RESSALVA Atendendo solicitação do(a) autor(a), o texto completo desta tese será disponibilizado somente a partir de 01/02/2023. UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JÚLIO DE MESQUITA FILHO” FACULDADE DE MEDICINA Bárbara Casella Amorim Potencial imunomodulador de substâncias bioativas vegetais na ativação do inflamassoma no contexto da paracoccidioidomicose Tese apresentada à Faculdade de Medicina, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Câmpus de Botucatu, para obtenção do título de Doutora em Doenças Tropicais. Orientador : Prof. Dr. James Venturini Botucatu 2021 Bárbara Casella Amorim Potencial imunomodulador de substâncias bioativas vegetais na ativação do inflamassoma no contexto da paracoccidioidomicose Tese apresentada à Faculdade de Medicina, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Câmpus de Botucatu, para obtenção do título de Doutora em Doenças Tropicais. Orientador: Prof.Dr.James Venturini Botucatu 2021 Bárbara Casella Amorim Potencial imunomodulador de substâncias bioativas vegetais na ativação do inflamassoma no contexto da paracoccidioidomicose Tese apresentada a Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Julio de Mesquita Filho, Campus de Botucatu, para obtenção do título de Doutora em Doenças Tropicais. Orientador Prof. Dr. James Venturini Comissão Avaliadora Prof(a). Dr(a). Universidade: Assinatura: Prof(a). Dr(a). Universidade Assinatura: Prof(a). Dr(a). Universidade Assinatura: Prof(a). Dr(a). Universidade Assinatura: Botucatu, de de 2021. Dedicatória Dedico esse trabalho a minha mãe Ivana, por todo o amor e por ser um exemplo de força e caráter. A todos os profissionais de saúde, pesquisadores e trabalhadores dos serviços essenciais. Obrigada pela dedicação e pela coragem diária. Agradecimentos Agradeço primeiramente aos meus pais, Ivana e Milton, por todo amor destinado a mim e meu irmão. Ao meu irmão Bruno, minha cunhada Cíntia e meu sobrinhos Artur e Nicolas por todo amor e apoio. Aos meus primos Felipe, Vinicius, Gabriela, Lucas, Rosana, Mateus, Mariana, Marina e Ana Laura, as minhas tias Rosana, Silvana e Eliana e aos tios Douglas (in memorian), Zé e Ivan. Agradeço todos os dias por ter uma família unida e tão especial. Minha madrinha “Tatau”, Waldir, Pedro e Gabi. Vocês são incríveis! Ao meu orientador Dr. James Venturini, por todas as oportunidades, ensinamentos, paciência e principalmente pela amizade. Saiba que serei eternamente grata por tudo. A professora Dra. Maria Sueli por ter aberto as portas do Lipe, por toda a confiança e motivação que foram muito importantes para a minha caminhada. Muito obrigada de coração! Aos professores Dr. Rinaldo Poncio Mendes (Dr. Tietê) e Dr. Ricardo Souza Cavalcante por todos os ensinamentos e oportunidades. Foi muito importante acompanhar profissionais que se dedicam tanto e de coração aos pacientes. Ao Laboratório de Imunopatologia Experimental – LIPE, UNESP/Bauru, minha casa por sete anos, onde aprendi e vivi as melhores experiências, aprendizados. Lá entendi a responsabilidade de se trabalhar com a ciência e principalmente, o primeiro lugar que me senti pertencendo verdadeiramente a algo. A Debbie, Amanda, Angela, Thais, Camila, Luiza e Nara Lígia por todos os ensinamentos e amizade. Vocês foram essenciais na minha jornada! Muito obrigada! Aos amigos que o Lipe me deu: Laysla, Julia, Pedro, Babizinha, Rodolfo, Victor, Gaby, Angelinha, Adriely, Silas, Karol Souza, Tati, Vitória e Luiz Gustavo, Lost, Raul e Caio, muito obrigada por toda amizade e ajuda. Tê-los ao meu lado foi fundamenta! Ao Departamento de Química da Faculdade de Ciências da UNESP de Bauru, por todo o apoio, oportunidades e por nos acolherem em um momento tão delicado. Agradeço especialmente ao Vagner, Daniel, Ralph, David e aos professores Dr. Alexandre Legendre, Dr. Daniel Rinaldo e Dr. Flávio Caires. Muito obrigada! A todos os funcionários, alunos, gatinhos (Verinha em especial), cachorros e demais bichinhos da UNESP de Bauru. Sentirei muita falta das caminhadas em meio aquele lugar cheio de cor e amor! A Karol e Thainá por toda amizade e por terem ficado ao meu lado nos momentos mais difíceis. Aos meus amigos, Ana Roberta, Vanessa, Flávia, Fer, Heide, Cássia, Carol, Dani, Ariana, Juliana, Fábio e Néias. Obrigada por estarem sempre ao meu lado. Gostaria de agradecer especialmente ao meu amigo Jonatas. Eu tenho muita sorte em ter você ao meu lado, saiba que seu apoio e companheirismo foram muito importantes nos últimos anos. Você é incrível, nunca se esqueça disso! A minha amiga Ana Roberta que foi essencial nessa caminhada. Aos meus queridos alunos meu agradecimento por me ensinarem tanto. Aos colaboradores deste trabalho: Prof. Dr. Daniel Rinaldo, Profa. Dra. Maysa Furlan, Amanda Ribeiro, Débora de Fátima Almeida, Vitória Caroline, Luiz Gustavo Ferreira, Adriely Primo, Jonatas Perico, Karoline Reis e Thainá Paixão. Aos amigos do ILSL, Amanda, Eloise, Bruna, Mariane, Gra, Priscila Ballalai, Keren (in memoriam) e as pesquisadoras Dra. Ana Carla, Dra. Ida, Dra. Vânia e Dra. Maria Renata. Muito obrigada pelo acolhimento e parceria! Aos companheiros de Botucatu: Tati, Drika, Bia, Camila, Lariza, Priscila, Vanessa, Ricardo e Mari. Obrigada pela parceria e pelos bons momentos compartilhados. A Mariana Gatto e Adriele Dandara Levorato Vinche pela contribuição no exame geral de qualificação. Aos funcionários da seção técnica de pós-graduação e especialmente a Bruna Quirino Jorgetto por toda ajuda a nós destinada. Aos funcionários do Departamento de Doenças Tropicais e aos demais funcionários da Faculdade de Medicina de Botucatu pela ajuda quando necessário. À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) pela concessão da bolsa de estudos e a Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), processo