Análise funcional de genes de Xanthomonas axonopodis pv. citri implicados na patogênese - Laia, Marcelo Luiz de [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2007)
Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) constitui um dos principais patógenos da citricultura mundial. Essa litobactéria causa cancro em folhas. ramos e frutos de citros em geral. ocasionando grandes perda econômicas anuais. A fim de estudar a interação dessa bactéria com seu hospedeiro empregou-se a análise de mutantes e da expressão gênica global por meio de microarranjos de DNA (transcrissoma). Na primeira parte do estudo foi obtida uma biblioteca de cerca de 10.000 Illutantes do isolado 306 de Xac. Desses. 3.300 foram inoculados em folhas de limoeiro cravo e sua capacidade em causar cancro cítrico foi avaliada aos três dias da inoculação. Após quatro inoculaçàes. 56 mutantes foram selecionados por apresentarem virulência alterada e suas ORFs interrompidas foram identificadas por meio de seqüenciamento. Uma análise dessas ORFs mostrou que havia tanto ORFs quc codificavam para genes relacionados com a patogenicidade em fitobactérias como possihilitou identificar novos genes associados à infecção. além de ORFs hipotéticas. para as quais ainda não foi atrihuída nenhuma função. Dentre os genes previamente implicados na patogênese. pode-se citar o gene rpB4. o qual participa do sistema de secreção do tipo três. Já o gene hrlA. que contribui na virulência de algumas bactérias patogênicas de animais. até o presente ainda não tinha sido relatado como tendo importância no processo de patogênese em fitobactérias. A ORF XACO~40 é um exemplo de uma proteína hipotética que interfere significativamente no processo infeccioso. uma vez que o mutante para esse locos não induziu sintomas da doença. assim como os demais mutantes citados acima. Na segunda parte deste trabalho. produziu-se um microarranjo de DNA contendo 6.9 I 2 sondas imobilizadas (2.673 ORFs. 87 ORFs repetidas. 312 controles negativos e X4 controles positivos...

Xanthomonas axonopodis pv. citri constitutes one of the main and most damaging pathogcn of lhe world-wide citriculture. This phytobacteria causes canker in leaves, branches and fruits of citrus. causing scvcre cconomic losses. In order to study the interaction of this bacterium with its citrus host. two approaches had been used to proceed a post-genomic functional analysis: wholc genol11c mutagcncsis and global expression analysis by cDNA microarrays technique. In the first part of this study a Xac 306 mutants library with ' 10,000 mutants was obtained. From thesc. 3.300 wcrc inoculatcd in mexicam lemon tree leaves and its capacity to cause citrus canker was cvalualcd. Aftcr four inoculation cicIes, 56 mutants had been selected as having modified palhogcnicily. The inlcrruplcd ORFs were identified by DNA sequencing and analysis of these ORFs identificd ORFs coding for genes previously known as related to pathogenicity proccss in phytobactcrilll11 as wcll gcnes not yet described as involved in pathogenicity, incIuding hypothetical gcncs. Al110ng the gencs previously known as implied in pathogens attack, the hrpB4 gene is one that was found, whic participates of the type three secretion system. To the hrtA gene, whose participation in the virulcnce process has been described to some animal pathogenic bacteria but never yet as having a role in to pathogenicity process in phytobacteria, was found to be involved in the pathogenicity of Xac. The ORF XAC0340 is an example of hypothetical protein which presents grcat intcrfcrcncc in thc infcctious process: the mutant for this gene does not induce any diseasc sYl11ploms in citric Icaves...(Complete abstract, click electronic access below)
Keywords: Xanthomonas; Cítricos; Genoma funcional; Functional genomic; Citrus