Detecção e caracterização molecular de agentes Anaplasmataceae, hemoplasmas, piroplasmídeos, hemosporídeos e Coxiella burnetii em quirópteros hematófagos amostrados em diversas regiões do Brasil - de Mello, Victória Valente Califre [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023)
A ordem Chiroptera (do grego Cheir=mão e pteron=asas) representa o grupo mais particular da Classe Mammalia. A capacidade de vôo associada ao sistema de ecolocalização permitiu a colonização de diversos nichos e sua ampla distribuição geográfica, vivendo em contato próximo com animais domésticos e humanos. A subfamília Desmodontinae, pertencente à família Phyllostomidae, é composta por três espécies de morcegos hematófagos: Desmodus rotundus, Diphylla ecaudata e Diaemus youngii. O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de agentes transmitidos por vetores (agentes Anaplasmataceae, hemoplasmas, piroplasmídeos, hemosporídeos e Coxiella burnetii) em morcegos hematófagos amostrados em diferentes estados brasileiros. O trabalho foi realizado em duas partes: a primeira incluiu 198 amostras de fígado de morcegos hematófagos pertencentes às espécies Desmodus rotundus (n = 159), Diphylla ecaudata (n = 31) e Diaemus youngii (n = 8), provenientes de 15 diferentes estados brasileiros e gentilmente cedidas ao nosso grupo de pesquisa pelo Laboratório de Biologia Evolutiva e Conservação, Instituto de Biologia (IB), USP (São Paulo, SP, Brasil). Das 198 amostras de fígado dos morcegos hematófagos amostrados, 1,5% mostraram-se positivas para Neorickettsia sp. (nested[n] PCR 16S rRNA) e 6,06% para hemoplasmas (PCR 16S rRNA). Nenhuma amostra de fígado mostrou-se positiva para piroplasmídeos, hemosporídeos, Anaplasma spp., Ehrlichia spp. e C. burnetii. Análises filogenéticas baseadas no gene 16S rRNA posicionaram as sequências de hemoplasmas detectadas no presente estudo dentro do grande “grupo haemofelis”, compartilhando um subclado com hemoplasmas previamente detectados em morcegos hematófagos (D. rotundus, D. ecaudata) e morcegos não-hematófagos (Carollia sowelli e C. perspicillata) de Belize, Peru e Brasil. Alta diversidade genotípica foi identificada entre as sequências do gene 16S rRNA de micoplasmas hemotrópicos detectadas entre os morcegos analisados. Sequências 16S rRNA de Neorickettsia spp. detectadas nas amostras de fígado apresentaram alta identidade com Neorickettsia sp. previamente identificada em morcegos não-hematófagos do Brasil. Este é o primeiro estudo a relatar Neorickettsia sp. em morcegos hematófagos. Na segunda parte da tese, foram utilizadas 229 amostras de baço de morcegos hematófagos pertencentes às espécies D. rotundus (n = 228) e D. youngii (n = 1), gentilmente cedidas ao nosso grupo de pesquisa pelo Laboratório de Diagnóstico de Raiva do Instituto Evandro Chagas, São Brás, Belém, Pará, coletadas entre os anos de 2017 e 2019, nos estados do Pará (206 D. rotundus e 1 D. youngii), Roraima (18 D. rotundus), Amapá (3 D. rotundus) e Amazonas (1 D. rotundus). Dentre as 229 amostras de baço testadas, 10,04% mostraram-se positivas para hemoplasmas (PCR 16S rRNA), 18,77% para piroplasmídeos (nPCR 18S rRNA), 3% para Ehrlichia spp. (PCR dsb), 5,2% para Anaplasma spp. (nPCR 16S rRNA) e 10,9% para Neorickettsia spp. (nPCR 16S rRNA). Nenhuma amostra de baço mostrou-se positiva para hemosporídeos (nPCR 18S rRNA) e C. burnetii (qPCR IS1111) Análises filogenéticas baseadas no gene 16S rRNA de hemoplasmas posicionaram as sequências obtidas no presente estudo dentro do grande “grupo haemofelis”, em três clados distintos, com hemoplasmas previamente detectados em morcegos hematófagos e nãohematófagos do Brasil, Peru, Belize, Costa Rica e Alemanha. A análise filogenética baseada no gene 23S rRNA de hemoplasmas posicionou a sequência obtida no presente trabalho próxima àquelas previamente detectadas em morcegos nãohematófagos do Brasil e de Belize. Alta diversidade genotípica foi verificada entre hemoplasmas associados a morcegos hematófagos e não-hematófagos no Brasil e no mundo. Análise filogenética baseada no gene 18S rRNA quase completo de piroplasmídeos, por sua vez, posicionou as sequências obtidas de três D. rotundus em clados distintos (Theileria sensu stricto, Tapirus terrestris e “South America Marsupialia”), demonstrando a ocorrência de diferentes espécies de piroplasmídeos em morcegos hematófagos. O presente trabalho relatou, pela primeira vez, a ocorrência de Babesia spp. e Theileria spp. em D. rotundus. As análises filogenéticas baseadas nos genes dsb e ftsZ de Ehrlichia e 16S rRNA de Anaplasma spp. revelaram proximidade filogenética dos genótipos detectados em morcegos hematófagos com agentes Anaplasmataceae associados a ruminantes domésticos, enquanto as inferências filogenéticas baseadas nos genes gltA e groEL revelaram a ocorrência de genótipos potencialmente exclusivos de quirópteros. Neorickettsia sp. filogeneticamente associada a N. risticii foi detectada em morcegos hematófagos amostrados do Norte brasileiro. Co-positividade para os diversos agentes pesquisados foi identificada em amostras de fígado e baço de morcegos hematófagos no Brasil, demonstrando que tais mamíferos podem albergar uma gama de agentes transmitidos por vetores.

