Estudo da infecção intramamária e dos métodos de triagem para detecção de mastite subclínica em búfalas - Sales, Danielle Cavalcanti [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2019)
A mastite é a enfermidade que mais causa prejuízos de ordem quantitativa e qualitativa nos sistemas de produção de leite no mundo. A prevenção e controle da doença precisam envolver atividades práticas e eficientes que auxiliem a tomada de decisões rápidas na fazenda. Os métodos de triagem para o diagnóstico da mastite aplicados às búfalas leiteiras são aqueles desenvolvidos especificamente para as vacas. Assim, o objetivo geral da tese foi estudar a mastite subclínica em búfalas e avaliar os métodos de triagem que auxiliam o diagnóstico da doença na fazenda. O trabalho se divide em quatro capítulos que tratam de: revisar a literatura sobre as temáticas (I); caracterizar o leite de quartos mamários com e sem infecção intramamária, e avaliar a associação entre a presença de infecção intramamária e as características microbiológicas do leite de quartos mamários de búfalas, posição dos tetos e os resultados dos métodos de triagem (II); e avaliar os testes rápidos California Mastitis Test , Somaticell e condutividade elétrica como métodos de triagem para auxiliar o diagnóstico da mastite subclínica em búfalas diretamente na fazenda (III). O estudo foi realizado em um rebanho de búfalas no estado do Rio Grande do Norte. Foram colhidas 533 amostras de leite de quartos mamários que foram submetidas à contagem eletrônica de células somáticas (CCS), aos testes de triagem (California Mastitis Test – CMT, teste Somaticell - SO e condutividade elétrica – CEL) e ao exame microbiológico para diagnóstico da mastite subclínica (IMM: positiva/negativa), classificação da infecção (negativa, contagiosa, ambiental, mista e oportunista) e do microrganismo envolvido (negativa, individual ou misto). Foram desenvolvidas análises descritivas por distribuição de frequências, e medidas de posição, dispersão e distribuição dos dados para caracterização dos quartos mamários. Também foram realizadas análises associativas pelo modelo linear generalizado e teste de qui-quadrado para verificar a dependência e correspondência entre os métodos de triagem e a presença da infecção intramamária. A avaliação dos métodos de triagem foi obtida pelas estimativas de estimativas da sensibilidade, especificidade, acurácia e concordância (coeficiente kappa) e pela curva ROC. A contagem eletrônica de células somáticas foi tomada como referência para a diferenciação dos quartos mamários com alta e baixa CCS, considerando quatro pontos de corte (150, 200, 280 e 400 mil céls/mL) e diferentes critérios de classificação dos quartos mamários pelos métodos de triagem - “traços, 1+, 2+ e 3+” e “1+, 2+ e 3+” (CMT); SO ≥ 150, 200 e 400 céls/mL; e CEL ≥ 3,0, 4,0, 5,0 e 6,0 mS/cm. A maioria dos quartos mamários avaliados tinham até 400 mil céls/mL. As reações positivas ao CMT ocorreram em 59,29% dos quartos mamários avaliados, sendo a reação 1+ a mais frequente dentre as positivas. 46,72% dos quartos mamários apresentou CCS acima de 400 mil céls/mL pelo teste SO. A CEL de 49,34% dos quartos mamários era maior que 4,5 mS/cm. As médias de CCS, SO e CEL foram 1.104,90 e 675,95 céls/mL e 4,88 ms/cm, respectivamente. A infecção intramamária foi diagnosticada em 68,73% dos quartos mamários investigados, sendo que metade (50,55%) estava infectada por apenas uma espécie de microrganismo. A maioria dos casos de IMM positiva era do tipo contagiosa (47,62%), principalmente por Corynebacterium bovis e Streptococcus agalactiae, seguida da ambiental (30,69%), principalmente Streptococcus dysgalactiae, Escherichia coli, Klebsiella spp. e Enterococcus spp; e oportunista (19,58), representada pelos Staphylococcus spp. coagulase negativa. Houve variação significativa de CCS nas classes de CMT, SO e CEL. Foi encontrada correspondência altamente significativa entre os testes CMT e Somaticell. Não existe associação entre a CCS, posição do quarto mamário, presença da infecção, tipo da infecção e do microrganismo. Há associação entre a variação da condutividade elétrica e a presença de IMM e concordância entre esta e os resultados de CMT. O critério do CMT que considera a reação de traço foi melhor para selecionar os quartos mamários com CCS a partir de 150 e 200 mil céls/mL. Já para uma triagem menos rigorosa, com CCS nos pontos de corte 280 e 400 mil céls/mL, a melhor avaliação do CMT foi no critério que não considera a reação de traço. As melhores avaliações para o teste Somaticell nos pontos de corte em 150 e 200 mil céls/mL foram nos critérios ≥ 200, e em 280 e 400 mil céls/mL, foi no critério ≥ 400. De forma mais específica, os valores críticos do teste Somaticell e condutividade elétrica que maximizam a capacidade de detectar corretamente os quartos mamários de búfalas com contagem de células somáticas de 150, 200, 280 e 400 céls/mL são, respectivamente 253 (244 - 263), 363 (340 - 379), 398 (379 - 418) e 477 (470 - 485) mil céls/mL e 4,5 mS/cm. Os métodos de triagem realizados na fazenda auxiliam a identificação de quartos mamários com alta contagem de células somáticas. A condutividade elétrica e o CMT têm relação com a presença de infecção intramamária, mas o diagnóstico da doença deve ser confirmado pelo exame microbiológico do leite quartos mamários de búfalas. A associação dos métodos de triagem pode ser uma escolha assertiva para os programas de controle e prevenção da doença em rebanhos bubalinos.

