Análise do efeito de microcristais contendo prata na inativação e erradicação de biofilme de Candida albicans - Martins, Guilherme [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023)
O uso indiscriminado de fármacos tem acarretado tolerância/resistência dos fungos aos mesmos, devido a mecanismos moleculares de proteção, como a diminuição na permeabilidade da membrana fúngica ao fármaco. Assim, terapias que inativem os microrganismos de maneira química/física e que possuam baixa propensão a causar tolerância e toxicidade sistêmica têm sido amplamente pesquisadas. Este trabalho teve como objetivo avaliar, in vitro, o efeito de microcristais de alfa vanadato de prata (α-AgVO3), beta molibdato de prata (β-Ag2MoO4) e alfa tungstato de prata (α-Ag2WO4) sobre biofilmes de Candida albicans em formação e após formados. Para tanto, os microcristais utilizados neste estudo foram sintetizados no Centro de Desenvolvimento de Materiais Funcionais (CDMF) pelo método de co-preciptação. Os grupos avaliados neste trabalho foram: controle padrão; fluconazol na concentração inibitória mínima (CIM) (1x e 10x); α-AgVO3, β-Ag2MoO4 e α-Ag2WO4 na CIM (1x, 10x e 100x). A CIM foi determinada em estudos anteriores. Para avaliar a capacidade de inibição de formação de biofilme (BIC - concentração de inibição de biofilme) de C. albicans (ATCC 90028), após a adesão das células em placas de 96 poços os tratamentos foram aplicados e mantidos por 24h. Já para avaliação da capacidade de erradicação de biofilme formado (BEC - concentração de erradicação de biofilme), foram crescidos biofilmes de 24h e estes foram tratados por 24h. Os ensaios de BIC e BEC foram avaliados quanto ao número de colônias viáveis (Log10(UFC/mL)), metabolismo celular (XTT) e biomassa (cristal violeta). Todos os dados obtidos foram analisados quanto a sua distribuição e homocedasticidade, e o teste ANOVA a um fator com correção de Welch seguido do pós-teste de Games-Howell foi aplicado (α = 0,05). Para BIC, apenas as concentrações 10x e 100x CIM de β-Ag2MoO4 e α-Ag2WO4 apresentaram valores de Log10(UFC/mL) menores que o grupo controle (p<0,0001). O metabolismo celular foi afetado em todos os tratamentos realizados, exceto α-AgVO3 CIM (p=1,000). A biomassa não foi afetada pelos tratamentos efetuados (p>0,176). Já para BEC, os três microcristais nas concentrações 10x e 100x CIM apresentaram valores de Log10(UFC/mL) menores que o controle (p<0,0001). Todos os tratamentos realizados, inclusive com fluconazol, foram capazes de diminuir o metabolismo celular (p<0,049). Contudo, apenas os grupos tratados com o α-Ag2WO4 (1x e 10x CIM) apresentaram diminuição na biomassa total (p=0,001). A partir dos resultados obtidos e das limitações deste estudo, é possível concluir que todos os microcristais avaliados foram capazes de interferir na formação de biofilme por C. albicans, bem como interferir nos biofilmes já formados.

The indiscriminate use of drugs has caused tolerance/resistance of fungi to them, due to molecular mechanisms of protection, such as the decrease in the permeability of the fungal membrane to the drug. Thus, therapies that inactivate microorganisms in a chemical/physical manner and that have a low propensity to cause tolerance and systemic toxicity have been widely researched. This work aimed to evaluate, in vitro, the effect of microcrystals of alpha silver vanadate (α-AgVO3), beta silver molybdate (β-Ag2MoO4), and alpha silver tungstate (α-Ag2WO4) on biofilms of Candida albicans in training and after being trained. Therefore, the microcrystals used in this study were synthesized at the Center for the Development of Functional Materials (CDMF) by the co-precipitation method. The groups evaluated in this work were: standard control; fluconazole in the minimum inhibitory concentration (MIC) (1x and 10x); α-AgVO3, β-Ag2MoO4, and α-Ag2WO4 in the MIC (1x, 10x and 100x). MIC has been determined in previous studies. To assess the ability to inhibit biofilm formation (BIC - biofilm inhibition concentration) of C. albicans (ATCC 90028), after the adhesion of cells in 96-well plates, treatments were applied and maintained for 24 h. For the evaluation of the capacity to eradicate formed biofilms (BEC - biofilm eradication concentration), biofilms were grown for 24 h and these were treated for 24 h. The BIC and BEC assays were evaluated for the number of viable colonies (Log10(CFU/mL)), cell metabolism (XTT), and biomass (crystal violet). All data obtained were analyzed for distribution and homoscedasticity, and the one-way ANOVA test with Welch correction followed by the Games-Howell post-test was applied (α = 0.05). For BIC, only the 10x and 100x MIC concentrations of β-Ag2MoO4 and α-Ag2WO4 showed Log10(UFC/mL) values lower than the control group (p<0.0001). Cellular metabolism was affected in all treatments performed, except α-AgVO3 CIM (p=1,000). Biomass was not affected by the treatments carried out (p>0.176). As for BEC, the three microcrystals in the 10x and 100x CIM concentrations showed Log10(UFC/mL) values lower than the control (p<0.0001). All treatments performed, including fluconazole, were able to decrease cellular metabolism (p<0.049). However, only the groups treated with α-Ag2WO4 (1x and 10x MIC) showed a decrease in total biomass (p=0.001). From the results obtained and the limitations of this study, it is possible to conclude that all microcrystals evaluated were able to interfere with the biofilm formation by C. albicans, as well as interfere with biofilms already formed.
Analysis of the effect of microcrystals containing silver on the inactivation and eradication of biofilm of Candida albicans
Keywords: Prata; Candida albicans; Biofilmes; Silver; Candida albicans; Biofilms