 

(Diracon Bio Informática Ltda., Vargem Grande do Sul, SP, Brasil).  

Os seguintes critérios, baseados em parte no estudo de Melo et al. (2005), foram usados para 

padronizar a análise histomorfométrica das imagens digitalizadas: 

1) A Área Total (AT) a ser analisada correspondeu à área total do defeito cirúrgico 

original. Esta área foi determinada, primeiramente, pela identificação das superfícies 

externa e interna da calvária original nas margens direita e esquerda do defeito 

cirúrgico. Estas superfícies foram conectadas com linhas desenhadas seguindo suas 

respectivas curvaturas. Foram então medidos, a partir de ambas as extremidades do 

espécime, 2 mm em direção ao centro do defeito para estabelecer os limites do defeito 



 

 
 

49 

 

cirúrgico original. A Área de Osso Neoformado (AON) foi delineada dentro dos 

limites da AT. 

2)  A AT foi medida em mm2 e considerada 100% da área a ser analisada. A AON 

também foi medida em mm2 e calculada como uma porcentagem da AT. 

Análise estatística 

Os valores de AON de cada animal foram representados pela porcentagem média dos 2 cortes 

histológicos. Estes dados percentuais foram transformados em raiz quadrada para a análise 

estatística. A significância das diferenças entre os grupos em relação à AON foi determinada 

pela análise de variância, seguida por um teste t de Student post hoc quando a análise de 

variância mostrou uma diferença significativa entre os grupos (p < 0,05). O coeficiente de 

correlação de Pearson (rp) foi usado para demonstrar a relação entre a AON e a quantidade de 

plaquetas das amostras de PRP, bem como entre a quantidade de plaquetas das amostras de 

PRP e de sangue periférico. Na análise da proliferação celular, a significância das diferenças 

entre os grupos foi determinada pela análise de variâncìa, seguida pelo teste de Dunnett post 

hoc, adotando o nível de significância de 5%. 

 

 

Resultados 

 

Um espécime do Grupo OA/PRP de 30 dias pós-operatórios foi perdido devido a problemas 

no processamento laboratorial. 

 

Acompanhamento clínico 
 



 

 
 

50 

 

Os animais toleraram bem o procedimento cirúrgico e mantiveram-se saudáveis durante todo 

o período experimental. 

 

Estudo da contagem de plaquetas 

As contagens de plaquetas confirmaram que a técnica usada para o preparo de PRP neste 

estudo produziu amostras com altas concentrações de plaquetas. Esfregaços de amostras de 

PRP exibiram maior quantidade de plaquetas do que esfregaços de amostras de sangue 

periférico. A quantidade média de plaquetas nas amostras de sangue periférico foi 327,83 ± 

73,61 x 103 plaquetas/µl, enquanto que nas amostras de PRP foi 1204,03 ± 369,875 x 103 

plaquetas/µl (Fig. 3). Portanto, a concentração de plaquetas nas amostras de PRP foi 

aproximadamente 4 vezes maior que aquela observada nas amostras de sangue periférico. 

 

Análise de proliferação celular 

As células da linhagem MC3T3-E1, tratadas com o sPRP, apresentaram uma taxa de 

proliferação dose-dependente. Com a adição de 10% de sPRP suplementado com SFB a 10% 

ou com a adição de 20% de sPRP somente, as células mostraram uma taxa de proliferação 

aproximadamente 100 % maior que a do grupo controle em 72 horas de cultura (Fig. 4).   

 

Análise histológica qualitativa  

Grupo C (controle): Em 30 dias pós-operatórios, quase toda a extensão do defeito cirúrgico 

estava ocupada por tecido conjuntivo com feixes de fibras colágenas orientadas 

paralelamente à superfície da ferida e um moderado número de fibroblastos. Observou-se, 

junto às margens do defeito cirúrgico, pequena quantidade de tecido ósseo neoformado (Fig. 

