Produção dos fragmentos variáveis de cadeia única de anticorpo anti-RBD de SARS-CoV-2 em Saccharomyces cerevisiae e Desenvolvimento de Kit Diagnóstico de COVID-19 - Corvello, Enzo [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023)
O vírus SARS-CoV-2 começou a se disseminar pelo mundo no ano de 2019 e, desde então, matou quase sete milhões de pessoas, trazendo impactos inimagináveis para a economia e saúde global. O Brasil, por não investir no desenvolvimento de tecnologias que o torne independente na produção de insumos destinados para kits diagnóstico e vacinas, dependeu da exportação desses produtos de outros países, deixando-o numa situação delicada nesse cenário de pandemia que, aliado a falta de políticas públicas, promoveu a circulação do vírus desenfreadamente, apresentando sérios problemas relacionados ao controle dos infectados e vacinação. Com base nesse problema, esse projeto visou a produção do fragmento variável de cadeia única (scFv) do anticorpo CC12.1, que apresenta elevada afinidade ao RBD do vírus SARS-CoV-2, na superfície celular da levedura Saccharomyces cerevisiae, como possível alternativa para teste diagnóstico a baixo custo, além de dispensar etapas de purificação que podem levar a perda de massa e funcionalidade da molécula de interesse, facilitando a sua obtenção. Para isso, a levedura recombinante, contendo o plasmídeo com a sequência codificadora do scFv, teve a sua capacidade de ligação ao RBD comercial avaliada por citometria de fluxo e, ao observar que havia a formação do complexo antígeno-anticorpo, foi realizado um Yeast-ELISA para verificar se o sinal obtido variava conforme a alteração da concentração do RBD, o que foi confirmado, indicando o potencial uso dessa técnica com essa levedura para testes de diagnóstico e quantificação viral.

The SARS-CoV-2 virus began to spread around the world in 2019 and since then it has killed nearly seven million people, bringing unimaginable impacts to the global economy and health. Brazil, by not investing in the technology development to make it independent in the production of inputs for diagnostic kits and vaccines, depended on the exportation of these products from other countries, leaving it in a delicate situation in the pandemic scenario that, combined with the lack of public policies, promoted the unbridled circulation of the virus, showing serious problems related to the control of the infected and vaccination. Based on this problem, this project aimed to produce the single-chain fragment variable (scFv) of the CC12.1 antibody, which has high affinity for the SARS-CoV-2 RBD, on the yeast cell surface of Saccharomyces cerevisiae, as a possible alternative low-cost diagnostic testing, beyond to dispensing purification steps that can lead to mass loss and functionality of the interest molecule, making it easier to obtain. For this, the recombinant yeast containing the plasmid with the scFv coding sequence had its ability to bind to the commercial RBD evaluated by flow cytometry and, when observed that there was the formation of the antigen-antibody complex, a Yeast- ELISA was performed to verify if the signal obtained varied according to the RBD concentration change, which was confirmed, indicating the potential use of this yeast technique for diagnostic tests and viral quantification.
Production of SARS-CoV-2 anti-RBD antibody single-chain variable fragments in Saccharomyces cerevisiae and Development of a COVID-19 Diagnostic Kit
Keywords: Yeast-ELISA; Kit diagnóstico; SARS-CoV-2; Diagnostic kit