número 2016/17627-4, pelo apoio finaceiro. “Na vida, não existe nada a temer, mas a entender.” Marie Curie RESUMO A paracoccidioidomicose (PCM) é micose sistêmica causada por fungos do gênero Paracoccidioides. É uma doença endêmica na América Latina e que se apresenta predominantemente em indivíduos do sexo masculino (90%) com idade entre 30 e 60 anos, sendo sua maioria constituída por trabalhadores rurais que se encontram em fase produtiva no trabalho. As principais formas clínicas da doença são aguda/subaguda e crônica. A busca por novos fármacos é uma constante na sociedade moderna, tendo em vista tanto a existências de doenças que ainda não têm tratamento e a necessidade de drogas mais potentes e/ou que apresentem menos efeitos colaterais, que as já conhecidas. Recentemente, nosso laboratório iniciou estudos avaliando o efeito de substâncias vegetais bioativas nesse contexto. Utilizando cultura de monócitos humanos desafiados com lipopolissacarídeo (LPS), verificamos que extratos brutos vegetais das espécies Piper, Peperomia e Davilla interferem na produção de TNF-α, IL-10 e IL-6, ora aumentando ora diminuindo a liberação dessas citocinas. Esses resultados sugerem que tais substâncias podem atuar alterando os fenótipos das subpopulações de macrófagos M1 e M2. Do mesmo modo, alguns dos extratos utilizados induziram diminuição na produção de IL-1β, evidenciando interferência na ativação dos inflamassomas. Considerando que tanto a ativação do inflamassoma como a polarização de macrófagos são elementos chaves na patogênese e cronificação das doenças inflamatórias, o presente estudo teve por objetivo avaliar o potencial imunomodulador de extratos brutos, frações, e/ou substâncias isoladas de espécies vegetais do gênero Piper sobre esses mecanismos. Para estudar sua ação sobre o NLRP3-inflamassoma, macrófagos derivados da linhagem THP-1, foram desafiados com LPS, ATP, inibidores e, ou, substâncias bioativas. Para avaliar a ação das substâncias na polarização macrofágica, macrófagos derivados de monócitos da linhagem THP-1 foram polarizados em M1 e desafiados com as substâncias bioativas. Nossos resultados mostraram que as substâncias bioativas provenientes da Piper tuberculatum possuem efeito modulador, seja atuando na ativação do inflamassoma, inibindo a produção da IL-1β, ou no aumento de moléculas importantes no reconhecimento de patógenos e desenvolvimento da resposta imune, como CD40, e TLR-2 e 4. Em conjunto nossos resultados indicaram potencial imunomodulador promissor dessas substâncias, destacando-se a piplartina. Palavras-chave: paracoccidioidomicose, extratos vegetais, inflamassoma, Piper, atividade macrofágica ABSTRACT Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by fungi of the genus Paracoccidioides. It is an endemic disease in Latin America and occurs predominantly in male individuals (90%) aged between 30 and 60 years old, most of them are rural workers in the productive phase. The main clinical forms of the disease are acute/ subacute and chronic. The search for new drugs is a constant in modern society, considering both the existence of diseases that still have no treatment and the need for more potent drugs and / or that have less side effects than those already known. Recently, our laboratory started studies evaluating the effect of bioactive plant substances in this context. Using culture of human monocytes challenged with lipopolysaccharide (LPS), we found that crude plant extracts of the species Piper, Peperomia and Davilla interfere in the production of TNF-α, IL-10 and IL-6, sometimes increasing or decreasing the release of these cytokines. These results suggest that such substances can act by altering the phenotypes of the subpopulations of macrophages M1 and M2. Likewise, some of the extracts used induced a decrease in the production of IL-1β, showing interference in the inflammasome activation. Considering that both inflammasome activation and macrophage polarization are key elements in pathogenesis and chronification of inflammatory diseases, the present study aimed to evaluate the immunomodulatory potential of crude extracts, fractions, and isolated substances from plant species of the genus Piper on these mechanisms. To study their action on the NLRP3 inflammasome, macrophages derived from the THP-1 strain, were challenged with LPS, ATP, inhibitors and, or, bioactive substances. To evaluate the action of this substances in the macrophage polarization, macrophages derived from monocytes of the THP-1 lineage were polarized in M1 and challenged with the bioactive substances. Our results showed that biaotive substances from Piper tuberculatum have a modulatory effect, either acting on the activation of the inflammasome, inhibiting the production of IL-1β, or increasing molecules important in the recognition of pathogens and development of the immune response, such as CD40, and TLR-2 and 4. Together, our results indicated a promising immunomodulatory potential of these substances, highlighting piplartine. Keywords: paracoccidioidomycosis, plant extracts, inflammasome, Piper, macrophage activity Lista de Figuras Figura 1. Modelo de ativação do inflamassoma ............................................................ 7 Figura 2. Estrutura química da piplartina ...................................................................... 14 Figura 3. Avaliação do efeito do extrato bruto da Piper tuberculatum e do inibidor do TLR-4 na produção da IL-1β .................................................................................................. 21 Figura 4. Avaliação do efeito do extrato bruto da Piper tuberculatum e do inibidor do NLRP3 na produção da IL-1β .................................................................................................. 