5A) circundado por poucos osteoblastos. Em 90 dias pós-operatórios, a maioria dos 

espécimes apresentou uma formação óssea similar àquela observada nos espécimes de 30 dias 



 

 
 

51 

 

pós-operatórios (Fig. 5B), enquanto poucos apresentaram uma maior formação óssea. O 

tecido conjuntivo apresentou um moderado número de fibroblastos ao lado de feixes de fibras 

colágenas. 

 

Grupo OA (osso autógeno):  

Aos 30 dias pós-operatórios, nenhum espécime apresentou o fechamento completo do defeito 

cirúrgico por tecido ósseo. Contudo,  observou-se um fechamento quase completo do mesmo 

em 6 espécimes. De forma geral, a região do defeito cirúrgico estava ocupada por formações 

isoladas de tecido ósseo neoformado imaturo ao lado de tecido conjuntivo fibroso (Fig 5C). 

Em toda a extensão do mesmo, observou-se a presença de remanescentes de partículas ósseas 

do enxerto. Áreas de tecido conjuntivo provisório também estavam presentes. Em alguns 

espécimes, notou-se a presença de um discreto número de linfócitos e macrófagos em áreas 

isoladas. Aos 90 dias, observou-se o fechamento completo do defeito por tecido ósseo 

trabecular maduro em todos os animais (Fig 5D). Em algumas áreas, remanescentes de 

partículas ósseas do enxerto ainda estavam presentes. Em ambos os períodos de análise, a 

espessura dos tecidos neoformados na região do defeito era, na maioria dos espécimes, mais 

delgada que o osso original da calota. 

 

Grupo OA/PRP (osso autógeno/plasma rico em plaquetas): Aos 30 dias pós-operatórios, 2 

espécimes apresentaram um fechamento completo do defeito cirúrgico por tecido ósseo (Fig. 

5E), enquanto 8 espécimes apresentaram um fechamento quase completo do mesmo com 

tecido ósseo trabecular imaturo.  Em toda a extensão do defeito, observou-se a presença de 

remanescentes de partículas ósseas do enxerto. A espessura dos tecidos neoformados era, na 

maioria dos espécimes, maior que o osso original da calota. Aos 90 dias pós-operatórios, 

observou-se o fechamento completo do defeito em todos os animais. Em alguns espécimes, 



 

 
 

52 

 

houve o restabelecimento quase completo das duas corticais, separadas por uma porção 

central medular (Fig. 5F). Em outros, o defeito estava preenchido por tecido ósseo trabecular 

maduro. Poucos remanescentes de partículas ósseas do enxerto estavam ainda presentes em 

algumas áreas. A estrutura óssea neoformada apresentou, na maioria dos espécimes, 

espessura semelhante àquela do osso original da calota. 

 

Análises histométrica e estatística 

As médias e os desvios-padrão da AON para os grupos C, OA e OA/PRP de 30 e 90 dias pós-

operatórios, assim como os resultados da comparação entre os grupos, estão apresentados na 

Tabela 1 e na Fig. 6. Foi observada uma correlação estatisticamente significante entre a 

quantidade de plaquetas nas amostras de sangue periférico e de PRP (r = 0,66, p = 0,0021). 

Contudo, não foi observada uma correlação estatisticamente significante entre a quantidade 

de plaquetas nas amostras de PRP e a AON (r = - 0,245, p = 0,3116). Os resultados da análise 

estatística dos dados obtidos no teste de proliferação celular estão apresentados na Fig. 4. 

 

 

Discussão 

 

Estudos clínicos e em animais têm demonstrado que a associação do Plasma Rico em 

Plaquetas (PRP) ao osso autógeno pode potencializar a formação óssea (Marx et al. 1998; 

Fennis et al. 2004). Contudo, outros autores não obtiveram resultados satisfatórios com a 

associação do PRP ao osso autógeno (Aghaloo et al. 2002; Choi et al. 2005). A necessidade 

de estudos usando protocolos padronizados para avaliar os reais efeitos biológicos do PRP 

tem sido enfatizada por Grageda et al. (2004) e Marx (2004).   



