Avaliação da variante alélica (L162V) do gene PPARA humano na modulação de genes chave relacionados a interação parasito-hospedeiro em células THP-1. - Paiva, Isabela Gaseta Ferraz [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2011)
Os receptores ativados da proliferação de peroxissomos (PPARs) compõem uma subfamília de receptores nucleares. Três isoformas, codificadas por genes separados, foram identificadas até então: PPARA (Alfa, α), PPARB (beta, β/δ) e PPARG (gama, γ). Esses receptores, que agem como fatores de transcrição, exibem diferentes funções e distribuições nos tecidos. Até o presente momento, sabe-se que os genes regulados pelos PPARs participam principalmente da regulação de proteínas chave, envolvidas no metabolismo intra e extracelular de lipídeos, oxidação de ácidos graxos e processos inflamatórios. O PPARA, em especial, é expresso em vários tecidos metabolicamente ativos, incluindo fígado, rim, coração, músculo esquelético, tecido adiposo e nos macrófagos que além de fazerem parte do sistema imunológico, possuem um papel importante no metabolismo lipídico. Pela sua influência na regulação lipídica e pelo fato da sua atividade ser facilmente modulada por drogas sintéticas, o PPARα é considerado um alvo muito importante para o tratamento eficaz das dislipidemias. Desordens lipídicas têm sido relatadas em pacientes humanos e até mesmo em cães domésticos com Leishmaniose Visceral (LV) ativa. A LV no Brasil é uma doença parasitária causada pela infecção de macrófagos do hospedeiro pelo protozoário Leishmania infantum e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, tendo como principais reservatórios os canídeos selvagens e cães domésticos. Nesse contexto, o PPARα pode-se mostrar como um possível gene candidato a contribuir com o risco geneticamente determinado da LV. Em um estudo caso-controle realizado pelo nosso grupo na área endêmica de Teresina-PI genótipos contendo o alelo mutado 162V foram significativamente mais freqüentes entre indivíduos com LV do que entre todos os indivíduos não infectados (p= 0.007). Além disso indivíduos sadios possuindo pelo menos um alelo mutado 162V, apresentam quase quatro vezes mais chances de contrair a doença do que indivíduos que não possuem a mutação (razão de chances 3,91 e intervalo de confiança 1,38-11,07). O presente projeto tem por objetivo utilizar a tecnologia CRISPR-Cas9 para a geração de macrófagos geneticamente modificados para conter a mutação L162V do gene PPARA humano, com o intuito de avaliar o papel da variante alélica L162V do gene PPARα no estabelecimento e desenvolvimento da Leishmaniose Visceral.

Activated peroxisome proliferation receptors (PPARs) make up a subfamily of nuclear receptors. Three isoforms, encoded by separate genes, were identified so far: PPARA, PPARB and PPARG. These receptors, which act as transcription factors, exhibit different functions and distributions in tissues. To date, it has been known that the genes regulated by PPARs participate mainly in the regulation of key proteins, involved in the intra- and extracellular metabolism of lipids, oxidation of fatty acids and inflammatory processes. PPARA is expressed in several metabolically active tissues, including liver, kidney, heart, skeletal muscle, adipose tissue, and macrophages that play an important role in lipid metabolism as well as being part of the immune system. Due to its influence on lipid regulation and the fact that its activity is easily modulated by synthetic drugs, PPARA is considered a particularly important target for the effective treatment of dyslipidemias. Lipid disorders have been reported in human patients and even in dogs with active Visceral Leishmaniasis (LV). LV in Brazil is a parasitic disease caused by infection of host macrophages by the protozoan Leishmania infantum and transmitted by the sandfly Lutzomyia longipalpis, with wild canids and domestic dogs as its main reservoirs. In this context, PPARA might be a possible candidate gene to contribute to the genetically determined risk of VL. In a case-control study conducted by our group in the endemic area of Teresina-PI genotypes containing the mutated 162V allele were significantly more frequent among individuals with VL than among all uninfected individuals (p = 0.007). In addition healthy individuals having at least one mutated 162V allele are nearly four times more likely to contract the disease than individuals who do not have the mutation (odds ratio 3.91 and confidence interval 1.38-11.07) The present project aims to use CRISPR-Cas9 technology for the generation of genetically modified macrophages to contain the human PPARA gene L162V mutation for in vitro infection assays with Leishmania infantum as well as an overall analysis of the gene expression profile of the modified cells with the purpose of evaluating the role of the L162V allelic variant of the PPARA gene in the establishment and development of Visceral Leishmaniasis The present project aims to use CRISPR-Cas9 technology for the generation of genetically modified macrophages to contain the L162V mutation of the human PPARA gene, in order to evaluate the role of the allelic variant L162V of the PPARA gene in the establishment and development of Visceral Leishmaniasis.
Evaluation of the allelic variant (L162V) of the human PPARA gene in the modulation of key genes related to host-parasite interaction in THP-1 cells.
Keywords: Leishmaniose visceral; PPARA; L162V; Crispr-cas9