Análise da dinâmica do tecido ósseo mandibular, colo de fêmur e coluna vertebral de ratas com osteoporose induzida tratadas com ácido zoledrônico e administração sistêmica de ozônio - Simon, Maria Eloise de Sá [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023)
Este trabalho teve como objetivo analisar o potencial da terapia com ozônio na dinâmica do tecido ósseo de ratas ovariectomizadas tratadas com ácido zoledrônico. Para tanto, 60 ratas Wistar, fêmeas, com 6 meses de idade, foram submetidas à ovariectomia bilateral (Ovx). Após três meses, quatro animais foram submetidos à eutanásia para caracterização da arquitetura do tecido ósseo em microtomografia (Micro-ct), os animais restantes foram divididos em dois grupos, o grupo ZOL e o grupo SAL e foi iniciado o tratamento nos animais do grupo ZOL com ácido zoledrônico (100 μg/Kg) e, no grupo SAL foi administrado 0,45 ml de solução salina usando o mesmo protocolo do ZOL. Após três meses desta terapia, quatro animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia para caracterização da arquitetura óssea (Micro-ct) e os animais restantes foram novamente divididos, aleatoriamente, de forma que os animais do grupo ZOL foram subdivididos em ZOL (n=12) e ZOL+OZN (n=12) e, os animais dos grupos SAL foram subdivididos em SAL (n=12) e SAL+OZN (n=12). Após isto, foi iniciada a ozonioterapia na concentração de 0,7mg/kg a cada dois dias até o final do experimento. Ao fim de 30 e 60 dias do início da terapia com ozônio, seis animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia para a análise e caracterização estrutural óssea do corpo da mandíbula, da cabeça do fêmur e das vértebras. Uma parte das peças correspondentes ao colo femoral foi destinada a testes biomecânicos e outra parte, para inclusão em resina fotopolimerizável para obtenção de lâminas e análise em microscópio confocal à laser. As demais amostras coletadas da cabeça do fêmur, das mandíbulas e vértebras foram descalcificadas e, através delas, realizadas lâminas histológicas, as quais foram coradas em hematoxilina e eosina para a análise histométrica (área de osso neoformado), contagem de células inflamatórias (linfócitos) e contagem de osteócitos. Para os parâmetros quantitativos de porcentagem de tecido ósseo na região da cabeça do fêmur e da mandíbula, o teste ANOVA-2 fatores (grupos vs períodos de análise) foi aplicado e em seguida o pós-teste Tukey, quando p<0,05. Já na coluna vertebral, o teste ANOVA-1 fator (grupos experimentais, somente no período de 30 dias) foi aplicado e pós-teste de Tukey. Em todos os testes foi considerado p<0,05. O tratamento com ácido zoledrônico e ozônio (ZOL+OZN) apresentou maior porcentagem de volume ósseo, maior número de osteócitos e maior número de células inflamatórias na região de cabeça do fêmur e mandíbula com resultados estatisticamente significantes (p<0,05). Na análise biomecânica do colo femoral, o módulo de elasticidade foi semelhante para os grupos ZOL e ZOL+OZN (p>0,05), em comparação aos grupos SAL e SAL+OZN (p<0,05). A área de calceína dos grupos tratados com ácido zoledrônico (ZOL e ZOL+OZN) foi maior que os grupos SAL e SAL+OZN (p>0,05), assim como em relação à alizarina, em que os resultados foram maiores nos grupos SAL+OZN e ZOL+OZN quando comparados aos grupos SAL e ZOL (p>0,05). Este estudo in vivo mostrou que existe um efeito sinérgico entre o ozônio e o ácido zoledrônico que promoveu a manutenção da massa óssea e formação de tecido ósseo vital em ratas ovariectomizadas. Além disso, indicou que a terapia com ozônio foi segura no modelo experimental proposto nesta investigação.

This work aimed to analyze the potential of ozone therapy in the dynamics of bone tissue in ovariectomized rats treated with zoledronic acid. For this purpose, 60 female Wistar rats, 6 months old, underwent bilateral ovariectomy (Ovx). After three months, four animals were submitted to euthanasia for characterization of bone tissue architecture in microtomography (Micro-ct), the remaining animals were divided into two groups, the ZOL group and the SAL group, and the treatment was started with zoledronic acid (100 μg/Kg/28 days) in the ZOL group animals and, 0.45 ml of saline solution was administered using the same ZOL protocol in the SAL group animals. After three months of this therapy, four animals from each group were euthanized to characterize the bone architecture (Micro-ct) and the remaining animals were randomly divided again, so that the animals in the ZOL group were subdivided into ZOL (n= 12) and ZOL+OZN (n=12) and, the animals from the SAL groups were subdivided into SAL (n=12) and SAL+OZN (n=12). After that, ozone therapy was started at a concentration of 0.7mg/kg every two days until the end of the experiment. At the end of 30 and 60 days from the start of ozone therapy, six animals from each group were euthanized for analysis and bone structural characterization of the mandible, femoral head and spine regions. A part of the pieces corresponding to the femoral neck was destined for biomechanical tests and another part, for inclusion in photopolymerizable resin to obtain slides and analysis in laser confocal microscope. The other samples collected from the femoral neck, mandibles and vertebral columns were decalcified and, through them, histological slides stained in hematoxylin and eosin were made for histometric analysis (area of newly formed bone), inflammatory cell count (lymphocytes) and blood cell count. For the quantitative parameters of percentage of bone tissue in the region of the femoral head and mandible, the ANOVA-2-way test (groups vs analysis periods) was applied, followed by the Tukey post-test, when p<0.05. As for this parameter in the spine, the ANOVA-1 factor test (experimental groups, only in the period of 30 days) was applied and Tukey's post-test. In all tests, p<0.05 was considered. Treatment with zoledronic acid and ozone (ZOL+OZN) showed a greater percentage of bone volume, a greater number of osteocytes and a greater number of inflammatory cells in the region of the femoral head and mandible, with statistically significant results (p<0.05). In the biomechanical analysis of the femoral neck, the modulus of elasticity was similar for the ZOL and ZOL+OZN groups (p>0.05), compared to the SAL and SAL+OZN groups (p<0.05). The calcein area of the groups treated with zoledronic acid (ZOL and ZOL+OZN) was greater than the SAL and SAL+OZN groups (p>0.05), as well as in relation to alizarin, in which the results were greater in the groups SAL+OZN and ZOL+OZN when compared to the SAL and ZOL groups (p>0.05). This in vivo study showed that there is a synergistic effect between ozone and zoledronic acid promoting maintenance of bone mass and formation of vital bone tissue in ovariectomized rats. Furthermore, showed that ozone therapy was safe in the experimental model proposed in this investigation.
Analysis of the dynamics of mandibular bone tissue, femoral neck and spine of rats with induced osteoporosis treated with zoledronic acid and systemic administration of ozone
Keywords: Osteoporose; Regeneração óssea; Ozônio; Osteoporosis