22 Figura 5. Avaliação do efeito do extrato bruto da Piper tuberculatum e inibidor da Caspase-1 na produção da IL-1β .................................................................................................. 22 Figura 6. Avaliação do efeito da fração acetato da Piper tuberculatum Jacq e do inibidor do TLR-4 na produção da IL-1β ....................................................................................... 24 Figura 7. Avaliação do efeito da fração acetato da Piper tuberculatum Jacq e do inibidor do NLRP3 na produção da IL-1β ..................................................................................... 24 Figura 8. Avaliação do efeito da fração acetato da Piper tuberculatum Jacq e do inibidor da Caspase-1 na produção da IL-1β ................................................................................ 25 Figura 9. Avaliação do efeito da piplartina, substância isolada da Piper tuberculatum e do inibidor do TLR-4 na produção da IL-1β ........................................................................... 26 Figura 10. Avaliação do efeito da piplartina, substância isolada da Piper tuberculatum e do inibidor do NLRP3 na produção da IL-1β ............................................................. 26 Figura 11. Avaliação do efeito da piplartina, substância isolada da Piper tuberculatum e do inibidor do NLRP3 na produção da IL-1β ............................................................. 27 Figura 12. Expressão de moléculas de superfície de macrófagos M0 e M1 .............. 32 Figura 13. Distribuição de moléculas de superfície em macrófagos M1 ........................ 34 Figura 14. Expressão de moléculas de superfície de macrófagos M1 .......................... 36 Figura15. Histogramas representativos da expressão das moléculas de superfície de macrófagos M1 .................................................................................................................... 37 Figura16. Histogramas representativos da expressão das moléculas de superfície de macrófagos M1 .................................................................................................................... 38 Figura17. Histogramas representativos da expressão das moléculas de superfície de macrófagos M1 .................................................................................................................... 39 14 Lista de abreviaturas PCM – Paracoccidioidomicose P. americana – Paracoccidioides americana P. restrepienses – Paracoccidioides restrepiensis P. venezuelensis – Paracoccidioides venezuelensis FA – Forma aguda/subaguda FC – Forma crônica Th - T helper IFN-γ: Interferon-gamma IL – Interleucina Ig – Imunoglobulina FcR – Receptores para imunoglobulina g TNF-α – Fator de necrose tumoral α TGF-β1: Fator de transformação do crescimento beta 1 FGFb: Fator de crescimento de fibroblasto básico/ Basic fibroblast growth factor PRRs – Receptores de reconhecimento padrão TLR – Receptor tipo Toll NLR – Receptor tipo Nod PYD – Domínio Pirina CARD – Domínio de recrutamento de caspase PAMP – Padrão molecular associado a patógeno DAMP – Padrão molecular associado a dano ATP – Adenosina trifosfato ASC – Proteína adaptadora associada a apoptose NF-kB – Fator de transcrição kappa B NETs - Neutrophil extracellular traps CASP-1 – Caspase 1 TIMPs - : Inibidor tecidual de metalloproteinase MEC – Membrana extracellular LPS – Lipolissacarídeo MHCII – Complexo principal de histocompatilidade de classe II MMP-1 - Metaloproteinase – 1 THP-1 – Linhagem cellular de monócitos humanos PMA - Forbol 12- miristato 13-acetato EBEtOh – Extrato Bruto etanólico FAcOEt – Fração acetato de etila 15 SUMÁRIO 1. INTRODUÇÃO ............................................................................................... 1 1.1 Paracoccidioidomicose ........................................................................................... 1 1.2 Imunidade na PCM .......................................................................................... 3 1.3 Inflamassoma ......................................................................................................... 5 1.4 Inflamassoma e infecções fúngicas ......................................................................... 7 1.5 Plasticidade Macrofágica ........................................................................................ 9 1.6 Macrófagos polarizados e doenças inflamatórias .................................................. 11 1.7 Extratos vegetais com potencial terapêutico ......................................................... 12 2. OBJETIVOS ................................................................................................. 15 3. MATERIAIS E MÉTODOS ........................................................................... 16 4. CAPÍTULO I ................................................................................................. 20 4.1 RESULTADOS ........................................................................................... 20 4.2 DISCUSSÃO .............................................................................................. 28 5. CAPÍTULO II .................................................................................................... 31 5.1 RESULTADOS ........................................................................................... 31 5.2 DISCUSSÃO .............................................................................................. 40 6. CONCLUSÃO .............................................................................................. 43 7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................ 