The order Chiroptera (from the Greek Cheir = hand and pteron = wings) represents the most particular group of the Class Mammalia. The flight capacity associated with the echolocation system allowed the colonization of different niches and its wide geographic distribution, living in close contact with domestic animals and humans. The subfamily Desmodontinae, belonging to the family Phyllostomidae, comprises three species of vampire bats: Desmodus rotundus, Diphylla ecaudata and Diaemus youngii. The present study aimed to investigate the occurrence of vectorborne agents (Anaplasmataceae agents, hemoplasmas, piroplasmids, hemosporidians and Coxiella burnetii) in vampire bats sampled in different Brazilian states.This work was carried out in two parts: the first included 198 liver samples from vampire bats belonging to the species Desmodus rotundus (n = 159), Diphylla ecaudata (n = 31) and Diaemus youngii (n = 8), from 15 different states Brazilians and kindly provided to our research group by the Laboratory of Evolutionary Biology and Conservation, Institute of Biology (IB), USP (São Paulo, SP, Brazil). Of the 198 liver samples from vampire bats sampled, 1.5% were positive for Neorickettsia sp. (nested[n] PCR 16S rRNA gene) and 6.06% for hemoplasmas (PCR 16S rRNA gene). No liver samples were positive for piroplasmids, haemosporidians, Ehrlichia spp., Anaplasma spp., and C. burnetii. Phylogenetic analyzes based on the 16S rRNA gene positioned the hemoplasma sequences detected in the present study within the large “haemofelis group”, sharing a subclade with hemoplasmas previously detected in vampire bats (D. rotundus, D. ecaudata) and non-hematophagous bats (Carollia sowelli, C. perspicillata) from Belize, Peru and Brazil. High genotypic diversity was identified among the 16S rRNA gene sequences of haemotropic mycoplasmas detected among the bats analyzed. The Neorickettsia 16S rRNA sequences detected in liver samples showed high identity with Neorickettsia sp. previously identified in nonhematophagous bats from Brazil. This is the first study to report Neorickettsia sp. in vampire bats. In the second part of the thesis, 229 spleen samples from vampire bats belonging to the species D. rotundus (n = 228) and D. youngii (n = 1), kindly provided to our research group by the Rabies Diagnostic Laboratory from the Evandro Chagas Institute, São Brás, Belém, Pará, were collected between 2017 and 2019, in the states of Pará (206 D. rotundus and 1 D. youngii), Roraima (18 D. rotundus), Amapá (3 D. rotundus) and Amazonas (1 D. rotundus). Among the 229 spleen samples tested, 10.04% were positive for hemoplasmas (PCR 16S rRNA), 18.77% for piroplasmids (nPCR 18S rRNA), 3% for Ehrlichia spp. (PCR dsb), 5.2% for Anaplasma spp. (nPCR 16S rRNA) and 10.9% for Neorickettsia spp. (nPCR 16S rRNA). No spleen samples were positive for haemosporidians (nPCR 18S rRNA) and C. burnetii (qPCR IS1111). Phylogenetic analyzes based on the 16S rRNA gene of hemoplasmas positioned the sequences obtained in the present study within the large “haemofelis group”, in three distinct clades, with hemoplasmas previously detected in hematophagous and nonhematophagous bats from Brazil, Peru, Belize, Costa Rica and Germany. Phylogenetic analysis based on the hemoplasma 23S rRNA gene positioned the sequence obtained in the present work close to those previously detected in non-hematophagous bats from Brazil and Belize. Furthermore, high genotypic diversity was observed between hemoplasmas associated with hematophagous and non-hematophagous bats in Brazil and around the world. Phylogenetic analysis based on the near-complete 18S rRNA gene of Piroplasmida positioned the sequences obtained from three D. rotundus into distinct clades (Theileria sensu stricto, Tapirus terrestris and “South America Marsupialia”), demonstrating the occurrence of different species of piroplasmids in vampire bats. The present work reported, for the first time, the occurrence of Babesia sp. and Theileria sp. in D. rotundus. Phylogenetic analyzes based on the dsb and ftsZ genes of Ehrlichia and 16S rRNA of Anaplasma spp. revealed phylogenetic proximity of the genotypes detected in vampire bats to those associated with domestic ruminants, while phylogenetic inferences based on the gltA and groEL genes revealed the occurrence of genotypes potentially exclusive to bats. Neorickettsia sp. phylogenetically associated with N. risticii was detected in vampire bats sampled from northern Brazil. Co-positivity for the various agents studied was identified in liver and spleen samples from vampire bats in Brazil, demonstrating that such mammals can harbor a range of vector-transmitted agents.
Detection and molecular characterization of Anaplasmataceae agents, hemoplasmas, piroplasmids, hemosporidians and Coxiella burnetii in hematophagous chiropterans sampled in different regions of Brazil
Keywords: Morcegos hematófagos; Hemoplasmas; Babesia; Anaplasma spp.; Ehrlichia spp.; Neorickettsia spp.; Haemosporida; Febre