Estabelecimento de modelo murino de hepatocarcinogênese associado à doença hepática gordurosa não-alcoólica: caracterização morfológica e fenotípica do eixo fígado-tecido adiposo - Lyra, Maria Letícia de Oliveira [UNESP] (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023)
O carcinoma hepatocelular corresponde ao 6º/3º mais incidente e mortal tipo de neoplasia e apresenta como contexto propício ao seu desenvolvimento a doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA), compreendendo um amplo espectro fenotípico e podendo variar de quadros de esteatose simples (acúmulo de lipídeos no parênquima hepático uma área igual ou maior a 5% do órgão), a quadros de esteatohepatite e fibrose hepática. Assim, o presente trabalho buscou avaliar os aspectos morfológicos e fenotípicos de um modelo murino de hepatocarcinogênese associada à DHGNA. Camundongos C57BL/6J machos receberam doses intraperitoneais de dietilnitrosamina (DEN, 25 mg/Kg de peso corpóreo, 1x/semana, por 4 semanas) ou veículo a partir do 14º dia pós-natal e, a partir da 6 semana de vida, foram distribuídos em 4 grupos experimentais e submetidos a um protocolo de indução nutricional de DGHNA induzido por dieta ocidental [(DO), ou Western Diet, no inglês] ração hiperlipídica (30% de gordura saturada e 0,2% de colesterol) e solução rica em açúcar [no inglês, High Sugar Solution, (HSS), composta por 55/45% de d-frutose/d-glicose diluídas em água filtrada] ou dieta basal, por 24 semanas. Na semana anterior à eutanásia, os animais foram submetidos a um teste de tolerância à glicose (TTG). No momento da eutanásia, foram coletadas amostras séricas [dosagem de alanina aminotransferase (ALT), triglicerídios e colesterol total], hepáticas tumorais e não-tumorais [histopatologia, reações de imunoistoquímica para Ki67 e α-actina de músculo liso (α-SMA) e coloração de sirius red] e de tecido adiposo (histopatologia). Os dados foram avaliados por One-Way, Two-Way ANOVA ou Kruskall-Wallis, e teste pós-hoc de Tukey ou Mann-Whitney, e considerados estatisticamente significativos quando p<0,05. Animais submetidos ao protocolo de apresentaram maior área sob a curva no TTG (p<0,0001), além de maiores peso corpóreo final (p<0,0001), peso hepático relativo (p<0,0001) e índice de adiposidade (p<0,0001). Animais do grupo DEN+DO também apresentaram maior multiplicidade de lesões neoplásicas em comparação ao grupo DEN (p=0,0031). Como esperado, o protocolo de DO induziu um perfil pronunciado de esteatose macro/microvesicular (p<0,0001), hipertrofia de hepatócitos (p<0,0001) e inflamação lobular (p=0,0111). Além disso, o protocolo de DO aumentou os níveis de α-SMA (p<0,0001) e o depósito de fibras colágenas no fígado (p=0,0011). Observamos também que somente os grupos que receberam a DO apresentaram hipertrofia de adipócitos (p<0,0001), maiores níveis séricos de ALT (p=0,0006) e colesterol total (p<0,0001). Portanto, o protocolo DO promoveu alterações fenotípicas/morfológicas observadas na DHGNA em humanos, demonstrando ação promotora nas etapas da hepatocarcinogênese.

Hepatocellular carcinoma corresponds to the 6th/3rd most incident and deadly type of neoplasia and presents non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) as a conducive context for its development, encompassing a broad phenotypic spectrum ranging from simple steatosis (accumulation of lipids in the liver parenchyma equal to or greater than 5% of the organ) to steatohepatitis and hepatic fibrosis. Thus, the present study aimed to evaluate the morphological and phenotypic aspects of a murine model of hepatocarcinogenesis associated with NAFLD. Male C57BL/6J mice received intraperitoneal doses of diethylnitrosamine (DEN, 25 mg/kg body weight, 1x/week for 4 weeks) or vehicle from the 14th postnatal day and, from the 6th week of life, were distributed into 4 experimental groups and subjected to a nutritional induction protocol of NAFLD induced by a Western diet (30% saturated fat and 0.2% cholesterol) and a high sugar solution (composed of 55/45% d-fructose/d-glucose diluted in filtered water) or a basal diet for 24 weeks. In the week before euthanasia, the animals underwent a glucose tolerance test (GTT). At the time of euthanasia, serum samples were collected (alanine aminotransferase (ALT), triglycerides, and total cholesterol levels), as well as tumor and non-tumor liver samples (histopathology, immunohistochemical reactions for Ki67 and α-smooth muscle actin (α-SMA), and Sirius Red staining) and adipose tissue samples (histopathology). Data were evaluated by One-Way, Two-Way ANOVA, or Kruskall-Wallis, and post-hoc Tukey or Mann-Whitney tests, considered statistically significant when p<0.05. Animals subjected to the protocol showed a larger area under the curve in the GTT (p<0.0001), as well as higher final body weight (p<0.0001), relative liver weight (p<0.0001), and adiposity index (p<0.0001). DEN+Western diet animals also showed a higher multiplicity of neoplastic lesions compared to the DEN group (p=0.0031). As expected, the Western diet protocol induced a pronounced profile of macro/microvesicular steatosis (p<0.0001), hepatocyte hypertrophy (p<0.0001), and lobular inflammation (p=0.0111). Additionally, the Western diet protocol increased α-SMA levels (p<0.0001) and collagen fiber deposition in the liver (p=0.0011). We also observed that only the groups receiving the Western diet showed adipocyte hypertrophy (p<0.0001), higher serum levels of ALT (p=0.0006), and total cholesterol (p<0.0001). Therefore, the Western diet protocol promoted phenotypic/morphological changes observed in NAFLD in humans, demonstrating a promoting action in the stages of hepatocarcinogenesis.
Establishment of a murine model of hepatocarcinogenesis associated with non-alcoholic fatty liver disease: morphological and phenotypic characterization of the liver-adipose tissue axis
Keywords: CHC; Carcinoma hepatocelular; DHGNA; Hepatocarcinogênese; Modelo experimental; HCC; Hepatocellular Carcinoma; NAFLD; Hepatocarconogenesis; Experimental model