44 43 6. CONCLUSÃO: Em conjunto, nossos resultados evidenciaram o potencial imunomodulador das substâncias bioativas provenientes da Piper tuberculatum, com um destaque para a substância isolada, Piplartina, seja na modulação do inflamassoma, inibindo a produção da IL-1β ou na modulação dos macrófagos M1, aumentando a expressão de moléculas importantes no reconhecimento de patógenos e desenvolvimento da resposta imune, como CD40, e TLR-2 e TLR-4. 44 7. REFERÊNCIAS Aimanianda V, Bayry J, Bozza S, Kniemeyer O, Perruccio K, Elluru SR, Clavaud C, Paris S, Brakhage AA, Kaveri SV, Romani L, Latgé JP.(2009) Surface hydrophobin prevents immune recognition of airborne fungal spores. Nature ; 2009; 460:1117–1121. Amorim et al., Enhanced expression of NLRP3 inflammasome components by monocytes of patients with pulmonary paracoccidioidomycosis is associated with smoking and intracellular hypoxemia, Microbes and Infection, https:/ doi.org/10.1016/ Amorim, CZ, Flores, CA, Gomes, BE, Marques, AD, Cordeiro RS,. Screening for antimalarial activity in the genus Potomorphe. J Ethnopharmacol. 1988; 24, 101–106. Anderson CF, Mosser DM. A novel phenotype for an activated macrophage: the type 2 activated macrophage. Journal of Leukocyte Biology. 2002;72(1):101–6. Apel, MA., Sobral, M., Schapoval, EES., Henriques, AT., Menut, C., Bessiere, JM. Essential Oils from Eugenia Species—Part VII: Sections Phyllocalyx and Stenocalyx. Journal of Essential Oil Research. 2004; 16:135–138. doi:10.1080/10412905.2004.9698675 Aravind, L, Dixit, VM, Koonin, EV. Apoptotic molecular machinery: vastly increased complexity in vertebrates revealed by genome comparisons. Science. 2001; 291:1279–1284. doi:10.1126/science.291.5507.1279 Aristizabal, BH.; Clemons, KV.; Cock, AM.; Restrepo, A.; Stevens, DA.(2002) Experimental Paracoccidioides brasiliensis infection in mice: Influence of the hormonal status of the host on tissue responses. Medical Mycology. 2002; 40:169-178. Aristizabal, BH.; Clemons, KV.; Stevens, DA.; Restrepo, A. Morfological transition of Paracoccidioides brasiliensis comidis to yeast cells: in vivo inibition in females. Infection and Immunity. 1998; 66:5587- 5591. Arora S, Dev K, Agarwal B, Das P, Syed MA. Macrophages: Their role, activation and polarization in pulmonary diseases. Immunobiology. 2018; 223(4):383–96. Bachiega TF, Dias-Melicio LA, Fernandes RK, de Almeida Balderramas H, Rodrigues DR, Ximenes VF, de Campos Soares ÂM. Participation of dectin-1 receptor on NETs release against Paracoccidioides brasiliensis: Role on extracellular killing. Immunobiology. 2016 ;221(2):228-35. Bagagli E, Franco M, Bosco SMG, Barbosa, FH, Montenegro MR.(2003) High frequency of Paracoccidioides brasiliensis infection in armadillos (Dasypus novemcinctus): An ecological study. Medical Mycology. 2003; 41(3): 217-22. Bauernfeind, F., Hornung, V. Of inflammasomes and pathogens--sensing of microbes by the inflammasome. EMBO Mol Med. 2013; 5:814–826. doi:10.1002/emmm.201201771 Beauvais A, et al. An extracellular matrix glues together the aerial-grown hyphae of Aspergillus fumigatus. Cell Microbiol. 2007; 9:1588–1600. Becho JRM, Machado H, Guerra MO. RUTINA – ESTRUTURA, METABOLISMO E POTENCIAL FARMACOLÓGICO. Revista Interdisciplinar de Estudos Experimentais - Animais e Humanos Interdisciplinary Journal of Experimental Studies [Internet]. 2009 [citado 15 de outubro de 2019];1(1). Disponível em: https://periodicos.ufjf.br/index.php/riee/article/view/23874 https://doi.org/10.1016/ http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26416210 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26416210 https://periodicos.ufjf.br/index.php/riee/article/view/23874 45 Benard, G., Hong, M.A., Del Negro, G.M., Batista, L., Shikanai-Yasuda, M.A., Duarte, A.J. Antigen- specific immunosuppression in paracoccidioidomycosis. Am. J. Trop. Med. Hyg. 1996; 54:7–12. Bezerra DP, Moura DJ, Rosa RM, de Vasconcellos MC, e Silva ACR, de Moraes MO. Evaluation of the genotoxicity of piplartine, an alkamide of Piper tuberculatum, in yeast and mammalian V79 cells. Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis. 2008; 652(2):164–74. Biso, FI., Rodrigues, CM., Rinaldo, D., Reis, MB. dos, Bernardi, CC., de Mat os, JCP., Caldeira-de- Araújo, A., Vilegas, W., Cólus, I.M. de S., Varanda, E.A. Assessment of DNA damage induced by extracts, fractions and isolated compounds of Davilla nitida and Davilla elliptica (Dilleniaceae). Mutat. Res. 2010; 702:92–99. doi:10.1016/j.mrgentox.2010.07.011 Bolzani V da S, Valli M, Pivatto M, Viegas C. Natural products from Brazilian biodiversity as a source of new models for medicinal chemistry. Pure Appl. Chem. 2012; 84(9):1837-46. Doi: 10.1351. Bolzani, V. da S., Valli, M., Pivatto, M., Viegas, C. Natural products from Brazilian biodiversity as a source of new models for medicinal chemistry. Pure and Applied Chemistry. 2012; 84. doi:10.1351/PAC-CON- 12- 01-11 Burci LM, Pereira IT, Silva LM, Rodrigues RV, Facundo VA, Militão JSLT, et al. Antiulcer and gastric antisecretory effects of dichloromethane fraction and piplartine obtained from fruits of Piper tuberculatum Jacq. in rats. J Ethnoph. 2013; 148(1):165- 174. Carlos, IZ., Lopes, FCM., Benzatti, FP., Carli, CBA., Marques, MF., Jordão Junior, CM., Rinaldo, D., Calvo, TR., Santos, LC., Vilegas, W., 2005. Ação do extrato metanólico e etanólico de Davilla elliptica St. Hill. (Malpighiaceae) na resposta imune. Revista Brasileira de Farmacognosia. 2005; 15. doi:10.1590/S0102-695X2005000100010 Carmo, JPM., Dias-Melicio, LA., Calvi, SA., Peraçoli, MTS., Soares, AMVC. TNF-alpha activates human monocytes for Paracoccidioides brasiliensis killing by an H2O2-dependent mechanism. Med. Mycol. 