Apocinina versus diapocinina como inibidor da produção de peróxido de hidrogênio e ácido hipocloroso por neutrófilos ativados - Pessoa, Adriano de Souza [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2009)
Apocynin has been used as an efficient inhibitor of the multi-enzymatic complex NADPH oxidase in many experimental models involving phagocytic and nonphagocytic cells. The mechanism of inhibition has been linked with the previous activation of apocynin through the action of cellular peroxidases leading to the formation of a dimeric oxidation product, diapocynin. In this study we compared apocynin with pure diapocynin regarding their effects as scavenger of hydrogen peroxide and hypochlorous generated by glucose/glucose oxidase and myeloperoxidase respectively, and as inhibitors of the production of hydrogen peroxide and hypochlorous acid by activated neutrophils. The production of hydrogen peroxide was measured by the oxidation of the fluorescent substance Amplex Red and the production of hypochlorous acid by was measured as taurine-chloramine derivative using the chromogenic substrate 3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine (TMB). Neutrophils (1 x106 cells/mL) were pre-incubated in PBS buffer supplemented with 1 mM calcium chloride, 0.5 mM magnesium chloride, 1 mg/mL glucose and 5 mM taurine in the presence or absence of inhibitors. The reactions were triggered by adding the soluble stimulus Forbol Miristate Acetate PMA or zymosan and incubated by additional 30 minutes. We found that pure diapocynin was not better than apocynin regarding its scavenger and inhibitory properties. These results suggest that the formation of diapocynin is not essential for the action of apocynin as inhibitor of NADPH oxidase activation

A apocinina tem sido utilizada como um eficiente inibidor do complexo multienzimático NADPH oxidase em muitos modelos experimentais envolvendo células fagocíticas e não fagocíticas. O mecanismo de inibição tem sido associado com a ativação celular da apocinina através da ação de peroxidases levando à formação de um produto dimérico por oxidação, a diapocinina. Neste estudo a apocinina e a diapocinina puras foram comparadas a respeito de seus efeitos como supressor de peróxido de hidrogênio e hipocloroso gerados pela glicose / glicose oxidase e mieloperoxidase, respectivamente, e como inibidores da produção de peróxido de hidrogênio e ácido hipocloroso por neutrófilos ativados. A produção de peróxido de hidrogênio, foi medida pela oxidação da substância fluorescente Amplex® Red e a produção de ácido hipocloroso foi medida com taurina-cloramina utilizando o substrato cromogênico 3,3’,5,5’-tetrametillbenzidina (TMB). Neutrófilos (1 x106 células / mL) foram pré-incubados em tampão PBS suplementado com 1 mM de cloreto de cálcio, 0,5 mM de cloreto de magnésio, 1mg/mL de glicose e 5 mM de taurina na presença ou ausência dos inibidores. As reações foram desencadeadas pela adição ao estímulo solúvel acetato de formol miristato (PMA) ou zimozan e incubadas por mais 30 minutos. Descobrimos que a diapocinina purificada não foi melhor do que a apocinina no que diz respeito à sua propriedade de supressão e inibição da produção de H2O2 e HOCl por neutrófilos ativados. Estes resultados sugerem que o mecanismo de ação da apocinina não esteja, necessariamente, relacionado à sua conversão em diapocinina
Keywords: Oxidação; Fagocitose; Peróxido de hidrogênio; Inibidores quimicos; Antioxidantes; Oxidation; Phagocytosis; Hydrogen peroxide; Chemical inhibitors; Antioxidants