 

 
 

53 

 

A escolha do modelo animal e do sítio cirúrgico adequados é fundamental para que as 

avaliações obtidas sejam confiáveis e possam mimetizar, de forma reprodutível, os possíveis 

efeitos dos biomateriais em seres humanos (Hollinger & Kleinschmidt 1990). O coelho foi 

selecionado como modelo experimental no presente estudo por ter elementos figurados do 

sangue morfologicamente semelhantes ao dos humanos (Jain 1993) e por possibilitar a coleta 

de um volume de sangue suficiente para o preparo de um PRP autólogo (Efeoglu et al. 2004).  

A calvária foi selecionada por possuir várias similaridades com a região maxilo-facial e 

apresentar baixa capacidade regenerativa (Frame 1980; Dahlin et al. 1991).  Além disso, um 

defeito de tamanho crítico (DTC) foi realizado, confirmado pela pequena e limitada formação 

óssea observada no Grupo C no presente estudo (Tabela 1), para permitir a avaliação da real 

influência do biomaterial no reparo ósseo (Hollinger & Kleinschmidt 1990). 

A seleção de uma técnica adequada para o preparo do PRP é um outro aspecto de 

fundamental importância para uma avaliação confiável dos efeitos deste biomaterial.  Neste 

trabalho, o PRP foi preparado segundo o protocolo do sistema PCCS IITM. A primeira versão 

deste sistema, o PCCS, foi avaliada em estudos clínicos (Wiltfang et al. 2003; Raghoebar et 

al. 2005), animais (Wiltfang et al. 2004, Thorwarth et al. 2005) e laboratoriais (Weibrich et 

al. 2005; Leitner et al. 2006). Esses estudos laboratoriais demonstraram que o referido 

sistema apresentou as características ideais para o preparo do PRP, pois concentra as 

plaquetas em níveis adequados, requer um volume reduzido de sangue, é semi-automatizado 

e não danifica mecanicamente as plaquetas durante  a centrifugação.  Assim como a primeira 

versão deste sistema, que foi recomendada por Marx (2004) por proporcionar uma 

concentração de plaquetas considerada terapêutica, o sistema PCCS IITM utilizado no presente 

estudo manteve esta propriedade, como constatado pelo aumento constante e previsível do 

número de plaquetas nas amostras de PRP em relação as do sangue periférico (Fig. 3). Esta 

previsibilidade na concentração de plaquetas apresentada pelo sistema PCCS IITM pôde ser 



 

 
 

54 

 

confirmada  pela  correlação estatisticamente significante observada entre a quantidade de 

plaquetas nas amostras de sangue periférico e de PRP. Além dessa propriedade, o sistema 

PCCS IITM provavelmente também preservou a integridade da membrana das plaquetas 

durante o processamento do PRP, o que é fundamental para que as mesmas secretem fatores 

de crescimento em um estado bioativo (Marx 2004), como indicado pelos resultados 

favoráveis obtidos com a avaliação in vitro das propriedades mitogênicas do sobrenadante do 

PRP no presente estudo (Fig. 4).  

Um aumento significativo na neoformação óssea foi observado no Grupo OA/PRP em 

relação ao Grupo OA, aos 30 dias pós-operatórios (Tabela 1). Estes dados corroboram os 

achados de estudos prévios, onde um aumento significativo na neoformação óssea somente 

pôde ser constatado nos períodos iniciais do reparo ósseo de DTC criados em crânios de 

mini-porcos (Wiltfang et al. 2004; Schlegel et al. 2004; Thorwarth et al. 2005; Thorwarth et 

al. 2006) e de defeitos ósseos segmentares realizados em mandíbulas de cães (Gerard et al. 

2006).  A maior quantidade de novo osso observado no Grupo OA/PRP, aos 30 dias, deveu-

se, provavelmente, a um aumento na proliferação das células endoteliais (Fréchette et al. 

2005), pré-osteoblastos (Gruber et al. 2006), osteoblastos (Choi et al. 2005; Ogino et al. 

2006) e osteoclastos (Gruber et al. 2002) no sítio da ferida devido à ação do PRP. É 

interessante ressaltar que este aumento do número de osteoclastos deve ter contribuído para 

uma maior biodisponibilidade das proteínas morfogenéticas ósseas no microambiente da 

ferida cirúrgica (Marx & Garg 1998). 