2006; 44, 363–368. Cechinel Filho, V., Yunes, R.A.Estrategies for obtaining pharmacologically active compounds from medicinal plants: concepts about structural modification for improve the activity. Química Nova.1998; 21:99–105. doi:10.1590/S0100-40421998000100015 Chanput W, Mes JJ, Savelkoul HFJ, Wichers HJ. Characterization of polarized THP-1 macrophages and polarizing ability of LPS and food compounds. Food Funct. 2013; 4(2):266–76. Chaves MMF, Usberti R. Previsão da longevidade de sementes de faveiro (Dimorphandra mollis Benth.). Brazilian Journal of Botany. 2003; 26(4):557–64. Chizzolini C, Rezzonico R, Luca CD, Burger D, Dayer J-M. Th2 Cell Membrane Factors in Association with IL-4 Enhance Matrix Metalloproteinase-1 (MMP-1) while Decreasing MMP-9 Production by Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor-Differentiated Human Monocytes. The Journal of Immunology. 2000; 164(11):5952–60. Cotinguiba, F., Regasini, LO., Bolzani, V. da S., Debonsi, HM., Passerini, GD., Cicarelli, RMB., Kato, MJ., Furlan, M. Piperamides and their derivatives as potential anti-trypanosomal agents. Med Chem Res. 2009;18:703–711. doi:10.1007/s00044-008-9161-9 46 De Campos, M.P., Cechinel Filho, V., Da Silva, R.Z., Yunes, R.A., Zacchino, S., Juarez, S., Bella Cruz, R.C., Bella Cruz, A., 2005. Evaluation of antifungal activity of Piper solmsianum C. DC. var. solmsianum (Piperaceae). Biol. Pharm. Bull. 2005; 28:1527–1530. de Castro LF, Ferreira MC, da Silva RM, de Blotta MHSL, Longhi LNA, Mamoni RL. Characterization of the immune response in human paracoccidioidomycosis.J Infect. 2013; 67:470e85. de Castro LF, Longhi LNA, Paiao MR, da Justo-Júnior AS, de Jesus MB, de Blotta MHSL, et al. NLRP3 inflammasome is involved in the recognition of Paracoccidioides brasiliensis by human dendritic cells and in the induction of Th17 cells. J Infect. 2018;77:137e44. de Ferreira-da-Cruz, M., Adami, Y.L., da Espinola-Mendes, E., Figueiredo, M.R., Daniel-Ribeiro, C.T., 2000. The intraperitoneal Plasmodium berghei-Pasteur infection of Swiss mice is not a system that is able to detect the antiplasmodial activity in the Pothomorphe plant extracts that are used as antimalarials in Brazilian endemic areas. Exp. Parasitol. 2000; 94:243–247. doi:10.1006/expr.2000.4494 Della Colet a AM, Bachiega TF, de Quaglia e Silva JC, Soares ÂM, De Faveri J, Marques SA, Marques ME, Ximenes VF, Dias-Melicio LA. Neutrophil Extracellular Traps Identification in Tegumentary Lesions of Patients with Paracoccidioidomycosis and Different Patterns of NETs Generation In Vitro. PLoS Negl Trop Dis.2015; 1;9(9) Dierichs L, Kloubert V, Rink L. Cellular zinc homeostasis modulates polarization of THP-1-derived macrophages. Eur J Nutr.2018; 57(6):2161–9. Etzerodt A, Moestrup SK. CD163 and Inflammation: Biological, Diagnostic, and Therapeutic Aspects. Antioxid Redox Signal. 10 de junho de 2013;18(17):2352–63. Farnsworth, N.R., Kaas, C.J. An approach utilizing information from traditional medicine to identify tumor- inhibiting plants. J Ethnopharmacol. 1981; 3:85–99. Feriotti C., Bazan S.B., Loures F.V., Araújo E.F., Costa T.A., Calich V.L. Expression of dectin-1 and enhanced activation of NALP3 inflammasome are associated with resistance to paracoccidioidomycosis. Front Microbiol. 2015; 6:913 Finato AC, Fraga-Silva TF, Prati AUC, de Souza Júnior AA, Mazzeu BF, Felippe LG, et al. Crude leaf extracts of Piperaceae species downmodulate inflammatory responses by human monocytes. PLoS ONE.2018. 13(6): e0198682. Forrester MA, Wassall HJ, Hall LS, Cao H, Wilson HM, Barker RN, et al. Similarities and differences in surface receptor expression by THP-1 monocytes and dif erentiated macrophages polarized using seven dif erent conditioning regimens. Cell Immunol. 2018;332:58–76. Franco, M., Peracoli, M.T., Soares, A., Montenegro, R., Mendes, R.P., Meira, D.A. Host-parasite relationship in paracoccidioidomycosis. Curr Top Med Mycol. 1993; 5:115–149. Freeman, L.C., Ting, J.P.-Y.The pathogenic role of the inflammasome in neurodegenerative diseases. J. Neurochem. 2016; 136: 29–38. doi:10.1111/jnc.13217 Friedman SL, Arthur MJ. Activation of cultured rat hepatic lipocytes by Kupffer cell conditioned medium. Direct enhancement of matrix synthesis and stimulation of cell proliferation via induction of platelet- derived growth factor receptors. J Clin Invest. dezembro de 1989;84(6):1780–5. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26327485 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26327485 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26327485 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Feriotti%20C%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=26388856 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Bazan%20SB%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=26388856 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Loures%20FV%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=26388856 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Ara%C3%BAjo%20EF%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=26388856 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Costa%20TA%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=26388856 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Calich%20VL%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=26388856 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26388856 47 Gates MA, Thorkildson P, Kozel TR. Molecular architecture of the Cryptococcus neoformans capsule. Mol Microbiol. 2004; 52:13–24. Genin M, Clement F, Fattaccioli A, Raes M, Michiels C. M1 and M2 macrophages derived from THP-1 cells differentially modulate the response of cancer cells to etoposide. BMC Cancer. 