Efeitos da oncoproteína LMP1 do vírus de Epstein-Barr no potencial de invasão e na expressão de microRNAs endógenos em células humanas in vitro - Muller-Coan, Barbara Grasiele [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2016)
O vírus Epstein-Barr (Epstein-Barr virus - EBV) é um herpesvírus ubíquo que participa na patogênese de diferentes neoplasias malignas humanas, notadamente o linfoma de Burkitt endêmico e o carcinoma indiferenciado de nasofaringe. Tem tropismo principalmente por células epiteliais e linfócitos B e seu ciclo biológico é dividido em fases de infecção lítica e latente. Isolados distintos do EBV podem apresentar propriedades biológicas peculiares: por exemplo, em relação ao isolado viral B95-8, o M81 tem predileção por células epiteliais e é mais suscetível a induzir reativação lítica espontânea. As células neoplásicas latentemente infectadas pelo EBV expressam número limitado de produtos virais, alguns com papel cancerígeno bem documentado. Nesse sentido merece destaque a proteína latente de membrana 1 (Latent Membrane Protein 1 - LMP1), uma proteína transmembrana com propriedades transformantes in vitro e in vivo. Adicionalmente, a expressão de LMP1 em células epiteliais estimula motilidade e invasão celular, o que reflete em na agressividade biológica de carcinomas associados ao EBV. Para esse efeito, LMP1 pode regular a expressão de determinados microRNAs, que por sua vez podem atuar em diversos processos celulares, como progressão do ciclo celular, proliferação celular, metabolismo celular e apoptose. Alguns microRNAs estão envolvidos em condições adversas à saúde, incluindo a carcinogênese, a progressão tumoral e o surgimento do fenótipo de resistência à drogas em cânceres. A expressão de EBV LMP1 contribui no potencial metastático do carcinoma de nasofaringe; entretanto, é desconhecido se a LMP1 de diferentes isolados virais exibem efeitos distintos no que se refere aos fenômenos da progressão de carcinomas. Por essa razão, o presente estudo verificou se as diferentes variantes de LMP1 (e.g., isolados B95-8 e M81) induziram níveis distintos de migração e invasão celular e de expressão de diversos microRNAs. Para tanto, células expressando a proteína LMP1 dos isolados virais B95-8 e M81, foram submetidas a experimento de migração e invasão celular in vitro e análise da expressão dos miRNAs. Quanto à indução de migração e invasão celular, as variantes não apresentaram diferenças significativas, porém, a expressão de microRNAs demonstrou um indício in silico da variante M81 de induzir a regulação negativa de genes envolvidos em estímulos da adesão focal, angiogênese, anti-apoptóticos, modulação da expressão gênica celular, motilidade e proliferação celular.

Epstein-Barr virus (EBV) is a ubiquitous herpesvirus that participates in many human cancers pathogenesis, such as endemic Burkitt lymphoma and undifferentiated nasopharyngeal carcinoma. EBV cycle is divided into the lytic and latent infection and distinct viral strains may present peculiar biological properties; compared to the viral isolate B95-8, M81 has propensity to epithelial cell infection and can more likely induce spontaneous lytic activation. In latently-infected neoplastic cells, EBV expresses a limited set of viral products, some of them with well documented oncogenic properties, like latent membrane protein 1 (LMP1). LMP1 is a transmembrane protein with transforming properties both in vitro and in vivo. Furthermore, epithelial cells expressing LMP1 show increased cell mobility and invasion, with impact on the biological behavior of EBVassociated carcinomas. Cellular microRNAs are involve in many cellular processes like cell cicle progression, cell proliferation, cell metabolism and apoptosis. Some of those microRNAs are related to carcinogenesis, cancer progression and even resistance to chemotherapy drugs. Though EBV LMP1 expression can contribute to metastatic potential of nasopharyngeal carcinomas, it is unknown whether different viral LMP1 forms may have distinct effects on the progression of carcinomas. We verified if LMP1 from B95-8 or M81 EBV isolates behaves distinctly regarding cell migration, invasion and microRNA expression. For this intent, we used human cells expressing the LMP1 protein from EBV B95-8 and M81 strains, and performed in vitro cell invasion and migration assays as well as miRNAs expression analysis using rt-PCR. Regarding migration and invasion, both isolates showed similar results. However, microRNA expression pointed in silico evidence that M81, when compared to M81, can downregulate genes involved in focal adhesion, apoptosis escape, gene expression, cell motility and proliferation.
Effects of epstein-barr virus LMP1 oncoprotein on in vitro cell invasion and expression of endogenous microRNAs in human cells
Keywords: Epstein-Barr; microRNAs; Carcinoma; LMP1