No período tardio de avaliação, os Grupos OA e OA/PRP apresentaram quantidades similares 

de osso neoformado (Tabela 1), com fechamento ósseo completo do defeito cirúrgico em 

todos os espécimes. Estes resultados corroboram os achados de um estudo animal recente 

realizado por Gerard et al. (2006). De fato, era de se esperar, no período final de avaliação, o 

fechamento ósseo completo do defeito cirúrgico com o uso do enxerto de osso autógeno, 



 

 
 

55 

 

considerado como “gold standard” para procedimentos de reconstrução óssea.  Apesar da 

similaridade nos resultados finais do processo de reparo ósseo dos Grupos OA e OA/PRP, é 

importante ressaltar que o Grupo OA/PRP apresentou, já aos 30 dias pós-operatórios, uma 

quantidade de osso neoformado similar àquela observada no Grupo OA aos 90 dias pós-

operatórios (Tabela 1).  Isto significa que o uso do PRP acelerou o processo de reparo ósseo 

em aproximadamente duas vezes, corroborando os achados de Marx et al. (1998). Essa 

evolução mais rápida no processo de reparo ósseo do defeito cirúrgico pôde também ser 

observada na análise qualitativa dos espécimes aos 90 dias pós-operatórios, que evidenciou 

um reparo ósseo mais desenvolvido no Grupo OA/PRP, como observado pelo 

restabelecimento quase completo das corticais e porção central medular da calvária em alguns 

espécimes. 

Grageda et al. (2004) sugeriram que se avaliasse a correlação entre a análise 

histomorfométrica e o número de plaquetas no PRP. No presente estudo, nenhuma correlação 

foi constatada entre a quantidade de plaquetas nas amostras de PRP e a AON. Considerando 

que o potencial regenerativo do PRP depende dos níveis dos fatores de crescimento, poder-

se-ia inferir que este resultado suporta os achados de Weibrich et al. (2002), que 

demonstraram que tanto o número de plaquetas no PRP como no sangue periférico não 

podem confiavelmente predizer os níveis de fatores de crescimento resultantes no PRP. De 

acordo com esses autores, o conhecimento dos níveis de fatores de crescimento nas amostras 

de PRP é necessário para assegurar um uso confiável e reproduzível do PRP para tratamento 

clínico. Infelizmente, não há um procedimento simples disponível para obter estimativas pré-

operatórias dos níveis de fatores de crescimento individuais em uma amostra de PRP. 

Portanto, estudos adicionais são necessários neste tópico. 

Dentro dos limites deste trabalho, pode-se concluir que o PRP acelerou o processo de reparo 

do enxerto de osso autógeno em defeitos de tamanho crítico em calvária de coelhos.  



 

 
 

56 

 

Agradecimentos 

 

Os autores agradecem ao Departamento de Ciências Básicas da Faculdade de Odontologia do 

Campus de Araçatuba (FOA) - UNESP na pessoa do seu Chefe de Departamento, Profa. Dra. 

Rita Cássia Menegati Dornelles, pela disponibilização do laboratório e pelo empréstimo de 

equipamentos necessários para a realização deste estudo; ao Departamento de Bioquímica do 

Instituto de Biologia da UNICAMP, na pessoa do seu Chefe de Departamento, Profa. Dra. 

Carmem Veríssima Ferreira, por disponibilizar os recursos necessários para a realização dos 

testes in vitro; à Profa. Dra. Suely Regina Mogami Bomfim da Faculdade de Medicina 

Veterinária do Campus de Araçatuba – UNESP, pela assessoria técnica prestada e ao Prof. 

Dr. Tetuo Okamoto da FOA – UNESP, pelo auxílio na análise histológica. 

  

 

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62 

 

   Tabela 

 

         

       

 

 

 

 

 

 

 

  

     

     

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Grupo n  Médias AON (%) 30 
dias 

Desvios-Padrão 
 30 dias 

n  Médias AON (%) 
 90 dias 

Desvios-Padrão  
90 dias 

C 10 8,99 a ± 2,62 10 5,31 a ± 1,69 

OA 10 46,88 b ± 14,15 10 75,00 cd ± 8,11 

OA/PRP 9 64,44 c ± 15,00 10 77,90 d ± 8,13 

  *Letras iguais indicam que não há diferença estatística entre os grupos (p < 0,05). 