2015;15:577. Gorgani L,Mohammadi M, Najafpour GD, Nikzad M. Piperine—The Bioactive Compound of Black Pepper: From Isolation to Medicinal Formulations. Comp Rev. In Food Sci and Food Saf. 2017;16:124- 140. Gow NAR, van de Veerdonk FL, Brown AJP, Netea MG.Candida albicans morphogenesis and host defence: discriminating invasion fromcolonization. Nat Rev Microbiol. 2012;10:112–122. Gratchev A, Guillot P, Hakiy N, Politz O, Orfanos CE, Schledzewski K, et al. Alternatively Activated Macrophages Dif erentially Express Fibronectin and Its Splice Variants and the Extracellular Matrix Protein βIG-H3. Scandinavian Journal of Immunology. 2001;53(4):386–92. Graversen JH, Svendsen P, Dagnæs-Hansen F, Dal J, Anton G, Etzerodt A, et al. Targeting the Hemoglobin Scavenger receptor CD163 in Macrophages Highly Increases the Anti-inflammatory Potency of Dexamethasone. Mol Ther. agosto de 2012;20(8):1550–8. Gross O, Poeck H, Bscheider M, Dostert C, Hannesschlager N, et al. Syk kinase signalling couples to the Nlrp3 inflammasome for anti-fungal host defence. Nature. 2009; 459: 433–436 Gross, O., Thomas, C.J., Guarda, G., Tschopp, J., (2011). The inflammasome: an integrated view. Immunol. Rev. 2011; 243, 136–151. doi:10.1111/j.1600-065X.2011.01046.x Guardia T, Rotelli AE, Juarez AO, Pelzer LE. Anti-inflammatory properties of plant flavonoids. Effects of rutin, quercetin and hesperidin on adjuvant arthritis in rat. Farmaco. 2001;56(9):683–7. Guo C, et al. Acapsular Cryptococcus neoformans activates the NLRP3 inflammasome. Microbes Infect 2014; 16:845–854. Guo, H., Callaway, J.B., Ting, J.P.-Y.Inflammasomes: mechanism of action, role in disease, and therapeutics. Nat. Med. 2015; 21:677–687. doi:10.1038/nm.3893 Han Y. Rutin has therapeutic effect on septic arthritis caused by Candida albicans. Int Immunopharmacol. 2009; 9(2):207–11. Hise AG, Tomalka J, Ganesan S, Patel K, Hall BA, et al. An essential role for the NLRP3 inflammasome in host defense against the human fungal pathogen Candida albicans.Cell Host Microbe. 2009; 5: 487– 497. Inohara, N., Nuñez, G. NODs: intracellular proteins involved in inflammation and apoptosis. Nat. Rev. Immunol. 2003; 3: 371–382. doi:10.1038/nri1086 Joly S, Ma N, Sadler JJ, Soll DR, Cassel SL, et al. Cutting edge: Candida albicans hyphae formation triggers activation of the Nlrp3 inflammasome. J Immunol. 2009; 183: 3578–3581 Joosten LA, et al.Inflammatory arthritis in caspase 1 gene-deficient mice: contribution of proteinase 3 to caspase 1-independent production of bioactive interleukin-1beta. Arthritis Rheum. 2009; 60:3651–3662. Juvenale, M., Del Negro, G.M., Duarte, A.J., Benard, G. Antibody isotypes to a Paracoccidioides brasiliensis somatic antigen in sub-acute and chronic form paracoccidioidomycosis. J. Med. Microbiol. 2001; 50:127–134. 48 Kankkunen P, Teirila L, Rintahaka J, Alenius H,Wolff H, Matikainen S. (1,3)-beta-glucans activate both dectin-1 and NLRP3 inflammasome in human macrophages. JImmunol. 2010; 184:6335–6342. Ketelut-Carneiro N, Silva GK, Rocha FA, Milanezi CM, Cavalcanti-Neto FF, Zamboni DS, Silva JS.(2015) IL-18 triggered by the Nlrp3 inflammasome induces host innate resistance in a pulmonary model of fungal infection.J Immunol. 2015 ;194(9):4507-17. Kneidl J, Löfler B, Erat MC, Kalinka J, Peters G, Roth J, et al. Soluble CD163 promotes recognition, phagocytosis and killing of Staphylococcus aureus via binding of specific fibronectin peptides. Cellular Microbiology. 2012;14(6):914–36. Kumar H, et al.Involvement of the NLRP3 inflammasome in innate and humoral adaptive immune responses to fungal beta-glucan. JImmunol. 2009; 183:8061–8067. Kushima, H., Nishijima, C.M., Rodrigues, C.M., Rinaldo, D., Sassá, M.F., Bauab, T.M., Stasi, L.C.D., Carlos, I.Z., Brito, A.R.M.S., Vilegas, W., Hiruma-Lima, C.A., 2009. Davilla elliptica and Davilla nitida: gastroprotective, anti-inflammatory immunomodulatory and anti-Helicobacter pylori action. J Ethnopharmacol. 2009; 123:430–438. doi:10.1016/j.jep.2009.03.031 Kuzmich NN, Sivak KV, Chubarev VN, Porozov YB, Savateeva-Lyubimova TN, Peri F. TLR4 Signaling Pathway Modulators as Potential Therapeutics in Inflammation and Sepsis. Vaccines. 2017 [citado 15 de outubro de 2019];5(4). Disponível em: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5748601/ Lago, J.H.G., Tanizaki, T.M., Young, M.C.M., Guimarães, E.F., Kato, M.J.Antifungal piperolides from Piper malacophyllum (Prels) C. DC. Journal of the Brazilian Chemical Society. 2005; 16:153–156. doi:10.1590/S0103-50532005000200005 Lamkanfi M, Malireddi RK, Kanneganti TD. Fungal zymosan and mannan activate the cryopyrin inflammasome. J Biol Chem. 2009; 284:20574–20581. Lei G, Chen M, Li H, Niu JL, Wu S. Biofilm from a clinical strain of Cryptococcus neoformans activates the NLRP3 inflammasome. Cell Res. 2013; 23: 965–968 Lei G, et al.Biofilm from a clinical strain of Cryptococcus neoformans activates the NLRP3 inflammasome. Cell Res. 2013; 23:965–968. Leu WJ, Chen JC, Guh JH. Extract From Plectranthus amboinicus Inhibit Maturation and Release of Interleukin 1β Through Inhibition of NF-κB Nuclear Translocation and NLRP3 Inflammasome Activation. Front Pharmacol. 2019;10:573. Published 2019 May 28. doi:10.3389/fphar.2019.00573 López, S.N., Lopes, A.A., Batista, J.M., Flausino, O., Bolzani, V. da S., Kato, M.J., Furlan, M. Geranylation of benzoic acid derivatives by enzymatic extracts from Piper crassinervium (Piperaceae). Bioresour. Technol. 2010; 101:4251–4260. doi:10.1016/j.biortech.2010.01.041 Lutz A. Uma mycose pseudococcidica localisada na bocca e observada no Brasil. Contribuição ao conhecimento das hyphoblastomycoses americanas. Brasil Med . 1908; 22:121–124. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25825440 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25825440 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5748601/ 49 Mamoni, R.L., Blotta, M.H.S.L.. Flow-cytometric analysis of cytokine production in human paracoccidioidomycosis. Cytokine. 