Mastitis is the disease that causes the most quantitative and qualitative losses in milk production systems in the world. Disease prevention and control need to involve practical and efficient actions that may help on decision-making on farm. Screening methods applied for mastitis diagnosis in dairy buffaloes are those developed specifically for cows. Thus, the objective of the thesis was to study subclinical mastitis in buffaloes and to evaluate the screening methods that help the disease diagnosis in farm. The work is divided into four chapters that deal with: reviewing the literature on the themes (I); to characterize breast milk with and without intramammary infection and to evaluate the association between the presence of intramammary infection and microbiological characteristics of buffalo milk, teat position, and the results of screening methods (II); and evaluate the California Mastitis Test (CMT), Somaticell (SO) and electrical conductivity (EC) rapid tests as a screening method to assist the diagnosis of subclinical mastitis in buffaloes on farm (III). The work was developed in a buffaloes commercial herd in the Rio Grande do Norte state. A total of 533 randomly selected milk samples were obtained and submitted to electronic somatic cell count (SCC), screening tests (CMT, SO and EC) and microbiological examination for diagnosis of subclinical mastitis (IMM: positive/negative), infection classification (negative, contagious, environmental, mixed and opportunistic) and microorganism involved (negative, individual or mixed). Descriptive analyzes were performed by frequency distribution and measures of position, dispersion and distribution of data to samples characterize. Associative analyzes were also performed by the generalized linear model and chi-square test to verify the dependence and correspondence between the screening methods, SCC and the presence of intramammary infection. The evaluation of screening methods was obtained by estimates of estimates of sensitivity, specificity, accuracy and agreement (kappa coefficient) and the ROC curve. SCC was taken as a reference for the differentiation of the high and low SCC, considering four cutoff points (150, 200, 280 and 400 x1000 cells/mL) and different criteria for the classification of the fourth breast by the methods - “Traces, 1+, 2+ and 3+” and “1+, 2+ and 3+” (CMT); SO ≥ 150, 200 and 400 thousand cells/mL; and EC ≥ 3.0, 4.0, 5.0 and 6.0 mS/cm. Most of the mammary quarters evaluated had up to 400 x1000 cells/mL. Positive reactions to CMT occurred in 59.29% of the mammary quarters evaluated, with the 1+ reaction being the most frequent among positive ones. 46.72% of the mammary quarters presented CCS above 400 x1000 cells/mL by the SO test. The CEL of 49.34% of the breast quarters was greater than 4.5 mS/cm. The average CCS, SO and CEL were 1,104.90 and 675.95 x1000 cells/mL and 4.88 ms/cm, respectively. Intramammary infection was diagnosed in 68.73% of the mammary quarters investigated, and half (50.55%) were infected by only one species of microorganism. Most cases of positive IMM were contagious (47.62%), mainly by Corynebacterium bovis and Streptococcus agalactiae, followed by environmental (30.69%), mainly Streptococcus dysgalactiae, Escherichia coli, Klebsiella spp. and Enterococcus spp.; and opportunistic (19.58), represented by Staphylococcus spp. negative coagulase. There was significant variation in SCC in CMT, SO and EC classes. Highly significant correspondence was found between CMT and SO. There is no association between SCC, quarter position, presence of infection, type of infection and microorganism. There is an association between the variation of CE and the presence of IMM and agreement between it and the results of CMT. The CMT trace reaction criterion was better to select the breasts with SCC from 150 and 200 x1000 cells/mL. For less rigorous screening, with SCC at cutoffs 280 and 400 x1000 cells/mL, the best CMT evaluation was the criterion that does not consider the trace reaction. The best evaluations for the Somaticell test at the cutoff points at 150 and 200 x1000 cells/mL were at criteria ≥ 200, and at 280 and 400 x1000 cells/mL at criteria ≥ 400. The critical values of the SO and EC that maximize the ability to correctly detect the buffaloes quarter with 150, 200, 280 and 400 x1000 cells/mL SCC are 253 (244 - 263), 363 (340 - 379), 398 (379-418) and 477 (470-485) x1000 cells/mL, respectively, and 4.5 mS/cm. Screening methods on farm assist in the identification of mammary quarters with high SCC. EC and CMT are related to the presence of intramammary infection, but the diagnosis of the disease should be confirmed by microbiological examination. The combination of screening methods can be an assertive choice for disease control and prevention programs in buffalo herds.
Intramammary infection and screening tests study for the subclinical mastitis detection in buffaloes
Keywords: Glândula mamária; CCS; Teste diagnóstico; Leite; Bubalus bubalis; Diagnostic; Mammary gland; Milk; SCC