Tabela 1. Porcentagem média da Área de Osso Neoformado (AON) dentro da área do 

defeito cirurgicamente criado, com comparação entre os grupos. 30 e 90 dias 

pós-operatórios. 



 

 
 

63 

 

   Figuras 

 

 

 

 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
  
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

Figura 1. Defeito de tamanho crítico (15 mm de diâmetro) e as duas marcações de 

referência criados na calvária. 

Figura 2. (A) Corte longitudinal ao longo da linha central (y) do DTC; (B) cortes 

tranversais (x); (C) espécime histológico pronto para inclusão em parafina. 



 

 
 

64 

 

 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

Figura 4. Efeito da concentração do sPRP sobre a proliferação dos pré-osteoblastos 

MC3T3-E1 (72 horas). *p < 0.05 em relação aos controles (Análise de 

Variância; teste de Dunnett). 

Figura 3. Quantidade média de plaquetas por microlitro (µl) nas amostras de PRP e de 

sangue periférico.  

 



 

 
 

65 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Figura 5. Vistas panorâmicas dos defeitos cirúrgicos mostrando osso neoformado.  (A) 

Grupo C - 30 dias; (B) Grupo C - 90 dias; (C) Grupo OA - 30 dias; (D) Grupo 

OA - 90 dias; (E) Grupo OA/PRP - 30 dias; (F) Grupo OA/PRP - 90 dias. 

Tricrômico de Masson. Aumento original 25x. 



 

 
 

66 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 Figura 6. Médias (%) e desvios-padrão da AON para os Grupos C, OA e OA/PRP. 30 e 

90 dias pós-operatórios.  

 



 

 
 
67 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

ANEXOS 



 

 
 
68 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  

ANEXO A - Certificado da Comissão de Ética na 
Experimentação Animal (CEEA) 

 



Anexo A - Certificado da Comissão de Ética na Experimentação Animal (CEEA)  

 

 
 

69 

 

 



 

 
  

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

ANEXO B - Normas para Publicação Segundo o 
Periódico “Clinical Oral Implants Research” 



Anexo B - Normas para Publicação segundo o Periódico “Clinical Oral Implants Research” 

 
 

71 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
Clinical Oral Implants Research  

Official publication of the European Association for Osseointegration  

Edited by: 
Niklaus P. Lang 

Print ISSN: 0905-7161 

Online ISSN: 1600-0501 

Frequency: Bi-monthly 

Current Volume: 18 / 2007  

ISI Journal Citation Reports® Ranking: 2005: 13/49 (Dentistry, Oral Surgery & Medicine); 

11/41 (Engineering, Biomedical)  

Impact Factor: 1.897  

Author Guidelines 

From December 1st 2005 all print (hard) copy submissions will be returned to the author and will 

not be accepted for review. Online Submission is now  available and submissions will be welcomed. 
http://mc.manuscriptcentral.com/coir 

Complete instructions for preparing and submitting manuscripts online are provided at 
the submission site. The review process is entirely electronic-based. 

Editorial Office: 

Clinical Oral Implants Research  

Department of Comprehensive Dental Care  

University of Berne 

School of Dental Medicine  

Freiburgstrasse 7  

CH-3010 Berne 

Switzerland  
Editorial Assistant Ms. Brigitte Baur: 

coir@zmk.unibe.ch 

Authors submitting a paper do so on the understanding that the work has not been published 

before, is not being considered for publication elsewhere and has been read and approved by all 

authors. The submission of the manuscript by the authors means that the authors automatically 

agree to assign exclusive copyright to Blackwell Munksgaard if and when the manuscript is 

accepted for publication. An Exclusive Licence Form has to be returned to the production 

department signed on behalf of all co-authors. An article will not proceed in production before the 

Exclusive Licence Form has been received at the production office.The Exclusive Licence Form 

can be downloaded at www.blackwellpublishing.com/clr or 

http://mc.manuscriptcentral.com/coir under 'Instructions and Forms'. 

