Construção de um circuito de regulação autônomo e temporal da expressão gênicaPiage - Piage Neto, Celso Delle (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022)
A complexa rede de interações que permeia os processos de regulação da expressão gênica vem sendo, há muito tempo, alvo de pesquisas, uma vez que o alcance da compreensão plena acerca desses fenômenos pode levar ao desenvolvimento de circuitos genéticos sintéticos com diversas finalidades, desde aplicações em diagnósticos até o aprimoramento de sistemas de armazenamento de dados não-dependentes de silício. Tais circuitos podem ser desenvolvidos e regulados a partir do conceito de portas lógicas, onde moléculas diversas, como açúcares, são utilizadas como inputs, desencadeando a expressão de genes e iniciando a interação entre os módulos genéticos. Baseando-se na versatilidade de uso desses circuitos, o presente projeto desenvolveu um circuito genético para controle temporal autônomo da expressão gênica em Escherichia coli, através do controle transcricional dos RNAs broccoli e corn pelo sistema CRIPSRa e CRISPRi Foram realizadas simulações do circuito no software iBioSim 3.0 e os resultados mostram que o sistema tem potencial de funcionar. Ainda, foram construídas três linhagens contendo o sistema de controle transcricional dos RNAs. Os cultivos in vivo mostraram que não há interferência na emissão do sinal entre os fluoróforos, porém a baixa emissão de fluorescência e o crescimento lento das linhagens mostra que os parâmetros de cultivo e o circuito genético precisam de ajustes.
Keywords: CRISPR-Cas; Expressão gênica; RNA fluorescente; Circuito genético; Controle transcricional