Efeitos da suplementação com metionina protegida no rúmen em vacas doadoras de oócitos na produção in vitro de embriões e na taxa de prenhez. - Zucoloto, Josiane Caobianco Dias [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023)
A metionina é um aminoácido essencial para o desenvolvimento dos oócitos e embriões, uma vez que é precursora de polipeptídeos e atua na regulação da tradução, metilação do DNA e equilíbrio antioxidante. Alterações na metilação do DNA de oócitos e embriões, hipermetilação ou hipometilação de genes específicos, podem favorecer a produção in vitro de embriões (PIVE). O estudo foi dividido em dois experimentos objetivando avaliar não só qualidade de oócito e embrião como também taxa de prenhez. Com isso, a hipótese é que a suplementação com metionina protegida no rúmen (MPR; Smartamine M® - Adisseo Brasil) em vacas doadoras de oócitos, na dose diária de 15 gramas/doadora/dia, durante os 14 dias que antecedem a aspiração folicular (OPU), aumenta os índices da PIVE e a taxa de prenhez após a transferência de embrião em tempo fixo (TETF). Objetivou-se comparar o efeito da suplementação oral com MPR em vacas doadoras de oócitos no número de CCOs recuperados, taxa de clivagem, taxa de conversão de CCOs em blastocistos no D7 (Experimento 1) e a taxa de prenhez após TETF (Experimento 2). No Experimento 1, vacas da raça Senepol, sem bezerro ao pé, não lactantes, foram divididas equitativamente de acordo com a idade, escore de condição corporal (ECC) e nível de produção de embriões in vitro, baseado em histórico prévio como doadoras de oócitos, em dois grupos: suplementação com MPR na dose diária de 15 gramas/doadora/dia, durante os 14 dias que antecedem a OPU (MPR; n=26) ou não suplementadas com MPR (CON; n=26), compreendendo para tanto um total de seis repetições. Utilizou-se um delineamento crossover, onde o intervalo entre a OPU e o início de um novo tratamento, foi de 30 dias. Após a OPU, a PIVE foi realizada em um sistema convencional onde avaliou-se os parâmetros relacionados a tal produção. No Experimento 2, as doadoras de oócitos foram submetidas aos mesmos tratamentos do Experimento 1, onde foram suplementadas com MPR (MPR; n=19 doadoras) ou não (CON; n=19 doadoras), após a OPU procedeu-se a PIVE e os embriões no D7 (n= 147) provenientes de doadoras não tratadas com MPR (CON; n=62 embriões) ou tratadas com MPR (n=85 embriões) foram transferidos às receptoras de embriões previamente sincronizadas por um protocolo convencional de TETF. Não houve diferença entre o Grupo CON e Grupo MPR para o número de CCOs totais recuperados /doadora (34,6842 + 3,2687 vs. 34,7894 + 3,6197; P = 0,6690); número de CCOs viáveis recuperados/doadora (29,2105 + 3,5930 vs. 29,6315 + 3,5992; P = 0,7514); taxa de CCOs recuperados viáveis (72,2659 + 5,2779 vs. 70,4465 + 6,0910%; P = 0,6908); taxa de clivagem (65,8627 + 5,9443 vs. 68,7473 + 6,8064%; P = 0,5692); taxa de conversão de CCOs em blastocistos viáveis no D7 (23,7181 + 4,4780 vs. 28,3952 + 4,6178%; P = 0,3082) e número de blastocistos produzidos no D7/doadora (9,8636 + 1,6187 vs. 10,0869 + 1,5411; P = 0,6682). A taxa de prenhez não diferiu em receptoras que receberam embriões do Grupo CON comparado ao MPR [46,77% (29/62) vs. 51,76% (44/85); P = 0,5513]. Conclui-se que a suplementação com metionina em doadoras de oócitos não aumenta eficiência na produção in vitro de embriões e a taxa de prenhez após TETF.

Methionine is an essential amino acid for the development of oocytes and embryos, since it is a precursor of polypeptides and acts in the regulation of translation, DNA methylation and antioxidant balance. Alterations in the DNA methylation of oocytes and embryos, hypermethylation or hipomethylation of specif genes, may favor the in vitro production of embryos (IVP). The hypothesis is that oral supplementation with rumen-protected methionine (RPM; Smartamine M® - Adisseo Brazil) in oocyte donor cows, at a daily dose of 15 grams/donor/day during the 14 days prior to follicular aspiration (OPU), increases the number of total cumulus oocyte complex (COCs) recovered, number of viable COCs recovered, rate of recovered viable COCs, cleavage rate, rate of conversion of COCs to blastocysts on D7, number of blastocysts produced on D7and the pregnancy rate after fixed-time embryo transfer (FTET). The aim of this study was to compare the effect of oral RPM supplementation in oocyte donor cows on the number of total COCs recovered, the number of viable COCs recovered, the rate of viable COCs recovered, the cleavage rate, the rate of conversion of COCs into blastocysts on D7, number of blastocysts produced in D7 (Experiment 1) and the pregnancy rate after FTET (Experiment 2). In Experiment 1, Senepol cows single, non-lactating, were equally divided according to age, body condition score (BCS) and in vitro embryo production level, based on history as oocyte donors, into two groups: supplementation with RPM at a daily dose of 15 grams/donor/day, orally, during the 14 days prior to OPU (RPM; n=26) or not supplemented with RPM (CON; n= 26) comprising for both a total of six repetitions. A crossover design was used, where the interval between OPU and the start of a new treatment was 30 days. After OPU, in IVP was performed in a conventional system where the parameters related to such production were evaluated. In Experiment 2, oocyte donors were submitted to the same treatments as in Experiment 1, where they were supplemented (RPM; n=19) or not with MPR (CON; n=19), after OPU and IVP and embryos on D7 (n=147) from donors not treated with MPR (CON; n = 62 embryos) or treated with MPR (MPR; n=85 embryos) were transferred to previously synchronized embryo recipients by a conventional protocol of FTET. The was no difference between the Control Group and MPR for the number of total COCs recovered /donor (34.6842 + 3.2687 vs. 34.7894 + 3.6197; P = 0.6690); number of recovered viable COCs/donor (29.2105 + 3.5930 vs. 29.6315 + 3.5992 respectively; P = 0.7514); rate of recovered viable COCs (72.2659 + 5.2779% vs. 70.4465 + 6.0910%; P = 0.6908); cleavage rate (65.8627 + 5.9443 vs. 68.7473 + 6.8064%; P = 0.5692); conversion rate of into viable blastocysts on D7 (23.7181 + 4.4780 vs. 28.3952 + 4.6178%; P = 0.3082) and number of blastocysts produced on D7/donor (9.8636 + 1.6187 vs. 10.0869 + 1.5411; P = 0.6682). Pregnancy rate did not differ in recipients receiving embryos to Control Group compared to MPR [46,77% (29/62) vs. 51,76% (44/85); P = 0,5513]. It is concluded that methionine supplementation in oocyte donors does not increases efficiency in vitro embryo production and pregnancy rate after FTET.
Effects of rumen-protected methionine supplementation in oocyte donor cows on in vitro embryo production and pregnancy rate.
Keywords: Fecundidade; Embriões; Metilação de DNA; Bovinos; Fecundity; Embryos; DNA Methylation; Cattle