2006; 35:207–216. Mantovani A, Sica A, Sozzani S, Allavena P, Vecchi A, Locati M. The chemokine system in diverse forms of macrophage activation and polarization. Trends in Immunology. 2004; 25(12):677–86. Martinez R. Epidemiology of paracoccidioidomycosis. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 2015; 19:11-20. Martinon, F.,Burns, K., Tschopp, J. The inflammasome: a molecular platform triggering activation of inflammatory caspases and processing of proIL-beta. Mol. Cell. 2002; 10:417 426. Martinon, F., Mayor, A., Tschopp, J. The inflammasomes: guardians of the body. Annu. Rev. Immunol. 2009; 27: 229–265. doi:10.1146/annurev.immunol.021908.132715 Martinon, F., Tschopp, J. NLRs join TLRs as innate sensors of pathogens. Trends Immunol. 2005; 26:447–454. doi:10.1016/j.it.2005.06.004 Matute DR, McEwen JG, Puccia R, Montes BA, San-Blas G, Bagagli E, et al.Crypticspeciation and recombination in the fungus Paracoccidioides brasiliensis as revealed by gene genealogies. Mol Biol Evol. 2015; 23(1):65-73. McCoy, S.S., Stannard, J., Kahlenberg, J.M. Targeting the inflammasome in rheumatic diseases. Transl Res. 2016; 167, 125–137. doi:10.1016/j.trsl.2015.06.006 McFadden DC, Casadevall A. Capsule and melanin synthesis in Cryptococcus neoformans. Med Mycol. 2001; 39(Suppl 1):19–30. Medzhitov, R., Janeway, C.A. Decoding the patterns of self and nonself by the innate immune system. Science. 2002; 296, 298–300. doi:10.1126/science.1068883 Mendes RP, Cavalcante RS, Marques SA, Marques MEA, Venturini J, Sylvestre TF, et al. Paracoccidioidomycosis: Current Perspectives from Brazil. Open Microbiol J. 2017; 22:224e82. Michelin,D.C.,Iha,S.M.,Rinaldo,D.,Sannomiya, M., Santos, L.C., Vilegas, W., Salgado, H.R.N., 2005. Antimicrobial activity of Davilla elliptica St. Hill (Dilleniaceae). Revista Brasileira de Farmacognosia. 2005; 15:209–211. doi:10.1590/S0102-695X2005000300008 Middleton E, Kandaswami C, Theoharides TC. The effects of plant flavonoids on mammalian cells: implications for inflammation, heart disease, and cancer. Pharmacol Rev. 2000; 52(4):673–751. Montellano, B. de. Empirical Aztec medicine. Science. 1975; 188:15-220. doi:10.1126/science.1090996 Moraes J de, Nascimento C, Lopes POMV, Nakano E, Yamaguchi LF, Kato MJ, et al. Schistosoma mansoni: In vitro schistosomicidal activity of piplartine. Experimental Parasitology. 1o de fevereiro de 2011;127(2):357–64. Moraes J, Nascimento C, Lopes POMV, Nakano E, Yamaguchi LF, Kato MJ, et. al. Schistosoma mansoni: In vitro schistosomicidal activity of piplartine. Exper. Paras. 2011;127(2):357-364. Moreira F, Riul T, Moreira M, Pilon A, Dias-Barufi M, Araújo M, et al. Leishmanicidal Effects of 50 Piperlongumine (Piplartine) and Its Putative Metabolites. Planta Medica. 2018; doi:10.1055/a-0614-2680 Morelle W, Bernard M, Debeaupuis JP, Buitrago M, Tabouret M, Latge JP. Galactomannoproteins of Aspergillus fumigatus.Eukaryot Cell. 2005; 4:1308–1316. Mosser DM, Edwards JP. Exploring the full spectrum of macrophage activation. Nat Rev Immunol. 2008; 8(12):958–69. Mota, N.G., Peraçoli, M.T., Mendes, R.P., Gat ass, C.R., Marques, S.A., Soares, A.M., Izatto, I.C., Rezkallah-Iwasso, M.T.(1988). Mononuclear cell subsets in patients with different clinical forms of paracoccidioidomycosis. J. Med. Vet. Mycol. 1988; 26:105–111. Mota, N.G., Rezkallah-Iwasso, M.T., Peraçoli, M.T., Audi, R.C., Mendes, R.P., Marcondes, J., Marques, S.A., Dillon, N.L., Franco, M.F. Correlation between cell-mediated immunity and clinical forms of paracoccidioidomycosis. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1985; 79:765–772. Muñoz JF, Farrer RA, Desjardins CA, Gallo JE, Sykes S, Sakthikumar S, et al. Genome diversity, recombination, and virulence across the major lineages of Paracoccidioides. mSphere. 2016; 1(5):e00213-16. Navickiene HM, Alécio AC, Kato MJ, Bolzani VD, Young MC, Cavalheiro AJ, et al. Antifungal amides from Piper hispidum and Piper tuberculatum. Phytochemistry. 2000; 55(6):621–6. Navickiene HMD, Bolzani V da S, Kato MJ, Pereira AMS, Bertoni BW, França SC, et al. Quantitative determination of anti-fungal and insecticide amides in adult plants, plantlets and callus from Piper tuberculatum by reverse-phase high-performance liquid chromatography. Phytochem Anal. 2003;14(5):281–4. Oliveira-Nascimento L, Massari P, Wetzler LM. The Role of TLR2 in Infection and Immunity. Front Immunol. 2012 [citado 15 de outubro de 2019];3. Disponível em: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3342043/ Park M-J, Lee D-E, Shim MK,Jang EH, Lee JK, Jeong SY. Piperlongumine inhibits TGF-β-induced epithelial-to-mesenchymal transition by modulating the expression of E-cadherin, Snail1, and Twist1. European Journal of Pharmacology. 2017. Doi: 10.1016. Pedriali, AC. Síntese química de derivados hidrossolúveis da rutina: determinação de suas propriedades físico-químicas e avaliação de suas atividades antioxidantes [Dissertação de Mestrado]. [Faculdade de Ciências Farmacêuticas.Departamento de Tecnologia Bioquímica-Farmacêutica]: Universidade de São Paulo; 2005. Pereira AP, Ferreira ICFR, Marcelino F, Valentão P, Andrade PB, Seabra R, et al. Phenolic compounds and antimicrobial activity of olive (Olea europaea L. Cv. Cobrançosa) leaves. Molecules. 26 de maio de 2007;12(5):1153–62. Ramm GA, Nair VG, Bridle KR, Shepherd RW, Crawford DHG. Contribution of Hepatic Parenchymal and Nonparenchymal Cells to Hepatic Fibrogenesis in Biliary Atresia. Am J Pathol. agosto de 1998;153(2):527–35. Rapado LN, Pinheiro A de S, Lopes PO de MV, Fokoue HH, Scotti MT, Marques JV, et al. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3342043/ 51 Schistosomiasis Control Using Piplartine against Biomphalaria glabrata at Different Developmental Stages. PLoS Negl Trop Dis [Internet]. 