Significância clínica e epidemiologia molecular de Staphylococcus spp. nas infecções da corrente sanguínea em UTI neonatal - Riboli, Danilo Flávio Moraes [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2018)
Introdução: o isolamento de estafilococos coagulase negativos (ECN) de pacientes em Unidades de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) pode representar, muitas vezes, uma contaminação ao invés de bacteremia. O padrão ouro para o diagnóstico de sepse neonatal é a positividade de duas hemoculturas coletadas num intervalo de 48 horas associada às manifestações clínicas sugestivas de sepse. A resistência aos antimicrobianos e a formação de biofilme são fatores seletivos na persistência de cepas de S. epidermidis e S. haemolyticus. A técnica de Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE), altamente discriminatória, é frequentemente usada para a investigação de surtos. A tipagem por Multilocus Sequence Typing (MLST) se tornou o método de escolha no estudo epidemiológico em longo prazo. Objetivos: esse estudo teve como objetivos caracterizar o perfil das infecções de corrente sanguínea por Staphylococcus spp. em RNs internados na UTIN, os fatores de risco para infecção, perfil de virulência e resistência antimicrobiana dos estafilococos isolados, bem como a presença de clones prevalentes na unidade. Resultados: foram isolados 72 Staphylococcus spp. de hemoculturas de 54 recém-nascidos de Março de 2014 a Agosto de 2015. Foram confirmados 37 episódios de Infecção da Corrente Sanguínea (ICS) causados por Staphylococcus spp., sendo 27 associados a espécie S. epidemidis, 3 S. haemolyticus, 2 S. capitis e 5 S. aureus. A maioria dos Recém-nascidos (RNs) possuía extremo baixo peso, nasceu com menos de 31 semanas de gestação (72,2%), fazia uso de cateter e ventilação mecânica. Das 72 amostras de Staphylococcus spp. analisadas, 55 (76,4%) possuíam o gene mecA de resistência à meticilina. Em 19 (26,4%) amostras foi encontrado o gene sea, 13 (18,1%) o gene seb, 13 (18,1%) o gene sec e 8 (11,1%) o gene sed. Em 13 das amostras foram encontrados os genes do operon icaADBC completo. Os genes para produção de hemolisinas hla, hlb e hld foram encontrados em 43 (59,7%), 40 (55,5%) e 34 (47,2%) do total de isolados, respectivamente. Foram observados dois clusters majoritários de S. epidermidis na técnica de PFGE, um com 26 amostras (43.3%) e outro com 16 amostras (26,7%). Dentre os S. haemolyticus isolados, constatou-se que as três amostras possuíam 100% de similaridade. Foi feito o MLST de uma amostra de cada cluster de S. epidermidis sendo encontrado ST59 e ST2. O spa typing das amostras de S. aureus tipadas por essa técnica foram t002 e t0084. Conclusão: a capacidade de formar biofilme, de resistência a antibióticos e de produção de fatores de virulência podem fazer com que cepas endêmicas permaneçam por longos períodos no ambiente hospitalar. A detecção de cepas específicas pode ajudar no diagnóstico precoce de infecções mais graves sendo um diagnóstico preciso, combinando a detecção do micro-organismo no hospedeiro com o quadro clínico sugestivo, fundamental no tratamento dessas infecções por esses micro-organismos.

Abstract Introduction: The isolation of coagulase negative staphylococci (CoNS) of Neonatal Intensive Care Unit (NICU) patients can often represent contamination instead of bacteremia. The golden standard for the diagnosis of sepsis is the positivity of two blood cultures, collected within a 48-hour gap, associated to clinic manifestations suggestive of sepsis. Resistance to antimicrobials and biofilm formation are selective factors to S. epidermidis and S. haemoyticus strains to persist. Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), a highly discriminatory technique, is often used in investigating outbreaks. Multilocus Sequence Typing (MLST) has become the preferred method when it comes long-term epidemiologic studies. Objectives: this research aimed to characterize the profile of infections caused by Staphylococcus spp. at NICU, the virulence profile and antimicrobial resistance of isolated staphylococci, as well as the presence of clusters prevalent in the unit. Results: 72 Staphyloccocus spp. have been isolated from blood cultures taken from 54 newborns from March 2014 to August 2015. Thirty-seven bloodstream infection (BSI) episodes caused by Staphylococcus spp. were confirmed, 27 of which are associated to S. epidemidis, 3 to S. haemolyticus, 2 to S. capitis and 5 to S. aureus. Most newborns presented extremely low weight, were born before the 31st week of pregnancy (72.2%), used catheter and mechanical ventilation. From the 72 samples of Staphylococcus spp. under analysis, 55 (76.4%) had the mecA gene of resistance to methicillin. The sea gene was found in 19 samples (26.4%); the seb gene in 13 (18.1%), the sec gene in 13 (18.1%); and the sed gene in 8 (11.1%). In 13 samples the complete operon icaADBC genes were found. The genes for the production of hemolysin hla, hlb and hld were found in 43 (59.7%), 49 (55.5%) and 34 (47.2%) of isolated totals respectively. Two majoritarian clusters of S. epidermidis have been observed in the PFGE technique, one of them involving 26 samples (43.3%) and another one involving 16 samples (26.7%). From the S. haemolyticus isolated, the three samples had 100% similarity. MLST was made of a sample from each cluster of S. epidermidis and ST59 and ST2 were found. The spa typing of S. aureus samples were t002 and t0084. Conclusion: biofilm formation, resistance to antibiotics and the production of virulence factors can make endemic strains to remain for long periods within hospital environment. The detection of specific strains can help in the early diagnosis of more serious infections, combining the detection of the microorganism in the host with the suggestive clinical situation, is fundamental in treating such infections.
Clinical significance and molecular epidemiology of Staphylococcus spp. in bloodstream infections in newborn ICU
Keywords: hemocultura; fatores de virulência; mecA; PFGE; MLST; blood culture; virulence factors