Respostas de citrandarins (Poncirus trifoliata × tangerina Sunki) à infecção por 'Candidatus Liberibacter asiaticus' - Cavichioli, Thaís Magni [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2021)
Atualmente uma das mais importantes doenças que acometem plantas de citros em todo o mundo, inclusive no Brasil, é o Huanglongbing (HLB), o qual apresenta como agente causal a bactéria Gram-negativa 'Candidatus Liberibacter asiaticus' de ocorrência restrita aos vasos crivados do floema da planta hospedeira e ao inseto vetor, Diaphorina citri. Apesar da ampla susceptibilidade, a multiplicação de CLas é uma característica contrastante entre as espécies de Citrus. O Poncirus trifoliata e alguns de seus híbridos têm-se mostrado como possível fonte de tolerância à bactéria, além de que estes genótipos têm ganhado uma importância crescente como porta-enxertos cítricos devido às qualidades que conferem aos frutos. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo desafiar, sob contínua exposição a CLas, 14 genótipos de citrandarins (híbridos de Citrus sunki x P. trifoliata) que apresentaram resultados negativos para infecção natural com CLas. Um segundo objetivo foi estudar o efeito de CLas em um genótipo de citrandarin quando usado como porta-enxerto e interenxerto para a laranjeira ‘Valência’ infectada com CLas. Para tanto, dois experimentos foram conduzidos sob condições de casa de vegetação. No experimento I, as gemas (borbulhas) desses híbridos foram sobre-enxertadas na copa de plantas de laranjeira ‘Valência’ com alto título de CLas. A detecção e quantificação foram realizadas a partir de amostras de DNA total extraído dos pecíolos das folhas seguindo-se do PCR quantitativo em tempo real (qPCR) para detecção e quantificação do patógeno. Também foi quantificado amido e calose. Aos 360 dias de infecção, houve redução no número de plantas infectadas por CLas, chegando à ausência completa de infecção para o genótipo H106 em todas as repetições analisadas. Além disso, baixas concentrações de amido (17 mg/g de tecido) e menor formação de calose (8 unidades de fluorescência/mm2 ) foram observadas neste híbrido. No experimento II, o citrandarin H222, pré-selecionado em trabalhos anteriores, foi utilizado como porta-enxerto e interenxerto para a laranja ‘Valência’, inoculada com CLas via enxertia de tecido infectado. A detecção e quantificação foram realizadas a partir de amostras de DNA total extraído dos pecíolos das folhas e das raízes. Quantificou-se o volume, diâmetro, peso seco e úmido do sistema radicular de plantas infectadas e controle dos tratamentos. Os resultados mostraram que o citrandarin H222 apresentou ausência de infecção por CLas no sistema radicular em três das quatro repetições. Além disso, análise utilizando a técnica multivariada, considerando as diferentes variáveis analisadas (diâmetro do caule acima do solo, volume e peso das raízes e taxa de infecção por CLas) das plantas inoculadas e não inoculadas, possibilitou o agrupamento do H222 no mesmo grupo dos resultados obtidos para as plantas não inoculadas. As plantas inoculadas tendo o citrumelo Swingle como porta-enxerto assim como aquelas com os interenxertos do H222 com 5 e 30 cm agruparam-se em um outro cluster. O porta-enxerto H222 apresentou desempenho superior ao do citrumelo Swingle quanto ao desenvolvimento do sistema radicular, podendo ser, inclusive, comparado ao desenvolvimento do sistema radicular das plantas não inoculadas. No entanto, os interenxertos com este genótipo não trouxeram ganhos às plantas, sendo até deletérios.

Currently, Huanglongbing has been considered one of the most important diseases that affects citrus plants worldwide, including Brazil. The causal agent is the Gram-negative bacterium 'Candidatus Liberibacter asiaticus', which occurs restricted to the phloem vessels of the host plant. Diaphorina citri is the insect vector associated with HLB disease. Despite the wide susceptibility, CLas multiplication is a contrasting characteristic among Citrus species. For example, Poncirus trifoliata and some of its hybrids have been shown to be a possible source of tolerance to the bacteria. In addition, these genotypes have presented a great importance when used as citrus rootstocks, due to the qualities they confer to the fruits. In this context, the present work aimed to challenge, under continuous exposure to CLas, 14 citrandarins genotypes (P. trifoliata × Citrus sunki) that showed negative results for natural CLas infection. Therefore, the study also investigated the effect of CLas on one of these genotype when used as a rootstock and intergraft for the CLas-infected ‘Valência’ orange tree. For that, two experiments were carried out under greenhouse conditions. In experiment I, the buds of the hybrids were overgrafted on the canopy of ‘Valência’ orange plants with high CLas titer. CLas detection and quantification were performed using total DNA samples extracted from the leaf petioles, followed by quantitative PCR (qPCR). The quantification of starch and the presence of callose was also evaluated. The results indicated, at 360 days of infection, there was a decrease in the number of CLas infected plants, since the complete absence of infection for the H106 genotype in all replicates analyzed was observed. Furthermore, low starch concentrations (17 mg/g tissue) and lower callose deposition (8 fluorescence units/mm2) were observed in H106 hybrids. In experiment II, the citrandarin H222, which was pre-selected in previous studies, was used as rootstock and intergraft for ‘Valência’ orange, CLas inoculations were performed via grafting of infected tissue. Detection and quantification were performed using samples of total DNA extracted from the petioles of leaves and roots. The volume, diameter, dry and wet weight of the root system of infected plants and control treatments were quantified. The results showed it was not possible to detect CLas in the roots of the plants graft onto H222, this fact occurred in within three to four biological repetitions. The multivariate hierarchical analysis (Ward statistic) considering the mean variables of above-ground stem diameter, root volume and weight, and CLas infection rate, analyzed jointly, grouped H222 in the same group of the uninoculated plants. Plants inoculated, which had Swingle citrumelo as rootstock, and those with 5 and 30 cm H222 intergrafts clustered in another cluster. Therefore, based on the set of variables analyzed, it is concluded that the H222 rootstock, even with the scion infected with CLas, was not significantly affected, on this basis considered similar with the non-inoculated plants. So, we concluded that H222 rootstock presented superior performance when compared to the citrumelo Swingle regarding the development of the root system. However, intergrafts with this genotype did not bring gains to the plants, being even deleterious.
Responses of citrandarins (Poncirus trifoliata x tangerine Sunki) to infection by ‘Candidatus Liberibacter asiaticus’
Keywords: Genética; Resistência a doenças; Genetics; Disease resistance