6 de junho de 2013 [citado 15 de outubro de 2019];7(6). Disponível em: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3675008/ Rinaldo, D., Silva, M.A., Rodrigues, C.M., Calvo, T.R., Sannomiya, M., Santos, L.C. dos, Vilegas, W., Kushima, H., Hiruma-Lima, C.A., Brito, A.R.M. de S. Preparative separation of flavonoids from the medicinal plant Davilla elliptica St. Hill. By high-speed counter-current chromatography. Química Nova. 2006; 29:947–949. doi:10.1590/S0100-40422006000500011 Rodrigues, C.M., 2007. Caracterização quali e quantitativa de metabólitos secundários em extratos vegetais. Instituto de Química, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho,” Araraquara. Rodrigues, C.M., Rinaldo, D., Sannomiya, M., dos Santos, L.C., Montoro, P., Piacente, S., Pizza, C., Vilegas, W. High-performance liquid chromatographic separation and identification of polyphenolic compounds from the infusion of Davilla elliptica St. Hill. Phytochem Anal. 2008; 19:17–24. doi:10.1002/pca.1008 Said-Sadier N, Padilla E, Langsley G, Ojcius DM (2010) Aspergillus fumigatus stimulates the NLRP3 inflammasome through a pathway requiring ROS production and the Syk tyrosine kinase. PloS one 5: e10008. Savva A, Roger T. Targeting toll-like receptors: promising therapeutic strategies for the management of sepsis-associated pathology and infectious diseases. Front Immunol. 2013; 4:387. Schett, G., Dayer, J.-M., Manger, B., (2016). Interleukin-1 function and role in rheumatic disease. Nat Rev Rheumatol. 2016; 12:14–24. doi:10.1038/nrrheum.2016.166 Shiratori H, Feinweber C, Luckhardt S, Linke B, Resch E, Geisslinger G, et al. THP-1 and human peripheral blood mononuclear cell-derived macrophages differ in their capacity to polarize in vitro. Molecular Immunology. 2017; 88:58–68. Spiller KL, Wrona EA, Romero-Torres S, Pallotta I, Graney PL, Witherel CE, et al. Dif erential gene expression in human, murine, and cell line-derived macrophages upon polarization. Experimental Cell Research. 2016; 347(1):1–13. Stasi, L.C. di, 2002. Plantas medicinais na Amazônia e na Mata Atlântica, 2a. ed., e ampliada. ed. Editora UNESP, São Paulo, SP Stossi F, Madak-Erdoğan Z, Katzenellenbogen BS. Macrophage-elicited loss of estrogen receptor-α in breast cancer cells via involvement of MAPK and c-Jun at the ESR1 genomic locus. Oncogene. 2012;31(14):1825–34. Takizawa R, Pawankar R, Yamagishi S, Takenaka H, Yagi T. Increased expression of HLA-DR and CD86 in nasal epithelial cells in allergic rhinitics: antigen presentation to T cells and up-regulation by diesel exhaust particles. Clin Exp Allergy. 2007; 37(3):420–33. Tavares AH, Magalhaes KG, Almeida RD, Correa R, Burgel PH, Bocca AL. NLRP3 inflammasome activation by Paracoccidioides brasiliensis. PLoS Negl Trop Dis. 2013; 7:e2595. Tedesco S, De Majo F, Kim J, Trenti A, Trevisi L, Fadini GP, et al. Convenience versus Biological https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3675008/ 52 Significance: Are PMA-Differentiated THP-1 Cells a Reliable Substitute for Blood-Derived Macrophages When Studying in Vitro Polarization? Front Pharmacol. 2018; 9:71. Teixeira MM, Theodoro RC, Nino-Vega G, Bagagli E, Felipe MSS. Paracoccidioides Species Complex: Ecology, Phylogeny, Sexual Reproduction, and Virulence. PLoS Pathog. 2014; Tschopp, J., Martinon, F., Burns, K.. NALPs: a novel protein family involved in inflammation. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003; 4, 95–104. doi:10.1038/nrm1019 Turissini DA, Gomez OM, Teixeira MM, McEwen JG, Matute DR. Species boundaries in the human pathogen Paracoccidioides. Fungal Genet Biol. 2017; 106:9–25. Unander, D.W., Webster, G.L., Blumberg, B.S. Usage and bioassays in Phyllanthus (Euphorbiaceae). IV. Clustering of antiviral uses and other ef ects. J Ethnopharmacol. 1995; 45:1–18 van de Veerdonk FL, et al. The inflammasome drives protective Th1 and Th17 cellular responses in disseminated candidiasis.Eur J Immunol. 2011; 41:2260–2268. van de Veerdonk, F.L., Netea, M.G., Dinarello, C.A., Joosten, L.A.B., (2011). Inflammasome activation and IL-1β and IL-18 processing during infection. Trends Immunol. 2011; 32:110–116. doi:10.1016/j.it.2011.01.003 Vasques da Silva R, Debonsi Navickiene HM, Kato MJ, Bolzani V da S, Méda CI, Young MCM, et al. Antifungal amides from Piper arboreum and Piper tuberculatum. Phytochemistry. 2002; 59(5):521–7. Venturini J, Cavalcante R, de Assis Golim M, Marchetti C, de Azevedo P, Amorim BC. Phenotypic and functional evaluations of peripheral blood monocytes from chronic-form paracoccidioidomycosis patients before and after treatment. BMC Infect Dis. 2014; 14:552 Vizzotto M, Krolow ACR, Weber GEB. Metabólitos secundários encontrados em plantas e sua importância. Pelotas: Embrapa Clima Temperado. ISSN 1516-8840, documento 316. 2010 Volp ACP, Alfenas R de CG, Costa NMB, Minim VPR, Stringueta PC, Bressan J. Capacidade dos biomarcadores inflamatórios em predizer a síndrome metabólica: Inflammation biomarkers capacity in predicting the metabolic syndrome. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia & Metabologia. 2008; 52(3):537–49. Wynn TA, Barron L. Macrophages: master regulators of inflammation and fibrosis. Semin Liver Dis. 2010; 30(3):245–57. Yamaguchi, L.F., Lago, J.H.G., Tanizaki, T.M., Mascio, P.D., Kato, M.J., 2006. Antioxidant activity of prenylated hydroquinone and benzoic acid derivatives from Piper crassinervium Kunth. Phytochemistry. 2006; 67:1838–1843. doi:10.1016/j.phytochem.2006.03.001 Ying X, Chen X, Cheng S, Shen Y, Peng L, Xu HZ. Piperine inhibits IL-β induced expression of inflammatory mediators in human osteoarthritis chondrocyte. Int Immunopharmacol. 2013;17(2):293- 299. doi:10.1016/j.intimp.2013.06.025