 

 



Anexo B - Normas para Publicação segundo o Periódico “Clinical Oral Implants Research” 

 
 

72 

 

Please send the form to: 

Clinical Oral Implants Research 

Blackwell Publishing 

101 George Street 

Edinburgh 

EH2 3ES 

UK 

Fax: +44 (0)131 2263803 

The work shall not be published elsewhere in any language without the written consent of the 

publisher. The articles published in this journal are protected by copyright, which covers translation 

rights and the exclusive right to reproduce and distribute all of the articles printed in the journal. 

No material published in the journal may be stored on microfilm or videocassettes or in electronic 

databases and the like or reproduced photographically without the prior written permission of the 

publisher.  

The instructions to authors will be strictly adhered to by the Editor. Manuscripts otherwise prepared 

will be returned to the authors for revision prior to review.  

Acceptable material - Original investigations, reviews, and case reports. The last will be 

published only if they provide new fundamental knowledge and if they use language 

understandable to the clinician. Proceedings of international meetings may also be considered for 
publication at the discretion of the Editor.  

Electronic submission: Authors must submit their manuscripts electronically to the online 

submission site: http://mc.manuscriptcentral.com/coir Complete instructions for preparing 

and submitting manuscripts online are provided at the submission site. 

Authors are notified promptly by e-mail that their manuscripts have been received. If this 

acknowledgement is not received within a week or so then authors should enquire at the editorial 
office: Editorial Assistant Ms. Brigitte Baur: coir@zmk.unibe.ch  

Manuscripts - The author is responsible for all statements made in the work, including changes 

made by the copy editor, which must be reviewed in proof. Manuscripts must be written in English. 

Articles should not normally exceed 10 printed pages, including illustrations and references. One 

printed page is the equivalent of 3.8 typed double-spaced pages using a 12-pitch font (12 

characters per inch). Additional pages will be charged to the author(s) at the rate of DKK 800 per 

page. The author must list 5 appropriate key words for indexing purposes. The Online Submission 

System offers a list of keywords to choose from and additional keywords can be manually added.    

The article should be clearly divided as follows:  

Title page - The first page should contain the title of the article, full name(s) of the authors (no 

more than 6) and institutional affiliation(s), a running title not to exceed 60 letters and spaces, and 

the name, telephone and fax numbers, email and complete mailing address of the author 
responsible for correspondence. The author must list appropriate key words for indexing purposes.  

Abstract - An abstract should not to exceed 250 words. This should be structured into: objectives 
- material and methods - results - conclusions, and no other information. 

Introduction - Summarise the rationale and purpose of the study, giving only strictly pertinent 

references. Do not review existing literature extensively. State clearly the working hypothesis.  

Material and methods - Material and methods should be presented in sufficient detail to allow 

confirmation of the observations. Published methods should be referenced and discussed only 
briefly, unless modifications have been made. Indicate the statistical methods used, if applicable.  

Results - Present your results in a logical sequence in the text, tables, and illustrations. Do not 

repeat in the text all data in the tables and illustrations. The important observations should be 
emphasised.  



Anexo B - Normas para Publicação segundo o Periódico “Clinical Oral Implants Research” 

 
 

73 

 

Discussion - Summarise the findings without repeating in detail the data given in the Results 

section. Relate your observations to other relevant studies and point out the implications of the 
findings and their limitations. Cite other relevant studies.  

Acknowledgements - Acknowledge persons who have made substantive contributions to the 

study. Authors are responsible for obtaining written permission from everyone acknowledged by 

name because readers may infer their endorsement of the data and conclusions. Sources of 
financial support may be acknowledged.  

Short communications -Short communications, limited to two printed pages including 

illustrations and references, will be considered for rapid publication. Such papers must be based on 

work that is of special importance or has the potential for great impact. Short communications 
need not follow the usual division into Material and methods, etc., but should have an abstract.  

