Análise citogenética e mapeamento cromossômico de DNA satélite em espécies de Leptodactylus (Amphibia, Anura) - Souza, Ágata Gardini de [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024)
Dentro das sequências de DNA dos eucariotos, podem ser encontradas cópias na totalidade do genoma ou em locais específicos, repetidas in tandem, ou seja, em sequência. Um exemplo dessas sequências repetidas é o chamado “DNA satélite” (DNAsat), presente em grande quantidade na maioria dos genomas de eucariotos. Conforme os estudos acerca dessas regiões de DNA avançam, identifica-se cada vez mais seu papel genético, que aborda desde funções celulares à processos evolutivos. Considerando a conservação dessas sequências no genoma, é interessante utilizar os DNAs satélite como guia para estudos comparativos de espécies animais principalmente mais aparentadas, no qual se faz necessário o uso de ferramentas citogenéticas para identificar diferenciações com resultados mais claros. É o caso, por exemplo, do gênero anuro Leptodactylus, em que semelhanças fenotípicas e de distribuição geográfica já fizeram com que espécies do mesmo grupo fossem confundidas na literatura. O presente projeto abordou citogeneticamente as espécies Leptodactylus brevipes e Leptodactylus pentadactylus, por meio extração de DNA, amplificação de sequências de DNAsat por PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) e análises de Hibridização in situ fluorescente (FISH). Dessa forma, foi possível analisar a presença de ambos os DNAs satélites utilizados (LpeSat01-152 e LpeSat02-92) nas duas espécies estudadas pela amplificação em PCR. Também foi identificada a localização cromossômica do DNAsat LpeSat02-92 na espécie L. pentadactylus pela marcação na FISH. Esses resultados demonstram coerência à hipótese da biblioteca de DNAs satélites, uma vez que as duas espécies do mesmo gênero compartilham as sequências a partir de uma biblioteca ancestral. Além disso, ilustram a importância das técnicas moleculares aplicadas para os estudos de mapeamento cromossômico, bem como a possibilidade de caracterizar os DNAsats como marcadores moleculares para análises citogenéticas em anfíbios anuros.

Within the eukaryotic DNA sequences, copies can be found in the totality or specific locations, repeated in tandem, i.e., in sequence. An example of these repeated sequences is called the “satellite DNA” (satDNA), present in great quantities in most eukaryotic genomes. As studies about these DNA regions progress, it’s greater identified its genetic role, which approaches from cellular functions to evolutive processes. Considering the conservation of these sequences in the genome, it is interesting to use the satellite DNA as a guide to comparative studies of animal species, especially more related, where it becomes necessary to use cytogenetic tools to identify differentiations with clearer results. It could be the case, for example, of the anuran genus Leptodactylus, where similarities in phenotype and geographic distribution made species from the same group be mistaken in literature before. The present project approached cytogenetically the species Leptodactylus brevipes e Leptodactylus pentadactylus, with DNA extraction, amplification of sequences of satDNA by PCR (polymerase chain reaction) and analyses of Fluorescent In Situ Hybridization (FISH). Therefore, it was possible to analyze the presence of both satDNAs utilized (LpeSat01-152 e LpeSat02-92) on both species studied by PCR amplification. It was also identified the chromosomal location of satDNA LpeSat02-92 in the L. pentadactylus species by FISH marking. These results demonstrate coherency with the satellite DNA library hypothesis, as two species of the same genus share the sequences from an ancestral library. It also illustrates the value of the applied molecular techniques for chromosomal mapping studies, as well as the possibility to use satDNAs as molecular markers for cytogenetic analysis in anurans amphibians.
Cytogenetic analysis and chromosome mapping of DNA satellite in Leptodactylus species (Amphibia, Anura)
Keywords: Sequências repetitivas; Hibridização in situ fluorescente; Evolução; Cromossomos; Repetitive sequences; In situ hybridization; Evolution; Chromosomes