Descrição e caracterização de equipamentos e técnicas científicas no laboratório de fitomedicamentos, farmacologia e biotecnologia (FitoFarmaTec), Instituto de Biociências de Botucatu, UNESP. - Souza, Beatriz Bressani. [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024)
Este relatório descreve as técnicas e equipamentos utilizados no Laboratório de Fitomedicamentos Farmacologia e Biotecnologia, com foco em biotério, cultivo celular, extração e quantificação de RNA, e fermentação. O biotério, operando sob Nível de Biossegurança 1, cuida de camundongos e ratos, seguindo as regulamentações da Anvisa e diretrizes éticas rigorosas. A equipe adota práticas de higiene e segurança para garantir o bem-estar animal, controlando temperatura, fotoperíodo e alimentação. A produção de ração hipercalórica no laboratório é realizada em parceria com a UNIPEX, utilizando ingredientes como açaí, amendoim e bolacha. A ração é enriquecida com fibras solúveis e passa por processos de peletização e secagem antes de ser armazenada. Para a morte dos animais, é administrada anestesia dissociativa com ketamina e xilazina, seguida de coleta sanguínea e eutanásia. O cultivo celular é monitorado com rigor, com troca de meios, tripsinização e contagem de células viáveis, seguido de congelamento ou plaqueamento. A extração de RNA envolve etapas como a maceração da pele, purificação com colunas RNeasy e quantificação utilizando o NanoDropLite, além da normalização para síntese de cDNA. Todos os procedimentos seguem protocolos estritos de limpeza e uso de equipamentos para evitar contaminação. No estudo da microbiota intestinal, que fermenta carboidratos não digeríveis, as bactérias produzem ácidos graxos de cadeia curta (AGCCs), como acetato, butirato e propionato, que influenciam vários processos metabólicos, como a regulação do apetite, a motilidade intestinal e a lipólise. Para investigar esses efeitos na obesidade, as fezes dos camundongos são fermentadas em condições anaeróbicas, com uma solução de bicarbonato e gás argônio, imitando o ambiente intestinal. O processo de incubação de 24 horas permite a análise dos AGCCs, oferecendo insights sobre como a microbiota intestinal pode influenciar a saúde metabólica e o desenvolvimento de doenças crônicas.

This report describes the techniques and equipment used in the Laboratory of Phytomedicines, Pharmacology and Biotechnology, with a focus on vivarium, cell culture, RNA extraction and quantification, and fermentation. The vivarium, operating under Biosafety Level 1, cares for mice and rats, following Anvisa regulations and strict ethical guidelines. The team adopts hygiene and safety practices to ensure animal welfare, controlling temperature, photoperiod and feeding. The production of hypercaloric feed in the laboratory is carried out in partnership with UNIPEX, using ingredients such as açaí, peanuts and cookies. The feed is enriched with soluble fibers and undergoes pelleting and drying processes before being stored. For the death of the animals, dissociative anesthesia with ketamine and xylazine is administered, followed by blood collection and euthanasia. Cell culture is closely monitored, with media exchange, trypsinization, and viable cell counting, followed by freezing or plating. RNA extraction involves steps such as skin maceration, purification with RNeasy columns, and quantification using NanoDropLite, in addition to normalization for cDNA synthesis. All procedures follow strict cleaning protocols and use of equipment to avoid contamination. In the study of the gut microbiota, which ferments non-digestible carbohydrates, bacteria produce short-chain fatty acids (SCFAs) such as acetate, butyrate, and propionate, which influence various metabolic processes, such as appetite regulation, gut motility, and lipolysis. To investigate these effects on obesity, the feces of the mice are fermented under anaerobic conditions, with a solution of bicarbonate and argon gas, mimicking the intestinal environment. The 24-hour incubation process allows for the analysis of SCFAs, offering insights into how the gut microbiota may influence metabolic health and the development of chronic diseases.
Description and characterization of equipment and scientific techniques in the phytomedicines, pharmacology and biotechnology laboratory (FitoFarmaTec), Biosciences Institute of Botucatu, UNESP
Keywords: Biotério; Cultivo celular; Extração RNA; Fermentação; Quantificação RNA