References - in the text should quote the last name(s) of the author(s) and the year of 

publication (Black & Miller 1988). Three or more authors should always be referred to as, for 
example, (Fox et al. 1977).  

A list of references should be given at the end of the paper and should follow the recommendations 

in Units, symbols and abbreviations: a guide for biological and medical editors and authors (1988), 
p. 52, London: The Royal Society of Medicine.  

a) The arrangement of the references should be alphabetical by author's surname.  

b) The order of the items in each reference should be:  

(i) for journal references: 

name(s) of author(s), year, title of paper, title of journal, volume number, first and last page 

numbers.  

(ii) for book references: 

name(s) of author(s), year, title of book, edition, volume, chapter and/ or page number, town of 

publication, publisher.  

c) Author's names should be arranged thus: 

Daniels, J.A., Kelly, R.A. & Til, T.C. 

 Note the use of the ampersand and omission of comma before it. Author's names when repeated 
in the next reference are always spelled out in full.  

d) The year of publication should be surrounded by parentheses: (1966).  

e) The title of the paper should be included, without quotation marks.  

f) The journal title should be written in full, italicised (single underlining on typescript), and 

followed by volume number in bold type (double underlining on typescript), and page numbers.  

Examples - Tonetti, M. S., Schmid, J., Hämmerle,C. H. & Lang, N. P. (1993) Intraepithelial 

antigen-presenting cells in the keratinized mucosa around teeth and osseointegrated implants. 
Clinical Oral Implants Research 4: 177-186.  

Poole, B., Ohkuma, S. & Warburton, M. (1978) Some aspects of the intracellular breakdown of 

erogenous and endogenous proteins. In: Segal, H.S. & Doyle, D.J., eds. Protein turnover and 
lysosome function, 1st edition, p. 43. New York: AcademicPress.  

Illustrations - All figures should clarify the text and their number should be kept to a minimum. 

Details must be large enough to retain their clarity after reduction in size. Illustrations should 

preferably fill a single-column width (81mm) after reduction, although in exceptional cases 120mm 

(double-column) and 168mm (full page) widths will be accepted. Micrographs should be designed 



Anexo B - Normas para Publicação segundo o Periódico “Clinical Oral Implants Research” 

 
 

74 

 

to be reproduced without reduction, and they should be dressed directly on the micrograph with a 
linear size scale, arrows, and other designators as needed. 

Line drawings should be professionally drawn; halftones should exhibit high contrast. Colour 

illustrations in small numbers may be accepted free of charge to the authors at the discretion of 

the Editor. Please find the Electronic Artwork Guidelines on the Blackwell Publishing Author Service 

website 

http://www.blackwellpublishing.com/bauthor/author.asp    

 

Tables - Tables should be numbered consecutively with Arabic numerals. Type each table on a 

separate sheet, with titles making them self-explanatory. Due regard should be given to the 

proportions of the printed page.  

Scientific names - Proper names of bacteria should be binomial and should be singly underlined 

on the typescript. The full proper name (e.g., Streptococcus sanguis) must be given upon first 

mention. The generic name may be abbreviated thereafter with the first letter of the genus (e.g., 

S. sanguis). If abbreviation of the generic name could cause confusion, the full name should be 

used. If the vernacular form of a genus name (e.g., streptococci) is used, the first letter of the 

vernacular name is not capitalised and the name is not underlined. Use of two letters of the genus 

(e.g., Ps. for Peptostreptococcus) is incorrect, even though it might avoid ambiguity. With regard 

to drugs, generic names should be used instead of proprietary names. If a proprietary name is 
used, it must be attached when the term is first used.  

Abbreviations and symbols - The symbol % is to be used for percent, h for hour, min for 

minute, and s for second. In vitro, in vivo, in situ and other Latin expressions are to be italicised. 

Use only standard abbreviations. All units will be metric. Use no roman numerals in the text. In 

decimals, a decimal point and not a comma will be used. Avoid abbreviations in the title. The full 

term for which an abbreviation stands should precede its first use in the text unless it is a standard 

unit of measurement. In cases of doubt, the spelling orthodoxy of Webster's third new international 
dictionary will be adhered to.  

