Ocorrência e diversidade genética associada à infecção por micoplasmas hemotrópicos em suínos domésticos no Brasil - Sonálio, Karina [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020)
Mycoplasma suis e Mycoplasma parvum se ligam fortemente aos eritrócitos e causam hemoplasmose em suínos. Os animais infectados podem ser portadores assintomáticos ou apresentar sinais inespecíficos, acometendo todas as faixas etárias. No Brasil, os estudos sobre a ocorrência e a diversidade genética associada aos hemoplasmas suínos (HS) são escassos. Portanto, este trabalho teve como objetivo detectar, quantificar e caracterizar a diversidade genética da HS em animais terminados de granjas tecnificadas no estado de Goiás, Brasil. Amostras de sangue total de 450 de 30 granjas diferentes localizadas no estado de Goiás, foram coletadas em tubos contendo ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e armazenadas a -80 °C. A extração de DNA seguiu o método “in house” descrito previamente. A PCR convencional (cPCR) direcionada ao gene endógeno gapdh foi realizada para evitar resultados falso-negativos nos testes seguintes. Os ensaios de PCR em tempo real quantitativa (qPCR) foram realizados a fim de detectar e quantificar DNA de Mycoplasma baseado no gene 16S rRNA para HS. Para avaliar a diversidade genética da HS, realizou-se a clonagem e sequenciamento dos genes 16S rRNA e 23S rRNA para hemoplasmas. Os resultados da qPCR mostraram uma ocorrência de HS de 68,89%, onde todas as fazendas tinham pelo menos dois animais positivos. A quantificação na qPCR variou de 8.43x10-1 a 4.69x106 µL, e 52.71% das amostras apresentaram 1x103 copies/µL. Além disso, o teste do coeficiente de Spearman revelou que a ocorrência de HS está inversamente associada ao número de partos por semana, leitões desmamados por semana e peso de abate. Já a análise filogenética utilizando os métodos de Máxima Verossimilhança e Bayesiana, demonstrou que os 22 clones obtidos a partir do fragmento 16S rRNA formaram um único cluster intimamente relacionado a M. parvum. Ainda, sete genótipos foram encontrados nas análises genéticas dessas 22 sequências, mesmo se tratando de um gene conservado. Análises filogenéticas por Máxima Verossimilhança e Bayesiana realizadas para os sete clones do fragmento 23S rRNA, resultaram em um clado associado a M. parvum (NR121958). Portanto, os resultados demonstram pela primeira vez a presença de M. parvum em suínos amostrados no estado de Goiás, e confirmam a existência de diferentes genótipos de M. parvum circulando entre granjas de suínos no Brasil.

Mycoplasma suis and Mycoplasma parvum are strongly bound to erythrocytes and cause hemoplasmosis in pigs. Infected animals can be asymptomatic carriers or have nonspecific signs, affecting all age groups. In Brazil, studies on the occurrence and genetic diversity associated with porcine hemoplasmas (PH) are scarce. Therefore, this work aimed to detect, quantify and characterize the genetic diversity of PH in finished animals from technified farms in the state of Goiás, Brazil. Whole blood samples from 450 animals from 30 different farms located in the state of Goiás, were collected in tubes containing ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and stored at -80°C. DNA extraction followed the "in house" method previously described. Conventional PCR (cPCR) targeting the gapdh endogenous gene was performed to avoid false negative results in the following tests. Quantitative real-time PCR (qPCR) assays were performed in order to detect and quantify Mycoplasma DNA based on the 16S rRNA gene for PH. To assess the genetic diversity of PH, cloning and sequencing of the 16S rRNA and 23S rRNA genes for hemoplasmas was performed. The results of the qPCR showed a PH occurrence of 68.89%, where all farms had at least two positive animals. The quantification in the qPCR varied from 8.43x10-1 to 4.69x106 µL, and 52.71% of the samples presented 1x103 copies / µL. Furthermore, the Spearman coefficient test revealed that the occurrence of PH is inversely associated with the number of births per week, piglets weaned per week and slaughter weight. Phylogenetic analysis using the Maximum Likelihood and Bayesian methods, demonstrated that the 22 clones obtained from the 16S rRNA fragment formed a single cluster closely related to M. parvum. In addition, seven genotypes were found in the genetic analysis of these 22 sequences, even though it is a conserved gene. Phylogenetic analyzes by Maximum Likelihood and Bayesian performed for the seven clones of the 23S rRNA fragment, resulted in a clade associated with M. parvum (NR121958). Furthermore, the results demonstrate for the first time the presence of M. parvum in pigs sampled in the state of Goiás and confirm the existence of different genotypes of M. parvum circulating among pig farms in Brazil.
Occurrence and genetic diversity associated with hemotropic mycoplasms infection in domestic pigs from Brazil
Keywords: Hemoplasmas suínos; Mycoplasma parvum; Granjas tecnificadas; Genótipos; Suínos domésticos