Author material archive policy - Please note that unless specifically requested, Blackwell 

Publishing will dispose of all hardcopy or electronic material submitted two months after 

publication. If you require the return of any material submitted, please inform the 
editorial office or production editor as soon as possible if you have not yet done so. 

Proofs - The corresponding author will receive an e-mail alert containing a link to a web site. A 

working e-mail address must therefore be provided for the corresponding author. The proof can be 

downloaded as a PDF (portable document format) file from this site. Acrobat Reader will be 

required in order to read this file. This software can be downloaded (free of charge) from the 

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This will enable the file to be opened, read on screen and printed out in order for any corrections to 

be added. Further instructions will be sent with the proof. Hard copy proofs will be posted if no e-

mail address is available. Excessive changes made by the author in the proofs, excluding 

typesetting errors, will be charged separately. 

Offprints - The senior authors will receive a PDF offprint of their article. Additional hard 

copy offprint can be ordered from the publisher by using the offprint order form accompanying the 
proofs when page proofs are returned. 

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Author Services enables authors to track their article - once it has been accepted - through the 

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online and choose to receive automated e-mails at key stages of production. The author will 

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submitting the manuscript. Visit www.blackwellpublishing.com/bauthor for more details on 

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preparation, submission and more. 

 



 

 
  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

         

ANEXO C - Figuras e Tabelas Adicionais 



Anexo C - Figuras e Tabelas Adicionais 

 
 

76 

 

   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

   

 

 

 

 

 

 

 

 

Figura 7. Efeito da concentração do sPRP sobre a proliferação dos pré-osteoblastos 

MC3T3-E1 (24 horas). *p < 0.05 em relação aos controles (Análise de 

Variância; teste de Dunnett). 

Figura 8.  Cultura de pré-osteoblastos MC3T3-E1 (72 horas). (A) Alfa-MEM +10% SBF; 

(B) (A) Alfa-MEM + 10% SBF + 10% sPRP.  



Anexo C - Figuras e Tabelas Adicionais 

 
 

77 

 

 

 

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 
 
 
 
 

Grupo Médias Desvio-Padrão n 

Plaquetas (Sangue Periférico) 327833 73608 19 

Plaquetas (PRP) 1204028 369875 19 

r = 0,66 

p valor = 0,0021  

 

Tabela 2.  Teste de Correlação de Pearson para a quantidade de plaquetas presentes 

nas amostras de sangue periférico e de Plasma Rico em Plaquetas (PRP)  

Tabela 3.  Teste de Correlação de Pearson para a quantidade de plaquetas presentes 

nas amostras de Plasma Rico em Plaquetas (PRP) e a Área de Osso 

Neoformado (AON) 

Grupo Médias Desvio-Padrão n 

Plaquetas (PRP) 1204028 369875 19 

Área de Osso Neoformado 71,80 13,09 19 

r = - 0,245 

p valor = 0,3116  

 



Anexo C - Figuras e Tabelas Adicionais 

 

 
 

78 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Figura 9.  Esfregaço de amostra de sangue periférico (A) mostrando menor número de 

plaquetas (setas) que o esfregaço de amostra de PRP (B). Panótico. Aumento de 

1000x.  


	CAPA
	FOLHA DE ROSTO
	FICHA CATALOGRÁFICA
	DADOS CURRICULARES
	DEDICATÓRIA
	AGRADECIMENTO ESPECIAL
	AGRADECIMENTOS
	EPÍGRAFE
	RESUMO
	ABSTRACT
	LISTA DE FIGURAS
	LISTA DE TABELAS
	LISTA DE ABREVIATURAS
	LISTA DE SÍMBOLOS
	SUMÁRIO
	MANUSCRITO PARA PUBLICAÇÃO1
	INTRODUÇÃO
	MATERIAL E MÉTODOS
	RESULTADOS
	DISCUSSÃO
	REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
	TABELA
	FIGURAS
	ANEXOS
	ANEXO A - Certificado da Comissão de Ética na
	ANEXO B - Normas para Publicação Segundo o
	ANEXO C - Figuras e Tabelas Adicionais